Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1 Современные представления о структурно-функциональной характеристике кожи и ее дериватов 8
1.2 Морфологическая характеристика процессов репаративной регенерации кожи 34
1.3 Динамика биологических потенций органов иммуногенеза на стадиях репаративной регенерации кожи .38
1.4 Влияние температурного фактора на функциональную активность иммунной системы и репаративные процессы 44
Глава 2. Материал и методы исследования .47
Глава 3. Результаты собственных исследований 51
3.1. Динамика репаративного процесса кожных ран 51
3.2. Состояние клеток генеративных слоев эпидермиса и дериватов кожи на стадиях заживления дефекта кожи 58
3.3. Состояние компонентов дермы на стадиях заживления кожной раны 73
3.4. Динамика иммуноморфологических параметров органов лабораторных животных на фоне формирования кожного регенерата 79
Глава 4. Обсуждение результатов собственных
Исследований .94
Выводы 109
Список литературы
- Динамика биологических потенций органов иммуногенеза на стадиях репаративной регенерации кожи
- Влияние температурного фактора на функциональную активность иммунной системы и репаративные процессы
- Состояние клеток генеративных слоев эпидермиса и дериватов кожи на стадиях заживления дефекта кожи
- Динамика иммуноморфологических параметров органов лабораторных животных на фоне формирования кожного регенерата
Введение к работе
Актуальность проблемы. Несмотря на большое количество
исследований, до настоящего времени не существует четкого представления о ряде процессов, протекающих в ходе репаративной регенерации (Ланичева А.Х. Семченко В.В., Степанов С.С., 2010; Винник Ю.С. с соавт., 2011). Механизмы репарации неразрывно связаны с воспалением и формируют с ним единую реакцию на повреждение (Пальцев М.А., Аничков Н.М., 2001; Данилов Р.К., 2001, 2008; Молокова О. А., 2012). Репаративная регенерация является стереотипным процессом, однако имеет свои особенности в различных органах и тканях, в том числе и при заживлении кожных ран. Детальное исследование регенерации имеет не только фундаментальную, но и клиническую направленность, так как является основой для разработки оптимальных режимов и методов лечения (Ноздрин В.И., 2006; Ноздрин В.И. и др., 2008).
Актуальность изучения вопросов регенерации ран кожного покрова обусловлена высокими уровнями травм, особенно среди населения детского возраста (Ахтямов С.Н., Бутов Ю.С., 2003). Наряду с традиционными методами пластической, эстетической и реконструктивно-восстановительной хирургии, в последние годы активно внедряются консервативные методики контроля за активностью заживления дефектов органов на разных стадиях репаративного процесса. В конечном итоге весь арсенал способов ускорения трансформации биологического субстрата из состояния «болезнь» в состояние «здоровье» направлен на достижение реституции пораженного участка (Morelli J.G., 1998; Адаскевич В.П., 2000; Фенчин К.М., 2009).
В исследованиях ряда авторов (Черешнев В.А. и др, 2002; Бабаева А.Г., 2009; Храмцова Ю.С. и др., 2012) установлено участие иммунной системы в регуляции процессов физиологической и репаративной регенерации тканей и органов. В этой связи представляет интерес поиск способов влияния на процессы регенерации посредством воздействия на естественные механизмы иммунной системы.
Одним из распространенных способов воздействия на иммунную систему является воздействие температурного фактора (Суховей Ю.Г., 2006).
Цель исследования – выявить особенности структурных,
морфометрических и иммуногистохимических показателей заживления кожной раны, тимуса и селезенки при локальном воздействии различных режимов температурного фактора в эксперименте.
Задачи исследования:
1. Выявить динамику морфометрических параметров эпидермиса, сальной
железы, волоса и соединительнотканной основы регенерирующей кожи на
фоне температурной экспозиции.
-
Изучить состояние пролиферативной активности клеток генеративных слоев эпидермиса (кератиноцитов) и дериватов кожи (себоцитов, клеток корневых эпителиальных влагалищ волоса), содержание клеток Лангерганса на стадиях заживления дефекта кожи на фоне температурной экспозиции.
-
Изучить состояние компонентов дермы на стадиях заживления кожной раны на фоне температурной экспозиции.
-
Исследовать динамику морфометрических и иммуногистохимических параметров тимуса и селезенки лабораторных животных на фоне формирования кожного регенерата и действия температурного фактора.
Научная новизна работы. Впервые показано, что температурный
фактор неоднозначно действует на процессы репарации кожной раны:
ускорение ранних стадий регенераторного процесса выявлено у мышей в
условиях «холодового» режима. Низкие температуры стимулируют
образование грануляционной ткани и способствуют ускорению процесса
контракции краев раны. На последующих и заключительных стадиях
эксперимента действие «холодового» фактора вызывает замедление
органотипической дифференцировки эпителиальных и
соединительнотканных компонентов регенерата. Одной из особенностей соединительнотканного компонента кожного регенерата при действии низких температур является увеличение количества тучных клеток с явлениями дегрануляции в сосочковом слое дермы. При холодовом воздействии не прослеживается стадийность изменений в тимусе, сохраняется структурно-функциональная стабильность в дольках.
В режиме действия «теплового» фактора отмечено ускорение органотипической дифференцировки эпидермиса, дериватов кожи и формирование кожного регенерата на уровне реституции, выявлена стадийность структурно-функциональных изменений в тимусе: начальному периоду были характерны деструктивно-компенсаторные прогрессивные процессы, восстановительному периоду – возвращению к исходному состоянию.
Воздействие низких и повышенных температур вызывает уменьшение размеров селезеночных телец и увеличение числа фагоцитирующих макрофагов в красной пульпе селезенки.
Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана
экспериментальная модель для изучения влияния дозированных
температурных воздействий на ход регенераторных процессов в кожных ранах.
Определены физиологические параметры (длительность, цикличность) температурных режимов, способствующих ускорению закрытия дефекта и органотипической регенерации кожного покрова. Повышенные температуры (+42С, длительностью воздействия 30 секунд в течение 5 дней) обеспечивают ускорение клеточных, тканевотипических и органотипических преобразований регенерата, создают условия для реституции кожи как органа. При низких температурах (+8С, длительностью воздействия 5 секунд в течение 5 дней) регенераторный процесс протекает замедленно и к конечным стадиям эксперимента не обеспечивает реституции пораженного участка кожи.
Проведенные исследования позволили расширить представления о
механизмах взаимодействия репаративного процесса и иммунной системой.
Установлено, что кратковременное температурное воздействие оказывает
влияние на иммунную систему на разных ее уровнях организации: от
иммунокомпетентных клеток в кожном регенерате до иммуноархитектоники
периферического органа (селезенки) и центрального органа (тимуса)
иммунной системы организма. Активность процессов регенерации
коррелирует с состоянием органов иммунного ответа организма.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Кратковременные режимы температурного воздействия оказывают влияние на течение репаративного процесса, полноту регенерации кожных ран и состояние клеточных дифферонов иммунокомпетентных органов.
-
Дозированное холодовое воздействие на область раны ускоряет эпителизацию, способствует закрытию дефекта, пролонгирует процессы морфогенеза дериватов кожи, вызывает увеличение числа макрофагов и уменьшение числа плазмоцитов в селезенке, не оказывает регистрируемого влияния на состояние тимуса.
3. Повышенные температуры стимулируют органотипическую
дифференцировку эпителиального и соединительнотканного компонентов
регенерата, способствуют реституции пораженного участка, нарастанию
содержания макрофагов и плазмоцитов в селезенке, динамичным
преобразованиям коркового и мозгового вещества долек тимуса на стадиях
репарации.
Апробация работы. Основные положения диссертационного
исследования докладывались и обсуждались на: II Всероссийской научно-
практической конференции с международным участием «Физиологические
механизмы адаптации и экология человека» (Тюмень, 2012); 47-й
Всероссийской научной конференции с международным участием студентов
и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической,
экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2013); VII терапевтическом форуме «Актуальные вопросы диагностики и лечения наиболее распространенных заболеваний внутренних органов» (Тюмень, 2013); Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы морфологии, адаптагенеза и репаративных гистогенезов», посвященной памяти член корр. АМН СССР профессора Ф.М. Лазаренко (Оренбург, 2013).
Публикации по теме диссертации. Опубликовано 9 печатных работ, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных ВАК при Минобрнауки РФ для публикации материалов кандидатских и докторских диссертаций.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Работа изложена на 135 страницах печатного текста, иллюстрирована 14 таблицами и 30 рисунками. Библиографический указатель включает 148 отечественных и 95 работ иностранных авторов.
Динамика биологических потенций органов иммуногенеза на стадиях репаративной регенерации кожи
Кожа является одним из самых крупных органов системы кожных покровов. В состав системы кожных покровов входят: кожа, волосы, сальные, потовые, церуминозные, молочные и некоторые другие железы, являющиеся производными либо сальных, либо потовых желез, либо образованные их комбинацией (Мяделец О.Д., Адаскавич В.П., 2006). Каждая из перечисленных частей кожного покрова имеет ярко выраженные органные черты строения: состоит из нескольких (более одного) типов тканей, имеет собственные кровеносную и лимфатическую циркуляторные системы, специфические особенности роста и регенерации. Каждый орган системы кожных покровов имеет свои уникальные черты строения и специфические функции. И вместе с тем, как и любой другой системе организма, в системе кожных покровов наблюдается четкое согласование работы всех составляющих ее органов, их взаимодействие как в условиях нормы, так и при патологии и адаптивных перестройках (Соколов В.Е., Женевская Р.П., 1988; Кошевенко Ю.Н., 2006).
Кожа состоит из трех слоев: наружного – эпидермиса (многослойного плоского ороговевающего эпителия), среднего – двухслойной дермы и внутреннего – гиподермы, находящихся в морфофункциональном единстве (Чернух А.М., Фролов Е.П., 1982; Юрина Н.А., Радостина А.И., 1996; Шилов В.Н., 2001).
Эпидермис состоит из пяти слоев клеток, отличающихся количеством рядов, формой, и цитологическими характеристиками базального, шиповатого, зернистого, блестящего и рогового слоев (Афанасьев Ю.И., 1996; Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А., 1999; Шилов В.Н., 2001).
Область соединения эпидермиса и дермы является границей соприкосновения двух разнородных по эмбриогенезу тканей и зоной с выраженными барьерными функциями, осуществляющей обменные процессы между эпидермисом, не имеющей кровоснабжения, и подлежащей дермой. Однако роль базальной мембраны не сводится только к функциям структурной опоры и избирательного барьера для различных соединений и клеток. Она играет важную роль в регенерации эпидермиса. При повреждении уцелевшая базальная мембрана направляет и стимулирует продвижение размножающихся клеток, обеспечивая восстановление исходной архитектуры эпидермиса (Пальцев М.А., Иванов А.А., 1995).
Непосредственно на базальной мембране лежат клетки, составляющие базальный слой (stratum basale). Кератиноциты базального слоя - клетки призматической формы функционально находятся в состоянии митотического процесса, что обеспечивает формирование вышележащих слоев эпидермиса. Среди клеток базального слоя располагаются меланоциты, отростчатые клетки Лангерганса и Грейнстейна и осязательные клетки Меркеля. По мере продвижения кератиноцитов наружу, из базального слоя в роговой, кератиноцит в процессе дифференцировки превращается в высоко специализированную клетку и, в конечном счете, в роговую пластинку (Eckert R., 1989).
Над базальным слоем располагается слой шиповатых эпидермоцитов, состоящий из 3-8 рядов клеток – шиповатый слой (stratum spinosum). Кератиноциты, находящиеся ближе к поверхности кожи, приобретают ромбовидную уплощенную форму, а клетки, прилегающие к базальному слою имеют цилиндрическую и кубическую форму. Для строения клеток этого слоя характерно наличие множеств цитоплазматических выростов (шипов или акантов) десмосомальной структуры (Traupe H., 1997). Эти выросты обеспечивают соединение клеток, образованием между ними сети каналов, по которым циркулирует межклеточная жидкость. Десмосомы и тонофибриллы формируют внутренний каркас клеток. В шиповатом слое, как и в базальном, находятся клетки Лангерганса, осуществляющие вместе с кератиноцитами защитную, иммунную функцию. Наличие митозов в клетках базального и шиповатого слоев позволяет объединить их в единый ростковый слой эпидермиса (мальпигиев слой).
Регуляция пролиферации клеток эпидермиса находится под контролем различных внутренних и внешних факторов. Гормоны на уровне организма, а цитокины на клеточном уровне осуществляют гуморальную регуляцию не только интенсивности клеточного размножения, но и функциональную активность кератиноцитов и их дифференцировку (Мордовцев В.Н., Цветкова Г.М., 1993).
Над шиповатым слоем находится зернистый слой (stratum granulosum), состоящий из 2-3 рядов сравнительно плоских клеток и названный так потому, что клетки этого слоя содержит кератогиалиновые гранулы. Эти гранулы содержат профилагрин - высокомолекулярный предшественник филагрина, белка, который, по мнению ряда авторов, участвует в агрегации кератиновых тонофибрилл (Leung D.Y., 1999).
За зернистым слоем следует блестящий слой (stratum luctdum), образованный уплощенными безъядерными клетками. Гистологически – это переходная зона между живыми и мертвыми клетками эпидермиса, которая характеризуется интенсивной энзиматической активностью. Внутри этой зоны все клеточные органеллы разрушаются под действием протеаз, кислых гидролаз, ядерных нуклеаз. Одновременно с этим пластинчатые гранулы, содержащие липиды, сливаются с плазматической мембраной, которая приобретает в результате этого слоистое строение (Hughes С.С., Savage С.О., Prober J.S., 1990). При этом выход содержимого пластинчатых гранул в межклеточное пространство обеспечивает гидроизоляционные свойства кожи.
Влияние температурного фактора на функциональную активность иммунной системы и репаративные процессы
Регенерация – восстановление тканей, органов, отдельных частей живых существ, подвергшихся разрушению или утрате. Различают следующие типы регенерации: Регенерация физиологическая – регенерация тканей, отмирающих в процессе нормальной жизнедеятельности организма, например, регенерация эпидермиса. Регенерация репаративная – регенерация участков органов или тканей, погибших в результате травмы или какого-либо патологического процесса. Регенерация патологическая – регенерация, характеризующаяся замедленным течением процессов заживления или избыточным развитием замещающей ткани.
Репаративная регенерация, возникающая в ответ на повреждение тканей или органов, как правило, тесно связана с другими выработанными в процессе эволюции стереотипными реакциями на повреждение – воспалением и склерозом (фиброзом). В общем процессе репаративной регенерации проявляется единство воспаления, регенерации и фиброза, которые по существу являются неразрывными компонентами целостной тканевой реакции на повреждение (Попов В.А., Питенин И.Ю., 1991).
Процесс заживления раны представляет собой естественный феномен. При этом организм действует по достаточно стандартной схеме, которая начинается со свертывания крови, образования струпа, очищения раны от погибших тканей, инородных тел и микроорганизмов и, наконец, формирует для заполнения дефекта новую грануляционную ткань, которая со временем преобразуется и способна выполнять все функции, присущие кожным покровам. Эта цепочка взаимосвязанных биологических процессов предъявляет высокие требования к репаративным способностям организма, которые проявляются не только местно, но и затрагивают все резервы организма. Нанесение раны сопровождается местными и общими реакциями организма. Общие реакции заключаются в усилении основного обмена и катаболизма под влиянием симпатической нервной системы и гормонов. Всасывание в кровоток микробных токсинов, продуктов распада тканей стимулируют лейкоциты к выбросу цитокинов и вызывают появление симптомов интоксикации. При отсутствии осложнений эти явления купируются через 4-5 суток.
Местные реакции направлены на заживление раны и имеют определенную генетически обусловленную закономерность. Заживление ран различных органов и тканей имеет свои особенности, зависящие от их морфологического строения, и различается по длительности, но всегда происходит с образованием соединительно-тканного рубца. Без рубца заживают только поверхностные раны без повреждения росткового слоя кожи (Alster T.S., 1997; Alster T.S., Tanzi Е., 2003).
Аничков Н.Н., Волкова К.Г. и Гаршин В.Г. (1951) описали следующие стадии заживления ран: ранняя стадия заживления ран (от 1 до 8 суток после первичного иссечения); стадия полного развития грануляционной ткани (от 9 до 15-го дня); стадия созревания грануляционной ткани и перехода в рубцовую ткань (от 15-го до 21-го дня); дальнейшая стадия созревания грануляционной ткани и превращения е в рубцовую ткань (сроки от 22 до 28-го дня); поздние стадии раневого процесса (начиная со 2-го месяца).
Многолетнее изучение В.В. Серовым и А.Б. Шехтером (1981) заживления ран и других фиброзирующих процессов позволило им выдвинуть концепцию ауторегуляции роста соединительной ткани, основанной на взаимодействии клеточных элементов (фибробластов и макрофагов) и коллагена. Раневой процесс – весьма сложное многоплановое явление, в котором выделяется три обязательный компонента: повреждение – воспаление – восстановление. Они настолько тесно связаны между собой, что разделить их во времени и по морфологическому субстрату представляется весьма сложно (Чернух А.М., Кауфман О.А., 1979). Существуют многочисленные классификации раневого процесса, отражающие его фазовый характер. Они отличаются положенными в их основу критериями: хирургическими, биологическими, морфологическими и др. С точки зрения морфологии R. Ross (1968) предложил делить процесс на три фазы: воспалительную, пролиферативную, реорганизацию рубца. Учитывая, что пролиферация клеток является лишь одним из элементов роста, была предложена модифицированная классификация: травматическое воспаление; новообразование соединительное (грануляционной) ткани, регенерация эпителия; формирование и перестройка рубца. По времени эти фазы накладываются друг на друга (Серов В.В., Шехтер А.Б., 1981; Кузин М.И., Костюченок Б. М., 1990).
В научных исследованиях используют разные экспериментальные модели ран (Берлин Л.Г., 1966; Ефимов Е.А., 1991; Лебединский В.Ю. и соавт., 1999; Хомулло Г.В. и соавт., 1999; Арий Е.Г., 2003): линейные «резанные» раны, заживающие первичным натяжением; полнослойные «вырезанные» раны, заживающие «под струпом»; инфицированные гнойные раны; ожоговые раны; трофические язвы; «вырезанные» раны, в края которых вставлено тефлоновое кольцо, предотвращающее контракцию и эпителизацию, что позволяет изучать грануляционную ткань в чистом виде. Несмотря на значительные различия, выделенные фазы характерны для всех ран. Различия, зависящие от характера, размера, локализации и степени инфицированности ран, а также от вида животного, заключается в общей скорости заживления, в скорости протекания отдельных фаз, вклада контракции и вставочного роста, степени развития грануляционной ткани, полноты регенерации.
Состояние клеток генеративных слоев эпидермиса и дериватов кожи на стадиях заживления дефекта кожи
К 2-ым суткам опыта у животных контрольной группы подлежащая к раневой поверхности соединительная ткань дермы содержит активно делящиеся фибробласты (активность пролиферации составляла 46,98±0,25%) (табл. 8). В сосочковым слое наблюдается отечность. Коллагеновые и эластические волокна располагаются плотными тонкими тяжами. К 7-ым суткам в дерме прослеживается пролиферативная способность клеток фибробластического дифферона (активность пролиферации составляла 77,11±0,02%). Коллагеновые волокна объединяются в крупные пучки. Волосяные фолликулы представлены эпителиальными компонентами наружного и внутреннего корневых влагалищ и матрицей волоса. К 14-ым суткам происходит спад митотического деления клеток соединительной ткани дермы (69,01±0,18%). Сосочковый слой более дифференцирован и содержит значительно больше волокнистых компонентов и уже зрелых клеток фибробластического ряда. К 21-ым суткам прослеживается дальнейшее снижение пролиферативной активности клеток дермы. Митотическая активность составляет 64,54±0,28% (табл. 8). Соединительная ткань представлена умеренным содержанием аморфного вещества и пучками плотно расположенных волокнистых структур. На этих сроках эксперимента значительно активизируются сальные железы, их секреторные отделы значительно увеличиваются в объеме, в них возрастает количество себоцитов на промежуточной стадии дифференцировки, а также высоко дифференцированных. Происходит нарастание митотической активности клеток эпителия наружного и внутреннего корневых влагалищ.
Формируются многослойные участки в наружном корневом влагалище с явлениями вертикальной анизоморфности. Таблица 8 Пролиферативная активность клеток в соединительнотканной основе кожного регенерата после воздействия локального температурного фактора, % (M±m) Стадии «Контроль» (n=30) «Холод» (n=35) «Тепло» (n=35) 2 сутки 76,45±0,56 58,13±0,13 60,11±0,11 7 сутки 77,11±0,02 78,12±0,16### 79,10±0,15 14 сутки 69,01±0,18 79,01±0,14 ,### 80,12±0,11 21 сутки 64,54±0,28 61,12±0,12### 83,44±0,50 Примечание: достоверность различий по сравнению с контролем - - Р 0,05; - Р 0,01, - Р 0,001; достоверность различий по сравнению с группой «Тепло» - ### - Р 0,001.
При тепловой экспозиции на раневую поверхность в кожном регенерате на 2-е сутки эксперимента соединительнотканный компонент представлен рыхлым расположением волоконных структур в глубоких слоях и их плотным расположением в сосочковом слое. Митотическая активность клеток дермы достоверно снижается относительно контрольных значений (60,11±0,11% против 76,45±0,56%, p 0,01) (табл. 8). Волосяные фолликулы содержат наружное и внутреннее многослойные корневые влагалища. Достоверно значимых изменений роста числа пролиферирующих клеток волосяного фолликула не выявлено. Митотическая способность эпителиальных клеток секреторных отделов сальных желез не наблюдается.
На 7-е сутки пролиферативная активность фибробластов возрастает относительно контрольных показателей (79,10±0,15 кл/мм2 против 77,11±0,02 кл/мм2, p 0,01) (табл. 8). Во всех слоях дермы коллагеновые и эластические волокна распределяются плотно. Секреторные отделы сальных желез приобретают выраженную альвеолярную форму, в них четко прослеживается этапность дифференцировки себоцитов. Цитоплазма центральных клеток характеризуется светлым «пенистым» содержимым. В отдельных клетках исчезают клеточные границы, появляется закономерный процесс голокриновой секреции. В отдельных сальных железах процесс характерной дифференцировки клеток секреторных отделов находится в начальном периоде, поэтому представлены только Ki67 положительными клетками. Такие секреторные отделы имеют незначительный диаметр. Следует отметить, что подобное состояние можно расценить как предварительный этап в активной деятельности сальных желез и формирования резервных элементов для последующей их секреторной дифференцировки. Волосяные фолликулы содержат наружное, внутреннее многослойные корневые влагалища и матрицу волоса.
На 14-е сутки клеточные популяции дермы характеризуются высокой пролиферативной способностью. Сосочковый слой представлен рыхлой волокнистой тканью с умеренным содержанием аморфного вещества. Продолжается процесс формирования закладок и дальнейшей дифференцировки новых сальных желез и новых волос. Сальные железы сохраняют состояние активной секреции, секрет которых направляется в сформированные новые выводные протоки. Обращает внимание возможность изменения объемных органных показателе регенерирующего корня волоса. Прослеживаются увеличение количества слоев эпителиоцитов в наружном и внутреннем корневых эпителиальных влагалищах. К 21-ым суткам эксперимента происходит еще большее возрастание пролиферативных потенций клеток фибробластического ряда, эпителиальных клеток волосяных фолликулов, клеток секреторных отделов сальных желез. Соединительная ткань содержит значительные прослойки аморфного вещества между пучками фибриллярных структур. Происходит формирование стержня волоса, но без разделения на корковое и мозговое вещество.
Динамика иммуноморфологических параметров органов лабораторных животных на фоне формирования кожного регенерата
Кроме того и тканевые базофилы и их разная функциональная активность играют важную стимулирующую роль в процессах формирования регенерата не только на начальном этапе раневого процесса, его воспалительной фазе, но и в отдаленные фазы заживления раны: на ранней стадии рубцевания (Paus R., Maurer M., Slominski A., 1994; Maurer M., Fischer E., Handjiski B., 1997; Липшиц Р.У., Звягинцева Т.В., 1999; Мяделец О.Д., Адаскевич В.П., 2006). Секретируемые тучными клетками гистамин и гепарин являются митогенами и хемоаттрактантами для эндотелиоцитов. Выделяющиеся при дегрануляции тканевых базофилов вещества оказывают митогенное действие на эндотелиоциты и на другие клетки микроокружения, в частности на фибробласты. Гистамин в определенных дозах (возможно в таких, которые наблюдались у лабораторных животных при степени дегрануляции 33,3±0,4 %, т.е. при воздействии на рану низких температур) стимулирует секрецию фибробластами коллагена. Именно фибробласты являются главной клеточной линией в репаративную фазу раневого процесса.
Причины выявленных различий в полноте регенерации могут быть следующие. После нанесения травмы первоочередной задачей регенераторного процесса является быстрейшее закрытие дефекта и восстановление барьерно-защитных свойств кожного покрова, а восстановление дериватов предполагается менее важной задачей (Ефимов Е.А., Букина Т.В., 1991; Жукова О.В., Потекаев Н.Н., Стенько А.Г., 2009). Достоверные различия в содержании Ki-67 позитивных клеток в дерме и эпителиальных компонентах кожного регенерата и сохранившихся участках кожи, прилежащих к краям раны, позволили констатировать неоднозначное влияние холодового фактора на компоненты изучаемого субстрата.
Холодовой фактор позитивно влияет на состояние тканевых базофилов, их синтетическую активность и способность к дегрануляции, что указывает на постоянно существующую межтканевую систему регуляторных механизмов компонентов эпидермального и мезенхимного генеза в составе переживающей и регенерирующей кожи.
Восстановление волосяного покрова и сальных желез потребовало бы более длительных и сложных морфогенетических процессов, а, значит, персистенции раны. Такая ситуация наблюдалась у лабораторных мышей при воздействии повышенных температур на область раневой поверхности.
Следовательно, физическими факторами, в частности температурой, можно направлять восстановительный процесс в коже млекопитающих по пути органотипической регенерации (кожный тип регенерации), а не рубцевания (дермальный тип регенерации), и снижать опасность попадания в организм чужеродных антигенов благодаря быстрому закрытию дефекта (Задорожный, Б.А., 1985).
По данным морфометрического анализа иммуногистохимических препаратов околораневой области кожи, относительное содержание Ki-67 позитивных клеток в регенерате существенно отличалось на фоне локального воздействия температурного фактора различного режима в течение всего периода наблюдения.
Так, при воздействии низких температур в межфолликулярном эпидермисе через 2 суток после травмы экспрессия Ki-67 была очень низкой по сравнению с контрольными показателями и индекс пролиферации составил 10,03±0,14%. На 7 и 14 сутки отмечалось постепенное усиление экспрессии белка Ki-67 и рост индекса пролиферации (7 сутки - 25,11±0,26%; 14 сутки - 28,9±0,20%) по сравнению со значениями в контроле и в группе «Тепло». Следует отметить, что на протяжении всего эксперимента при влиянии низкими температурами на раневой дефект выявлялась сниженная пролиферативная активность клеток наружного корневого влагалища волоса по сравнению и с контрольными показателями, и с показателями в группе «Тепло». Возможно, низкие температуры стимулируют эпителизацию раны за счет потенций пула камбиальных клеток не только собственных кератиноцитов межфолликулярного эпидермиса, но и клеток волосяного фолликула (Терских В.В., Васильев А.В., Воротеляк Е.А., 2005). Таким образом, при воздействии низкими температурами на раневую кожную 103 область собственных ресурсов на морфогенетические процессы формирования пилосебацейного комплекса не хватает (Taylor G., Lehrer M.S., Jensen P.J., 2000). Эпителиальные клетки с высоким уровнем связывания маркера Кi-67 выявлялись не только в базальном слое, но в шиповатом слоях. Это свидетельствовало о том, что изменялись взаимоотношения процессов пролиферации, миграции и дифференцировки эпителиальных клеток эпидермиса. Клетки начинали мигрировать в фазе пролиферации, а их созревание происходило в вышележащих слоях (Ланичева А.Х, Мурзабаев Х.Х., Сулайманова Р.Т., 2010; Горелова М.В., Алексеев А.Г., Калинина О.В., Ноздрин В.И., 2012). Установлено, что через 2 суток после травмы уменьшилось количество Ki-67 позитивных клеток в соединительнотканной основе кожного регенерата по сравнению с контрольными значениями. К 7 суткам и особенно к 14 суткам эксперимента наблюдался рост индекса пролиферации фибробластов по сравнению с контролем, но не с соответствующими показателями мышей группы «Тепло». Кроме того, можно заметить, что между кератиноцитами эпидермиса и фибробластами дермы существует тесная прямая связь при воздействии низких и повышенных температур. По данным Явишевой Т.М. с соавт. (2007), эпидермис и дерма образуют единую морфофункциональную зону, в которой происходит пролиферация камбиальных клеток и дифференцировка дочерних клеток, получившихся в результате деления. «Работа» этой зоны основана на том, что процесс образования дочерних клеток в дерме более длителен, чем в эпидермисе. Это приводит к преобладанию в зоне сначала численности эпидермальных дочерних клеток и, следовательно, к их влиянию на камбиальные клетки, а затем стромальных клеток и, соответственно, их влиянию.
