Содержание к диссертации
Введение
1. Общая характеристика работы 4
2. Обзор литературы 10
2.1. Роль гуминовых веществ в природе 10
2.2. Естественная резистентность животных 17
2.3. Фармакологические средства повышения естественной резистентности животных 20
2.4. Оценка безвредности фармакологических препаратов 23
2.5. Применение препаратов из торфа и гуминовых соединений в животноводстве и ветеринарии 26
2.6. Этиология, диагностика, лечение и профилактика болезней молодняка (гипотрофия, диспепсия, бронхопневмония) 38
3. Материалы и методы 51
4. Результаты собственных исследований 58
4.1. Разработка препарата биостим-К, установление его физико-химических свойств и контроль 58
4.2. Токсикологическое исследование препарата биостим-К 60
4.3. Фармакологическое исследование препарата биостим-К 79
4.3.1. Оценка адаптогенных свойств
4.4. Клиническое испытание биостима-К 80
4.4.1. Профилактическая эффективность 81
4.4.1.1. Послеродовые заболевания свиней и новорожденных поросят
4.4.1.2. Диспепсия и бронхопневмония телят
4.4.2. Терапевтическая эффективность биостима-К 90
4.4.2.1. Гипотрофия поросят
4.4.2.2. Гипотрофия телят
4.4.2.3. Диспепсия телят
4.4.2.4. Бронхопневмония телят
4.5. Производственное испытание препарата биостим-К 101
4.6. Широкое научно-производственное испытание препарата биостим-К 107
Обсуждение результатов 109
Выводы 117
Практические предложения 119
Список литературы 120
Приложения 146
- Естественная резистентность животных
- Этиология, диагностика, лечение и профилактика болезней молодняка (гипотрофия, диспепсия, бронхопневмония)
- Токсикологическое исследование препарата биостим-К
- Терапевтическая эффективность биостима-К
Введение к работе
1.1. Актуальность темы. В условиях промышленной технологии ведения животноводства широкое распространение имеют заболевания незаразной этиологии.
Они занимают свыше 95% всех заболеваний (А.В.Коробов, 1992; В.Т. Самохин, 2002; А.Г. Шахов, 2002). Среди них наиболее часто встречаются незаразные заболевания молодняка, такие как болезни обмена веществ, гипотрофия, диспепсия, бронхопневмония. Своевременные меры профилактики и лечения заболеваний молодняка позволяют значительно снизить падеж животных, повысить их продуктивность. Радикальным путем решения этой проблемы следует считать изыскание эффективных и безопасных лечебно-профилактических средств (В.Д. Соколов, 1993; М.И. Рабинович, 1996; В.А. Антипов, 1997; М.Н. Аргунов, 1997; B.C. Бузлама, 1997).
При проведении мероприятий по борьбе с болезнями молодняка незаразной этиологии, важное значение имеет стабилизация и оптимизация внутренней среды организма животных за счет введения в их рационы препаратов, содержащих биологически активные вещества (БАВ), повышающих резистентность организма и обладающих лечебно-профилактическими свойствами.
В настоящее время в практике животноводства применяются препараты торфа (гумат натрия (гуминат), гумитель и другие). Они способствуют повышению неспецифической резистентности организма животных (И.Г. Белогрудов, В.И. Сокрут, 1983), продуктивности крупного рогатого скота (А.Ф. Кузьмин и соавт., 1983), препараты испытаны в ветеринарном акушерстве и гинекологии (В.Г. Муляк и соавт., 1983) и в других областях практической ветеринарии.
Установлено, что стимулирующее действие гумината и других препаратов из торфа обусловлено их воздействием на аденилатциклазную систему клеток. Под влиянием гумината отмечается повышение синтеза циклического аденозинмоно-фосфата за счет ингибирования на 50% фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов и активации на 210-300% аденилатциклазы (Щедрин Е.Л. и др, 1985). Несмотря на имеющиеся данные по применению биологически активных веществ гуминовой природы, актуальным остается разработка, изучение и внедрение в ветеринарную практику новых препаратов гуминовых кислот отдельно и в комбинации с другими средствами борьбы с заболеваниями молодняка. Отмечая перспективность решения данной проблемы и в соответствии с требованиями к лекарственным средствам ветеринарного назначения (Приказ Министерства сельского хозяйства РФ № 48 от 01.04.2005 г. «Об утверждении Правил государственной регистрации лекарственных средств для животных и кормовых добавок») нами проведены комплексные исследования по разработке препарата из торфа биостима-К, изучению его токсикологических и фармакологических свойств, профилактической и те I рапевтической эффективности при некоторых незаразных заболеваниях телят и поросят (гипотрофия, диспепсия, бронхопневмония) с целью внедрения его в ветеринарную практику и животноводство.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явилась оценка токсических и фармакологических свойств нового препарата биостима-К, установление его влияния на некоторые биологические показатели (адаптация, обменные процессы), обусловливающие повышение естественной резистентности организма животных, профилактическую и лечебную эффективность при болезнях молодняка, ускорение темпов роста и развития, снижение заболеваемости, повышение сохранности и продуктивности.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
- определить физико-химические параметры препарата биостим-К и методы их контроля;
- установить параметры острой и подострой токсичности биостима-К для животных, выявить адаптогенные свойства препарата;
- изучить влияние биостима-К на обмен веществ и некоторые физиологические показатели животных;
- разработать показания к применению препарата биостим-К на телятах и поросятах;
- провести научно-производственное испытание препарата биостим-К.
[ і 1.3. Научная новизна. Предложен новый гуминовый препарат биостим-К. Дана токсикологическая и фармакологическая оценка биостима-К. Впервые теоретически и экспериментально обоснована возможность применения препарата биостим-К для;повышения естественной резистентности и иммунобиологической реактивности организма животных, для нормализации обменных процессов, профилактики и лечения незаразных болезней молодняка (гипотрофии, диспепсии, бронхопневмонии), ускорения темпов их роста и развития, повышения продуктивности, снижения заболеваемости и падежа.
1.4. Практическая значимость работы. На основании результатов исследова-ний предложен для ветеринарии препарат биостим-К. Разработана и утверждена нормативная документация, регламентирующая технологический процесс производства препарата, показатели качества, методы их контроля, порядок применения препарата:
- «Временное наставление по применению Биостима-К в ветеринарии» разработано ООО НПФ «Биофид», утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 19.04.2002 (№ 0013710 ОП);
- Биостим-К (Технические условия - ТУ 9337-002-52333343-02), согласовано с ВГНКИ и Департаментом ветеринарии МСХ РФ и утверждено ООО НПФ «Биофид».
В результате проведенных исследований установлено, что биостим-К относится к малотоксичным соединениям: кумулятивные свойства препарата выражены слабо, препарат обладает адаптогенными свойствами. Введение в рацион биостима-К повышает неспецифическую естественную резистентность организма, снижает заболеваемость и повышает сохранность животных, стимулирует рост и развитие молодняка, повышает продуктивность и воспроизводительные качества животных. Установлено, что препарат обладает выраженной профилактической и лечебной эффективностью при гипотрофиях, диспепсиях и бронхопневмониях молодняка, послеродовых заболеваниях свиней.
По результатам лабораторных исследований, широкого производственного испытания и экспертной оценки препарата и документации Фармакологическим сове 7 том Департамента ветеринарии МСХ РФ и ВГНКИ, а также обобщения данных литературы, разработаны, рассмотрены, одобрены и рекомендованы к изданию на заседании секции «Незаразные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН следующие научно-методические разработки:
- Методы тестирования иммунологической резистентности сельскохозяйственных животных. - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 2004 (в соавт,);
- Применение новых биологически активных препаратов в ветеринарии и животноводстве. - ВНИВИПФиТ. - РАСХН. - 2004 (в соавт.);
- Изучение физиологических показателей крови животных с использованием современных биохимических и иммунобиологических тестов (Учебное пособие). Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений по зооветеринарным специальностям. - ВГСХА. - Киров. - 2004 (в соавт).
Указанные методические рекомендации позволяют объективно оценивать фармакологические и токсические свойства препаратов, а таюке совершенствовать все этапы испытания и внедрения в практику ветеринарной медицины высокоэффективных и безопасных средств, которые необходимы для исследователей, проводящих скрининг новых биологически активных веществ. Методические рекомендации могут быть использованы для определения показателей естественной неспецифической резистентности и иммунологической реактивности животных.
Результаты исследований могут применяться зооветеринарными специалистами животноводческих хозяйств в целях стимуляции и стабилизации обменных процессов и повышения общей резистентности организма животных, профилактики стрессов, профилактики и лечения незаразных болезней молодняка, улучшения использования питательных веществ рационов, интенсификации приростов массы тела, снижения себестоимости и повышения конкурентоспособности продукции животноводства.
Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс при чтении курса «Ветеринарная фармакология» в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина», курсов «Клиническая диагностика» и «Внутренние незаразные болезни» на факультете ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия» и могут быть использованы в других вузах при подготовке специалистов биологического, ветеринарного и зоотехнического профилей. 1.5. Основные положения, выносимые на защиту:
- Физико-химические свойства препарата биостим -К, методы контроля качества;
- токсикологическая оценка и фармакологические свойства препарата;
- клинические испытания биостима-К в качестве лечебно-профилактического средства при незаразных болезнях телят и поросят;
- влияние биостима-К на показатели роста и развитие молодняка.
1.6. Апробация результатов исследований. Материалы исследований доложены и обсуждены на:
- Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и лечения болезней животных» (Киров, 2004);
- Научной сессии Кировского филиала Российской Академии Естествознания, Кировского областного отделения Российской Академии Естественных наук (Киров, 2004);
- 15-ой Коми республиканской молодежной научной конференции. - Коми научный центр Уральское отделение Российской академии наук (Сыктывкар, 2004);
- 4-ой городской конференции аспирантов и соискателей «Науке нового века -знания молодых» (Киров, 2004);
- Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вклад молодых ученых в развитие аграрной науки XXI века», посвященной 55-летию Рязанской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора П.А. Костычева (Рязань, 2004);
- Международной научно-практической конференции, посвященной 150-летию со дня рождения члена-корреспондента АН СССР, заслуженного деятеля науки РСФСР, профессора П.Н. Кулешова «Научное наследие П.Н. Кулешова и современное развитие зоотехнической науки и практики животноводства» (Москва, 2004);
5-й научной конференции аспирантов и соискателей «Науке нового века -знания молодых», посвященной 75-летию основания Вятской государственной сельскохозяйственной академии (Киров, 2005);
Международной научно-практической конференции «Повышение эффективности лечения и профилактики акушерско-гинекологических заболеваний и биотехники размножения животных», посвященной 75-летию Вятской государственной сельскохозяйственной академии (Киров, 2005).
Естественная резистентность животных
Конец XIX и начало XX веков считаются периодом становления инфекционной иммунологии как науки. В этот период открыты антитела, разработаны методы серологической и аллергической диагностики инфекционных болезней, разработаны основы теории гуморального и клеточного иммунитета и т.д. (У.Дж Герберт, 1974; В.П. Урбан, 1987). Параллельно с инфекционной иммунологией развивалось учение о неспецифической резистентности организма (синоним «неспецифический иммунитет»).
Ряд авторов (Я.Е. Коляков, 1986; В.П. Урбан, И.Л. Найманов, 1984) отмечают, что иммунная реактивность организма направлена не только против патогенных микробов, но и против всех агентов с признаками чужеродной информации. Под неспецифической естественной резистентностью принято понимать способность организма противостоять неблагоприятному воздействию факторов окружающей среды (П.А. Генкель, 1974; Д.Ф. Осидзе, А.П. Простяков, 1983; Р.В. Петров, 1987).
У. Дж. Герберт (1974) отмечал, что механизм неспецифической защиты «включается в действие» сразу же после внедрения инфекта в организм животного. Специфический иммунный ответ проявляется спустя некоторый промежуток времени, в течение которого появляются антитела. В продолжение этого периода единственным фактором, предотвращающим развитие инфекционного процесса в организме, являются неспецифические средства защиты (Р.В. Петров, 1987; В.П. Урбан, И.Л. Найманов, 1984).
Общепризнано, что совокупность защитных факторов, относящихся к категориям «специфического» и «неспецифического» иммунитета, рассматривается как единый функциональный комплекс, как иммунная система (Я.Е, Коляков, 1986; А.В. Селиванов, Ч.Г. Хасанов, 1983). Факторы неспецифической защиты организма разнообразны. В.П. Урбан, И.Л. Найманов (1984) отмечают, что резистентность организма обеспечивают, прежде всего, неспецифические системы защиты (кожа, волосяной покров, слизистые оболочки), генетические факторы, кислая реакция содержимого желудка, постоянная температура тела и др. Кроме того, устойчивость организма обусловливается клеточными и гуморальными факторами неспецифической иммунобиологической реактивности, главным из которых являются фагоцитоз, лизоцим, комплемент, про-пердин, интерферон и др.
Фагоцитоз, как биологическое явление, был открыт И.И. Мечниковым в последней четверти прошлого века. Защитная роль фагоцитоза - процесса активного захватывания, поглощения и внутриклеточного переваривания живых (микробы, клетки и др.) и неживых частиц клеточными элементами животного организма -была доказана И.И. Мечниковым, его многочисленными последователями (А. Адо, 1961; Р.В.Петров, 1987).
При оценке неспецифической естественной резистентности организма сельскохозяйственных животных определению показателей, характеризующих активность фагоцитоза уделялось особое внимание. Установлено, что фагоцитарная активность лейкоцитов зависит от условий кормления (А.А. Шуканов, 1984) и содержания животных (В.В. Исаев, А.К. Моругин, 1987; А.П. Онегов и соавт., 1984). Фагоцитарная активность лейкоцитов КРС по данным Р.А. Салахутдинова (1976), изменяется в зависимости от сезона года: она максимальна в летнее время, минимальна зимой. Установлено, что неспецифическая естественная резистентность новорожденного молодняка с-х млекопитающих и птиц во многом зависит от иммунологического состояния материнского организма (Л.Г. Замарин, 1968). Изменения фагоцитарной активности лейкоцитов отмечены при заболеваниях животных; она значительно снижается при нарушении обмена веществ, респираторных и желудочно-кишечных болезнях (И.М. Карпуть и соавт., 1986; М.И. Немченко и соавт., 1986; В.Т. Самохин, 1981). Лизоцим был открыт английским ученым А. Флемингом в 1922 году. Я.Е. Ко ляков (1986) указывал, что вещество подобного рода было обнаружено в белке куриных яиц русским ученым П.Н. Лащенковым еще ранее, в 1909 году.
Исследования показали (И.В. Казанцева, Т.Б. Дурова, 1980; У.Я. Каулиньш, 1982), что лизоцим представляет собой белковое вещество, состоящее из полипептидной цепи, включающей 130-150 аминокислотных остатков. Лизоцим является ферментом, обладающим свойством лизировать живые и мертвые клетки, в основном грамположительных микроорганизмов (Г.Ф. Коромыслов, П.Е. Игнатов, 1983; В.М. Митюшников, 1985).
В организме животных лизоцим присутствует в слезах, слюне, носовой слизи, желудочном соке, крови, лимфе, молоке. Обнаружен лизоцим в экстрактах, полученных из различных тканей и органов, в белке яиц (У.Я. Каулиньш, 1982).
Механизм лизирующего действия лизоцима в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов не одинаков. Исследования показали, что разрушение оболочки (стенки) грамположительных микроорганизмов происходит вследствие выравнивания внутриклеточного осмотического давления с наружным при повреждении лизоцимом муреинового каркаса клетки. Разрушающее действие лизоцима на грамположительные микроорганизмы усиливается под влиянием протеаз и моновалентных неорганических анионов (В.Н. Денисенко, Е.Э. Евреинова, 1985).
Внешний липопротеиновый слой грамотрицательных микроорганизмов охраняет их от губительного действия лизоцима. В силу этого лизирующее действие фермента проявляется только после предварительного разрушения внешнего липо-протеинового слоя микроба под влиянием комплемента С1 и иммуноглобулина G. Таким образом, лизоцим не влияет на живую клетку, а участвует в лизисе уже убитого комплементом и антителами грамотрицательного микроорганизма.
Действие лизоцима усиливают лактотрансферрин и секреторный компонент SigA. Лактотрансферрин ингибирует рост определенных микроорганизмов. Секреторный компонент SigA усиливает антибактериальное действие лактотрансферрина (У.Я. Каулиньш, 1982). Исследования показали, что на активность лизоцима сыворотки крови влияют условия кормления и содержания животных (Н.Н. Белкина, СВ. Шаталов, 1984; В.И. Георгиевский и соавт., 1979), При патологических состояниях организма активность фермента изменяется (В.Н. Денисенко, 1985; К.Б. Клинберг и соавт., 1983). Учение о неспецифическом иммунитете сыграло важную роль в разработке методов диагностики, лечения и профилактики заболеваний животных, повышения их естественной резистентности, продуктивности и воспроизводительной способности.
Этиология, диагностика, лечение и профилактика болезней молодняка (гипотрофия, диспепсия, бронхопневмония)
Гипотрофия. Особенности кормления и содержания, высокая концентрация поголовья на ограниченных площадях при промышленном ведении животноводства, повышенное количество микроорганизмов в окружающей среде изменяют физиологический статус животных и дестабилизируют защитные силы организма. Такие нарушения баланса организма с внешней средой неизбежно приводят к нарушению взаимоотношений между организмом животного и внешней средой. Наличие большого количества стресс-факторов, действующих на животных, приводит к нарушению функционирования системы тимус-гипофиз-надпочечники, ответственной за поддержание иммунного гомеостаза в организме. Это приводит к ослаблению адаптационных механизмов, к повышенной заболеваемости и частой гибели животных в результате снижения иммунологической реактивности и естественной рези-стентости (В.П. Урбан, И.Л. Найманов, 1984; И.М. Карпуть и соавт., 1989).
По литературным данным потери сельскохозяйственных животных в постна-тальный период достигают 15-20% от общего количества народившихся (А.И. Карелин, 1974; А.Ф. Кузнецов с соавт., 1982; Я.Е. Коляков, 1986 и др.). По данным Ф.Ф. Мюллера (1956), М.В. Валиева (1974) и других основной причиной этого является гипотрофия. Возникающую при неблагоприятных условиях морфологическую и функциональную недостаточность клеток, тканей или всего организма плода принято называть гипотрофией (Н.И. Дубровин, 1971). При характеристике новорожденных животных, находящихся в состоянии гипотрофии, пользуются понятием физиологической зрелости. С этим термином связывают соответствие физиологических отправлений животного раннего возраста его истинному календарному возрасту. В противоположность физиологически зрелым, незрелые плоды характеризуются разнообразными формами задержки развития, в результате которых у них с рождения обнаруживают несоответствие физиологических отправлений календарному возрасту (И.А. Аршавский, 1968; В.П. Урбан, И.Д. Найманов, 1989).
Становление и созревание иммунной системы и факторов неспецифической резистентности начинается с ранних сроков внутриутробного развития и продолжается в течение всего периода беременности и после рождения (П.А. Емельяненко, 1987), При этом отмечается как генетическая предрасположенность событий, так и воздействие различных факторов среды. Отрицательное действие этих факторов приводит к адаптационно-трофическим нарушениям в организме плода, следствием которых может быть развитие гипотрофии (М.В. Валиев, В.В. Митюшин, 1985; и ДР-) Постнаталыюе развитие нередко определяется состоянием животного при рождении, на которое значительное влияние оказывают внутриутробные условия. Нарушение внутриутробного развития в силу действия какой-либо причины может проявляться такой патологией как гипотрофия. Врожденная гипотрофия у животных как патологическая единица описана Ф.Ф. Мюллером еще в 1956 году. Он отмечал, что животное, страдающее гипотрофией, отличается слабым телосложением, плохо развитой мускулатурой, тонкостью трубчатых костей, плохой подвижностью, повышенным нервно-мышечным тонусом. Другие исследователи (В,Г. Герасименко, 1966; И.И. Цельс, 1967; М.И. Дубровнин, 1971) причину гипотрофии видят также в нарушении экзо- и эндогенного питания животных, сопровождающегося нарушением трофических функций организма, пищеварения, задержкой развития.
Некоторые исследователи (В.А. Берестов и соавт., 1978, 1987) гипотрофию молодняка животных рассматривают как результат плохого кормления самок во время беременности, низкой молочности матерей, скученного содержания животных по 40 еле отсадки, формирования неоднородных групп или переболевания молодняка в раннем периоде постнатального онтогенеза.
О «патологической доминанте)), возникающей при неблагоприятных условиях течения беременности, сообщает Е.М. Фатеева (1969). Природа этого нарушения может быть обусловлена неполноценным кормлением беременных животных, как по общей питательности, так и по содержанию протеина, минеральных веществ и каротина в рационе, особенно в последние месяцы беременности (Л.П. Онегов, 1974) и ненормальным условиям внутриутробного развития и роста (В.А. Аликаев, 1968; 1985).
По данным W. Hoffman (1981) рождение телят -гипотрофиков имеет в своей основе нарушение трофических процессов в организме стельных коров, вследствие чего нарушаются оптимальные биологические процессы развития плода. Важным показателем этого является нарушение биосинтеза нуклеиновых кислот и дефицит витаминов, что обуславливает в организме новорожденных телят недостаточное образование обязательных составных компонентов ферментных систем и ослабление активности гидролитических ферментов.
Среди причин гипотрофии новорожденных на первом месте стоит алиментарный фактор, т.е. недостаточное питание плода через плаценту. На втором месте -здоровье матери, гинекологическая патология. В комплексе неблагоприятных факторов, действующих на организм беременных животных, одним из важнейших A.M. Липатов (1986) считает гиподинамию. Кроме того, большое значение отводится породному составу и методам разведения животных.
Сущность гипотрофии как болезни при всей сложности генеза заключается в конечном итоге в голодании организма, то есть преобладании расходов над поступлением питательных веществ, в невозможности компенсировать пищей затраты организма плода (В.И. Чистяков, 1980). Кроме того, плод может испытывать и недостаточность поступления кислорода из крови матери и влияние продуктов нарушенного обмена.
При гипотрофии наблюдается как физиологическая неполноценность организма в целом, так и отдельных органов и систем. Отмечается непропорциональное развитие головы, кожа сухая, шелушащаяся, эластичность ее понижена. У таких животных вскоре после рождения отмечается резкое понижение температуры тела, а затем медленное ее восстановление. Мышечный тонус ослаблен, площадь опоры увеличена. Видимые слизистые оболочки бледны, иногда с синюшным оттенком. Со стороны сердечно-сосудистой системы наблюдаются значительные изменения. Дыхание в большинстве случаев учащено, поверхностное. Двигательно-пищевые рефлексы появляются с большим опозданием. Зубы недоразвиты, аппетит ослаблен или отсутствует, реакция на окружающее сильно понижена, длительное время после рождения животные находятся в сонно-дремотном состоянии. Все они в раннем по-стнатальном периоде переболевают диспепсией с большим отходом (М.И. Дубра-вин, 1971; Н.С. Егорова, 1971; М.Ф. Васильев, 1975, 1977; АЛ. Кабыш, 1980).
Причину гипотрофии связывают (М.В. Валиев, 1974; A.M. Липатов, 1984; В.А. Аликаев, В.В. Митюшин, 1985) и с воздействием на организм матери различных неблагоприятных факторов, таких как стресс. В результате чего изменяются гормональные отношения системы гипофиз-желтое тело, что приводит к нарушению обменных процессов. Это, в свою очередь, нарушает развитие плода, особенно в ранний период беременности, когда процессы эмбриогенеза отличаются высокой интенсивностью. G.L. Coldow (1988) установил прямую связь между стрессовым состоянием стельных коров в период сухостоя и заболеваемостью новорожденных телят. Автор выявил, что у коров в состоянии стресса повышается функциональная активность гипофиза и коры надпочечников, в результате чего большое количество кортикостероидов, поступающих в плод, вызывают торможение развития надпочечников, приводящее к рождению телят с ослабленным адаптационным механизмом, с низким уровнем резистентности.
Токсикологическое исследование препарата биостим-К
Опыт по изучению острой токсичности препарата биостим-К проводили на белых мышах-самцах с исходной массой 18-20 г. Введение препарата в дозе 1 мл на кг массы тела не вызывало отклонений в клиническом состоянии животных в течение 2 недель наблюдения. При увеличении дозы до 3-4 мл на кг массы тела наблюдался частичный отказ от корма и незначительное угнетение. Введение более высоких доз препарата - 30-40 мл/кг массы тела сопровождалось общим угнетением, отказом от корма, затрудненным дыханием, некоординированными движениями. Однако, ЛДзо определить не удалось, так как более высокие дозы ввести животным физиологически не представилось возможным, а испытанные количества препарата не вызывали гибели мышей.
При изучении влияния биостима-К на действие веществ, угнетающих центральную нервную систему, было установлено, что препарат не влияет на продолжительность гексеналового наркоза. Что касается барбитал-натрия, то биостим-К в исследованных дозах удлинял время «бокового» положения животных. При этом эффект был более выражен, если препарат вводили за 4 ч до применения барбитал-натрия. Кроме того установлено, что под влиянием биостима-К быстрее проявляется эффект от действия барбитал-натрия. Продолжительность хлоралгидратного наркоза также увеличивалась, но в этом случае не отмечено существенных различий для разных доз биостима (10-15 мл/кг массы тела) или временного интервала.
Установлено, что биостим-К в дозах 10-15 мл на массы тела при введении его как за 30 мин., так и за 4 ч до воздействия коразола удлинял период развития тонической фазы судорожного приступа, не изменяя течения клонической фазы. На мышечный тонус и координацию движений препарат влияния не оказывал. Таблица 3 Гематологические показатели подопытных крыс (п=8)
Аналогичные результаты получены и при исследовании острой токсичности биостима-К на белых крысах, Первые признаки (незначительное угнетение и частичный отказ от корма) наблюдались после применения препарата в дозе 4,0-5,0 мл/кг массы тела. Более выраженные признаки отмечали при назначении препарата в дозе 20,0т30,0 мл/кг массы тела. ЛД5о также определить не удалось, так как максимально вводимые по объему дозы не вызывала гибели животных.
Введение больших доз препарата сопровождалось незначительными нарушениями нервной и других жизненно важных систем (сердечно-сосудистой, дыхания и желудочно-кишечного тракта) через 20-30 мин. после их применения.
Нормализация клинического состояния мышей и крыс, у которых наблюдались некоторые признаки отравления исследуемым препаратом, происходила в течение 2-3 дней после их появления. Вскрытие декапетированных животных на 6 и 12 дни исследований не выявило патологоанатомических изменений со стороны внутренних органов. Не было выявлено достоверных изменений массы тела животных опытных и контрольной групп. В таблице 2 приведены показатели массы тела и процентное отношение массы внутренних органов к массе тела декапетированных после легкого наркоза крыс. При вскрытии декапетированных животных макроскопических изменений в органах не обнаружено. В период опыта было установлено, что поедаемость корма во всех группах животных была сравнительно одинаковой. Введение препарата не вызывало проявлений интоксикации, случаев падежа животных не обнаружено. Результаты гематологических исследований приведены в таблице 3. Как видно из таблицы, препарат в различных дозах не вызывал существенных изменений чис ла форменных элементов крови опытных животных в сравнении с контрольными. Хроническая токсичность Хроническая токсичность биостима-К была изучена на 60 белых крысах-самцах «Вистар», разбитых на 3 группы по 20 особей. Животным 1 группы препарат вводили в дозе 10 мл/кг массы тела, 2 группе - 15 мл/кг в течение 10 дней через рот (в желудок). Животные 3 группы служили контролем. Обследование и убой животных проводили как после окончания применения препарата, так и через 3 недели восстановительного периода.
Также хроническая токсичность была изучена на крысах при многократном применении (в течение 6 месяцев) препарата в дозах 5 и 50 мл на кг корма. Не выявлено отрицательного действия биостима-К на организм крыс. При определении массы тела животных в опытных и контрольных группах также не установлено достоверной разницы, і Анализ исследования крови (табл. 4 и 5) крыс опытных и контрольных групп позволяет сделать вывод о том, что многократное введение препарата не оказало существенного влияния на гематологические показатели животных. Наблюдалось лишь достоверное увеличение количества лейкоцитов в крови животных при введении препарата в дозе 15 мл/кг массы тела.
При исследовании противовоспалительных свойств биостима-К препарат в дозе 0,5 мл вводили перорально белым мышам. В качестве флогогенного агента использовали 2% раствор формалина, который вводили в объеме 0,05 мл в подушечку задней правой лапки мыши. Биостим-К вводили одновременно с формалином или за 30 мин до него. Результаты оценивали по средней разнице массы лапок (левой и правой) через 1, 2, 3 и 4 ч после введения формалина. Установлено, что применение биостима-К несколько уменьшало отек, вызываемый формалином, однако разница с контролем была статистически незначимой.
Анализ полученных данных показал, что ежедневное введение биостима-К вызывает уменьшение клиренса мочевины (на 21%) и увеличение ее содержания в сыворотке крови. Через 3 недели восстановительного периода, несмотря на то, что содержание мочевины в крови оставалось повышенным, клиренс мочевины животных опытных групп почти не отличался от контрольных животных.
Терапевтическая эффективность биостима-К
Экспериментальные исследования выполняли на базе свиноводческого хозяйства, неблагополучного по гипотрофии поросят. Клинический материал подбирали путем диспансерного обследования свиней, оценки условий кормления и содержания. Выявляли причины анте- и постнатальной гипотрофии поросят. К антенатальной относили гипотрофию, обусловленную нарушением внутриутробного развития поросят: при неполноценном кормлении беременных свиноматок, родственном разведении, заболеваниях, слишком большой численности (более 13) новорожденных в помете. К постнатальной относили гипотрофию, возникающую вследствие низкой молочности подсосных свиноматок (гипо- и агалактии), поражений молочной железы, нарушений кормления и содержания народившихся поросят и их матерей.
Клинические исследования подопытных животных проводили по общепринятой методике. Поросят взвешивали в процессе их роста и развития. Измеряли длину туловища, обхват груди. При постановке диагноза на гипотрофию принимали во внимание особенности клинической картины болезни: общая слабость, вялость, недоразвитость, снижение массы, бледность кожи и видимых слизистых оболочек, подавление сосательного рефлекса, западение глаз, низкая температура тела (гипотермия), анемия. В крови определяли гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, СОЭ, в сыворотке - общий белок, альбумины, глобулины, глобулиновые фракции, Клинико-гематологические исследования проводили в процессе заболевания. Регистрировали тяжесть заболевания, выздоровление животных. Учитывали время достижения ими убойных кондиций. При контрольном убое животных определяли качество свинины, рассчитывали расход кормов на получение единицы прироста массы животного.
При выполнении первой серии опытов подобрано две группы поросят, больных антенатальной гипотрофией. 20 поросят-гипотрофиков были опытными, 20 - контрольными. Опытным поросятам назначали с кормом биостим-К. Схема введения препарата в организм поросят состояла в том, что препарат выпаивали вместе с молоком (0,8 мл на кг массы) в течение 60 дней. Условия кормления и содержания опытных и контрольных поросят - гипотрофиков были одинаковыми.
Исследования показали, что биостим-К оказывает активное влияние на рост и развитие поросят-гипотрофиков. Под влиянием препарата происходит улучшение общего состояния поросят. Постепенно сглаживаются, ослабевают и исчезают признаки гипотрофии. У опытных поросят, по сравнению с контрольными, отмечен высокий темп прироста массы тела, что видно из рис. 3. У контрольных животных признаки гипотрофии сохранились и даже усугубились. Заболевание протекало тяжело. Выздоровление животных сопровождалось благоприятными изменениями гематологических и биохимических показателей, что видно из таблицы 24 и рис. 4. Из таблицы 24 видно, что у опытных животных, подвергнутых лечению с применением препарата биостим-К, увеличивалось количество гемоглобина и эритроцитов крови, что свидетельствует о влиянии препарата на эритро- и гемопоэз. Об активизации обмена веществ в организме свидетельствовало повышение показателя общего белка в сыворотке. Увеличение гамма-глобулинов в сыворотке крови - один из параметров, отражающих усиление защитных сил организма.
Была испытана лечебная эффективность биостима-К при гипотрофии телят. Лечебная доза препарата превышала профилактическую в 2 раза и составляла 0,8 мл на кг массы тела в сутки до полного излечения животного. Биостим-К включали в комплекс лечебных мер как средство этиолого-патогенетической и заместительной терапии, направленной на устранение нарушений обмена веществ и повышения резистентности.
С этиологической точки зрения врожденная гипотрофия может рассматриваться как следствие внутриутробной патологии из-за метаболитических расстройств, развивающихся в материнском организме, по причине нарушений обмена веществ у плода и, следовательно, у приплода. Гипотрофию молодняка относят к болезням недостаточности, т.к. она характеризуется нарушением обмена веществ, снижением естественной резистентности организма, функционально-морфологической незрелостью гипотрофиков.
Гипотрофики чаще заболевают диспепсией и бронхопневмонией из-за чего нередко погибают. Высокую чувствительность телят-гипотрофиков к желудочно 95 кишечным и респираторным болезням также связывают с метаплазией и кератини зацией эпителия слизистой оболочки дыхательных путей и пищеварительного тракта вследствие А витаминной недостаточности (И.Г. Шарабрин, 1965; В.М. Данилевский, 1991).
Для проведения экспериментов подобного рода подбирали животных с клинической картиной болезни, сопровождающейся признаками обменных расстройств, І особенно нарушений А-витаминозного обмена. В опыт брали больных телят, родившихся от коров со сниженным уровнем каротина в сыворотке крови (ниже 3,5 мкг/мл), молозиве (ниже 0,8 мкг/мл) и молоке (ниже 0,25 мкг/мл). Наряду с гипока-ротинемией и гипокаротинолактией выявляли в пробах дефицит ретинола (в плазме крови ниже 0,3 мкг/мл, в молозиве ниже 3,2 мкг/мл, в молоке ниже 0,25 мкг/мл). При диагностике заболевания телят проводили анализ анамнестических данных, результатов диспансерного обследования стада крупного рогатого скота, условий его кормления, содержания, эксплуатации. При исследовании больных телят определяли массу их тела, выраженность сосательного рефлекса, состояние видимых слизистых оболочек, кожи, наличие или отсутствие явлений обезвоживания, интоксикации, гипо- или гипертермии, расстройств кровообращения, дыхания, пищеварения, патологических сдвигов в деятельности органов мочеполовой и нервной систем. Учитывали результаты лабораторных исследований крови телят и, отчасти, матерей.
К гипотрофикам относили телят со сниженной массой тела, с признаками сухости и морщинистости кожи, слабой выраженностью подкожной клетчатки, бледностью видимых слизистых оболочек, заторможенностью сосательного рефлекса, тахикардией и учащением артериального пульса, учащением дыхательных движений и ослаблением визикулярного дыхания, уменьшением в крови гемоглобина и эритроцитов, снижением показателей естественной резистентности организма.
Было подобрано 20 телят-гипотрофиков с более или менее одинаковым клиническим статусом. По принципу аналогов больных телят разделили на две группы по 10 в каждой. Одна группа телят была опытной, другая - контрольной. Телята обеих групп находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Контрольных телят лечили с применением метода, принятого в хозяйстве: под кожу вводили кровь здоровой коровы из расчета 1 мл на 1 кг массы тела гипотрофика. Телят опытной группы лечили с применением препарата биостим-К, который давали в дозе 0,8 мл на кг массы тела с кормом.
Похожие диссертации на Фармако-токсикологические свойства и применение препарата биостим-к при болезнях молодняка
