Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современное состояние исследований пижмы обыкновенной (обзор литературы) 14
Систематическое положение пижмы обыкновенной 14
Этимология названия и историческая справка 18
Ботаническое описание 18
Ареал. Сырьевая база. Заготовка и сушка. Агротехнические особенности 20
Ареал 20
Сырьевая база 21
Заготовка и сушка 21
Агротехнические особенности 22
Внешние признаки сырья 23
Характеристика микроскопических признаков цветков
пижмы обыкновенной 23
Химический состав пижмы обыкновенной 26
Фармакологическое действие, применение в современной
медицине 34
Фитопрепараты из цветков пижмы обыкновенной 37
Проблемы стандартизации сырья и препаратов пижмы обыкновенной 39
Выводы к главе 1 48
Объекты и методы исследования 49
Объекты исследования 49
Методы исследования 51
Методики морфолого-анатомического анализа 51
Физические методы анализа 52
Химические методы анализа 52
Хроматографические методы 54
Тонкослойная хроматография 54
Адсорбционная жидкостная колоночная хроматография 55
Газожидкостная хроматография 55
Физико-химические методы 58
Метод спектрофотометрии 58
1Н-ЯМР-спектроскопия и масс-спектрометрия 59
Технологические методы 59
Метод модифицированной ремацерации 59
Фармакологические методы 59
ГЛАВА 3. Изучение вопросов диагностики пижмы обыкновенной в измельченном сырье и фармакопейных сборах 61
3.1. Анатомо-морфологическое исследование порошка пижмы обыкновенной 61
3.2. Диагностирование признаков порошка цветков пижмы в рамках сравнительного морфолого-анатомического анализа с порошком цветков бессмертника песчаного 69
Выводы к главе 3 85
ГЛАВА 4. Фитохимическое исследование пижмы обыкновенной 87
4.1. Фитохимические исследования цветков пижмы обыкновенной 87
4.1.1. Выделение индивидуальных веществ 88
4.1.2. Структурные исследования выделенных веществ 90
4.2. Газожидкостная хроматография 96
Выводы к главе 4 118
ГЛАВА 5. Совершенствование подходов к стандартизации цветков пижмы обыкновенной и фитопрепаратов на их основе 120
5.1. Совершенствование методов контроля качества цветков пижмы обыкновенной 121
5.1.1. Разработка методик качественного анализа цветков пижмы обыкновенной 123
5.1.2. Разработка методик количественного определения цветков пижмы обыкновенной 126
5.2. Совершенствование методов стандартизации
«Желчегонного сбора № 3» 132
5.2.1. Изучение спектральных характеристик компонентов «Желчегонного сбора № 3» 133
5.2.2. Разработка методики количественного определения «Желчегонного сбора № 3» 140 Выводы к главе 5 147
ГЛАВА 6. Обоснования по стандартизации и созданию лекарственных препаратов на основе пижмы обыкновенной 149
6.1. Обоснование состава и способа получения настойки пижмы
обыкновенной 150
6.2. Стандартизация настойки пижмы обыкновенной 153
6.2.1. Качественный анализ 154
6.2.2. Количественный анализ 155
6.2.3. Числовые показатели 159
6.3. Обоснование состава и способа получения лекарственного препарата «Пижмы цветков сироп» 159
6.3.1. Технология получения сиропа цветков пижмы 160
6.4. Стандартизация лекарственного препарата «Пижмы цветков сироп» 163
6.4.1. Качественный анализ лекарственного препарата «Пижмы цветков сироп» 163
6.4.2. Количественное определение лекарственного препарата «Пижмы цветков сироп» 166
6.4.3. Числовые показатели 171
6.5. Влияние разработанных лекарственных препаратов на экскреторную функцию почек 172
Выводы к главе 6 176
Общие выводы 178
Библиографический список
- Ареал. Сырьевая база. Заготовка и сушка. Агротехнические особенности
- Адсорбционная жидкостная колоночная хроматография
- Диагностирование признаков порошка цветков пижмы в рамках сравнительного морфолого-анатомического анализа с порошком цветков бессмертника песчаного
- Структурные исследования выделенных веществ
Ареал. Сырьевая база. Заготовка и сушка. Агротехнические особенности
Согласно современной ботанической систематике, пижма обыкновенная - Tanacetum vulgare L. относится к отделу Цветковые растения (Magnoliophyta), классу Двудольные (Magnoliopsida), порядку Campanulatae Астроцветные (Asterales) или Сростнопыльниковые (Synandrae), семейству Астровые (Compositae), подсемейству Carduoideae (Астровые (Asteroideae)), колену Anthemideae, подколену Chrysantheminae роду Tanacetum L. секции Tanacetum [70, 93, 97].
Род Tanacetum L. объединяет около 50 видов, распространенных во внетропических районах северного полушария, особенно в Европе, Средней и Юго-Западной Азии [28, 70, 93, 97, 136, 141]. Из них 34 вида встречаются на территориях стран, входивших в состав СССР [93]. Во флоре России встречается более 10 видов, среднерусский регион представлен – 6-8 видами растений [141]. Некоторые авторы указывают, что род Tanacetum L. включает в себя до 80 различных видов [37].
Род Tanacetum L. делится на четыре естественные секции (секция 1 Omalotes, секция 2 Tanacetum, секция 3 Xanthoglossa, секция 4 Asterotricha), которые связаны несомненным родством, но настолько обособлены, что могут быть легко приняты за самостоятельные роды. Секция 2 Tanacetum представлена двумя рядами: Ряд 1 Vulgaria Tzvel. [Tanacetum vulgare L. – пижма обыкновенная (дикая рябинка), Tanacetum boreale Fisch. Ex DC. Prodr – пижма северная] и Ряд 2 Pseudoachillea Tzvel. (Tanacetum pseudoachillea Winkl. - полынь ложнотысячелистниковая, Tanacetum abrotanifolium L. – полынь абротанолистная) [144]. Представителями данного рода также являются: Tanacetum bipinnatum L. – пижма дваждыперистая (секция 1 Omalotes), Tanacetum myriophyllum Willd. Achill. – пижма многолистная, Tanacetum duderanum (Boiss.) Tzvel. – пижма дудеранская, Tanacetum heterophyllum Boiss.- пижма разнолистная, Tanacetum tamrutense (Sosn.) – пижма тамрутская, Tanacetum tabrisianum Boiss. – пижма тавризская, Tanacetum canescens (DC.) Prodr. – пижма седоватая, Tanacetum tanacetoides (DC.) Tzvel. – пижма пижмовидная, Tanacetum crassipes (Stschegl.) Tzvel. – пижма толстоножковая, Tanacetum turlanicum (Pavl.) Tzvel. – пижма турланская, Tanacetum scopulorum (Krasch.) Tzvel. – пижма утесная, Tanacetum saxicolum (Krasch.) Tzvel. – пижма скальная, Tanacetum santolina Winkl. - пижма сантолиновидная, Tanacetum Karelinii – пижма Карелина, Tanacetum Kittaryanum (C.A.M.) Tzvel. - пижма Киттари, Tanacetum uralense (Krasch.) Tzvel. – полынь уральская, Tanacetum sclerophyllum (Krasch.) Tzvel. – полынь жестколистная, Tanacetum odessanum – пижма одесская, Tanacetum millefolium (L.) Tzvel. – пижма тысячелистная (ромашник тысячелистный), Tanacetum Paczoskii (Zefir.) Tzvel. – пижма Пачосского, Tanacetum ulutavicum Tzvel. – пижма улутавская, Tanacetum achilleifolium (MB.) Sch. Bip. – пижма тысячелистниковая (ромашник тысячелистниковый), Tanacetum chiliophyllum (F. et M.) – пижма закавказская, Tanacetum longipedunculatum (Sosn.) Tzvel. -пижма длинноножковая, Tanacetum oligocephalum (DC.) Sch. – пижма малоголовчатая, Tanacetum tenuissimum (Trautv.) Grossh. – пижма тончайшая, Tanacetum uniflorum – пижма одноцветковая, Tanacetum Akinfievii (Alex.) Tzvel. – пижма Акинфиева (секция 3 Xanthoglossa), Tanacetum turcomanicum (Krasch.) Tzvel. – пижма туркменская, Tanacetum Walteri (Winkl.) Tzvel. -пижма Вальтера (секция 4 Asterotricha) [144].
Было замечено, что некоторые литературные источники [93, 176] относят к роду Tanacetum такое растение, как Tanacetum parthenium (L.) Sch. Bip. = Pyrethrum parthenium (L.) Smith. = Chrysanthemum parthenium (L.) Smith – пиретрум девичий (пижма девичья, ромашка девичья). Действительно, многие авторы последнего времени объединяют Tanacetum и Pyrethrum в один род Tanacetum, как это делал еще К. Шульц (K. H. Schultz Bipontinus, ber die Tanacetum, 1844). Некоторые современные зарубежные специалисты в области филогении (часть биологии, рассматривающая вопрос о происхождении организмов друг от друга) также не поддерживают разделение Tanacetum и Pyrethrum в самостоятельные роды и считают точку зрения исследователей флоры СССР [144] недостаточно убедительной [214].
Граница между родом Tanacetum и весьма близким к нему родом Pyrethrum всегда была очень неопределенной, причем чаще всего эти роды разделялись или на основании присутствия (отсутствия) язычковых цветков, или на основании разницы в расположении корзинок и их количества. Многие авторы, включая Флору СССР все же сохраняет род Pyrethrum (секция Parthenium) в качестве самостоятельного рода, основываясь главным образом, на иной, чем у видов рода Tanacetum окраске язычковых цветков [28, 93, 144]. Род Pyrethrum (пиретрум, ромашник, поповник) содержит около 100 видов, принадлежащих к 14 секциям и распространенных в Европе. При этом 56 видов распространены на территории бывшего СССР. Многие виды рода (особенно Tanacetum parthenium (L.) Sch. Bip.) используются как декоративные бордюрные растения. Некоторые виды (Pyrethrum cinerariifolium – пижма цинерариелистная, или далматская ромашка, Pyrethrum coccineum – пижма красная, Pyrethrum roseum – пижма розовая) используются для получения инсектицидных веществ (пиретринов), применяющиеся при изготовлении различных препаратов с целью уничтожения насекомых (порошок «пиретрум»). Виды Pyrethrum majus и Pyrethrum balsamita считаются овощными растениями [37, 144].
Интересно, что два вида - Tanacetum vulgare L. и Tanacetum parthenium (L.) Sch. Bip. [Pyrethrum parthenium (L.) Smith.], отнесенные некоторыми учеными к общему роду Tanacetum, по описанию зарубежных авторов несколько отличаются местообитанием. Так, пижма обыкновенная растет вдоль дорог, речных берегов, на пустошах как сорное растение, оно распространено по всей Европе; тогда как пиретрум девичий встречается преимущественно в горной местности, на скалах, произрастает на Балканах на узких полосках берега к морю. Tanacetum parthenium (L.) Sch. Bip. приживается около живых изгородях и во влажных местах на протяжении на протяжении большой части Европы [176].
Адсорбционная жидкостная колоночная хроматография
Для цветоносов характерными признаками может быть их следующая совокупность: эпидермис, представленный небольшими клетками округлой формы с мощным слоем кутикулы; по поверхности эпидермиса, изредка расположенные остатки многоклеточных бичевидных волосков, состоящих из 4–5 последовательно соединенных клеток округлой формы и железистые двухрядные, многоярусные трихомы (рис 2Е); хлорофиллоносная паренхима, представленная крупными тонкостенными вытянутыми клетками; проводящие элементы в виде спиральных и кольчатых сосудов. При микроскопировании давленых микропрепаратов цветоложа хорошо диагностируется его поверхность, составленная паренхимными клетками угловатой формы. Поверхность цветоложа оформлена упорядоченно расположенными местами прикрепления трубчатых цветков (рис. 2Б–Г). Места прикрепления округлой формы. В их центре видны фрагменты проводящих элементов, темно-бурого цвета на фоне бесцветных клеток эпидермы (рис. 2Б, Г).
Более мелкие фракции сырья, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм (размером частиц более 1мм), состоят в основном из цельных трубчатых и краевых цветков и их фрагментов, листочков обертки и их фрагментов, кусочков цветоложа с цветками или без них, кусочков цветоносов, фрагментов листьев (рис. 3).
При этом во фракциях идентифицируются следующие морфолого анатомические признаки сырья: у листочков обертки и их фрагментов хорошо заметна центральная жилка, сопровождающая секреторные ходы и опушенная, характерными для пижмы обыкновенной, бичевидными волоскам имеющими многоклеточную ножку (рис. 3Б). Эпидермис наружной стороны представлен крупными клетками с прямыми или слегка извилистыми стенками, с заметно выраженной складчатостью кутикулы, с устьицами аномоцитного типа (рис. 3Б), волосками и железистыми трихомами (рис. 3А). Хорошо диагностируется эпидермис внутренней стороны, образованный узкими, сильно вытянутыми клетками. Внутренние ткани листочка, представлены склеренхимными волокнами с сильно утолщенными оболочками, в которых хорошо заметны поровые каналы (рис. 3А).
Среди гистологических особенностей листьев в указанной фракции выявлены следующие признаки: эпидермис с клетками почти округлой формы с сильно утолщенными стенками, а также устьичные аппараты аномоцитного типа в эпидермисе с нижней стороны листа; волосистые и железистые трихомы, аналогичные описанным выше для листочков обёртки (рис. 3В).
Среди диагностируемых признаков характерных для трубчатых цветков пижмы важно отметить неоднородность клеток эпидермиса на трубке венчика, с многочисленными друзами (рис. 3Г). Указанная особенность является значимой, она легко диагностируемой в порошке сырья пижмы обыкновенной. Наиболее часто встречаемым фрагментом околоцветника является отгиб венчика. Он желтого цвета, представлен пятью вытянутыми зубцами с округлыми верхушками и железистыми трихомами, характерными для пижмы обыкновенной. Завязи цветков также имеют ряд диагностических особенностей. К основным из них можно отнести следующие: паренхимные клетки эпидермиса завязи, изодиаметричные по форме; основание завязи, обрамленное тремя-четырьмя рядами склерефицированных клеток. Также диагностичными являются фрагменты мест срастания завязи и венчика с микроскопируемыми там многочисленными друзами, образующими заметное кольцо (рис. 3Е); локализация эфиромасличные железок – наиболее густо расположенных на завязи и у основания трубочки венчика (рис. 3Д); мелкозубчатая окраина завязи цветка – хохлатка редуцированной чашечки (рис. 3Д). Рисунок 3 – Диагностические элементы порошка цветков пижмы обыкновенной, (фракция более 1 мм): А – эпидермис обертки соцветия с трихомами (х400), Б – эпидермис обертки соцветия (х400), В – эпидермис листа (х400), Г – трубка венчика (х400), Д – зона сопряжения венчика и завязи; хохлатка редуцированной чашечки (х400), Е – зона сопряжения венчика и завязи; железки завязи; кольцо из клеток с друзами оксалата кальция (х400).
Обозначения: 1,4 – кроющие бичевидные трихомы, 2 - устьице, 3 -склеренхима, 5 – скопление друз, 6 - железки, 7 - хохлатка. Фракция сырья, проходящая сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм (размер частиц более 0,25 мм и менее 1 мм).
Данная фракция представлена в основном цельными трубчатыми и краевыми цветками и их фрагментами различных размеров, листочков обертки и их фрагментов, с характерными выше описанными диагностическими признаками (рис. 4). В порошке указанной фракции диагностируются фертильные части цветка. Из основных особенностей андроцея, можно отметить: крупные, двухгнездные, сросшиеся теки пыльников, с заостренными верхушками, заполненными пыльцой желтого цвета или без нее (рис. 4Д, Е); длинные тычиночные нити, бесцветные с заметным проводящим пучком, из двух спиральных сосудов. Эпидермис тычиночных нитей представлен слабо вытянутыми, тонкостенными клетками.
К диагностируемым особенностям гинецея, можно отнести: неровную, ворсинчатую поверхность раздвоенного рыльца (рис. 4Е); крупное кольцо из нектарников желтого цвета, локализованное у основания столбика пестика.
Фракция сырья, проходящая сквозь сито с отверстиями диаметром 0,25 мм (размер частиц менее 0,25мм), представлена мелким желто-зеленым порошком с коричневыми вкраплениями, с размером частиц не диагностируемым невооруженным глазом.
При микроскопическом исследовании данной фракции обнаруживаются фрагменты соцветия корзинка пижмы обыкновенной с диагностическими признаками, характерными для данного вида сырья: цельные незрелые цветки, фрагменты цветка (рис. 5): обрывки эпидермиса трубки венчика и завязи, фрагменты пестика и тычинок; фрагменты листочков обертки. Встречаются фрагменты листовых пластинок и цветоносов в продольном и поперечном сечении; отдельные волоски и их обломки, трудно распознаваемые частицы растительного сырья и примесные частицы (рис. 5).
Диагностирование признаков порошка цветков пижмы в рамках сравнительного морфолого-анатомического анализа с порошком цветков бессмертника песчаного
На хроматограмме зарегистрировано 28 пиков. Основными летучими компонентами с относительной площадью Aотн,i 1% являются 20 компонентов, среди которых выбраны компоненты с Aотн,i 3%, в количестве 8 с индексами удерживания 703, 883, 958, 1047, 1105, 1198, 1252, 1310. Из всех значений 10 совпадают с основными летучими компонентами цветков, им соответствуют индексы удерживания 652, 703, 760, 838, 883, 958, 1066, 1252, 1444, 1543.
В целом, летучие компоненты цветков и промышленного образца ОАО «Красногорсклексредства», пачка 50 г, как и ожидалось, имеют близкий состав.
На рис. 24 представлена хроматограмма летучих компонентов промышленного образца ОАО «Красногорсклексредства», фильтр-пакетов.
Хроматограмма летучих компонентов равновесной паровой фазы цветков промышленного образца ОАО «Красногорсклексредства», фильтр-пакеты: капиллярная кварцевая колонка INNOWAX, линейное программирование температуры (40-180С), 4/мин, газ-носитель – водород. На хроматограмме зарегистрировано 18 пиков. Основными летучими компонентами с относительной площадью Aотн,i 1% являются 12 компонентов, среди которых выбраны компоненты с Aотн,i 3%, в количестве 10 с индексами удерживания 703, 858, 952, 1039, 1105, 1085, 1231, 1418, 1518, 1548. Из всех значений 2 совпадают с основными летучими компонентами предыдущих образцов, им соответствуют индексы удерживания 703, 760. На рис. 25 представлена хроматограмма летучих компонентов настойки пижмы обыкновенной.
Хроматограмма летучих компонентов равновесной паровой фазы настойки пижмы: капиллярная кварцевая колонка INNOWAX, линейное программирование температуры (40-180С), 4/мин, газ-носитель – водород.
На хроматограмме зарегистрировано 4 пика с индексами удерживания 742, 858, 918, 943. Из всех значений 1 совпадает с основным летучим компонентом промышленного образца ОАО «Красногорсклексредства», фильтр-пакеты с индексом удерживания 858.
Хроматограмма летучих компонентов равновесной паровой фазы препарата «Танацехол»: капиллярная кварцевая колонка INNOWAX, линейное программирование температуры (40-180С), 4/мин, газ-носитель - водород.
На хроматограмме зарегистрировано 13 пиков. Основными летучими компонентами с относительной площадью AomHi 1% являются 9 компонентов, среди которых выбраны компоненты с AomHi 3%, в количестве 5 с индексами удерживания 858, 918, 943,1001,1209. Из всех значений 3 совпадают с основными летучими компонентами цветков пижмы обыкновенной, им соответствуют индексы удерживания 703, 838, 1001, три компонента 3 совпадают с основными летучими компонентами настойки пижмы обыкновенной, им соответствуют индексы удерживания 858, 918, 943.
На основании газохроматографических характеристик относительных площадей Л1отн% и индексов удерживания if основных летучих компонентов была построена диаграмма-образ равновесной паровой фазы образцов (рис. 27).
Диаграммы «индекс удерживания - относительная площадь пика» полученных на колонке с полярной неподвижной фазой. Обозначения: А - цветков пижмы; Б - промышленного образца ОАО «Красногорсклексредства», пачки 50 г; В - промышленного образца ОАО «Красногорсклексредства», фильтр-пакеты; Г - настойки пижмы обыкновенной, Д - препарата «Танацехол»
Хроматографические спектры удерживания летучих компонентов образцах растения 10 (703, 858, 952, 1039, 1105, 1085, 1231, 1418, 1518, 1548) имеют совпадений индексов удерживания в пределах погрешности в цветках пижмы обыкновенной и промышленном образце ОАО «Красногорсклексредства».
Среди всех полученных на хроматограммах летучих компонентов, содержащихся в различных образцах растения и препаратах, 3 компонента (703, 838, 943) имеют совпадений индексов удерживания в пределах погрешности в образцах сырья и препарата «Танацехол» (табл. 11). 1 компонент 858 имеет совпадение индекса удерживания в пределах погрешности в промышленном образце ОАО «Красногорсклексредства», фильтр-пакеты и настойке пижмы. Три компонента (858, 918, 943) имеют совпадений индексов удерживания в пределах погрешности в настойке пижмы и препарате «Танацехол».
Летучие компоненты цветков и промышленного образца ОАО «Красногорсклексредства», пачка 50 г, как и ожидалось, имеют близкий состав. Хроматографические характеристики основных летучих компонентов настойки и цветков достаточно сильно отличаются друг от друга. На диаграмме основных летучих компонентов препарата «Танацехол», отсутствует часть некоторых компонентов, обнаруживаемых в цветках. Отсутствие некоторых компонентов связано, по-видимому, с технологией изготовления препаратов.
Таким образом, экспериментально определены с использованием капиллярных колонок с неполярной (VF-1) и полярной (INNOWAX) неподвижными фазами, газохроматографические характеристики летучих компонентов, выделяющихся в равновесную паровую фазу из цветков пижмы обыкновенной, промышленных образцов сырья и препаратов на ее основе. Получены газохроматографические спектры удерживания летучих компонентов для этих объектов, включающие совокупность индексов удерживания Ван-ден-Доола и Кратца в диапазоне от 453±5 до 1129±1 для колонки с неполярной и от 574±8 до 1569±2 для колонки с полярной неподвижными фазами. Установлено, что летучие компоненты цветков и промышленных образцов сырья имеют близкий состав, а многие летучие компоненты препаратов отсутствуют, что связано, по-видимому, с технологией изготовления. Из массива полученных газохроматографических данных по цветкам пижмы обыкновенной, включающего 31 индекс удерживания летучих компонентов для неполярной фазы и 14 индексов удерживания для полярной фазы, выбраны характеристические летучие компоненты, имеющие по два или более совпадения индексов удерживания при переходе от одного объекта исследования к другому. На основании определения основных летучих компонентов каждого из объектов исследования, относительное содержание которых Ліотн1%, построены диаграммы-образы для идентификации этих объектов и оценки их подлинности. Показано близкое соответствие диаграмм летучих компонентов цветков и промышленных образцов сырья для колонки с неполярной неподвижной фазой. В качестве маркеров цветков пижмы обыкновенной предложено использовать три компонента с наибольшим содержанием в паровой фазе (с индексами удерживания на неполярной фазе: 474±5, 923±2, 1048±1 и Аіотн= 23,33; 15,12; 17,06, соответственно).
Структурные исследования выделенных веществ
Для стандартизации сиропа проведена оценка органолептических свойств и определены плотность, показатель преломления, значения рН, концентрация спирта, содержание действующих веществ, микробиологическая чистота (табл. 27). Определение производили в соответствии с ГФ РФ XII издания, часть 1 [21]. Показатели качества Значения Сироп на фруктозе Сироп на сахарозе Сироп на сорбите Описание Густая, прозрачная жидкость, желто-коричневого цвета, с приятным, специфическим запахом, сладким вкусом Густая, прозрачная жидкость, желто-коричневого цвета, с приятным, специфическим запахом, сладким вкусом Густая, прозрачная жидкость, желто-коричневого цвета, с приятным, специфическим запахом, сладким вкусом
Плотность (г/см3) 1,25 1,27 1,23 Показатель преломления 1,3900 1,4500 1,4200 рН 6,4 6,2 6,6 Содержание спирта, % 3,6 3,7 3,8 Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид 0,032 0,035 0,033 Микробиологическая чистота Аэробных бактерий менее 500 в 1 г; грибов менее 50 в 1 мл; отсутствие бактерий семейств Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus
Таким образом, разработан состав и более рациональная технология получения сиропа на основе 40% настойки из цветков пижмы обыкновенной. Разработана методика качественного анализа сиропа с применением ТСХ, с использованием в качестве стандартного образца – тилианина, и методика количественного определения суммы флавоноидов, методом дифференциальной спектрофотометрии, в пересчете на цинарозид, при длине волны 400 нм. 5. Влияние разработанных лекарственных препаратов на экскреторную функцию почек Исследование влияния препаратов пижмы обыкновенной на выделительную функцию почек проводилось путем постановки хронических фармакологических экспериментов на белых беспородных крысах обоего пола массой 180 - 220 г. Животные содержались в виварии на обычном рационе при свободном доступе к воде. Исследованию подверглись следующие препараты на основе цветков пижмы обыкновенной: сироп цветков пижмы на фруктозе и сироп цветков пижмы на сорбите - в дозе 50 мкл/кг за 4 и 24 ч эксперимента. Всего было поставлено 4 серии экспериментов, в каждой серии участвовало по 3 группы животных, каждая группа состояла из 10 крыс. За день до опыта животные получали внутрижелудочно водную нагрузку в объеме 3% от массы тела.
В день эксперимента крысам абсолютного контроля при помощи внутрижелудочного зонда вводилась 3% водная нагрузка, животным относительного контроля – раствор фруктозы/сорбита на фоне аналогичной водной нагрузки, а опытным крысам – сироп цветков пижмы на фруктозе/сорбите на фоне идентичной водной нагрузки. После этого животные помещались на 4 и 24 часа в обменные клетки для сбора мочи. У полученных образцов мочи определялся объем, регистрировалась концентрация натрия и калия методом пламенной фотометрии на ПАЖ-1, креатинина - колориметрическим методом на КФК-3. С целью получения более точных результатов исследования все показатели пересчитывались на 100 г массы тела животного.
Статистическая обработка полученных результатов экспериментов проводилась с применением стандартных методов вариационной статистики: расчет средней арифметической величины (М), средней ошибки средней арифметической (m) – при помощи программ Microsoft Excel 2010 «Пакет анализа» и Statistica 8.0 по критерию Манна-Уитни.
В результате проведенных фармакологических экспериментов было выявлено следующее. Однократное внутрижелудочное введение фруктозы сиропа крысам в дозе 50 мкл/кг в первые 4 ч опыта не привело к достоверным изменениям показателей экскреторной функции почек (табл. 28). Однако спустя 24 ч после введения фруктозы у животных данной группы достоверно возросли показатели диуреза на 37% и натрийуреза на 53% относительного водного контроля (табл. 29).
Влияние фруктозы и сиропа пижмы на фруктозе в дозе 50 мкл/кг на экскреторную функцию почек за 4 ч эксперимента (М±m, n=10)
В тоже время, сироп цветков пижмы на фруктозе в дозе 50 мкл/кг в первые 4 ч эксперимента не проявил диуретических и салуретических свойств, а через 24 ч – способствовал значительному достоверному росту почечной экскреции воды на 60%, натрия на 43% и калия на 30% у животных данной группы относительного водного контроля (табл. 28 и 29).
Внутрижелудочное введение сорбитного сиропа животным привело к недостоверным изменениям показателей выделительной функции почек в первые 4 ч опытного периода (табл. 30). По окончании 24 ч данный препарат способствовал достоверному возрастанию всех исследуемых показателей почечной экскреции: воды – на 49%, натрия – на 62%, калия – на 40%, креатинина – на 25% (табл. 31), что свидетельствует о тенденции к проявлении калийсберегающего эффекта.
Сироп пижмы цветков на сорбите в дозе 50 мкл/кг при однократном введении за 4 ч эксперимента не вызвал достоверных изменений исследуемых показателей почечной экскреции (табл. 30). Спустя 24 ч опыта сироп пижмы цветков на сорбите привел к достоверному возрастанию диуреза – на 29%, натрийуреза – на 37%, калийуреза – на 41% и креатининуреза – на 30% в данной группе животных относительно водного контроля (табл. 31).
Следовательно, среди изученных препаратов наиболее эффективно стимулирует диурез и салурез сироп пижмы цветков на основе фруктозы исключительно за счет снижения канальцевой реабсорбции. В тоже время, сироп пижмы цветков на сорбите уступая по силе диуретического действия сиропу пижмы цветков на фруктозе, обладает наряду с салуретическими креатининуретическими свойствами, что свидетельствует о стимуляции клубочковой фильтрации и угнетении канальцевой реабсорбции в почках.
Создание новых лекарственных препаратов обязательным образом сопряжено с изучением вопросов безопасности их применения. С этой целью было проведено исследование острой токсичности настойки пижмы обыкновенной (экстрагент - спирт этиловый 40%, соотношение «сырье:эктрагент» 1:5, способ получения – модифицированная ремацерация). Опыты по изучению острой токсичности настойки пижмы проводили на 30 белых беспородных половозрелых крысах-самцах массой 200 – 220 г. Животные были разделены на три группы по 10 крыс в каждой. Первая группа животных получала однократно внутрижелудочно настойку пижмы в дозе 15 г/кг на фоне 3% водной нагрузки, вторая группа – спирт этиловый 40% на фоне 3% водной нагрузки, а третья группа – воду в аналогичном объеме. В первый день животные находились под непрерывным наблюдением. Общая продолжительность эксперимента составила 14 суток. В ходе исследования летальных случаев зарегистрировано не было. За все время наблюдения нарушений в поведенческой активности крыс контрольных групп и опытной группы зарегистрировано не было. Изучение массы тела грызунов всех групп в динамике отличий не выявили. Введение настойки пижмы обыкновенной в дозе 15 г/кг не вызвало гибели животных, на основании этого можно сделать вывод о том, что исследуемый образец относится к IV классу токсичности (малоопасные вещества) в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.
Таким образом, установлено, что сироп пижмы цветков на фруктозе наиболее эффективно стимулирует диурез исключительно за счет канальцевого эффекта. В свою очередь, сироп пижмы цветков на сорбите, обладая менее выраженными диуретическими свойствами, приводит к росту креатининуреза и салуреза, а, следовательно, росту клубочковой фильтрации и угнетению канальцевой реабсорбции. Настойка пижмы относится к IV классу токсичности (малоопасные вещества) в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.
