Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Основные функции слизистой оболочки полости рта 11
1.2. Развитие и строение эпителия ротовой полости 13
1.3. Возрастные особенности строения эпителия слизистой оболочки полости рта 21
1.4. Цитологические аспекты многослойного плоского эпителия слизистой оболочки полости рта и их клиническое значение 23
1.5. Гормональнообусловленные изменения эпителиальных тканей. Зависимость эпителия ротовой полости от гормонального статуса 31
1.6. Краткие сведения об изменениях гормонального статуса у женщин при опухолях молочной железы 34
1.7 Резюме 39
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1. Общая характеристика клинических наблюдений 40
2.2. Клинические методы исследования 41
2.3. Методы морфологического исследования эпителия слизистой оболочки десны и щеки 43
2.3.1. Методы морфометрических и цитохимических исследований эпителия слизистой оболочки десны и щеки 46
2.4. Методы статистической обработки данных 49
ГЛАВА 3. Половые и обусловленные фазой менструального цикла морфологические особенности эпителия десны и щеки в норме
3.1. Цитологическая характеристика эпителия десны. Общие сведения 51
3.1.1. Морфологическая характеристика эпителия десны у практически здоровых женщин в разные фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин 67
3.1.2. Морфометрическая и цитотохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны у практически здоровых женщин в разные фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин 71
3.2. Цитологическая характеристика эпителия щеки. Общие сведения 81
3.2.1. Морфологическая характеристика эпителия щеки у практически здоровых женщин в разные фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин 87
3.2.2. Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия щеки у практически здоровых женщин в зависимости от фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин 89
3.3. Сравнительная морфологическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны и щеки у практически здоровых женщин в зависимости от фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин 94
ГЛАВА 4. Морфологические особенности эпителия десны и щеки у женщин при мастопатии
4.1. Морфологические особенности эпителия десны у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла 99
4.2. Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла 104
4.3. Морфологические особенности эпителия щеки у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла 108
4.4. Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия щеки у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла 112
4.5. Сравнительная морфологическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны и щеки у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла 117
ГЛАВА 5. Морфологические особенности эпителия десны и щеки у женщин на ранних стадиях (T1-2N0M0) рака молочной железы
5.1. Морфологические особенности эпителия десны у женщин на ранних стадиях (T1-2N0M0) рака молочной железы 120
5.2. Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны у женщин на ранних стадиях (Т1-2N0M0) рака молочной железы 122
5.3. Морфологические особенности эпителия щеки у женщин на ранних стадиях (T1-2N0M0) рака молочной железы больных раком молочной железы на ранних стадиях (T1-2N0M0) 125
5.4. Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия щеки у женщин на ранних стадиях (T1-2N0M0) рака молочной железы 127
5.5. Сравнительная морфологическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны и щеки у женщин на ранних стадиях (T1-2N0M0) рака молочной железы 132
Заключение 134
Выводы 151
Список литературы 154
- Цитологические аспекты многослойного плоского эпителия слизистой оболочки полости рта и их клиническое значение
- Морфометрическая и цитотохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны у практически здоровых женщин в разные фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин
- Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия щеки у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла
- Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны у женщин на ранних стадиях (Т1-2N0M0) рака молочной железы
Введение к работе
В современной медицине результаты цитологического анализа эпителиальных тканей заняли лидирующие позиции в диагностике многих патологических процессов. Они являются основополагающими для постановки клинического диагноза, позволяют раскрыть патогенетические механизмы заболевания, обеспечить эффективность назначенного лечения (Е.Г. Новикова и соавт., 1998; Л.Т. Базелюк, С.А. Бакеева, 1999; В.Л. Эмануэль и соавт., 2002). В стоматологии принципы доказательной медицины предполагают пересмотреть традиционные подходы в вопросах прогнозирования и ранней диагностики заболеваний парадонта и слизистой оболочки полости рта, чаще всего основанные на клинических симптомах и визуальном осмотре, которые содержат долю субъективизма, как со стороны врача, так и со стороны пациента (А.И. Грудянов и соавт., 1998). Особое значение эти принципы приобретают в таких областях стоматологии, как имплантология и онкостоматология. В последнее время в стоматологии все больше внимания уделяется цитоморфологическим исследованиям с целью выявления: нарушений нормального течения процессов пролиферации и дифференцировки эпителия; степени деструктивных, воспалительных, атрофических процессов; изменений иммунного характера; явлений клеточной атипии и ядерного полиморфизма; степени микробной контаминации и определение морфологической принадлежности микроорганизмов; генетического пола индивидума и цитогенетических изменений. Большой потенциал диагностических возможностей, простота и доступность цитологического анализа позволяет применять эти методы в массовых профилактических обследованиях (A.W. Barret, A.M. Raja, 1997; А.С Григорьян и соавт., 1998; К.П. Ганина и соавт., 1999; Л.М. Цепов и соат., 1999; G.R. Ogden et al., 1999; Л.Ф. Власова и соавт., 2000; Л.Ф. Власова, Л.М. Непомнящих, 2000; А.С. Григорьян и соавт., 2000; А.С. Григорьян, А.И. Грудянов, 2001; А.А. Кунин и соавт., 2001; В.А. Dale, S. Krisanaprakornkit, 2001; S.P. Khoo et al., 2001; L.M. da Silva Fonseca, M.A. do Carmo, 2001; A. Dunsche et al., 2002).
Эпителиальные ткани разных органов являются гормонально-зависимыми. Строение эпидермиса, рост волос, секреция сальных и молочных желез имеют половые различия и зависят от концентрации половых и ряда других гормонов (N.I. Walker et al., 1989; Волков Н.А., 1996; L. Vitellaro-Zuccarello, 1997; L. Langbein et al., 2002). В слизистой оболочке десны имеются рецепторы, в том числе и к 176-эстрадиолу и токсостеролу, которые преимущественно находятся в ядрах эпителиоцитов промежуточного и герминативного слоев (J. Vittek et al., 1982). В то же время остается спорным вопрос о наличии рецепторов к эстрогенам в буккальном эпителии (F. Dolchini et al. 1989; R. Leimola-Virtanen et al., 1997; H. Coleman et al. 2001; F. Schmidt et al. 2002).
Несмотря на значительные успехи, которые были достигнуты в изыскании новых и совершенствовании известных способов диагностики заболеваний парадонта и слизистой оболочки полости рта, до сих пор отсутствуют нормативные цитоморфометрические показатели эпителия, учитывающие половые различия и особенности, связанные с физиологическими изменениями гормонального статуса женщин в разные фазы менструального цикла. В немалой степени это обусловлено недостаточной изученностью этих вопросов, что не позволяет адекватно оценить морфофункциональные изменения слизистой оболочки полости рта и, следовательно, сделать это исследование прогностически значимым и максимально информативным.
При гормональном дисбалансе в эпителии слизистой оболочки полости рта происходят изменения. Клинически, в патологических условиях, это проявляется развитием гингивитов, парадонтитов и стоматитов. Очень часто эти формы протекают атипично и агрессивно (Л.М. Лукиных, 2000; И.В. Безрукова, А.И. Грудянов, 2002).
Известно, что концентрация половых стероидов повышена при мастопатии - группе дисгормональных доброкачественных новообразований заболеваний молочных желез, распространенность которой достигает 50% среди женского населения и раке молочной железы -гормональнообусловленном злокачественном процессе, занимающем первое место по частоте возникновения среди злокачественных новообразований у женщин (J.R. Skinner et al., 1980; М. Smethurst et al., 1981; V. Humeniuk et al., 1982; K.J. Walker et al., 1988; В.И. Даниленко, А.Л. Фоменков, 1995; Н.Ю. Гурова и соавт., 1998; Н.А. Пономарева и соавт. 1998; А.А. Путырский, 1998; Л.Х.Хасханова и соавт., 1998; Л.А. Ли, В.В. Мартынюк, 1999; М. Уайттхауз, М. Слевин, 1999; В.А. Тазалов и соавт., 2002).
В современной стоматологии остаются недостаточно изученными морфофункциональные особенности слизистой оболочки полости рта у женщин репродуктивного возраста с гормональнообусловленными доброкачественными и злокачественными заболеваниями. Отсутствие цитологических показателей интактной слизистой при гормональнообусловленных доброкачественных и злокачественных заболеваниях, критериев прогнозирования развития заболеваний тканей парадонта и слизистой оболочки полости рта свидетельствуют об актуальности изучения этих вопросов и обусловливают необходимость исследования морфофункциональных и гистохимических изменений слизистой оболочки полости рта при данной патологии.
Исходя из актуальности проблемы, была поставлена цель и определены задачи исследования.
Цель исследования
Дать морфологическую характеристику, базирующуюся на количественной цитохимиии и морфометрии, эпителия десны и щеки у мужчин и женщин репродуктивного возраста в норме, а также при мастопатии и раке молочной железы.
8 Для выполнения данной цели были поставлены следующие задачи исследования.
Задачи исследования
Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у мужчин.
Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у женщин репродуктивного возраста в разные фазы менструального цикла.
Сопоставить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у мужчин и у женщин репродуктивного возраста в разные фазы менструального цикла.
Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у женщин репродуктивного возраста, больных мастопатией в разные фазы менструального цикла.
Изучить морфометрические и цитохимические параметры эпителия десны и щеки у женщин репродуктивного возраста, больных раком молочной железы.
Изучить степень микробной контаминации эпителиоцитов, зависящие от пола, фазы менструального цикла, наличия мастопатии и рака молочной железы.
Научная новизна
Новыми в настоящей работе являются следующее.
1. Получены комплексные данные о морфометрических и цитохимических половых различиях эпителия десны и щеки у мужчин и женщин в разные фазы менструального цикла.
2. Получены данные о морфометрических и цитохимических различиях эпителия десны и щеки у женщин, больных мастопатией в разные фазы менструального цикла.
3. Получены данные о морфометрических и цитохимических особенностях эпителия десны и щеки у женщин, больных раком молочной железы.
Установлены общие для эпителия десны и щеки изменения и особенности их реагирования, в зависимости от локализации, развивающиеся при мастопатии и раке молочной железы.
На основании цитологических исследований определена степень микробной контаминации эпителиоцитов, ее зависимость от пола, фазы менструального цикла, наличия мастопатии и рака молочной железы.
Научная и практическая значимость работы
1. Установленные количественные морфометрические и цитохимические параметры слизистой оболочки десны и щеки у практически здоровых мужчин и у практически здоровых женщин, в зависимости от фазы менструального цикла, могут быть использованы в качестве контрольных параметров в работе цитологических лабораторий.
Выявленные особенности дифференцировки и цитофизиологии эпителия слизистой оболочки десны и щеки у практически здоровых женщин в зависимости от фазы менструального цикла, могут быть применены при диагностике, а также - при определении оптимального срока лечебных и профилактических мероприятий в каждом конкретном случае.
Полученные в работе данные комплексного изучения эпителия десны позволили раскрыть особенности дифференцировки и цитофизиологии эпителия слизистой оболочки десны и щеки у женщин при мастопатии и раке молочной железы.
4. Результаты проведенных исследований могут быть использованы в практической работе стоматологических поликлиник, стоматологических отделений стационаров и стоматологических отделений общепрофильных поликлиник; использованы в учебном процессе на кафедрах гистологии и
10 эмбриологии, терапевтической, хирургической и ортопедической стоматологии медицинских ВУЗов, при обучении студентов, интернов, клинических ординаторов, на курсах усовершенствования врачей.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Морфометрические и цитохимические показатели эпителия слизистой оболочки десны у практически здоровых мужчин и у практически здоровых женщин имеют половые различия.
2. Показатели дифференцировки, цитоморфометрии, данные компьютерного анализа изображений ядра и ядрышкового организатора эпителия десны у женщин имеют различия, обусловленные фазой менструального цикла.
3. Эпителий щеки у практически здоровых женщин в меньшей степени зависим от фазы менструального цикла, чем эпителий десны, что позволяет предполагать его меньшую зависимость от концентрации гормонов.
Эпителий десны и щеки при мастопатии подвержен изменениям в течение менструального цикла. По показателям дифференцировки, морфометрическим и цитохимическим показателям они отличаются от таковых в контроле в соответствующие фазы цикла.
Эпителий десны и щеки у женщин при раке молочной железы имеет достоверные различия морфометрических и цитотохимических показателей по сравнению с таковыми у практически здоровых женщин и у женщин при мастопатии.
Цитологические аспекты многослойного плоского эпителия слизистой оболочки полости рта и их клиническое значение
В составе эпителиального пласта ротовой полости располагаются клетки, относящиеся к нескольким дифферонам. Наибольший клинический интерес исследователей привлекают эпителиоциты кератиноцитарного дифферона, находящиеся на разных стадиях дифференцировки, причем это характерно для работ, выполненных как морфологами, так и клиницистами (А.С. Григорьян и соавт., 1998; Л.М. Цепов и соавт., 1999; Л.Ф. Власова и соавт., 2000; А.А. Кунин и соавт., 2001; А.С. Григорьян, А.И. Грудянов, 2001). Им уделено наибольшее внимание при цитологических исследованиях эпителия ротовой полости.
Это объясняется, в значительной степени, доступностью и простотой взятия материала для исследований. Вторая причина внимания к нему состоит в том, что он закономерно изменяется при заболеваниях органов ротовой полости, и эти изменения могут учитываться для разработки методов профилактики, диагностики, оценки эффективности лечения и его прогноза. Наконец, имеющиеся исследования свидетельствуют о том, что эпителий полости рта подвергается изменениям при общесоматической патологии, является местом первичных проявлений многих системных заболеваний, таких как гипертоническая болезнь, сахарный диабет, панкреатит и др. (Б.Я. Рыжавский, Г.Н. Холодок, 1995; В.А. Кравченко, 1998; Цепов Л.М., 1998; К.О. Самойлов и соавт.,2000; P.M. Нигматов, Г.Т. Калменова, 2001), а также и в норме, в зависимости от возраста, состояния организма, необходимости адаптироваться к различным неблагоприятным факторам. В связи с этим интерес к этой проблеме возникает у врачей разных специальностей.
Цитологическое исследование эпителия полости рта применяется с целью выявления: 1) нарушений нормального течения процессов пролиферации и дифференцировки эпителия; 2) степени деструктивных, воспалительных, атрофических процессов; 3) изменений иммунного характера; 4) гормональных влияний; 5) явлений клеточной атипии и ядерного полиморфизма; 6) степени микробной контаминации и определение морфологической принадлежности микроорганизмов; 7) генетического пола индивидума и цитогенетических изменений. Поэтому цитологические методы в стоматологии нашли широкое применение: 1) при проведении мер первичной и вторичной профилактики; 2) при диагностике и дифференциальной диагностике, определении стадий и форм заболеваний парадонта, вирусных и бактериальных поражений слизистой полости рта, аутоиммунных заболеваний, доброкачественных и злокачественных новообразований; 3) для контроля эффективности лечения и прогноза его результатов; 4) в имплантологии. Материалом для исследований при этом служат смывы, мазки, мазки-отпечатки, соскобы. Исследования мазков, отпечатков для изучения эпителия слизистой оболочки полости рта должно проводиться с соблюдением ряда условий. Главное из них - строгий учет топографии исследуемого материала. Характерной чертой многих исследований является использование полуколичественных или количественных подходов. При этом используется ряд показателей: индекс созревания, кариопикнотический индекс, эозинофильный индекс, индекс дифференцировки клеток, воспалительно-деструктивный индекс, индекс деструкции клеток и другие (А.С. Григорьян и соавт., 1998; И.А. Быкова и соавт., 1999; Н.Ф. Данилевский и соавт., 1999; А.С. Григорьян, А.И. Грудянов, 2001). Б.Я. Рыжавский и Г.Н. Холодок (1995) предложили интегральный показатель, учитывающий степень дифференцировки буккальных эпителиоцитов и их деструкции. Авторы нашли их различия у здоровых и больных пневмонией детей, а также - у больных детей при различной степени тяжести заболевания. Г.И. Сидоренко и соавт. (1997) считают, что цитологические особенности слизистой ротовой полости могут использоваться для суждений об экологическом риске. Авторы предлагают в качестве критерия коэффициент дифференцировки. Также предложены: полуколичественный метод, на основе которого выведен индекс деструкции, позволяющий оценивать степень повреждения эпителия десны (А.С. Григорьян и соавт., 2000; А.С.Григорьян, А.И. Грудянов, 2001) и индекс дифференцировки, базирующийся на определении процентного содержания клеток разной степени зрелости в отпечатках эпителия слизистой оболочки полости рта (И.А. Быкова и соавт., 1987). На основании индекса дифференцировки и воспалительно-деструктивного индекса определены с высокой степенью достоверности диагностически значимые критерии у пациентов с заболеваниями парадонта (А.С. Григорьян и соавт., 2000). И.С. Хусаинова и соавт., (1997) сочли возможным оценить функциональное состояние организма и определить группы здоровых, с пограничным состоянием и группы риска, на основании состояния буккальных эпителиоцитов (электрофоретическая подвижность, размеры клеток, количество двуядерных клеток и др.). В цитологических исследованиях слизистой оболочки полости рта в настоящее время широко используется метод компьютерной морфометрии, позволяющей проводить количественный анализ морфологии клеток и осуществлять поиск наиболее информативных морфологических признаков, что, несомненно, дополняет традиционные визуальные методы регистрации. N. Mollaoglu, J.G. Cowpe (2001) предложили применять компьютерный анализ изображения цитологических объектов в диагностике злокачественных изменений в ротовой полости, считая что система анализа изображения может определить изменения в цитологических препаратах слизистой оболочки полости рта и позволит улучшить диагностическую ценность цитологических исследований. S.P. Khoo et al., (2001) использовали метод компьютерной морфометрии в дифференциальной диагностике лихеноидных повреждений слизистой полости рта. С помощью компьютерного анализа изображения были выявлены различия между этими и другими повреждениями. G.R. Ogden et al., (1999) оценили эффект хронического потребления алкоголя на распределение ДНК в эпителиоцитах клинически интактного буккального эпителия, используя количественный анализ площади клеток и содержания ДНК в ядрах.
M.J. Garcia-Pola Vallejo et al., (2001) провели сравнительный анализ количественной экспрессии Ki-67 при лейкоплакии и красном плоском лишае в соответствии с программой системы анализа изображения «Qwin colour RGB». Выявленные изменения показали различия в пролиферативной активности этих патологий.
Морфометрическая и цитотохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны у практически здоровых женщин в разные фазы менструального цикла и у практически здоровых мужчин
При изучении морфологической картины мазков эпителия десны было отмечено, что как у мужчин, так и у женщин, они содержали промежуточные и поверхностные клетки, а также роговые чешуйки. Парабазальные клетки при этом не выявлялись. Соотношение имевшихся клеток, зависело, во-первых, от пола. Во-вторых, у женщин оно отличалось в разные фазы менструального цикла. Так в фазу пролиферации, характеризующуюся высокой концентрацией эстрогенов и низкой -прогестерона, преобладали промежуточные клетки(49,4±2,24%). На долю поверхностных клеток и роговых чешуек приходилось 26,9±1,95% и 22,5±2,03% соответственно. В фазу секреции в мазках доминировали роговые чешуйки, составлявшие 43,6±3,68%, тогда как на долю промежуточных приходилось 36,6±3,50%, а на долю поверхностных -19,7±1,58%. Таким образом, при смене фазы цикла от пролиферативной к секреторной в мазках отмечался отчетливый «сдвиг» в сторону терминальной стадии дифференцировки эпителиоцитов.
Интересные данные получили при сравнении этих результатов с показателями, выявленными при изучении мазков десневого эпителия у мужчин. У последних они не имели достоверных отличий по проценту ороговевших клеток, полученных у женщин в секреторной фазе. В то же время содержание поверхностных клеток у мужчин было достоверно выше (26,3±1,57% против 19,7±1,58%), а содержание промежуточных клеток -ниже (табл.1). Процент эпителиоцитов разной степени зрелости в эпителии десны мужчин значительно и достоверно отличался от соответствующих показателей у женщин в фазе пролиферации (табл.1). Сопоставление этих данных позволяет предположить, что выявленные межгрупповые различия определялись различиями концентрации половых стероидов у пациентов разного пола, а также у женщин в пролиферативную и секреторную фазы цикла, первая из которых характеризуется максимальной концентрацией эстрогенов.
Количество клеток, не имевших выявляемых при световой микроскопии, деструктивных изменений, у женщин в фазу пролиферации и в фазу секреции не имели достоверных отличий. В то же время, наблюдалась незначительно большая частота встречаемости крупнокапельной вакуолизации ядра в фазу пролиферации (табл.1). У мужчин процент клеток без признаков деструкции был максимальным, -достоверно превышая его у женщин в обе фазы менструального цикла (табл.1), т.е. выраженность деструктивных процессов у них была ниже, чем у женщин.
Различные признаки деструкции были неодинаково представлены в сравниваемых группах. Так, у мужчин наиболее часто наблюдался кариолизис (23,4±1,25%), реже - кариопикноз (3,2±0,77%). У женщин же, наоборот, частота встречаемости кариопикноза превышала более чем в 12 раз этих показателей у мужчин и достоверно не различалась по фазам цикла, хотя процессы кариолизиса также имели место.
Вакуолизация ядер была отмечена во всех препаратах сравниваемых групп, но у женщин в фазу секреции эти показатели были наименьшими. По-видимому, это дает основание полагать, что как процессы дифференцировки поверхностных эпителиоцитов, так и их деструктивные изменения у женщин имеют особенности, обусловленные гормональным статусом.
Выявленные различия, по-нашему мнению, могут объясняться различными причинами. Во-первых, они могут отражать интенсивность деструкции, гибель эпителиоцитов в процессе их дифференцировки (скорость наступления терминальной стадии), а также влияние эндогенных факторов, действующих на эпителий. В любом случае полученные данные позволяют предположить, что дифференцировка клеток, их устойчивость к повреждающим факторам зависят от пола, а у женщин - также от фазы менструального цикла у женщин. Во-вторых, различия числа выявляемых клеток с деструкцией могут зависить от скорости, с которой деструктивные процессы протекают. Естественно, что, чем быстрее каждая клетка, подвергающаяся деструкции, проходит этот процесс, тем меньше вероятность ее обнаружения. Ответ на вопрос о том, какой из механизмов ответственен за выявленные различия числа клеток, подвергшихся деструктивным изменениям, требует специальных исследований.
Сравниваемые группы различались также и по числу микроорганизмов, контактирующих с эпителиоцитами. Их минимальные величины характеризовали эпителий десен мужчин. У них было наибольшее число эпителиоцитов, контактирующих с единичными микроорганизмами или с 5-25, а также - наименьшее количество клеток, соприкасающихся с 26-50 и более микроорганизмами (табл.1). У женщин большее число клеток, имеющих контакты с 51 и более микроорганизмами, определялось в фазу секреции (табл.1).
Представляет интерес сопоставление этих результатов с показателями деструкции эпителия. Как явствует из таблицы (табл.1), максимальный процент клеток без признаков деструкции, обнаруженный у мужчин, сочетается с минимальным числом контактирующих микроорганизмов, а минимальный процент клеток без признаков деструкции (фаза секреции) - с наибольшими показателями контаминации микроорганизмами. Эти факты позволяют предполагать взаимообусловленность данных параметров. При этом выявленные взаимоотношения могут зависеть: 1) от более высокой антимикробной активности эпителиоцитов, содержащих антимикробные пептиды, что сочетается с большим числом клеток, не имеющих признаков деструкции; 2) от скорости обновления клеточной популяции и интенсивности удаления с поверхности эпителия клеток, поврежденных и содержащих на своей поверхности микроорганизмы, у мужчин и женщин. При этом оба предполагаемых механизма не являются взаимоисключающими.
Одним из компонентов мазков-отпечатков десны являлись форменные элементы крови. При этом они выявлялись не у всех обследованных пациентов, обнаруживались в небольшом количестве и не имели межгрупповых различий.
Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия щеки у женщин при мастопатии в разные фазы менструального цикла
В фазу пролиферации размеры цитоплазмы промежуточных клеток не имели значимых различий у женщин в норме и при мастопатии. Размеры ядер и ядерно-цитоплазматическое соотношение последних были больше (табл. 6). Концентрация белка в ядрах и цитоплазме этих клеток не имели различий в данных группах. Число зон ядрышковых организаторов, их суммарная площадь, рассчитанная на одно ядро, были большими в эпителиоцитах десны женщин с мастопатией. При этом суммарная площадь зон ядрышковых организаторов при мастопатии превышала таковую в норме в 1,8 раза (рис.34).
Одновременно с этим наблюдалась тенденция к увеличению доли их площади в ядре(1,834±0,317% против 1,186±0,15% в норме, р 0,1). Фактор формы зон ядрышковых организаторов был «ближе» к единице (1,14 против 1,24), что отражало большую приближенность к окружности их конфигурации (табл. 6). В фазу секреции промежуточные эпителиоциты женщин с мастопатией имели меньшие, чем в норме размеры, как цитоплазмы, так и ядра (рис.35). Концентрация белка в них не различалась в сравниваемых группах. В то же время, число зон ядрышковых организаторов и их суммарная площадь, рассчитанные на одно ядро, при мастопатии были достоверно больше, чем у здоровых. Превышение площади достоверно составляло 1,67 раза, т.е. на 67%. (рис.35) Параллельно с этим наблюдались увеличение относительной площади, занимаемой в ядре зонами ядрышковых организаторов и изменение фактора формы (табл. 6). Таким образом, при мастопатии, в обе фазы цикла, возрастали число зон ядрышковых организаторов, их абсолютная и относительная суммарная площадь в ядрах промежуточных клеток. В то же время, направленность изменений размеров ядер и цитоплазмы данных клеток была при мастопатии различна в фазу пролиферации и секреции: в первую - размеры ядер имели незначительное увеличение, во вторую - как ядра, так и цитоплазма существенно возрастали (табл. 6). Наконец, концентрация белка не имела при мастопатии отличий от контрольной ни в фазу пролиферации, ни в фазу секреции. Сопоставление морфометрических и гистохимических характеристик промежуточных клеток десны при мастопатии, в разные фазы менструального цикла, выявило наличие различий обусловленных фазой. Однако они не были идентичными таковым в норме. Так, размеры ядер в фазу секреции в норме были больше, чем в фазу пролиферации (63±2,2 мкм против 53±1,4 мкм ), тогда как при мастопатии они были уменьшены (48±5,2 мкм2 и 60±2,4 мкм2 соответственно). Ядерно-цитоплазматическое соотношение в промежуточных эпителиоцитах десны при мастопатии в фазу секреции значительно меньше, чем в фазу пролиферации, тогда как в норме этот показатель не имел различий, обусловленных фазой цикла. Полученные данные, таким образом, свидетельствуют о ряде отличий промежуточных клеток десны женщин с мастопатией от таковых в норме, а также о наличии и при мастопатии различий, зависящих от фазы менструального цикла. Анализ особенностей эпителия щеки при мастопатии проведен, как и для эпителия десны, с двух точек зрения. Во-первых, выяснялись отличия данного эпителия в фазу пролиферации и секреции от такового в норме. Во-вторых, проведено сравнение эпителия при мастопатии в разные фазы менструального цикла.
В фазе пролиферации при мастопатии наблюдается изменение соотношения эпителиоцитов в мазках: увеличивается доля менее зрелых (промежуточных клеток) и снижается доля клеток терминальных стадий (поверхностных клеток и роговых чешуек).
Известно, что процессы дифференцировки в многослойных эпителиях сопряжены с синтезом ряда белков, в частности кератинов, входящих в состав тонофиламентов. В связи с этим представляет интерес увеличение частоты встречаемости базофильных включений, имеющих как выявлено, при окраске амидочерным, белковую природу, в буккальных эпителиоцитах при мастопатии (рис.36, 37). Это увеличение было более чем 8-кратным в фазу секреции и 4-кратным в фазу пролиферации (табл.7). В сочетании с уменьшением процента клеток наиболее поздних стадий дифференцировки (роговых чешуек и поверхностных клеток) у пациенток с мастопатией, эти отклонения могут быть основанием для предположения о нарушениях процессов, необходимых для дифференцировки клеток эпителия щеки.
Процент клеток, не имевших деструктивных изменений, не имел достоверных различий в сравниваемых группах. Однако типы деструктивных изменений, наблюдавшихся при мастопатии, различались по частоте от имевшихся в контрольной группе. Так при мастопатии многократно возрастало число клеток с явлениями цитолиза, увеличивалось количество эпителиоцитов с кариопикнозом, т.е. увеличивалась частота встречаемости некротизированных клеток. С другой стороны, количество клеток с лизированным ядром уменьшалось.
Морфометрическая и цитохимическая характеристика промежуточных клеток эпителия десны у женщин на ранних стадиях (Т1-2N0M0) рака молочной железы
Как указывалось в «обзоре литературы», важным этиопатогенетическим фактором развития мастопатии и рака молочной железы является гиперэстрогения. Исследование нами эпителия десны при мастопатии позволило установить, что в фазу пролиферации содержание роговых чешуек и поверхностных клеток было меньше, чем в контроле, промежуточных клеток - значительно больше. Эти результаты можно расценивать как подтверждение предположения о способности эстрогенов, при их высокой концентрации, подавлять заключительные этапы дифференцировки эпителиоцитов десны. В фазе секреции у женщин с мастопатией количество роговых чешуек, поверхностных клеток было больше, чем в фазе пролиферации, но меньше чем в фазе секреции у здоровых женщин. Таким образом, повышение в этой фазе цикла концентрации прогестерона не «нейтрализовало» полностью влияние повышенного содержания эстрогена. В то же время отметим, что и при мастопатии фаза цикла оказывала выраженное действие на соотношение клеток разной степени дифференцировки в мазках эпителия десны: в фазе пролиферации соотношение клеток было «сдвинуто» в сторону более «молодых».
У обследованных нами женщин, больных раком молочной железы, в фазе пролиферации менструального цикла соотношение между роговыми чешуйками, поверхностными и промежуточными клетками в мазках эпителия десны было близким к таковому при мастопатии. Оно характеризовалось более чем двукратным уменьшением содержания роговых чешуек, тенденцией к увеличению промежуточных клеток: по сравнению с соответствующими показателями в норме. По нашему мнению, эти факты также можно расценивать, как довод в пользу положения о способности высоких концентраций эстрогенов замедлять терминальные этапы дифференцировки эпителиоцитов десны.
Отличия соотношения эпителиоцитов разной степени зрелости в мазках, по-видимому, отражают различия толщины разных слоев эпителиального пласта. Можно полагать, что имеется прямая зависимость между толщиной рогового, поверхностного и промежуточного слоев в нем и числом роговых чешуек, поверхностных и промежуточных клеток в мазке.
Между тем, известно, что в процессе дифференцировки в эпителиоцитах изменяется количество тонофибрилл, кератиносом, спектр и концентрация белков-цитокератинов и белков, обладающих антимикробными свойствами (W. Muller-Glauser, Н.Е. Schroeder, 1983; J.P. Ouhayoun et al., 1985; B.B. Паникаровский и соавт. 1995; Е.В. Ковалев, С.А. Гусев, 1998; И.А. Быкова 1999; G.R. Ogden et al., 1999; A.M. Pedersen et al., 2002; A.W. Barrett et al., 1998; 2000; L. Alibardi, 2000; B.A. Dale, S. Krisanaprakornkit, 2001; A. Dunsche et al., 2002). В связи с этим можно полагать, что колебания количества клеток разной степени зрелости в мазке десневого эпителия идут параллельно с изменением механической прочности и антимикробной активности, характеризующих эпителиальный пласт. Полученные в работе данные подтверждают данное положение.
Так, в норме минимальное число клеток, имевших деструктивные изменения наблюдались в мазках десны у мужчин, которые отличались наибольшим содержанием роговых чешуек, обладающих высокой механической прочностью (Bahkar S.N., 1976; J.M. Matravers et al., 1982; C.A. Squier et al., 1991; B. Sondell et al., 1994; S.P. Khoo et al., 2001; G. Vielhaber et al., 2001; О.Д. Мяделец, 2002). По-видимому, большая толщина рогового слоя у них эффективно предохраняла клетки глубжележащих слоев эпителия от действия повреждающих агентов. Заслуживает внимания и тот факт, что степень микробной контаминации эпителиоцитов десны у мужчин была значительно меньшей, чем у женщин в обе фазы менструального цикла. В связи с этим можно предположить, что андрогены, концентрация которых в крови у мужчин существенно выше, чем у женщин, оказывают на эпителий десны эффект, диаметрально противоположный эффекту эстрогенов, т.е. стимулируют заключительные стадии дифференцировки его клеток (С. Clarke, R. Sutherland, 1990) и, как следствие, повышают устойчивость эпителиального покрова к действию повреждающих факторов.
В то же время, как следует из наших данных в мазках эпителия десны женщин не выявлено столь четкой зависимости между соотношением клеток разной степени зрелости, с одной стороны, выраженностью деструктивных процессов эпителиоцитов и микробной контаминации, с другой. По нашему мнению это отражает многоуровневость, многосторонность и сложность регуляции состояния эпителиального пласта и свойств его клеток, участия в ней местных внутриэпителиальных факторов, в том числе вырабатываемых лимфоцитами и другими лейкоцитами, количеством и составом веществ, поступающих из соединительной ткани (F.R. Korsrud, P. Brandtzaeg, 1980; R. Kuppers et al., 1993; S.J. Spencer et al., 1996; S.M.Michalek et al., 1998; Brandtzaeg, P., 1999; P.N. Naylor et al., 1999; D.K. Dunn-Walters, 2000 D.B. Pyne et al., 2001; Л.А. Дмитриева, 2001; И.В. Безрукова, А.И. Грудянов, 2002).
Это подтверждается и данными, полученными при изучении мазков эпителия десны у женщин с мастопатией: несмотря на значительные отличия от нормы в соотношении эпителиоцитов разной степени зрелости, они не имеют отличий от нормы по уровню деструктивных изменений эпителиальных клеток и их микробной контаминации. Приведенные факты можно трактовать также как свидетельство малой степени прямой зависимости данных показателей от концентрации половых стероидов. С другой стороны, резкое увеличение числа деструктивно измененных клеток, их микробной контаминации в мазках эпителия десны женщин, больных раком молочной железы (у которых нет достоверных отличий по соотношению разных эпителиоцитов от такового при мастопатии), может рассматриваться как следствие влияния опухоль-ассоциированных факторов при опухолевой болезни (СИ. Щелкунов, 1971; L. Bohatka, G. Alfoldy, 1977; Р.Е. Кавецкий, 1981; А.В. Дунаевский, Ю.А. Шеломенцев, 1986; И.Н. Швембергер, 1987; L. Rosin et al., 1998; К.П. Ганина и соавт., 1997; 1999; L.A. Dourmishev, 1999; И.М. Федяев и соавт., 2000; В. Sadowski et al., 2001; I.M. Braverman, 2002; J. Wenzel, 2002) на устойчивость клеток к действию различных повреждающих агентов, их антимикробные свойства. Мы полагаем, что эти данные, кроме академического интереса, могут иметь и клиническую значимость для врачей практического здравоохранения.
Похожие диссертации на Морфологическая характерстика эпителия десны и щеки в норме и при некоторых дисгормональных состояниях
