Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время все большую популярность в медицинской практике приобретают лекарственные средства растительного происхождения, обладающие антимикробным, противовоспалительным и ранозаживляющим спектром действия. Это объясняется тем, что по сравнению с химиопрепаратами они обладают меньшей токсичностью, достаточной широтой и мягкостью терапевтического действия, меньшим количеством побочных эффектов.
Одним из перспективных источников таких лекарственных средств являются почки тополя (Gemmae Populi, Populus sp., сем. Ивовые -Salicaceae).
Так, за рубежом на основе почек тополя черного (Populus nigra L.) выпускаются, такие лекарственные формы, как настойка и мазь.
Почки тополя черного включены в Государственный реестр лекарственных средств (1992), разрешенных для применения в медицинской практике (регистрационный номер 74/684/6), однако нормативно-техническая документация (НТД) на данное сырье отсутствует, так как имеющийся в свое время ОСТ 4286 (1932 г.) на почки тополя черного потерял свою юридическую силу. В настоящее время почки тополя черного продолжают использоваться в пищевой промышленности для производства "Рижского бальзама". Кроме того почки данного растения широко применяются в народной медицине для лечения заболеваний органов дыхания.
В этом отношении интерес представляют и другие вида тополя, химический состав которых изучен в недостаточной степени.
Кроме того, применяемые в настоящее время за рубежом методы стандартизации почек тополя и препаратов на его основе не позволяют на современном уровне объективно оценивать качество продукции.
Учитывая вышеизложенное, представляются актуальными исследования по изучению химического состава почек некоторых
перспективных видов рода Populus L., антимикробной и противогрибковой активности субстанций и основных компонентов растений, а также по разработке методов анализа сырья.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (СГМУ), НПО "ВИЛАР" и Межведомственного Совета по фармации » 47 АМН РФ (№ гос.регистрации 0190.0043486).
Цель работы и основные задачи исследования. Изучение химического состава и разработка методов анализа почек некоторых видов тополя.
С этой целью решались следующие задачи:
- изучение химического состава почек тополя бальзамического
(Populus balsamifera L.), т. канадского (P. deltoldes
Marsh.)(выделение и структурный анализ веществ) в сравнешш с
компонентным составом почек т. черного;
исследование компонентного состава почек тополя бальзамического методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ);
- разработка методик анализа почек тополя (количественное
определение суммы флавоноидов и фенилпропаноидов методой
спектрофотометрии с использованием Государственного стандартногс
образца (ГСО) пиностробина, ВЭЖХ-методика количественного
определения пиностробина в почках тополя с использованием ГС(
пиностробина);
- сравнительный анализ образцов почек различных видов тополя н;
содержание суммы фенилпропаноидов в пересчете на ГСО пиностробина, ;
также на содержание пиностробина методом ВЭЖС;
- разработка способа получения и технологической схемі
производства ГСО пиностробина;
- ис/тение показателей качества лекарственного растительног
сырья "Почки тополя" и ГСО пиностробина;
- разработка нормативно-технической документации на сырье 'Почки тополя" и ГСО пиностробина.
Научная новизна. В процессе изучения химического состава почек г. бальзамического и т. канадского методи адсорбционной колоночной сроматографии были выделены и идентифицированы при помощи спектраль-шх методов и химических превращений 7 новых веществ для т. Зальзамического и 10 новых соединений - для т. канадского (флавонои-пы), а флаванон алышнон - новое вещество для растений рода Populus L. На основе данных УФ-, ЯМР- и масс-спектров, результатов химических превращений установлено строение нового природного соединения, имеющего структуру 2-метил-З-бутенилкофеат.
При помощи метода ВЭЖХ и на основании физико-химических особенностей веществ разработаны оптимальные условия разделения (обращенная фаза и ступенчатый градиент ацетонитрил-вода, с добавлением уксусной кислоты) и детального изучения компонентного состава почек тополя (на основании индивидуальных времен удерживания и спектральных отношений на 4 длинах волн к опорной 290 нм).
Разработаны новые методические подходы к проблеме стандартизации почек тополя, заключающиеся в том, что оценка качества сырья осуществляется по содержанию суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в пересчете на пиностробин, который выбран в качестве государственного стандартного образца (ГСО).
На основании спектральных и физико-химических свойств пиностробина выбрана аналитическая длина волны (290 нм) и определены оптимальные условия отделения пика пиностробина на хроматограмме от других компонентов (изократический режим, система растворителей ацетонигрил-вода-уксусная кислота 50:50:1) и на на этой основе разработана оригинальная ВЭЖХ-методика количественного определения пиностробина в почках тополя с использованием ГСО пиностробина. С использованием разработанных методик во всех образцах почек тополя
- б -
из Европейской части России и Сибири выявлено высокое содержание суммы фенилпропаноидов (15 - 32 %), причем, установлено, что содержание пиностробина выше в образцах сырья из Европейского региона, а в Сибирских образцах - доминирование его халконового аналога.
С использованием колоночной хроматографии на невысоком слое силикагеля (3 см), обеспечивающей избирательную десорбцию пиностробина за счет подобранной липофильной системы растворителей (15 % хлороформ в гексане) разработан новый способ получения из почек тополя ГСО пиностробина, обеспечивающий выход 1,0 % от массы воздушно-сухого сырья.
Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработано и внедрено:
- методика определения подлинности почек тополя (проект ВФС
"Почки тополя" рассмотрен и рекомендован Комиссией по стандартизации
НПО "ВШІАР" для направления в Фармакопейный комитет МЗ РФ, справка Я
395-19 от 16.04.94 г.);
методики качественного и количественного определения флавоноидов и фенилпропаноидов в почках тополя (проект ВФС "Почки тополя", справка J6 395-19 от 16.04.94 г., акт внедрения № 2 от 25.10.94 г.);
- способ получения и технологическая схема производства ГСО
пиностробина (акт внедрения № I от 24.10.94 г.);
показатели качества стандартного образца пиностробина и методы его анализа (проект ВФС "Пиностробин - стандартный образец" рассмотрен и рекомендован комиссией по стандартизации НПО "ВИЛАР" для направления в Фармакопейный комитет МЗ РФ, справка Л 395-19 от 16.04.94 г.);
химический состав почек тополя бальзамического и т. канадского (Еыделено а идентифицировано при помощи спгкі'рзльшх методов и химических превращений 25 флавоноидов (флаваноны, флаванонолы,
флавоны, флавоноли, халконы) и фенилпропаноидов (гидроксикоричные кислоты и их производные) (проект ВФС "Почки тополя", справка № 395-19 от 16.04.94 Г.).
Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе Самарского государственного медицинского университета (акт внедрения № I от 24.10.94 г.) Положения, выдвигаемые на защиту:
- результаты химического изучения почек тополя бальзамического
и т. канадского;
- способ получения и показатели качества государственного
стандартного образца пиностробина;
методики качественного и количественного определения флавоноидов и фенилпропаноидов с использованием ГСО пиностробина;
- ВЭЖХ-методика количественного определения ГСО пиностробина.
Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены
на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (Куйбышев, 1988), IX Конференции молодых ученых НПО "ВИЛР" (Москва, 1989), III Молодежной конференции ботаников г. Ленинграда (Ленинград, 1990), Всесоюзной конференции по хроматографии (Геленджик, 1990), научно-практической конференции по фармации в Сибири и на Дальнем Востоке (Томск, 1991), IV Всесоюзной конференции молодых ученых по хроматографии (Джубга, 1991), областной научно-технической конференции молодых ученых и специалистов(Самара, 1992), VI Всероссийском симпозиуме по молекулярной хроматографии (Москва, 1993), 1-ом Международном научном конгрессе "Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты" (Москва, 1994).
Основное содержание диссертации опубликовано в 17 научных работах и 2 проектах временных фармакопейных статей.
ОСьеч и структура работы. Диссертационная работа изложена на /53 страницах машинописного текста, содержите/ таблиц, рисунков.
1/2 2-3873
Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 176 наименований, из них 106 зарубежных.
Во введении обосновывается актуальность темы, формулируются цель и задачи исследования, отмечены новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены основные положения, выносимые на защиту.
Первая глава посвящена обзору литературы современного состояния исследований растений рода Populus 1., в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава, фармакологических свойств и применению растений рода тополь в медицине. Главы 2-5 являются экспериментальными, в них дана характеристика объектов и методов исследования, обсуждаются результаты изучения химического состава почек двух видов тополя, разработки методик стандартизации сырья тополя и способа получения пиностробина.
В приложение вынесены материалы по разработке нормативно-технической документации.
