Введение к работе
Актуальность темы. Одной из важнейших задач медицин ской науки является лечение злокачественных новообразований, имеющих тенденцию к росту. Противоопухолевые препараты в настоящее время занимают одно из первых мест в лечении злокачественных новообразований. Разработка новых лекарственных средств, совершенствование лекарственных форм, контроль их доброкачественности остаются на современном этапе наиболее важными вопросами в здравоохранении и фармации.
Согласно прогнозам Н. Н. Трапезникова и В. .В. Двоири-на (1991) рост числа заболеваний раком достигнет максимума к 2000 году и в числе наиболее важных форм заболева* ний останутся рак молочной железы, органов пищеварения, дыхания и др.
В борьбе с злокачественными новообразованиями особое место занимает химиотерапия, применяющаяся в комбинаций с хирургическим лечением и лучевой терапией.
Изучаемая нами группа цитостатических препаратов включает препараты, полученные сравнительно недавно — гормоноцитостатнкії кортифен и тестифенон, сочетающие и себе свойства гормонов и цитостатических веществ, производных бис-(fi-хлорэтил)-амина, а также антиметаболиты — 5-фторурацнл (5-ФУ) и фторафур (ФТ). Фторпроизводные пиримидина широко применяются в онкологии, однако фармацевтический анализ этих препаратов разработан недостаточно: реакции идентификации не определяют функциональные группы, от которых зависит фармакологический эффект, методики количественного определения неспецифичны.
Лекарственные формы, используемые в клинике вызывают нежелательные осложнения. Разработка моделей других лекарственных форм (мазей, суппозиториев) по нашему мнению, позволит проводить лечение не только в клинике, но и в амбулаториях.
Цнтостатические препараты кортифен и тестнфенон проходят первую фазу клинических .испытании, фармацевтический анализ этих веществ пока несовершенен, поэтому требуется разработка методик определения подлинности н количественного определения как самих препаратов, так и их лекарственных форм. Необходимы методики анализа пригодные как для клиник, так и для контрольно-аналитических лабораторий.
Дли внедрения в клиническую практику кортпфена, тести-фепона и новых лекарственных форм мазей и суппозиториев 5-фторурацила и фторафура требуется обязательное исследование их фармакокинетики (ФК) и биодоступности.
Цель работы: комплексное выполнение цикла исследований, взаимосвязанных единым методологическим подходом, заключающимся в последовательном развитии и совершенст-нованпи методов анализа противоопухолевых препаратов при оценке их качества и для исследования фармакокинетики лекарственных форм исследуемых препаратов.
Задачи исследования:
изучение современного состояния вопроса о методах исследования цнтостатиков производных бис-(р-хлорэтил)-амина, гормональных веществ, производных циклопентан-пергидрофенантрена и фторпроизводных пиримидина;
разработка реакций идентификации препаратов, отличающихся большей избирательностью, чувствительностью, пригодных для определения исследуемых веществ в лекарственных формах и в биологических жидкостях;
разработка надежных и достаточно чувствительных методик количественного определения гормоноцитостатиков корти-фена и тестифенона, а также фторпроизводных пиримидина 5-фторурацила ,н фторафура в лекарственных формах н и биологических объектах;
разработка методики определения п-бнс(рЧ\лорэтнл)-смішофешілуксуснон кислоты (БХФК), как специфической примеси в цитостатиках алкилирующего действия;
разработка требований и методов контроля предлагаемых лекарственных форм (суппозитории и мази фторпроизводных пиримидина);
определение токсичности и хпмиотерапевтическоп активности 5-ФУ и ФТ;
изучение оптимальных условий выделения изучаемых веществ из биологических объектов (кровь, моча, внутренние органы) для разработки методики их анализа в биологических жидкостях;
определение величины биодоступности препаратов при различных способах их введения экспериментальным животным;
фармакокинетические исследования на животных для оценки лекарственных форм препаратов;
создание проектов временных фармакопейных статей (ВФС) на мазь п суппозитории ФТ, внесение изменений в
ВФС на методики количественного определения кортифена в лекарственных формах.
Научная новизна. Впервые разработаны методики количественного определения кортифена и тестифенона, основанные на:
а) реакции образования полиметиновых красителей;
б) реакции с 2,4-динитрофенплгидразином;
в) гидроксаматной реакции и
г) реакции образования фармазана для кортифена, отли
чающиеся от известных ранее возможностью определения по
функциональным группам, обусловливающим специфическую
активность цитостатиков.
На методику определения подлинности кортифена по реакции образования фармазана получено авторское свидетельство на изобретение № 1642336—1991 г. «Способ качественного определения кортнкостерондов, аскорбиновой кислоты и фурацилина».
Впервые разработана методика количественного определения БХФК, применяемой при синтезе цитостатических препаратов и анализируемой как специфическая примесь (в т. ч. в кортифене и тестнфеноне). На методику количественного определения этого вещества получено положительное решение НИИГПЭ о выдаче патента на «Способ количественного определения вещества, содержащего хлорал-кильную группу» от 26.11.91 г.
Впервые разработаны методики количественного определения 5-ФУ и ФТ в лекарственных формах, основанные на реакциях азосочетания, окисления и образования комплекс-пых соединений с солями кобальта. На методику количественного определения ФТ по реакции окисления получено
положительное решение НИИГПЭ о выдаче авторского свидетельства на «Способ количественного определения фтора-фура» от 10.12.90 г.
Впервые изучено связывание кортифена и тестифенона с белками. Впервые исследована фармакокинетика кортифена и тестифенона у мышей, установлена величина биологической доступности препарата при различных путях его введения.
Впервые изучена фармакокинетика 5-ФУ и ФТ в мазях и суппозиториях, определена их биодоступность.
Практическая значимость. Способ количественного определения БХФК в субстанции и цитостатиках предлагается для использования в заводских лабораториях химико-фармацевтических заводов, выпускающих <и контролирующих цитостатики. Методика внедрена в лаборатории химико-фармацевтического анализа онкологического научного центра (ОНЦ> РАМН.
Реакция образования полнметиновых красителей и реакция с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ) использованы для изучения фармакокинетики препаратов при доклиническом изучении.
Методика определения степени окисленностн кортифена внедрена в опытно-наработочной лаборатории и в лаборатории химико-фармацевтического анализа ОНЦ РАМН.
Токсикологическая характеристика и результаты изучения фармакокинетики мазей и суппозиториев 5-ФУ и ФТ внедрены в Казахском научно-исследовательском институте онкологии и радиологии для использования при углубленном клиническом изучении'этих лекарственных форм.
Методика определения цнтостатическпх препаратов, производных бис(р-хлорэтил)-амина, основанная на реакции образования полнметиновых красителей, внедрена в учебном процесс в Алма-Атинском, Кыргызском и Туркменском медицинских институтах.
Проекты ВФС на мази и суппозитории ФТ переданы в Фармакопейный комитет Министерства здравоохранения Республики Казахстан.
Внесены изменения в ВФС на количественное определение кортифена в 0,4 и 1,25% масляных растворах препарата по реакции образования фармазана. (і
На защиту выносятся:
— обоснование целесообразности комплексного химико-
фармацевтического и доклинического фармакокииетического
исследования гормоноцнтостатиков алкилирующего действия
и фторпронзводных пиримидина;
результаты изучения химических свойств исследуемых препаратов и разработанные на их основе реакции подлинности;
теоретическое обоснование и разработка методик количественного определения кортифена и тестифенона фотометрическими методами по реакциям образования иолиметииовых красителей, реакции с 2,4-ДНФГ, реакции образования фармазана, гидроксаматной реакции в субстанциях, лекарственных формах и в биологических объектах;
научное обоснование и разработка методики определения БХФК фотометрическим методом как специфической примеси і> цитостатиках;
теоретическое обоснование и экспериментальная разработка количественного определения 5-ФУ и ФТ фотометрическими методами по реакции с ацетатом кобальта, реакции образования азокрасителей и окисления в лекарственных формах;
— экспериментальные данные изучения фармакокинетикп
гормоноцнтостатиков кортифена и тестифенона и фторпронз
водных пиримидина — 5-ФУ и ФТ.
Апробация работы. Результаты проведенных исследований докладывались на III съезде фармацевтов Казахской ССР (Кустанай, 1987), V Всероссийском съезде фармацевтов (Ярославль, 1987), Республиканской конференции научного общества фармацевтов Казахской ССР (Чимкент, 'і989), на заседании кафедры фармацевтической химии (1990), межкафедральном заседании профильных кафедр Алма-Атинского государственного медицинского института (1992 г.), совместной конференции отдела фармакологии и токсикологии и лабораторий химико-фармацевтического анализа, лаборатории разработки лекарственных форм и группы наработки готовых лекарств ОНЦ РАМН.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Алма-Атинского государственного медицинского института и тематикой научных исследований секции «Фармацевтическая химия» 10.06.03 по
проблеме научного совета № 10 «Фармакологии и фармация РАМН», № регистрации 01.9.100.13.064 «Применение хромо-генных реакций полиметиновых (азометиновых) красителей в анализе лекарственных средств производных гидразина, ароматических аминов, пиридина, пиримидина, пмндазола. бенздиазепина и гормоноцитостатиков».
Публикации. По результатам проведенных 'исследований опубликована 21 печатная работа, в их числе 3 авторских свидетельства.
Объем и структура работы. Диссертационная работа содержит следующие разделы: введение, обзор литературы (1 глава), 4 главы с изложением собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, список литературы, включающий 284 работы отечественных и зарубежных авторов и приложения. Печатный текст, не считая литературного указателя и приложений, составляет 272 страницы. В работе приведено 40 рисунков и 51 таблица.
