Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Лекарственные средства (ЛС), содержащие гестагенные гормоны, широко используются в гинекологической практике в случаях разнообразных острых и хронических заболевании. Данные ЛС являются сильнодействующими и назначаются, как правило, длительными курсами. Следовательно, качество этих ЛС должно быть достаточно жестко нормировано. Важное значение для объективной оценки качества ЛС имеет:
наличие современных физико-химических методов анализа, позволяющих с высокой степенью точности оценить качество ЛС;
возможность нормирования родственных (т.е. сходных по строению) примесных соединений в ЛС.
При проведении государственного контроля, осуществляемого Государственным научно-исследовательским институтом по стандартизации и контролю лекарственных средств (ГНИИСКЛС) Минздравмедпро-ма (МЗ) РФ, установлено, что уровень требований и методы анализа НД на гестагенные гормональные препараты, в частности прогестерон и прегнин и их лекарственные формы, недостаточно совершенны и не обеспечивают объективную оценку их качества. Так, в НД на прогестерон и прегнин не предусмотрены испытания на обнаружение примесей, а методика оценки примесей в прегнине-стандарте методом ТСХ не позволяет обнаружить основные примеси. Для количественного определения прогестерона в субстанции и лекарственных формах в НД включен трудоемкий гравиметрический метод, не позволяющий правильно оценить содержание основного действующего вещества. Несовершенны методы подтверждения подлинности прогестерона и прегнина.
Необходимая информация о структуре примесей прогестерона и прегнина, их идентификации и накоплении отсутствовала в НД'идос-
тупной литературе.
В свя8и с этим проведение исследований по разработке новых методов оценки качества указанных ЛС на базе использования современных методов анализа является актуальной проблемой.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы явилось проведение исследований, направленных на создание комплекса эффективных методик стандартизации и контроля качества гестагенных гормональных препаратов; изучение химической структуры обнаруживаемых в них примесей, природы их происхождения, возможности их нормирования, а также разработка способов очистки изучаемых соединений.
Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:
провести сравнительную оценку уровня требований к качеству прогестерона, прегнина и их лекарственных форм в сравнении с зарубежными аналогами по данным отечественных и зарубежных НД (фармакопеи и фармакопейных статей);
изучить условия обнаружения и выделения возможных родственных соединений прогестерона методами ТСХ и препаративной адсорбционной хроматографии;
установить структуру обнаруживаемых родственных соединений прогестерона, используя методы ТСХ, ВЭЖХ, ИК-, УФ-, ЯМР-спектрос-копии, встречного синтеза;
изучить технологический процесс синтеза прогестерона с целью выявления стадий, где возможно образование и накопление примесей, и установить возможности снижения родственных соединений (посторонних стероидов) в прогестероне;
разработать условия нормирования примесей в прогестероне методами ТСХ, ВЭЖХ и дифференциальной сканирующей калориметрии
(ДСК) и провести сравнительную оценку применения этих методов для определения содержания примесей в прогестероне;
исследовать возможность присутствия и условия образования полиморфных форм прогестерона методом ДСК;
разработать методики определения подлинности прогестерона и прегнина в субстанции и лекарственных формах методами Ж-спектроскопии и БЭЯХ. а также прогестерона в субстанции - методом УФ-спектроскопии;
разработать методики количественного определения прогестерона и прегнина в субстанциях и лекарственных формах;
на основании полученных результатов включить показатель "Посторонние стероиды" в фармакопейную статью на прогестерон; внести в НД на прогестерон, прегнин и их лекарственные формы объективные физико-химические методики контроля по показателям "Подлинность". "Посторонние стероиды" и "Количественное определение".
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. С использованием методов ЯМР-, ИК- и УФ-спектроскопии, ТСХ, КЖ, препаративной адсорбционной хроматографии, встречного синтеза идентифицированы шесть примесей в прогестероне: 5«-прегнан-3,20-дион; 16-дегидропрогестерон; 20а-гидроксипрегн-4-ен-3-он; 20а-гидроксипрегн-4-ен-3-он; 6-ок-сопрогестерон; 1б«-метоксипрогестерон; что позволит оптимизировать технологический процесс с целью получения более чистого продукта.
На основе данных результатов анализа, полученных методом УФ-спектрофотометрии, установлена величина зкетинкции прогестерона в максимуме поглощения в области 241 гоі, положенная в основу спектрофотометрической методики количественного определения прогестерона в субстанции.
Методом ВЗЖХ установлено, что в структуре двух основных примесей прегнина содержатся группировки 4-ен-3,6-диона и 4,6-ди-ен-3-она; существенное отличие УФ-спектров данных примесей от спектра прегнина позволило подтвердить правильность УФ-спектрофо-тометрической методики количественного определения прегнина в субстанции.
На базе сравнительных данных результатов анализа, полученных методом ВЗЖХ, выбраны условия (подвижная фаза: гексан - дизтило-вый эфир - изопропанол = 64:35:1; колонка Силасорб 600, 64x2 мм) разделения прогестерона и посторонних стероидов, а также прегнина и сопутствующих примесей, которые положены в основу унифицированной методики ВЗЖХ для анализа прогестерона, прегнина и их лекарственных форм по показателям "Подлинность", "Посторонние стероиды" и "Количественное определение", основанной на использовании отечественного оборудования и недорогих растворителей.
С использованием данных сравнительного анализа, полученных методом ТСХ, подобраны условия (подвижная фаза: гексан - бута-нол-1 =4:1; сорбент - Сорбфил УФ-254, 15x10 см) выделения прогестерона из масляных инъекционных растворов, на основе которых разработана методика определения подлинности прогестерона в лекарственных формах методом ИК-спектроскопии, с предварительным препаративным его выделением методом ТСХ.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:
- методики оценки качества прогестерона по показателям "Подлинность", "Посторонние стероиды" и "Количественное определение" и другим физико-химическим характеристикам (ФС 42-2831-92 на прогестерон) ;
- методики определения подлинности и количественного содер
жания прогестерона в 1 % и 2,5 % растворах для инъекций (проект
ФС 42- на раствор прогестерона в оливковом или персиковом масле
1 % и 2,5 % для инъекций рассмотрен Фармакопейным комитетом и рекомендован к утверждению, протокол заседания фармацевтической комиссии ФК от 10.02.94 г.).
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты экспериментальных исследований доложены на конференции молодых ученых ГНШСКЛС Минздрава РФ (Москва, 1990 г.), на Ученом совете ГНИИСКЛС (Москва, 1994 г.), на межлабораторном коллоквиуме НИМ (Москва. 1995 г.).
ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 9 работ.
СВЯЗЬ ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Исследования выполнены в соответствии с темой-заданием "Разработка новых, совершенствование и унификация существующих методов исследований лекарственных веществ", планом научно-исследовательской работы ГНИИСКЛС Минздрава РФ (N госрегистрации 01.90.0062318), соответствуют тематике научных исследований Межведомственного совета по фармации N 47 АМН РФ.
НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ следующие основные положения:
результаты исследования прогестерона, прегнина и их лекарственных форм методами УФ-, ИК-спектроскопии, ТСХ, ВЭЖХ, ДСК;
методика количественного определения прогестерона спектро-фотометрическим методом;
методика установления подлинности прогестерона в лекарственных формах с использованием ТСХ;
методика установления подлинности прогестерона в лекарственных формах с использованием препаративной ТСХ и ИК-спектроскопии (в качестве альтернативной);
методики оценки качества прогестерона по показателю "Посторонние стероиды" методом ТСХ;
унифицированная методика ВЭЖ количественного определения примесей в прогестероне и прегнине, прогестерона и прегнина в субстанциях и лекарственных формах;
результаты изучения структуры примесей в прогестероне.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, трех глав, выводов, списка литературы, содержащего 212 источников, из них 166 на иностранных языках, и приложения. Работа изложена на 254 страницах машинописного текста, содержит 41 таблицу и 53 рисунка.
