Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Экологические аспекты распространения арбовирусов и эпидемиология вирусных инфекций (Обзор литературы) 11
1-1- Общая характеристика и эпидемиологическое значение арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края
1.2. Значение членистоногих и позвоночных в циркуляции арбовирусов 24
1.3. Особенности эпидемиологии арбовирусных инфекций 34
Глава 2. Материалы и методы 38
2.1. Материалы 38
2.2. Методы исследования
2.2.1. Эпидемиологический анализ заболеваемости 39
2.2.2. Места сбора полевого материала 40
2.2.3. Сбор и хранение полевого материала 40
2.2.4. Подготовка проб полевого материала к исследованию 41
2.2.5. Диагностические тест-системы, использованные при проведении лабораторных исследований 43
2.3. Методы математической и статистической обработки результатов 45
Глава 3. Природные предпосылки формирования очагов арбовирусных инфекций на территиории Ставропольского края 47
3.1. Ландшафтно-географическая и природно климатическая характеристика региона 47
Условия, обеспечивающие формирование при родных очагов арбовирусных инфекций 54
Глава 4. Изучение спектра арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края 59
4.1. Значение кровососущих членистоногих в формировании природных очагов арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края 59
4.2. Оценка роли птиц, мелких млекопитающих и сельскохозяйственных животных в сохранении возбудителей арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края 72
4.2.1. Роль птиц в поддержании циркуляции арбовиру-сов в природе 72
4.2.2. Значение грызунов как природных резервуаров арбовирусов 75
4.2.3. Роль сельскохозяйственных животных в сохранении возбудителей арбовирусных инфекций 78
Глава 5. Роль арбовирусов в краевой инфекционной патологии 85
5.1. Эпидемиологические особенности Крымской геморрагической лихорадки в Ставропольском крае 86
5.2. Клинические проявления Крымской геморрагической лихорадки 93
5.3. Выявление специфических антител к арбовиру-сам в сыворотках крови доноров 96
Глава 6. Районирование территории ставропольского края по степени активности природных очагов арбовирусов 102
Заключение 125
Выводы 139
Список литературы 141
Приложение
- Особенности эпидемиологии арбовирусных инфекций
- Эпидемиологический анализ заболеваемости
- Условия, обеспечивающие формирование при родных очагов арбовирусных инфекций
- Оценка роли птиц, мелких млекопитающих и сельскохозяйственных животных в сохранении возбудителей арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края
Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время на территории Российской Федерации установлена циркуляция многих арбовирусов, являющихся потенциально опасными для человека. Повсеместное распространение, большое антигенное разнообразие арбовирусов могут привести к осложнению эпидемиологической обстановки, связанной со вспышками арбовирусных инфекций (Львов Д.К. и др., 1989; Львов Д.К., Бутенко А.И., 2007). Благоприятные погодные условия, достаточная кормовая база, снижение дезинсекционных и акарицидных мероприятий в последние годы привели к резкому увеличению численности основных переносчиков арбовирусов – клещей, комаров, что обусловило активизацию и расширение ареала природных очагов арбовирусов (Онищенко Г.Г., 2000). Подтверждением этому явились вспышки Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и лихорадки Западного Нила (ЛЗН) в Ставропольском крае, Ростовской, Астраханской, Волгоградской областях и других субъектах РФ (Онищенко Г.Г. и др., 2000; Вышемирский О.И. и др., 2001; Колобухина Л.В. и др. 2001; Петров В.А. и др., 2001; Василенко Н.Ф., 2002; Ковтунов А.И. и др., 2003; Васильев А.В. и др., 2005). Эти события, отнесенные Министерством здравоохранения РФ к разряду чрезвычайных, позволили выявить существенные недостатки при проведении санитарно-эпидемиологического надзора за арбовирусами, что связано, прежде всего, с недостаточной изученностью экологических и клинико-эпидемиологических аспектов их циркуляции (Журавлев В.И., 2002).
Результаты проведенных эпидемиологических и эпизоотологических исследований на территории РФ за последние годы свидетельствуют о том, что помимо вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) и Западного Нила (ЗН), наблюдается активная циркуляция других арбовирусов. Положительные находки отмечаются как при исследовании полевого материала, так и в сыворотках крови от лихорадящих больных и здоровых людей (доноров, животноводов) (Краснова Е.М., 2001; Водяницкая С.Ю., 2005; Айдинов Г.В. и др., 2007; Афанасьева Е.Е. и др., 2007; Смирнова С.Е., 2007; Куличенко А.Н. и др., 2008; Картоев А.А., 2011).
В настоящее время на территории Ставропольского края активно функционирует природный очаг КГЛ, в полевом материале выявлен возбудитель ЛЗН, а в сыворотках крови доноров – антитела к нему (Брюханова Г.Д. и др., 2002; Онищенко Г.Г. и др., 2005; Афанасьева Е.Е. и др., 2006; Василенко Н.Ф. и др., 2007 и др.).
В связи с вышесказанным, актуальными направлениями изучения арбовирусов и арбовирусных инфекций являются такие, как установление спектра арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края; изучение путей распространения арбовирусов; выяснение условий формирования, сохранения и эпидемической значимости природных очагов арбовирусных инфекций.
Цель работы – изучение распространения арбовирусов на территории Ставропольского края и выяснение их роли в краевой инфекционной патологии.
Основные задачи исследования:
-
Изучить природно-климатические условия, способствующие формированию природных очагов арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края.
-
Определить спектр арбовирусов, циркулирующих на территории края.
-
Выявить основных переносчиков и природные резервуары арбовирусов.
-
Определить наличие специфических антител к арбовирусам в сыворотках крови людей и животных.
-
Выяснить значение арбовирусов в краевой инфекционной патологии.
-
Провести эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края по степени риска инфицирования людей возбудителями Крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.
Научная новизна исследований. Впервые определен спектр арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края: ККГЛ, ЗН, клещевого энцефалита (КЭ), Батаи, вирусов Калифорнийской серогруппы (Тягиня, Инко); впервые выявлены антигены вирусов Батаи, Тягиня, Инко в полевом материале. Определены основные виды кровососущих членистоногих, являющихся резервуаром и переносчиками возбудителей природно-очаговых арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края (иксодовые клещи, комары) и их природные резервуары (птицы семейства Врановых, дикие млекопитающие, сельскохозяйственные животные). Впервые проведено эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края по степени риска возникновения заболеваний среди людей арбовирусными инфекциями (КГЛ, ЛЗН) с использованием модифицированного нами метода расчета интегрального показателя трех совместных событий.
Практическая значимость работы. Результаты исследования использованы при разработке следующих нормативных документов:
-
Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней». МУК 4.2.3007-12, утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 28.03.2012 г.
2. Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней». МУК 4.2.3009-12, утвержденные Главным государственным санитарным врачом РФ 29.03. 2012 г.
3. Методические рекомендации «Исследование полевого материала на наличие арбовирусов методами ИФА и ПЦР», одобренные Ученым советом ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора (Протокол № 8 от 09.07.2009 г.) и утвержденные директором института.
4. «Методические рекомендации по предварительной подготовке полевого и клинического материала, обеспечивающей сохранность нуклеиновых кислот при температуре 28±4 С в течение 10 суток», одобренные Ученым советом ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора (Протокол № 9 от 09.10.2009 г.) и утвержденные директором института.
-
Электронная база данных «Результаты эпизоотологического обследования природного очага Крымской геморрагической лихорадки на территории Предкавказья», одобренная Ученым советом ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора (Протокол № 2 от 18.02.2010 г.) и утвержденная директором института.
Научные и практически значимые результаты работы используются в лекционном материале для слушателей курсов первичной специализации и усовершенствования врачей и биологов по особо опасным инфекциям при ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. На территории Ставропольского края циркулируют арбовирусы ККГЛ, ЗН, КЭ, Батаи, Тягиня, Инко, основными переносчиками которых являются клещи родов Hyalomma, Dermacentor, Rhipicephalus, Ixodes, Haemaphysalis, комары рода Aedes, а природными резервуарами - грызуны из семейств Мышиных, Хомяковых и Песчанковых, а так же птицы из сем. Врановых.
2. Наибольшее эпидемиологическое значение в краевой инфекционной патологии среди арбовирусных инфекций имеет Крымская геморрагическая лихорадка.
3. Наличие специфических антител к арбовирусам (ККГЛ, ЗН, КЭ) у местного населения свидетельствует о бессимптомно протекающей инфекции с трансмиссивным механизмом передачи кровососущими членистоногими.
4. Эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края при помощи модифицированного нами метода расчета интегрального показателя трех совместных событий с учетом эпидемиологических и эпизоотологических характеристик позволило выделить территории с различной степенью риска инфицирования людей возбудителями КГЛ и ЛЗН.
Личный вклад соискателя. Результаты работы, представленные в диссертации, получены лично автором в сотрудничестве, главным образом, с научным сотрудником лаборатории медицинской зоологии Г.П. Шкарлет и зав. информационно-аналитическим сектором, канд. техн. наук О.Х. Шаяхметовым (ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора). На защиту вынесены только те положения и результаты работы, в получении которых роль автора была определяющей.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены и обсуждены на Всероссийской научной конференции, посвященной 80-летию со дня основания ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России» «Диагностика, лечение и профилактика опасных и особо опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология» (Киров, 2008); IX Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государств-участников содружества независимых государств» (Волгоград, 2008); научно-практической конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских учреждений Роспотребнадзора «Биологическая безопасность в современном мире» (Оболенск, 2009); юбилейной научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии», посвященной 100-летию Ростовского научно-исследовательского института микробиологии и паразитологии (Ростов-на-Дону, 2009); научной конференции «Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактики актуальных инфекций» (Санкт-Петербург, 2009); Х Межгосударственной научно-практической конференции «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (Ставрополь, 2010); научно-практической школы-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора «Современные технологии обеспечения биологической безопасности» (Оболенск, 2010, 2011); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы болезней, общих для человека и животных» (Ставрополь, 2012).
Публикации. Основное содержание диссертации изложено в 21 опубликованной научной работе, в том числе 5 работ - в периодических изданиях, рекомендованных «Перечнем…» ВАК РФ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 184 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, шести глав собственных исследований, заключения, выводов, приложения; иллюстриро-вана 21 таблицей и 23 рисунками. Список литературы включает 347 источ-ников, из них 211 - отечественных и 136 - зарубежных.
Особенности эпидемиологии арбовирусных инфекций
Общая характеристика и эпидемиологическое значение арбовиру-сов, циркулирующих на территории Ставропольского края
Арбовирусы - экологическая группа вирусов, передающихся восприимчивым позвоночным кровососущими членистоногими переносчиками. Арбовирусы начали изучать с 1901 г., когда кубинский энтомолог С. Finlay и сотрудники американской военной миссии на Кубе во главе с W. Reed установили вирусную природу и трансмиссивную передачу комарами Aedes ае-gypti вируса желтой лихорадки (Reed W. et. al., 1900).Термин «arthropod -borne» (вирусы, передаваемые членистоногими) введен в 1942 г. В 1963 г. Международный подкомитет по номенклатуре вирусов ввел термин «arbovirus» (Львов Д.К. и др., 1989).
На территории России и сопредельных стран выделено более 50 арбо-вирусов, относящихся к семействам Toga-, Flavi-, Випуа-, Reo-, Rhabdo-, Picoma-, Orthomyxoviridae, причем 50 % из них оказались новыми для науки. У некоторых арбовирусов патогенность для человека не выявлена, что отнюдь не означает отсутствия их потенциальной опасности. Опустошительные, наносящие серьезный экономический ущерб эпизоотии среди сельскохозяйственных животных определяют большое ветеринарное значение арбовирусов. Это относится и к болезням диких животных, что объясняет интерес организаций охраны природы.
В полной мере данная проблема актуальна и для нашей страны с ее огромным ландшафтным разнообразием, активным освоением необъятных территорий и другими процессами антропогенного влияния на экосистемы. Миграционные русла птиц, гнездящихся на обширных пространствах Северной Евразии, а зимующих в странах субтропического-тропического и субэкваториально-экваториального климата в Африке, Азии, Америке, Австралии и Океании, определяют возможность заноса ряда вирусов с мест зимовок с дальнейшим формированием сезонных или стойких природных очагов. В отдельных случаях эпидемиологическое благополучие населения объясняется экологической разобщенностью возбудителя и восприимчивого хозяина, а иногда и недостатками диагностики. Все это определяет необходимость дальнейшего систематического обследования территории России в отношении очагов арбовирусов и других вирусов с природной очаговостью, а также осуществления постоянного эколого-вирусологического надзора за состоянием выявленных и обнаружения новых природных очагов (Львов Д.К. и др., 1989; Львов Д.К., 2008).
К настоящему времени на территории Ставропольского края в результате направленных эпизоотологических и иммунодиагностических исследований установлена циркуляция вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) (Колобухина Л.В. и др., 2000; Василенко Н.Ф., Афанасьев Е.Н. и др., 2001; Евченко Ю.М. и др., 2001; Онищенко Г.Г. и др., 2001; Они-щенко Г.Г. и др., 2001; Санникова И.В. и др., 2001; Тохов Ю.М. и др., 2001; Брюханова Г.Д. и др., 2002; Василенко Н.Ф., 2002 а, б; Ковалев Н.Г. и др., 2002; Санникова И.В. и др., 2002; Василенко Н.Ф. и др., 2003, 2004; Емельянова И.Н., 2002, 2006; Тохов Ю.М., 2004) и лихорадки Западного Нила (ЛЗН) (Василенко Н.Ф. и др., 2005; Афанасьева Е.Е., 2006; Афанасьева Е.Е. и др., 2006; Ефременко В.И. и др., 2006; Чумакова И.В. и др., 2006; Василенко Н.Ф. и др., 2007 а, б).
Вирус ККГЛ. Возбудителем КГЛ является вирус ККГЛ, содержащий негативную РНК, - Crimean-Congo haemorrhagic fever virus (CCHFV) семейства Bunyaviridae рода Nairovirus (Calisher C.H., 1991). Согласно «Международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем» (МБК-10) болезнь кодируется А98.0 Крымская геморрагическая лихорадка (Ежлова Е.Б. и др., 2009). В соответствии с принятой в России классификацией патогенных для человека микроорганизмов вирус ККГЛ относится ко II группе патогенности (СП 1.3.1285-03). Основные переносчики вируса ККГЛ - клещи. Спектр иксодовых клещей, экологически связанных с вирусом, насчитывает более 30 видов и подвидов, относящихся к родам Hyalomma, Haemaphysalis, Rhipicephalus, Derma-centor, Amblyomma, Boophilus и Ixodes. Во всех эндемичных районах основное значение в качестве резервуара и переносчика вируса имеет клещ Н. marginatum, который сохраняет вирус пожизненно. У этого вида клеща установлены трансовариальная и трансфазовая передачи вируса (Онищенко Г.Г. и др., 2005; Емельянова И.Н., 2006).
На Юге России природно-очаговая территория по КГЛ приурочена к степным, полупустынным и лесостепным ландшафтам (Лазарев В.Н., 1973; Смирнова С.Е., 2007). Здесь возбудитель КГЛ изолирован от клещей Н. marginatum, Н. anatolicum, D. marginatus, R rossicus, R. bursa, B. annulatus, I. rici-nus и др. В лесостепных ландшафтах численность Н. marginatum снижается и роль резервуара и переносчика вируса ККГЛ играют клеши других видов, в частности D. marginatus (Клюева Е.В. и др., 2002; Денисов А.А. и др., 2005; Москвитина Э.А. и др., 2007).
Прокормители клещей - млекопитающие и птицы различных видов, а также крупный и мелкий рогатый скот. При этом отличительной особенностью КГЛ является протекание заболевания у домашних животных в виде практически бессимптомной инфекции (Онищенко Г.Г. и др., 2005). Случаи заражения людей КГЛ во время забоя и разделки туш домашних животных свидетельствуют о том, что крупный рогатый скот (КРС) выполняет роль теплокровных хозяев возбудителя. Последнее позволяет использовать сельскохозяйственных животных в качестве индикаторных видов при изучении ареала вируса (Смирнова С.Е., 2003, 2007).
Птицы являются основными прокормителями преимагинальных фаз иксодовых клещей. Личинки и нимфы иксодовых клещей питаются более чем на 40 видах птиц (Львов Д.К., Ильичев В.Д., 1979). Возможно, птицы осуществляют механический перенос инфицированных клещей, не являясь донорами вируса (Аристова В.А. и др., 2001; Бутенко A.M. и др., 2002; Во дяницкая С.Ю., 2005). Зайцы, ежи, суслики и другие мелкие млекопитающие, прокармливая все фазы развития иксодовых клещей, заражаются от имаго и одновременно заражают кормящиеся на них преимагинальные стадии (нимфы и личинки). Они способствуют широкому заражению переносчиков, а зайцы и грачи, кроме того, и переносу их на значительные расстояния. Циркуляция арбовирусов в природе, в том числе и ККГЛ, имеет выраженную сезонность, совпадающую с пиками активности основных переносчиков.
Человек заражается КГЛ при укусе инфицированным клещом, однако трансмиссивный путь не является единственным. Инфицирование может происходить через поврежденную кожу рук, кровь и кровянистые выделения больных, а также при раздавливании клещей, снятых с домашних животных (Бутенко A.M., 1970; Малеев В.В. и др., 2003; Санникова И.В. и др., 2005). Известны случаи внутрилабораторного заражения (Каримов С.К. и др., 1975).
Эпидемиологический анализ заболеваемости
Ставропольского края, а также с целью уточнения видового состава основных переносчиков и носителей арбовирусов, изучения особенностей их экологии, распространения и территориальной приуроченности было проведено комплексное исследование кровососущих членистоногих, диких птиц, мелких и крупных млекопитающих.
Распространение арбовирусов зависит от наличия специфических переносчиков, восприимчивых позвоночных, суммы осадков и тепла и некоторых других факторов (Львов Д.К. и др., 1989). Одни вирусы передаются строго специфичными видами и родами комаров, другие - иксодовыми, га-мазовыми и аргасовыми клещами, третьи - другими кровососущими насекомыми - москитами и мокрецами. Причина этого явления заключается в ограничивающем действии факторов экологического порядка. Один из важнейших экологических факторов, определяющих циркуляцию арбовирусов в природе - специфика связей переносчиков с позвоночными хозяевами. Их трофические связи определяют основные циклы циркуляции, так многие виды комаров родов Aedes, Culex и Coquillettidia питаются в основном на птицах, a Anopheles, Culiseta - на млекопитающих. Наибольшее количество арбовирусов выделено от комаров. Личинки комаров легко заражаются многими арбовирусами алиментарным путем. С комарами ассоциировано более 230 вирусов из семейств Toga-, Flavi-, Випуа-, Reo- и Rabdoviridae (Чунихин СП., Леонова Г.Н., 1985). Иксодовые и аргасовые клещи, благодаря длительному циклу метаморфоза (от 5-7 до 20-25 лет), способности к трансова-риальной и трансфазовой передаче, являются эффективными переносчиками и резервуарами около 100 арбовирусов из семейств Toga- Flavi-, Випуа-,Reo-, Irido- и Rabdoviridae. Клещи обеспечивают существование стойких природных очагов арбовирусов, таких как Крымская и Омская геморрагические лихорадки, клещевой энцефалит и др. (Павловский Е.Н., 1960; Львов Д.К. и др., 1989; Смирнова С.Е., 2007).
Проведеные нами исследования позволили установить на территории Ставропольского края наличие шести родов иксодовых клещей: Hyalomma Koch, 1844; Dermacentor Koch, 1844; Boophilus Curtice, 1891; Rhipicephalus Koch, 1844; Ixodes Latreille, 1795; Haemaphysalis Koch, 1844, представленных 16 видами: Hyalomma marginatum Koch, 1844; H. scupense Schulze, 1981; Dermacentor marginatus Sulzer, 1776; D. reticulatus Fabncius, 1794; D. niveus Neumann, 1897; Rhipicephalus rossicus Jakimov et Kohl-Jakimova; 1911, Rh. bursa Canestrini et Fanzago, 1877; Rh. sanguineus Latreille, 1806; Rh. schulzei Olenev, 1929; Rh. pumilio Schulze, 1935; Haemaphysalis punctata Canestrini et Fanzago, 1877; Haem. parva Neumann, 1897; Haem. sulcata Canestrini et Fanzago, 1877; Haem. inermis Birula, 1895; Boophilus annulatus Say, 1821; Ixodes ricinus Linnaeus, 1758.
Разнообразие климата и растительности в разных ландшафтах в сочетании с хозяйственной деятельностью человека (развитое общественное и частное животноводство), большое количество прокормителей имаго создают благоприятные условия для обитания иксодовых клещей. Расчлененность ландшафта определяет мозаичное распределение клещей в отдельных стациях, различие показателей их численности и зараженности возбудителями инфекционных болезней.
Самыми распространенными иксодовыми клещами являются Н marginatum - 54,6 %. Второе место по численности приходится на В. annulatus - 13,1 %. Доля D. marginatus составляет 10,3 %. Другие виды составляют от 6,9 до 0,01 %. Видовое распределение иксодовых клещей представлено на рисунке 6.
Иксодовый клещ Н. marginatum - основной резервуар и переносчик возбудителя КГЛ - более распространен в административных районах, расположенных в полупустынной и степной ландшафтных зонах (Нефтекумском, Курском, Арзгирском, Благодарненском, Туркменском, Апанасенковском, Платовском, Красногвардейском, Буденновском). Излюбленными местами обитания Н. marginatum являются пастбища, места дойки коров, неубранные стога сена, лесозащитные полосы, заселенные грачами, забурьяненные участки. В восточных районах края активизация имаго наблюдается в конце марта - середине апреля. Пик численности паразитирования имаго на сельскохозяйственных животных приходится на май. Появление личинок отмечается в середине лета (конец июня - начало июля). В конце июля - начале августа появляются нимфы. Основными прокормителями преимагинальных стадий развития клеща являются птицы семейства врановых, в первую очередь грачи, а так же куриные (куропатка). Из мелких млекопитающих, подвергающихся нападению личинок, отмечены зайцы и ежи. Имаго новой генерации появляются осенью, на животных не напа 62 дают и отходят к зимовке. В процентном соотношении нападение Н. marginatum на человека по сравнению с другими видами клещей не превышает 5 %, но иногда может достигать до 39 % (Тохов Ю.М., 2009).
В период с 2001 г. по 2011 г. нами проведено эпизоотологическое обследование административных территорий края, из них 26 районов и 6 городов. За это время собрано 104978 экземпляров иксодовых клещей. В зависимости от вида клеща, его хозяина-прокормителя, места сбора, упитанности и стадии развития было сформировано 10677 пулов, которые исследованы методом ИФА на наличие антигена вируса ККГЛ.
Наибольшее количество положительных проб выявлено у Н. marginatum -349 (59,7 %) и D. marginatus - 86 (14,7 %). Результаты инфицированности иксодовых клещей по видам возбудителем КГЛ представлены в таблице 2.
Условия, обеспечивающие формирование при родных очагов арбовирусных инфекций
Носители вируса ЗН среди мелких грызунов выявлены на территориях 9 районов из 16 обследованных: Благодарненского, Изобильненского, Курского, Нефтекумского, Степновского, Андроповского, Новоселицкого, Предгорного и Минераловодского.
Удалось установить наличие антигена вируса Тягиня в головном мозге мелких млекопитающих. При исследовании 40 проб грызунов положительными оказались две пробы мыши домовой (Mus musculus) из г. Ессентуки и две - мыши полевой (Apodemus agrarius) из Предгорного района. Положительные находки составили 10,0 %.
На основании полученных результатов следует заключить, что среди грызунов, вовлекаемых в носительство арбовирусов, наиболее важную роль играют мыши подрода Sylvaemus и домовые мыши, а так же полевки. Активное участие синантропных видов грызунов в сохранении арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края представляет значительный эпидемиологический интерес, так как массовые осенне-зимние миграции домовой мыши в жилье человека могут способствовать заносу арбовирусов. 4.23 Роль сельскохозяйственных животных в сохранении возбудителей арбовирусных инфекций
Домашние животные являются основными прокормителями имаго многих видов иксодовых клещей, в том числе переносчиков вируса ККГЛ. Многочисленными исследованиями показана возможность заражения скота вирусом ККГЛ от инфицированных клещей (Чумаков М.П., 1945; Березин В.В. и др., 1971; Бируля Н.Б. и др., 1971; Гордеева З.Е. и др., 1990; Григорьев М.П. и др., 2001). Известны случаи заражения людей КГЛ при разделке туш домашнего скота, что свидетельствует о наличии вирусемии у крупного рогатого скота (Пак Т.П., 1980). Исследования сывороток крови мелкого рогатого скота показали, что при инфицировании овец вирус в крови сохраняется в течение пяти 79 восьми суток, при этом со вторых по четвертые сутки титры достаточны для заражения вирусом клещей (Смирнова С.Е., Чумаков М.П., 1986).
О контакте сельскохозяйственных животных с возбудителем КГЛ можно судить по наличию специфических антител в их сыворотках крови. По данным ряда исследователей, антитела к вирусу ККГЛ обнаружены в сыворотках крови крупного, мелкого рогатого скота и лошадей (Каринская Г.А. и др., 1970; Кучин В.В. и др., 1970; Онищенко Г.Г. и др., 2001; Shepherd A J. et al., 1987, 1989). При этом установлена корреляция между величинами иммунной прослойки у животных и заболеваемостью людей КГЛ (Кучин В.В., 1972).
В данном разделе работы представлены результаты серологического исследования на наличие специфических антител к вирусу ККГЛ сывороток крови домашних животных - крупного и мелкого рогатого скота, являющихся прокормителями имагинальных фаз иксодовых клещей.
В Ставропольском крае в полупустынной зоне Ногайской степи значительная часть территории, где сохранилась растительность полупустынь, используется как отгонные пастбища. На большей части степного ландшафта (80 % площади) расположены пахотные угодья, оконтуренные лесополосами. Однако отдельные участки степи с полынно-злаковой и солянковой растительностью используются в качестве пастбищ. На территории края пастбища являются основными стациями обитания клещей - резервуара возбудителя КГЛ и местами выпаса крупного рогатого скота - основного прокормителя имаго иксодовых клещей.
В 2000 г. первые 4 случая заболевания КГЛ были зарегистрированы во второй декаде апреля в Курском районе. Больные проживали на кошаре и участвовали в убое крупного рогатого скота, на котором отмечалось обилие клещей. Трое из них заболели на второй день после контакта с животными, один - на пятый. В 2002 г. антитела класса G выявлены в 13 пробах сывороток крови крупного рогатого скота в титрах 1:40 - 1:80, что составило 20,9 % от общего количества обследованных коров. Однако в суспензиях имаго Н. marginatum, собранных с тех же коров, антиген вируса ККГЛ не обнаружен. В 2003 г. антитела к вирусу КГЛ выявлены в сыворотках крови у 8 % обследованных коров, выпасавшихся на общественных пастбищах в июле-августе в трех районах Ставропольского края (Благодарненском, Грачевском и Изобильненском). В 2004 г. антитела к вирусу КГЛ обнаружены в сыворотках крови у 27,4 % обследованных коров из четырех районов края (Ан-дроповском, Грачевском, Изобильненском, Ипатовском). Исследования 2005 г. позволили выявить специфические IgG в сыворотках крови 7 КРС и 3 МРС, кроме того в 8 пробах сывороток крови КРС обнаружен антиген вируса ККГЛ. В последующем ежегодно выявлялись антитела у коров (от 1,1 % до 10,3 %); у овец только в 2007 г. отсутствовали положительные результаты, в остальные годы показатель положительных проб колебался от 0,3 % до 30 %. Результаты серологического исследования сывороток крови крупного и мелкого рогатого скота представлены в таблице 10.
В трех случаях отмечено выявление у животных антител класса G, а у клещей, снятых с этих животных, - антигена вируса ККГЛ. При этом одна проба крови была взята у овцы, с которой сняты клещи Rh. rossicus (Курский район); две - у крупного рогатого скота, с которого сняты клещи Н. marginatum (Нефтекумский район).
Частота положительных находок антител к вирусу ККГЛ у животных неодинакова в разные годы и зависит от численности и вирусофорности клещей, а также от степени контакта с последними. Сельскохозяйственные животные, в частности, крупный рогатый скот, являются хорошим индикатором для установления факта циркуляции вируса. По данным В.В. Кучина (1972), наилучшим временем для забора крови у скота являются третья-четвертая недели после пика численности клещей. В эти сроки у животных отмечаются наибольший процент положительных проб и максимальные титры антител, обусловленные недавней инфекцией или реинфекцией в результате контакта с вирусофорными клещами.
Оценка роли птиц, мелких млекопитающих и сельскохозяйственных животных в сохранении возбудителей арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края
На наличие вируса Западного Нила нами исследованы комары 4 родов: Culex, Aedes, Anopheles, Coquillettidia в количестве 3583 имаго, объединенных в 235 пулов. Антиген вируса ЗН выявлен в девяти пробах суспензий комаров Aedes, что составило 6,3 % от всего количества пулов Aedes и 3,8 % от общего количества исследованных пулов. РНК вируса ЗН обнаружена в 14 пробах суспензий комаров рода Aedes - 6,0 % от общего количества исследованных проб и 10,1 % от количества проб комаров рода Aedes.
При анализе полученных данных, обращает на себя внимание факт высокой зараженности вирусом ЗН орнитофильного комара рода Aedes, обитающего, главным образом, во влажной лесопарковой зоне. Из этого можно предположить, что комары рода Aedes, широко распространенные в крае, могут быть одним из переносчиков этой инфекции.
Поскольку особое значение в сохранении вирусной популяции в неблагоприятные для нее периоды (засушливый и зимний) имеют иксодовые, га-мазовые и аргасовые клещи, нами исследованы на наличие антигена вируса ЗН широко распространенные на территории края иксодовые клещи. Из 931 пробы иксодовых клещей Н. marginatum, собранных в 6-ти районах края, 16 (2,3 %) оказались положительными. Коэффициент ранговой корреляции Спир-мена rs = 0,8, что указывает на статистически высокую связь между количеством исследованных и положительных пулов.
В 2008 г. положительный результат на наличие антигена вируса ЗН получен в двух пробах личинок Н. marginatum, снятых с инфицированных грачей. Это достаточно редкий случай, когда прокормитель и переносчик одновременно дали положительный результат. Возможно, зараженные клещи трансмиссивным путем могли инфицировать грачей, либо, наоборот. Также не исключено, что и клещи, и грачи независимо друг от друга были заражены возбудителем ЛЗН. Эти данные подтверждают существование дополнительного механизма циркуляции и сохранения вируса ЗН в природе, который формируется в определенные периоды при сухой и теплой погоде, когда имеются благоприятные условия для массового размножения клещей, и появляется недостаток в комарах как основных переносчиках возбудителя лихорадки Западного Нила.
С 2006 г. в Ставропольском крае нами проводится мониторинг за возбудителем клещевого энцефалита. Для лабораторных исследований отбирали виды клещей, которые согласно литературным данным, являются переносчиками и носителями ВКЭ (Верета Л.А., 1975; Коренберг Э.И., 1993, 2008). Из1381 исследованного пула положительными оказались 124 (9,0 %). Наиболее высокий показатель зараженности у клещей D. marginatus (4,9 %), наименее - D. reticulatus (0,9 %). Первые положительные находки (антиген и РНК ВКЭ) обнаружены Ю.М. Тоховым (2009).
Нами впервые на территории Ставропольского края исследован полевой материал на наличие антигенов вирусов Батаи и Калифорнийской серогруп-пы (Инко, Тягиня). Положительными на наличие антигена вируса Батаи были два пула (5,3 %) клещей имаго Rh. rossicus (из 38 исследованных). Антиген вируса Тягиня выявлен в 9 (7,6 %) суспензиях имаго иксодовых клещей D. marginatus. Вирус Инко впервые обнаружен у клещей К marginatum в четырех (12,1 %) пробах, сформированных из нимф (одна) и имаго (три). Аналогичные данные получены на территории Ростовской области Э.А. Москви-тиной и соавт. (2009). Авторами обнаружены антигенные находки вируса Батаи у клещей Rh. rossicus, белокрылой крачки; вируса Тягиня у клещей D. marginatus и мыши домовой.
Таким образом, в результате выполненных исследований нами определен спектр кровососущих членистоногих (иксодовые клещи Н. marginatum, D. marginatus, D. reticulatus, Rh. rossicus, I. ricinus, Haem. punctata; комары рода Aedes), являющихся резервуаром и переносчиками возбудителей при-родно-очаговых арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края.
Одним из древнейших резервуаров возбудителей арбовирусных болезней являются птицы. Они играют ведущую роль для многих арбовирусов не только в резервации возбудителей в природных очагах, но и в их переносе на огромные расстояния вплоть до трансконтинентальных заносов во время сезонных миграций.
Нами обследовано 892 особи птиц, от которых на наличие антигенов арбовирусов исследовали пробы головного мозга и печени. Антиген вируса ККГЛ выявлен в 39 пробах (4,4 %) головного мозга птиц. Установлено, что основными прокормителями преимагинальных фаз клещей Н. marginatum в Ставропольском крае являются грачи, на долю которых приходится 74,4 % положительных проб. Данные наших исследований показали, что основным резервуаром вируса ЗН среди диких птиц в крае являются грачи, у которых обнаружено 50 % зараженных проб головного мозга и 60 % проб печени; второе место принадлежит голубю сизому (25 % и 30 % соответственно). Положительные результаты, полученные от синантропных популяций птиц, свидетельствуют о циркуляции возбудителя в селитебных ландшафтах. Это создает предпосылки для развития вспышек тех болезней птиц, которые являются общими с человеком (Львов Д.К., Ильичев В.Д., 1979). В пробах головного мозга птиц выявлен антиген вируса Батаи (10,6 %). Основная доля положительных проб на лихорадку Батаи, так же как на КГЛ и ЛЗН, получена от грачей, что свидетельствует о высокой чувствительности этого вида к различным арбовирусным инфекциям.
Особенности биологии и экологии грызунов определяют исключительное значение этого отряда в поддержании природных циклов арбовирусов (Чунихин СП., Леонова Г.Н., 1985).
Результаты наших исследований показали, что основным природным резервуаром вируса ККГЛ среди грызунов на территории Ставропольского края являются мыши сем. Мышиных (Muridae) подрода Sylvaemus и мышь домовая, в эпизоотический процесс вовлечены другие виды грызунов, что свидетельствует о расширении спектра природных носителей возбудителя КГЛ.
Обнаружение антигена вируса ЗН в пробах органов грызунов позволило установить, что носителями возбудителя ЛЗН являются грызуны семейств Мышиных (мышь домовая, мыши подрода Sylvaemus) и Хомяковых (полевки общественная и обыкновенная).
Удалось выявить антиген вируса Тягиня в головном мозге грызунов сем. Мышиных: мыши домовой и мыши полевой. Положительные находки составили 10,0%.
На основании полученных результатов следует заключить, что среди грызунов, вовлекаемых в носительство арбовирусов, наиболее важную роль играют мыши подрода Sylvaemus и домовые мыши, а так же полевки. Активное участие синантропных видов грызунов в сохранении арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края представляет значительный эпидемиологический интерес, так как массовые осенне-зимние миграции домовой мыши в жилье человека могут способствовать заносу арбовирусов.
Домашние животные являются основными прокормителями имаго многих видов иксодовых клещей, в том числе переносчиков вируса ККГЛ. Многочисленными исследованиями показана возможность заражения скота вирусом ККГЛ от инфицированных клещей (Чумаков М.П., 1945; Березин В.В. и др., 1971; Бируля Н.Б. и др., 1971; Гордеева З.Е. и др., 1990; Григорьев М.П. и др., 2001). Известны случаи заражения людей КГЛ при разделке туш домашнего скота, что свидетельствует о наличии вирусемии у крупного рогатого скота (Пак Т.П., 1980). Исследования сывороток крови мелкого рогатого скота показали, что при инфицировании овец вирус в крови сохраняется в течение пяти -восьми суток, при этом со вторых по четвертые сутки титры достаточны для заражения вирусом клещей (Смирнова С.Е., Чумаков М.П., 1986).
