Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время в медицинской практике широко используются препараты, содержащие алкалоиды спорыньи /эргоалкалоиды/. К числу таких препаратов относятся эрготоксин, соли аргометташа и эрготамина. Имеются отдельные лекарственные формы, в состав которых входят эргоалкалоиды: беллоид, беллатами-нал, кофетамин. Эргоалкалоиды обладают сильным фармакологическим действием и применяются при атонии матки и связанных с ней маточных кровотечениях. В определенных условиях /длительное лечение этими препаратами, передозировка, несчастные случаи, связанные с преднамеренным применением их с целью самоубийства и т.д./ эргоалкалоиды могут быть причиной отравлений.
Клинические сиштомы, патолого-анатомическая и гистологическая картины при интоксикации человека эргоалкалоидами нехарактерны и не позволяют дифференцировать состояние отравления с интоксикациями другими средствами.
Несмотря на успехи, достигнутые в области химико-токсиколиги-ческого анализа различных т;зсикологически ватных Ееществ, методы химико-токсикологического анализа эргоалкалондов почти не изучены или изучены недостаточно. Никем не подвергались систематическому изучению методы обнаружения и количественного определения эргоалкалондов в вытяжках, полученных из объектов биологического происхождения. Отсутствуют чувствительные и специфичные способы обнаружения и количественного определения эргоалкалондов. Некоторые метода исследования эргоалкалондов, применяемые в фармацевтическом анализе, из-за недостаточной чувствительности и неспецифичности являются непригодными для анализа. объектов химико-токсикологического исследования.
Не изучены условия выделения эргоалкалондов из объектов био-
логического происхождения, экстракции их из водных растворов, а также способы их очистки от соэкстрактивных веществ. Отсутст-ствуют надежные методы выделения эргоыетрина, эрготамина и эрго-' токсина из различных объектов биологического происхождения. Не изучены процессы связывания эргоалкалоидов с белковыми веществами, распределение их по органам отравленных животных и сохраняемость при гнилостном разложении биологического материала.
Учитывая широкое применение эргоалкалоидов в медицине, наличие случаев отравлений этими препаратами и недостатки или отсутствие методов химико-токсикологического анализа эргометрина, эрготамина и эрготоксина, выделенных из объектов биологического происхождения, разработка методов химико-токиикологическогр анализа является одной из важных и актуальных проблем.
Цель и задачи исследования. Целью наших исследований явилось теоретическое обоснование анализа эргоалкалоидов в различных биологических объектах ; установление условий связывания эргоалкалоидов с белковыми веществами ; изучение экстракции эргоалкалоидов из водных растворов органическими растворителями в зависимости от различных факторов ; проверка существующих методик для их изолирования из биологических объектов и при необходимости создать и рекомендовать новые методы химико-токсикологического анализа эрго-алкалоидоь на основе полученных результатов УФ-спектроскопии, экстракционной фотометрии, хроматографии в тонких слоях сорбентов, электрофореза на оумаге и высокоэффективной жидкостной хроматографии, гель-хроматографии.
Для достижения указанной цели нами поставлены следующие задачи:
I. Разработать чувствительные способы идентификации исследуемых эргоалкалоидов с помощью УФ-спектроскопии, хроматографии в
тонких слоях сорбентов, электрофореза на бумаге и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
-
Разработать чувствительные методики количественного„определения эргоалкалоидов с помощью УЗ>-спектрофотометрии, экстракционной фотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
-
Изучить возможность применения разработанных нами методов обнаружения и количественного определения для анализа эргометрина, эрготамина и эрготоксина, выделенных из объектов биологического происхождения.
-
Изучить влияние различных факторов на степень экстракции эргоалкалоидов из водных растворов и применить полученные результаты для разработки оптимальных условий выделения эргоалкалоидов из вытяжек, полученных из биологических объектов.
-
Изучить влияние рН среды на связывание эргоалкалоидов с белковыми веществами и условия разложения образовавшихся при этом соединений.
-
Разработать оптимальные условия выделения эргоалкалоидов из объектов биологического происхождения.
-
Изучить возможность применения метода хроматографии в тонком слое сорбента и гель-хроматографии для очистки вытяжек, полученных из объектов биологического происхождения, содержащих эргоалкало иды.
-
На основании изучения данных литературы, экспериментального и экспертного материала разработать судебно-химические критерии для судебно-медицинской оценки доказательства отравлении эргоалкалоидами.
Научная новизна. Разработаны новые методы выделения эргоалкалоидов из трупного материала и биологических жидкостей. Предложены способы обнаружения и количественного определения эргоалкало-
вдов в вытяжках из объектов биологического происхождения.
Изучены условия очистки вытяжек из биологического материала, обеспечивающие удаление соэкстрактивных веществ с наименьшими потерями исследуемых эргоалкалоидов.
Впервые предложены методики идентификации и количественного определения эргоалкалоидов с помощью УФ-спектроскопии и высокоэффективной жидкостной хроматографии для исследования трупного материала.
Разработаны екстракционно-фотометрические методв количественного определения эргоалкалоидов, основанные на взаимодействии их с кислотным красителем тропеолином 00.
Показано влияние рН среды, природы органических растворителей, присутствия электролитов в водной фазе на степень экстракции эргоалкалоидов из водных растворов и вытяжек из объектов биологического происхождения.
Изучена сохраняемость эргоалкалоидов в гнилостноразложившемся трупном материале и влияние консерванта - этанола на этот процесс.
Изучено возможное распределение эргометрина, эрготамина и эрготоксина в органах и биологических жидкостях.кроликов, отравленных этими препаратами.
Практическое значение работы. На основании разработанных нами методов выделения эргоалкалоидов из объектов биологического происхождения, биологических субстратов, а также предложенных методов их обнаружения и количественного определения изданы 3 методические рекомендации: "Определение эргометрина при судебно-хими-ческих исследованиях биологических объектов". - Ташкент, 1991 г. ; "Судебно-хиыическое исследование метилэргометрина в биологическом объекте" /на узб.яз./ - Ташкент, 1991 г. ; "Изолирование, обнаружение и определение эрготамина в биологических объектах". - Ташкент,
1992 г.
Разработанные нами методы изолирования, обнаружения и определения эргоалкалоидов при исследовании трупного материала и биосубстратов включены в указанные методические рекомендации и внедрены в практику судебно-химических лабораторий бюро судебно-медицинской экспертизы Республики Узбекистан, бюро судебно-медицинской экспертизы всех областей Республики Узбекистан.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены: .
- на конференциях циклов специализации экспертов-химиков на кафедре токсикологической химии Ташкентского фармацевтического института в I984-I99I гг. ; на Всесоюзной научной конференции "Современные аспекты создания и оценки лекарственных форм" /Баку, 1984/ ; Всесоюзном симпозиуме по химико-токсикологическому исследованию лекарственных средств ДоскЕа, 1984/ ; Научной конференции третьего гьезда фармацевтов Узбекистана /Ташкент, 1987/ ; третьем Всесоюзном, зъезде судебных медиков /Одесса,. 1988/ ; конференции Научного Центра по хроматографии АН УзССР /Ташкент, 1989/ ; заседании Проблемной «миссии "Фармация" научного Совета № 10 "Фармакогнозия и фармация" № СССР /Москва, 1990/ ; Третьей научной конференции молодых ученых і специалистов /Ташкент, 1990/ ; научно-практической конференции МЗ 'зССР и Республиканского производственного объединения "Фармация" Ургенч, 1990/ ; научно-практической конференции НИИ судебной экс-[ертизы /Ташкент, 1990/ ; I съезде молодых ученых-иедиков и врачей збекистана /Андижан, 1990/ ; научно-практической конференции рес-убликанского бюро судебно-медицинской экспертизы /1987-1990/ ; овместном заседании кафедры фармацевтической и токсикологической имии Ташкентского фармацевтического, института /1992/.
Публикация. По ,теме диссертационного'исследования опубликовано
, і
в открытой печати 3 методических рекомендации и 29 статей.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 288 страницах машинописного текста, содержит 68 таблиц, 26 . рисунков. Работа состоит из введения, шести, глав, выводов, списка литературы, включающего 419 источников, из низ 166 на иностранных языках и приложения.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнена в соответствии с планом научных исследований Ташкентского фармацевтическвго института /№ государственной регистрации 01827022869/ и связана с решением союзной проблемы 10.06 'Фармация" научного Совета № 10 "Фармакология и фармация" АМН СССР, которая включена в план АН Республики Узбекистан.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту. На защиту диссертации выносятся следующие результаты экспериментальных ис следований и их теоретическое обоснование: .
- теоретическое обоснование методов выделения эргометрина, эрготамина и эрготоксина из органов трупов и биологических жидкостей и способы их идентификации и количественного определения в химико-токсикологическом анализе ; методики очистки этих алкалоидов от сопутствующих веществ, условия экстракции и разделения эргоалка лоидов, находящихся в водных растворах и вытяжках из объектов биологического происхождения ; изучение связывания эргоалкалоидов с биологическим материалом и влияние рН среды на устойчивость образовавшихся при этом соединений ; изучение ориентировочного распределения эргоалкалоидов в органах животных, отравленных этими пре-паратами, и их сохраняемость при гнилостном разложении биологического объекта.
