Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Грибы морских местообитаний 8
1.2. Море как среда обитания морских грибов 12
1.3. Отношение грибов к солености. Степень активности воды 14
1.4. Грибы морских грунтов 16
1.5. Роль морских грибов в биохимических процессах океана 18
1.6. Морские грибы - продуценты биологически активных соединений 20
1.7. Комплексы грибов и меры их экологического биоразнообразия 23 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 41
Глава 2. Объекты и методы исследования 41
2.1. Объекты исследования 41
2.2. Основные методы выделения и выращивания грибов 43
2.2.1. Методы выделения грибов из морских грунтов в чистую культуру 43
2.2.2. Методы изучения численности, видового богатства и 44 биоразнообразия грибов морских грунтов
2.2.3. Методы изучения отношения грибов к низкой активности воды 45
2.2.4. Методы изучения способности грибов к продукции биологически активных соединений
2.2.5. Методы и условия культивирования грибов 46
2.2.6. Методы экстракции, выделения и идентификации суммарных фракций и их хроматографически индивидуальных соединений
2.2.7. Методы определения биологической активности экстрактов грибов и индивидуальных веществ
2.2.8. Статистические методы 50 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 52
Глава 3. Видовое богатство и биоразнообразие комплекса грибов морских грунтов Японского моря
3.1. Видовое богатство и биоразнообразие комплексов грибов морских грунтов
3.1.1. Влияние механического состава морского грунта на видовое богатство и биоразнообразие комплексов грибов морских грунтов
3.1.2. Влияние антропогенной нагрузки на видовое богатство и биоразнообразие комплексов грибов морских грунтов
3.1.3. Влияние глубины отбора образцов грунта на видовое богатство и биоразнообразие комплексов грибов морских грунтов
3.2. Влияние низкой активности воды на рост грибов выделенных из морских грунтов
3.3. Продукция биологически активных веществ грибами морских грунтов 91
3.3.1. Видовое богатство и биоразнообразие грибов-продуцентов гемолитически активных веществ в комплексах грибов морских грунтов Японского моря
3.3.2. Влияние механического состава морского грунта на обилие, видовое богатство и биоразнообразие грибов-продуцентов гемолитически активных веществ в комплексах грибов морских грунтов
3.3.3. Влияние антропогенной нагрузки на обилие, видовое богатство и биоразнообразие грибов-продуцентов гемолитически активных веществ в комплексах грибов морских грунтов
Глава 4. Низкомолекулярные гемолитически активные вещества грибов морских грунтов
4.1. Выявление гемолитически активных низкомолекулярных соединений 100
среди грибных метаболитов
Глава 5. Биологически активные метаболиты Chaetomium olivaceum 105
5.1. Влияние условий культивирования штамма гриба Chaetomium 105
olivaceum на продукцию гемолитически активных веществ
Глава 6. Установление химической структуры биологически ПО
активных соединений из штамма гриба Chaetomium olivaceum
6.1. Установление химической структуры гемолитически активных ПО
соединений из штамма гриба Chaetomium olivaceum
6.2. Установление химической структуры антибактериальных веществ, 114
продуцируемых штаммом гриба Chaetomium olivaceum
6.2.1. Установление химической структуры антибактериальных 114 соединений из гриба Chaetomium olivaceum, при культивировании штамма на среде RM
6.3. Изучение цитотоксического действия метаболитов штамма гриба 1:16
Chaetomium olivaceum
ВЫВОДЫ 118
ЛИТЕРАТУРА 119
ПРИЛОЖЕНИЕ 154
5 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГЖХ - газожидкостная хроматография;
ГЖХМС - газожидкостная хроматография, совмещенная с масс-
спектрометрией;
ГК5о - минимальная концентрация вещества, вызывающая 50% гемолиз
эритроцитов;
ДВР - Дальний Восток России;
КММ* - коллекция морских микроорганизмов;
ПТСХ - препаративная тонкослойная хроматография;
ТСХ - тонкослойная хроматография;
ТфП - температура фазового перехода;
АТСС* - американская коллекция типовых культур;
LE - типовой номер Гербария Ботанического института им. В.Л.
Комарова РАН, С-Петербург;
LM - световой микроскоп (light microscopy);
MM - пшенная среда (milt medium);
RM - рисовая среда (rice medium);
SEM - сканирующий электронный микроскоп (scanning electro nmicroscopy);
WYC - сусло-дрожже-кукурузная среда (wort yerst corn medium)
- Морские грибы - продуценты биологически активных соединений
- Методы и условия культивирования грибов
- Видовое богатство и биоразнообразие комплексов грибов морских грунтов
Введение к работе
Морские экосистемы нашей планеты во все времена служили для человека, в первую очередь, источником разнообразных пищевых ресурсов, что остается актуальным и сегодня. Однако в настоящее время изучение биологии океана становится все более целенаправленным еще ив другом отношении. Это связано с поиском новых продуцентов биологически активных соединений.
Наименее изученной группой морских организмов как потенциальных продуцентов биологически активных веществ новой структуры являются грибы. В последние годы показано, что грибы морских местообитаний способны синтезировать вещества, которые не продуцируются наземными экоформами этих организмов. Тем не менее, изучение разнообразия продуктов вторичного метаболизма экологической группы морских грибов невозможно без выявления видового разнообразия грибных комплексов морских экосистем.
Грибы заселяют самые разные места обитания. Одним из самых богатых морских местообитаний грибов являются грунты. Грибы морских грунтов изучались немногими исследователями. Как правило, в состав комплекса грибов морских грунтов входят факультативные морские грибы, преимущественно относящиеся к анаморфным грибам. Тем не менее, среди них встречаются новые виды, которые в наземных условиях не описаны. Кроме того, комплекс грибов морских грунтов играет существенную экологическую роль. Воздействие грибов на другие организмы может осуществляться посредством различных экстрацеллюлярных вторичных метаболитов. Многие из этих веществ обладают токсичным действием и могут оказывать существенное влияние на морскую биоту в целом и в. конечном итоге на здоровье человека. Изучение влияния различных биотических и абиотических факторов на частоту встречаемости токсин образующих форм грибов, а так же на изменение биоразнообразия, численности, доминирования и обилия комплексов грибов морских грунтов представляет актуальные проблемы
7
экологической биохимии и общей экологии. Изменение качественного состава
Wt комплексов грибов морских грунтов может служить индикатором
экологического благополучия исследуемых акваторий.
Таким образом, диссертационная работа выполнена с целью выявления биоразнообразия комплексов грибов морских грунтов на примере дальневосточных акваторий Японского моря, его изменения под действием биотических и абиотических факторов среды, а так же влияния этих факторов на обилие и разнообразие токсин/образующих грибов в морских грунтах.
Для достижения этой цели необходимо решение таких задач, как
выделение грибов в чистую культуру, их идентификация; выявление видового
" богатства грибных комплексов изучаемых грунтов; а также изучение влияния
различных абиотических (гранулометрический состав грунта, глубина) и биотических (уровень антропогенной нагрузки) факторов на биоразнообразие комплексов грибов морских грунтов и частоту встречаемости в них токсин образующих штаммов; определить влияние вторичных грибных метаболитов на развитие грамположительных и грамотрицательных бактериальных тест-культур и зародышей морского ежа Strongylocentrotus intermedins.
#
'#
Морские грибы - продуценты биологически активных соединений
На примере наземных экоформ грибов было показано, что в процессе жизнедеятельности мицелиальные грибы образуют разнообразные вторичные метаболиты .которые могут оказывать существенное влияние, как на развитие самого организма-продуцента, так и на процессы, происходящие во внешней среде, в первую очередь, в питательных субстратах (Фостер, 1950; Шиврина, 1965; Шиврина и др., 1969).
Большим вкладом- в изучение обмена веществ у мицелиальных грибов были работы Райстрика и его сотрудников (Raistrick ?ral., 1931; Raistrick, 1937 по Фостер, 1950), которые с 1922 года начали систематическое выделение, определение и изучение различных органических, соединений, образуемых плесневыми грибами. Райстрик и его сотрудники; были настолько поражены разнообразием продуктов,- образуемых мицелиальными грибами, что предположили для обозначения такой необычайной синтетической активности плесневых грибов специальный термин «полихимизм». Многие исследователи даже считают незаслуженным употребление термина «вторичный» к этой группе метаболитов и считают, что более правильно относить их к «специфическим» или «специальным» метаболитам (Bennett, Bentley, 1989).
Вторичные метаболиты грибов представлены как низкомолекулярными соединениями, так и соединениями, имеющими сравнительно большой молекулярный вес, отличающиеся очень сложной химической структурой; процессы образования которых еще мало изучены. По виду биологической У активности они могут быть отнесены к алкалоидам, антибиотикам или: микотоксинам, механизм действия которых различен. Кроме того, это могут быть белки, полипептиды, полисахариды, органические кислоты, а так/же с/ производные . фенолов и: хинонов, гликозиды, стиролы, изопреноиды, разнообразные гетероциклические соединения, включающие различные неорганические элементы (Билай, 1965; Беккер, 1988; Мирчинк, 1988). Исследования по физиологии грибов, в частности изучения путей их метаболизма, показали, что грибы могут образовывать самые разнообразные циклические соединения из соединений прямого ряда (Мюллер, Лёфффлер, 1995)..
Морские грибы как источники биологически активных соединений изучены еще недостаточно. Изучение морских грибов как: продуцентов биологически активных веществ, по сути, только начинается. Вторичные метаболиты морских грибов представляют собой один из самых интригующих объектов современной науки. Незатухающий интерес специалистов к ним объясняется пока не ясной до конца их ролью в жизнедеятельности микроорганизмов, многообразием структур; этих метаболитов и наличием у многих из них ярко выраженной физиологической активности, часто называемой биологической активностью3.
Среди множества известных вторичных метаболитов грибов, выделенных из морских мест обитания и грибов, ассоциированных с морскими организмами (асцидии, губки, горгонарии, морские водоросли, травы, крабы, лобстеры, кишечный тракт рыбы) наибольший практический интерес для исследователя представляют вещества,, имеющие, как правило, прикладной характер, например, с какой-либо выраженной физиологической активностью: антибактериальной, ферментативной; цитотоксической или противоопухолевой (Pock, Gloer, 1989; Sugano et al., 1994; Liberra, Lindeauist, 1995; Takahashi et al., 1995; Abrell et aL, 1996; Sato, 1996; Belofsky et al., 1998; Toske et al., 1998; Afiyatullov et. al., 2000, 2002; Alker et al., 2001; Blaylock, et ah, 2001; Бурцева и др., 2000; Фролова и др., 2002).
Сведения по химической структуре метаболитов морских грибов, полученные до: 1994 года/включительно, приведены в небольшой серии работ ш обзорах зарубежных авторов (Shin, Fenical, 1987; Guerriero et al., 1989; Pock, Gloer, 1989; Kabayshi, Ishibashi, 1993). В последние годы появилась публикация о метаболитах морских грибов В.В. Михайлова с сооаторами (Михайлов и др., 1999), где наиболее полно освещены достижения отечественных и зарубежных исследователей по изучению метаболитов морских грибов и их биологической активности.
Методы и условия культивирования грибов
Культивирование штаммов-продуцентов гемолитически активных соединений производилось на средах следующего состава:
- а) жидкое пивное сусло - 20 мл; морская вода - 80 мл, рН 7,8 (Билай, 1982; Семёнов, 1990);
- б) разработанная нами среда WYC: сусло пивное - 120 мл; глюкоза -20,4 г; сахароза- 96,0 т; дрожжевой экстракт - 1,2 г; кукурузная мука - 50,0 г; морская вода - 1000 мл;
- в) среда RM: К, Na - виннокислый - 0,01 г; дрожжевой экстракт - 0,02 г; рис - 20,0 г; КН2Р04- 0,01 г; морская вода - 40 мл; (Monaghan etd\., 1995);
- г) среда ММ: К, Na - виннокислый - 0,001 г; ардамин - 0,002 г; пшено - 15,0 г; КН2Р04 - 0,001 г; MgS04x7H20 - 0,001 г; FeS04x7H20 - 0,0001 г; морская вода -20 мл. (Monaghan e/al., 1995).
- д) среда SHG 1: сахароза - 80,0 г; дрожжевой экстракт - 1,0 г; кукурузная мука - 50,0 г; морская вода - 1000 мл (Monaghan et al., 1995);
Для тестирования активности грибных экстрацеллюлярных веществ использовали жидкое сусло. Культивирование производили в колбах Эрлеймейера объемом 0,25 л со 100 мл среды приведенного состава на установке для выращивания микроорганизмов УВМТ-12-250. Время культивирования 7 суток, температура культивирования 22С, скорость вращения 170 об/мин.
Для выявления и получения гемолитически активных веществ, отобранный штамм выращивали, на среде RM, так как на этой среде отобранный нами штамм гриба Chaetomium olivaceum образовывал метаболиты, проявляющие гемолитическую активность в наименьшей концентрации, по сравнению с экстрактами того же штамма, выращенного на других использованных средах. Для выявления и получения веществ с антибиотической активностью, отобранный штамм выращивали на среде RM и ММ. Культивирование производили в колбах Эрлеймейера объемом 0,5 л в термостате, температура инкубации 30С, время культивирования 14 суток (для гемолитически активных веществ); 30 суток (для веществ с антибактериальной активностью).
Методы экстракции, выделения и идентификации суммарных фракций и их хроматографически индивидуальных соединений
Биомассу мицелия гриба со средой гомогенизировали на гомогенизаторе типа МРМ-324 в течение 3-х минут и затем экстрагировали системой хлороформ:этанол в соотношении 2:1, троекратно.
Выделение веществ обладающих гемолитической активностью проводили согласно схеме 1 (см. приложение 3, 5).
Выделение веществ обладающих антибактериальной активностью проводили согласно схеме 2 (см. приложение 4,5).
Выделение и очистку метаболитов до индивидуального состояния осуществляли методами адсорбционной колоночной хроматографии и методом препаративной тонкослойной хроматографии.
Колоночная адсорбционная хроматография на Si02 марки КСК (50x3 см) осуществлялась в системах растворителей: хлороформ-этанол с увеличением процента содержания этанола от 1 до 100; а также петролейный эфир:этилацетат с увеличением процента содержания этилацетата от 1 до 50.
Для колоночной хроматографии- на флоресиле использовали систему растворителей: петролейный эфир:этилацетат, с увеличением градиента концентрации этилацетата до 70%.
Колоночную хроматографию на полихроме проводили последовательным: элюированием вещества бидистиллированной; водой; 50% этанолом; 96% этанолом.
Препаративное разделение метаболитов осуществляли методами препаративной ТСХ. Препаративную тонкослойную хроматографию проводили в системах: петролейный эфир-серный эфир-уксусная; кислота в соотношении 80:20:1 (для веществ с гемолитической активностью) ив системе хлороформ-этанол в соотношении 9:1 и 5:1 (для веществ с антибактериальной активностью).
Для. анализа чистоты получаемых в процессе разделения фракций использовали тонкослойную; хроматографию с использованием тех же систем растворителей. Тонкослойную хроматографию выполняли на стеклянных пластинках с закреплённым слоем силикагеля марки КСК, приготовленных по методу Б.Г. Беленького с соавторами (Беленький и др., 1984). Спектры Ни 13С ЯМР регистрировали на спектрометре "Bruker" WM-250 (250 Мгц, внутренний стандарт ТМС (SiMe4). Оптическое вращение измеряли на поляриметре Perkin-Flmer. 141 . Масс-спектр получали на приборе LKB 9000s (70эВ;.прямой ввод). ГЖХ-МС анализ выполнен на приборе Hewlett Packard 6890 GG System с 5973 масс детектором и капилярнои колонкой HP-5MS (5% Me siloxane, 30m х 250mm х 0,25 mm) при; 270 (гелий, 1 мл/мин, 70 эВ). Температуру плавления измеряли на приборе Leica Galen III. Рентгеноструктурный анализ выполнен с ограненного монокристала на дифрактометре SMART 1000 GCD (МоКальфа-излучение, "графитовый монохроматор). Все расчеты по определению и уточнению структуры іД. выполнены по программам SHELXTL/PC (Bruker..., 1998). ГЖХ-анализ метиловых эфиров жирных кислот проведен на РЖ-хроматографе GC-9A с пламенно-ионизационным детектором и интегратором Chromatopak C-R 317 (Shimadzu) на капиллярной колонке Supelcowax 10 (Supelco) 30 і+0,25 іі, газ-носитель Не. Изучение поведения хроматографически индивидуального соединения в липидном бислое проводилось методом дифференциальной сканирующей микрокалориметрии, фиксируя изменение состояния термотропного фазового перехода дипальметоилфосфатидилхолина (ДПФХ). Термограммы получены на Я приборе ДАСМ-1М отечественного производства. Объем измерительной ячейки 1см3, скорость прогрева образца 1 градус/мин.Методы определения биологической активности экстрактов грибов и индивидуальных веществ Одной из. наиболее удобных моделей для тестирования веществ, обладающих мембранотропным действием, являются эритроциты человека, животных или птиц. Использование методики, предусматривающей применение кровяного агара, позволяет определить наличие гемолитической активности продуктов вторичного метаболизма грибов и, таким образом, выявить штаммы-продуценты гемолитически активных соединений. Гемолитическую активность суммарных хлороформ-этанольных экстрактов исследуемых штаммов и их индивидуальных фракций определяли с использованием негепарированной крови белых беспородных мышей. ГК50 определяли как минимальную концентрацию вещества, вызывающую 50%- ный гемолиз эритроцитов в течение 60 минут при температуре 37С. Уровень гемолиза определяли по методике (Kalinin et al. 1996). s fcf Для определения гемолитической активности хроматографически индивидуального соединения использовали раствор соединения с DMSO в концентрации 100 мг/мл, в качестве буфера использовали физилогический раствор NaCI в концентрации 1 мкг/мл. Инкубирование проводили в течение 30 минут, при 37С. Уровень гемолиза определяли по методике (Kalinin et al. 1996). Для определения цитотоксической активности исследуемых фракций и их хроматографически индивидуальных соединений использовали также оплодотворенные яйцеклетки морского ежа Strongylocentrotus intermedius. Мужские и женские гаметы получали инъекцией в полость тела ежа 0,5 М раствора КС1. Яйцеклетки оплодотворяли в соответствии с методикой, описанной Т.А. Бузниковым и В.К. Подмаревым (Бузников, Подмарев, 1975). Инкубационную смесь, состоящую из 1 мл суспензии оплодотворенных яйцеклеток на стадии зиготы в морской воде (2000 клеток/мл) и; 0,01 мл раствора испытываемых веществ в этаноле или 0,01 мл спирта (контроль), выдерживали при температуре 20С, в течение 18 часов. Вещества;вносили в инкубационную среду через 3-5 минут после оплодотворения. Эффекты действия веществ оценивали по способности вызывать блокаду деления через 2 и 18 часов после оплодотворения.
Видовое богатство и биоразнообразие комплексов грибов морских грунтов
Донные осадки, как прибрежной- зоны, так и открытых акваторий являются конечным этапом миграции загрязняющих веществ, поступающих с прилегающей суши и из атмосферы. Концентрации; химических веществ в донных отложениях, поровых водах и придонном слое воды намного выше, чем в водной толще, поэтому химический состав верхнего (2-5 сантиметрового) слоя донных отложений и поровых вод позволяет судить о степени и характере антропогенного воздействия на прибрежные акватории (Ващенко, 2000). Эти исследования показывают, что наиболее загрязненными оказались донные осадки юго-восточной части Амурского залива, куда, можно отнести исследованные нами коллекторные станции 18.45 и 18.47, что оправдано высокой степенью урбанизации этих районов. Попадая, в прибрежные воды залива, загрязняющие вещества оказывают влияние на качество морской среды и на обитающие в ней организмы, оказывая как прямое, так и опосредованное токсическое воздействие; Негативное влияние загрязнения обнаруживается, во-первых, на разных трофических (от первичных продуцентов до млекопитающих, в том числе человека) и, во-вторых, на разных уровнях организации живой? материи (от молекулярно-биохимического до биоценотического и экосистемного). Причем, замечено, что от загрязнения морской среды в наибольшей степени страдают мелкие формы организмов (Бигон и др., 1989; Брагинский, 1998; Гусев и др., 1980).
Изменение комплекса видов грибов морских грунтов, возможно, может служить индикатором экологического благополучия исследуемого биотопа. Используя экологические параметры измерения: биоразнообразие, численность, доминирование и видовое обилие, выражая их содержание числовыми показателями, принятыми в синэкологии, можно показать состояние комплексов грибов морских грунтов. Изменение состояния;этих комплексов, в свою очередь, может дать важную информацию об особенностях функционирования экосистемы, определить оценку устойчивости и стабильности биотопов.
В Таблице:№ 8; показано состояние комплексов;грибов,морских. грунтов акваторий Японского моря, подвергающихся разному антропогенному воздействию.
Так, наибольшее количество; видов; грибов: было выделено из грунтов акваторий, испытывающих наиболее выраженный антропогенный пресс - это акватории- Амурского залива. Из грунтов этих акваторий было выделено 20 видов грибов. Количество особей всех видов грибов, выделенных нами в чистую культуру, из грунтов акваторий Амурского залива, по сравнению с исследуемыми образцами грунтов других акваторий, также самое большее - 66 (Таблица №8).
Несколько меньшим числом выделенных видов грибов отличались грунты акваторий бухты Троицы. Из грунтов акваторий бухты Троицы было выделено 17 видов грибов. Равное количество видов грибов было выделено из грунтов открытых акваторий залива Петра Великого и мыса Титова - 12 видов для грунтов каждой акватории. Из грунтов акваторий мыса Туманного выделено 13 видов грибов (Таблица № 8).
Из образцов морских грунтов нами было выявлено 3 вида грибов, типичных для всех районов забора грунта, независимо от степени воздействия антропогенного фактора, глубины и гранулометрических характеристик исследуемого образца грунта. К этим грибам относятся следующие виды: Peniciilium verrucosum var. ciclopium, P. verrucosum var. verrucosum и Wardomyces inflatus. Анализ обилия и частоты встречаемости позволил также установить типичные для районов с высоким уровнем урбанизации (акватории Амурского залива) виды грибов: Acremonium charticola, Acremonium fusidioides, Clados porium sphaerospermum, Geomyces asperulatus, Glocladium catenulatum, Myrothecium masonii, Penicillium citrinum, P. cordubense, P. donkii, P. estinogenum, P. granulatum, P. herquei, P. lanosum, P. velutinum. Штаммы этих видов грибов были выделены только из грунтов акваторий Амурского залива (см. приложение 10). В литературных источниках также отмечается; что в настоящее время в, различных биоценозах урбанизированных территорий увеличивается встречаемость различных видов грибов рода Penicillium (Козловский и др., 1997, Поддубный и др., 1998; Марфенина, 1997; Марфенина, 2000).
Для акваторий, характеризующихся умеренной антропогенной.нагрузкой, например, акватории бухты Троицы, весьма многочисленными по количеству выделенных изолятов, были виды Geomyces panorus, Penicillium griseofulvum, P. urticae, а также Trichoderma viride. Причем „ виды Penicillium griseofulvum и Pi urticae были изолированы исключительно из грунтов акваторий бухты Троицы.
Для грунтов акваторий, где уровень антропогенного воздействия считается минимальным (акватории мыса Туманного и мыса Титова) наиболее характерными были следующие виды грибов: Aspergillus halophilicus, Geomyces panorus, Penicillium jensenii;. а также P. simplicissimum. Такие виды грибов как Doratdmyces stemonitis, Oidiodendron tennuissimum, Penicillium frequentans, P. stekii, Trichoderma aureoviride были выделены только из грунтов этих акваторий.
Из литературных источников (Жданова и др., 1991; Марфенина, 1985, Марфенина 1997, 1998; Кулько, Марфенина, 1998; Марфенина 2000; Марфенина 2001) известно, что в местообитаниях, подверженных антропогенным воздействиям, постоянно выделяются эврибионтные виды грибов, такие как Aspergilus fumigatus, Penicillium frequentans, и ряд грибов порядка Mucorales. Однако иы, выделяли эти виды грибов как из грунтов акваторий с высокой антропогенной нагрузкой (Амурский залив), так и из грунтов акваторий, в которых степень антропогенного воздействия незначительна (мыс Туманный и мыс Титова), что отличает морские и наземные экосистемы.
Весьма примечательным можно считать наличие видов грибов рода Fusarium, многие штаммы которых также являются возбудителями болезней растений и животных (Микроорганизмы..., 1988; Петрович, 1991). Виды грибов этого рода мы чаще всего выделяли из грунтов акваторий бухты Троицы и мыса Титова, где антропогенная нагрузка не ) высока, по сравнению с акваториями Амурского залива. Возможно,, эти изоляты принадлежат к специфическим морским экоформам грибов. Например, известный возбудитель корневых гнилей многих видов растений (Микроорганизмы..., 1988), at так же заболеваний у человека - F. solani (Martius) Saccardo (Саттон и др., 2001) - в морской среде вызывает заболевания акул, черепах и лобстеров, (Alderman, 1981).
