Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 7
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Постановка экспериментов 27
2.2. Методы исследования 29
Глава 3. Результаты
3.1. Изменение количественного соотношения темных (ТГ) и светлых гепатоцитов (СГ) в интактной и денервированной печени. Сравнительный общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния печени интактных и ваготомированных крыс 31
3.2. Изменение количественного соотношения ТГ и СГ, общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния интактной печени в динамике после острой массивной кровопотери 34
3.3. Изменение количественного соотношения ТГ и СГ, общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния печени денервированных крыс в динамике после острой массивной кровопотери 37
3.4. Гистоэнзимологический анализ интактной и денервированной печени в динамике после острой массивной кровопотери 40
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 45
Выводы 74
Список литературы 76
Приложение 102
- Изменение количественного соотношения темных (ТГ) и светлых гепатоцитов (СГ) в интактной и денервированной печени. Сравнительный общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния печени интактных и ваготомированных крыс
- Изменение количественного соотношения ТГ и СГ, общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния интактной печени в динамике после острой массивной кровопотери
- Изменение количественного соотношения ТГ и СГ, общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния печени денервированных крыс в динамике после острой массивной кровопотери
- Гистоэнзимологический анализ интактной и денервированной печени в динамике после острой массивной кровопотери
Введение к работе
Актуальность темы:
Острая массивная кровопотеря остается одним из распространенных повреждений организма. Комплекс нарушений, возникающих при этом состоянии, весьма сложен. Наиболее существенное значение в их возникновении и развитии имеют циркуляторная гипоксия и ишемия органов, ведущие к возникновению геморрагического шока. Тяжесть последствий потери крови и высокая частота встречаемости в клинике определяют актуальность исследований в этом направлении. Значительное внимание в работах, связанных с кровопотерей, уделяется состоянию печени, поскольку она имеет высокую чувствительность к недостатку кислорода. Несмотря на то, что проблема кровопотери изучена довольно глубоко, некоторые ее аспекты требуют дальнейшего изучения. Это, в частности, касается сведений об адаптационно-компенсаторных процессах, протекающих в органах и тканях после потери крови при различных исходных состояниях организма. В этой связи в литературе уделяется большое внимание роли печени, в частности, так называемым темным гепатоцитам (ТГ) и светлым гепатоцитам (СГ). В последние годы установлено, что ТГ и СГ являются клетками одной популяции, находящиеся в разных функциональных состояниях между которыми возможны взаимопереходы (Саркисов Д.С., Крымский Л.Д., Рубецкой Л.С., 1975, Ченцов Ю.С., Косых М.И., 1991). Известно, также, что при различного рода экспериментальных воздействиях и патологических ситуациях (стресс, гепатэктомия, голодание, токсическое воздействие, условия высокогорья, гипертермия) происходит увеличение количества ТГ (Бекетова Т.П., Лапиш К., Королев В.В., Ковач Л., 1975, 1980, Косых М.И., 1991, Сайфутдинов А.И., 1994, Молодых О.П., Непомнящих Л.М., 2000).
Однако сведения об изменении в количественном соотношении ТГ и СГ и о функциональном значении этого феномена неоднозначны. Некоторые исследователи обращают внимание на ряд особенностей структурной,
биохимической и функциональной организации ТГ. В частности показано, что цитоплазма ТГ имеет повышенную электронную плотность; их митохондрии отличаются высокой степенью энергазованности и более высоким уровнем продукции АТФ; для ТГ характерно повышенное содержание гликопротеидов (Нечаева Н.В., Новикова Т.Е., Косых М.И., Ченцов Ю.С, Юровицкий Ю.Г., 1991, Альберте Б., 1994). На основании вышеизложенного мы полагаем, что исследование количественных соотношений ТГ и СГ после острой массивной кровопотери может быть полезным для более глубокого понимания роли ТГ в адаптационно-компенсаторных процессах, протекающих в печени в этих условиях.
Актуальность настоящего исследования определяется также и тем, что изучение особенностей популяционных изменений печеночной паренхимы в условиях кровопотери было проведено на органе с сохранной иннервацией и на органе, лишенном адекватной иннервации. Этот аспект работы был обусловлен двумя обстоятельствами. Во-первых, известно, что нервная система имеет существенное значение в регуляции строения, функций, трофики тканей и их реактивности (Григорьева Т.А., 1959, Астахова А.М.,1970, Никифоров А.Ф., 1973, Волкова О.В., 1978, Ажипа Я.И., 1990, Дубовая Т.К., 1991).Во-вторых, ваготомия, в том числе и стволовая, вошла в практику хирургического лечения язвенной болезни желудка и кишечника, не осложненной и осложненной кровотечением. Механизмы положительного эффекта при этом способе лечения остаются до конца неясными (Горбунов В.И., Розанов В.Е., 1991, Ганжа П.Ф., 1995, Soderlund С. 1991, Reck Т., 1997). При этом существенно, что при стволовой ваготомии нарушается иннервация не только органов желудочно-кишечного тракта, но и печени. Вышеизложенное свидетельствует о том, что исследование роли периферической нервной системы в регуляции состояния печени после острой массивной кровопотери является весьма актуальным и с общебиологических и с прикладных позиций.
Цель и задачи исследования:
Целью настоящего исследования является морфофункциональный анализ состояния паренхимы интактной и денервированной печени в динамике после острой массивной кровопотери. В рамках сформулированной цели были поставлены следующие задачи:
-
Определить количество ТГ в печени интактных и ваготомированных крыс.
-
Оценить количественное соотношение ТГ и СГ у исходно интактных и денервированных животных в ходе ответной реакции печени на кровопотерю.
-
Провести сравнительный общеморфологический, гистохимический и ультраструктурный анализ состояния печени интактных и ваготомированных животных в динамике после острой массивной кровопотери.
Научная новизна работы:
1.Впервые было установлено, что в ранние сроки после ваготомии
существенно увеличивается количество ТГ в печени по сравнению с печенью
интактных животных.
2.Впервые был выполнен сравнительный комплексный
морфофункциональный анализ печени в условиях сохранной и нарушенной
вагуснои иннервации в динамике после острой массивной кровопотери.
3.Впервые была исследована динамика изменения численности ТГ в печени
интактных и денервированных крыс в ходе ответной реакции на острую
массивную кровопотерю. При этом впервые было выявлено, что в процессе
адаптивной перестройки печеночной паренхимы исходно интактных и
денервированных крыс существенную роль играют ТГ. Однако детали
механизма адаптации к условиям кровопотери у этих групп животных
различены.
4.Впервые высказывается предположение о том, что увеличение численности
ТГ после нарушения вагуснои иннервации печени следует расценивать как
компенсаторно-приспособительный процесс, развивающейся на фоне
постденервационной гипоксии. При этом адаптация денервированнои
печени к гипоксии, вызванной кровопотерей, приводит к улучшению
состояния органа по сравнению с таковым у денервированных животных, не
подвергавшихся кровопусканию. В этой связи процессы, имеющие место в
денервированнои печени, можно рассматривать как преадаптационные по
отношению к адаптационным перестройкам, происходящим в
ваготомированном органе после кровопотери.
5. Впервые было обнаружено, что кровопотеря способствует нормализации структуры денервированнои печени.
Теоретическое и практическое значение работы:
Результаты проведенного исследования значимы в плане расширения существующих представлений о механизмах адаптационных процессов в печени при различных неблагоприятных условиях ее жизнедеятельности, в частности, при нарушении ее адекватной вагусной иннервации. Сведения о том, что количественное соотношение ТГ и СГ в интактной и денервироваанной печени в ходе ответной реакции на острую массивную кровопотерю неодинаково, свидетельствует о важной роли исходного субпопуляционного состава печеночной паренхимы для реактивности органа. Самостоятельный интерес для практической и теоретической медицины представляют данные об улучшении строения исходно поврежденной (денервированнои) печени в ходе ответной реакции на кровопотерю. Полученные сведения могут быть полезны при разработке оптимального варианта коррекции состояний, связанных с острой массивной кровопотерей.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Паренхима печени содержит субпопуляции ТГ и СГ, которые находятся в разных морфофункциональных состояниях. Нарушение
условии жизнедеятельности органа сопровождается изменением их количественного соотношения. При этом ТГ проявляют устойчивость к действию неблагоприятных факторов.
-
ТГ принимают активное участие в развитие адаптационно-компенсаторных процессов в денервированном органе. В ранние сроки после ваготомии количество ТГ увеличивается в 2,5 раза по сравнению с их содержанием в интактном органе.
-
В ходе ответной реакции печени на острую массивную кровопотерю меняется количественное соотношение ТГ и СГ. Динамика изменения этого показателя различна в исходно интактном и денервированном органе.
-
Структура денервированной печени животных, перенесших кровопотерю к концу исследования (4 сут) более сохранна по сравнению с таковой у денервированных крыс, не подвергавшихся кровопусканию.
Апробация диссертации:
Материалы диссертации доложены и обсуждены на совместном научном заседании кафедр гистологии лечебного и педиатрического факультетов РГМУ, кафедры морфологии медико-биологического факультета РГМУ (2003); 29 Российской конференции молодых ученых (Смоленск, 2002).
Объем и структура диссертации:
Изменение количественного соотношения темных (ТГ) и светлых гепатоцитов (СГ) в интактной и денервированной печени. Сравнительный общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния печени интактных и ваготомированных крыс
В главе, посвященной литературному анализу исследуемой темы, мы отметили, что оптимальными условиями фиксации, заливки и окраски материала, при которых были получены наиболее достоверные результаты по выявлению ТГ и СГ являются: использование 2,5% глютарового альдегида в качестве фиксатора с дофиксацией осмием, с последующей заливкой в Эпон - Аралдит; окраска срезов 0,1% раствором метилового синего с 1% раствором буры, взятых в соотношении 1:1, рН=9 (Косых М.И., 1991). Учитывая эти данные, в нашем исследовании для оценки количественного соотношения ТГ и СГ в интактной и ваготомированной печени мы использовали вышеописанный метод обработки материала. В дальнейшем, на полутонких срезах определяли количество ТГ и СГ по десяти полям зрения на каждый срез с использованием сетки Автондилова Г.Г. (1980), с учетом имеющихся литературных сведений об относительно одинаковом количестве ТГ и СГ как в центральной, так и в портальной частях дольки (Ясвоин Г.В., 1948, Ченцов Ю.С, Косых М.И., 1991). Как видно их данных, представленных графиком №1 и таблицей №1, после обозначенной обработки материала, количество ТГ в печени интактных крыс составляет 31% (Рис. 1 а). Световой уровень исследования показал, что ТГ и СГ на полутонких срезах отличались только интенсивностью окраски их цитоплазмы. Субмикроскопическое исследование подтвердило наличие большей электронной плотности гиалоплазмы ТТ и выявило особенности их митохондриального аппарата. Так для ТГ характерно преобладающее содержание митохондрий (Мх) конденсированного типа: с электронно- плотным матриксом, большим количеством плотно упакованных крист (Рис.2а, б). Соответственно, СГ имели менее плотную гиалоплазму и содержали Мх промежуточного (просветленный мелкозернистый матрикс) и ортодоксального типов (резко набухший электронно-светлый матрикс с редуцированными кристами), (Рис.3 а, б). При исследовании популяционного состава печени, лишенной иннервации (14 дней после ваготомии), было выявлено значительное увеличение ТГ в сравнении с печенью интактных крыс. Так в паренхиме интактных животных количество ТГ составляло 31%, а в денервированном органе — 78% (РисЛ б).
В литературном обзоре было отмечено, что при различного рода экспериментальных воздействиях и патологических ситуациях (стресс, гепатэктомия, голодание, токсическое воздействие, условия высокогорья, гипертермия) происходит увеличение количества ТГ. Однако в доступной литературе отсутствуют сведения относительно содержания ТГ в печени, лишенной адекватной иннервации, но общей концепции количественных изменений содержания ТГ в печени, полученные нами результаты не противоречат. При световой микроскопии были выявлены типичные для постденервационного состояния изменения паренхимы печени и ее сосудистой системы на ваготомию. При этом наиболее выраженными были сосудистые расстройства, что находило свое выражение в расширении кровеносных сосудов всех калибров, гемостазе, инфильтрации полиморфноядерными лейкоцитами стенки сосудов и паренхимы денервированного органа (Рис.4 а, б). Деструктивные изменения гепатоцитов на светооптическом уровне проявляются в дескомплексации балок, вакуолизации и отеке цитоплазмы. Проявления нейродистрофического процесса на ультраструктурном уровне выражались повреждением мембранных структур гепатоцитов, в первую очередь эндоплазматической сети (ЭПС) и Мх. При этом деструкция ЭПС морфологически выражалась в ее фрагментации, дегрануляции, расширении полостей. Изменение митохондриального аппарата гепатоцитов проявляется в набухании Мх, редукции и дезорганизации крист. В гепатоцитах денервированной печени был гипертрофирован комплекс Гольджи, увеличивалось число первичных лизосом и аутофагических вакуолей. Морфология со стороны ядер существенно не менялась, однако отмечалось расширение перинуклеарного пространства и конденсация околоядрышкового и периферического хроматина (Рис.5 а, б, в, г). При этом указанные деструктивные изменения обнаруживались только в СГ. ТГ выглядели сохранными и при световом, и при субмикроскопическом исследовании. Следует отметить, что наряду с клетками обычных размеров среди ТГ выявлялись мелкие интенсивно темные клетки. Для ультраструктуры последних было характерно высокое содержание мелких Мх округлой формы с плотным матриксом, которые занимали практически всю цитоплазму. Гранулярная ЭПС этих клеток была интенсивно развита и располагалась преимущественно вокруг Мх (Рис.6 а, б). СГ были представлены клетками двух разновидностей: одна из них состояла из полностью сохранных гепатоцитов с признаками активной деятельности внутриклеточных структур (Рис.7а, б); другая разновидность СГ была представлена клетками с морфологическими признаками перенапряжения и вышеописанными деструктивными изменениями органелл вплоть до полной гибели гепатоцитов (рис.8 а, б). Среди СГ встречались делящиеся клетки. Таким образом, результаты данного раздела исследований демонстрируют, что паренхима интактной и денервированной печени содержит субпопуляции ТГ и СГ, которые находятся в разных морфофункциональных состояниях; при этом в ранние сроки после ваготомии количество ТГ увеличивается в 2,5 раза по сравнению с их содержанием в интактном органе.
Изменение количественного соотношения ТГ и СГ, общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния интактной печени в динамике после острой массивной кровопотери
По данным светового и ультраструктурного исследования изменения количественного соотношения ТГ и СГ в интактной печени после острой массивной кровопотери имели следующие особенности. В первые часы после кровопотери (3 час) содержание ТГ в интактной печени возрастало и составляло 66% против 31% до кровопускания (график №1), (Рис.9 а). При светооптическом исследовании выявлялись нарушения цитоархитектоники печени и вакуолизация СГ, расположенных вокруг центральных вен (Рис.10 а, б).
Субмикроскопическое исследование в данный период времени показывает, что деструктивным изменениям в первую очередь подвергались СГ центральных отделов печеночных долек, в то время как ТГ оставались сохранными. Среди ТГ можно было выделить интенсивно темные мелкие клетки, в которых содержание элементов ЭПС, свободных полисом и Мх с плотным матриксом визуально явно увеличено (Рис. 11 а, б). Деструктивным изменениям, протекающим в СГ были подвержены наиболее уязвимые ультраструктуры, ответственные за энергетический обмен и биосинтетическую функцию: митохондриальный и синтетический аппараты клеток. В большинстве СГ Мх представляли собой сильно набухшие органеллы с просветленным мелкозернистым матриксом, с укороченными или редуцированными кристами, располагающимися по периферии. При этом наружные оболочки Мх прослеживались достаточно четко, и лишь отдельные органеллы содержали участки разрыхления наружной мембраны. Гранулярная ЭПС СГ была представлена расширенными цистернами, заполненными хлопьевидным материалом, на поверхности которых выявлялись участки со сниженным количеством рибосом (Рис.12 а, б). Гладкая ЭПС представлена в меньшей степени и ее изменения были связаны с вакуолизацией. Пластинчатый комплекс СГ был резко гипертрофирован. Наименьшим ультраструктурным изменениям были подвержены ядра СГ, форма которых чаще округлая, с четко определяемой ядерной оболочкой, для которой характерно появление извилистости контура и умеренное расширение перинуклеарного пространства (Рис.13 а, б). Исследуемый период времени (15мин - 3 час после кровопотери) сопровождался нарушением состояния внутридольковых и междольковых сосудов, что выражалось резкой дилатацией синусоидов, расширением центральных и поддольковых вен с их полнокровием на фоне редукции портальных сосудов (Рис.14 а, б). Паренхима печени, особенно, область портальных и центральных вен была инфильтрована полиморфноядерными лейкоцитами, при этом в зоне центральных сосудов наблюдались некротические изменения СГ (Рис.15 а, б; Рис.16 а, б). Субмикроскопическое изучение сосудистого русла интактной печени в исследуемый период времени (15 мин - 3 час) позволило выявить расширение пространства Диссе с появлением в нем миелоподобных структур, редукцию микроворсинок капиллярного полюса, гипертрофическое состояние эндотелиоцитов, увеличение количества Купферовских клеток с появлением в последних многочисленных цитоплазматических выростов и вторичных лизосом (Рис. 17 а, б; Рис.18 а, б).
Таким образом, полученные результаты демонстрируют, что в ответ на кровопотерю в интаткной печени возрастает количество ТГ в 2 раза; состояние междольковых и внутридольковых сосудов свидетельствует о депонировании крови в органе в первые часы после острой массивной кровопотери.
В последующие сроки исследования интактной печени после кровопускания (10 час, 24 час) было установлено плавное снижение количества ТГ до 63,5% и 61,8% соответственно обозначенным периодам времени (Рис.19 а). В указанные сроки исследования наблюдалось усиление деструктивных процессов, которые также затрагивали лишь СГ, в то время как ТГ оставались сохранными. При световой микроскопии были отмечены небольшие скопления СГ с наличием жировых включений через 10 час после острой массивной кровопотери, а концу первых суток выявлялась жировая инфильтрация СГ, которая захватывала целиком некоторые дольки (Рис.20 а, б). Ультраструктурное исследование в указанные периоды времени показало, что деструктивные процессы СГ имеют разную степень выраженности: от деструкции Мх и ЭПС, до появления бесструктурных зон, указывающих на полное разрушение клетки. В цитоплазме СГ наблюдалось накопление миелоподобных структур и аутофагосом, а для Мх характерными изменениями были гиперплазия и полиморфизм, выражающийся не только формой, но и размерами органелл (Рис.21 а, б). В перисинусоидальных пространствах обнаруживались элементы лимфоидного инфильтрата и пучки коллагеновых волокон. Последние встречались и в пространстве Диссе, и проникали в паренхиму органа (Рис.22а,б; Рис.23 а, б). В указанные сроки (10 час, 24 час) были существенно сужены синусоиды, центральные и поддольковые вены оставались расширенными, а изменения со стороны портальных вен носили мозаичный характер: местами расширены, местами редуцированы (Рис.24 а).
Таким образом, результаты исследования интактной печени по истечению суток после острой массивной кровопотери показали, что субпопуляционные изменения паренхимы органа связаны с плавным снижением количества ТГ; изменения со стороны сосудов свидетельствовали о мобилизации депонированной крови из портального бассейна. По окончанию эксперимента (через 4 сут после кровопотери) количество ТГ в печени интаткных крыс уменьшалось в сравнении с предыдущими сроками исследования и составляло 31,3 %, что соответствует их количеству в контроле (Рис.25 а). Световая микроскопия показывает на начало восстановления цитоархитектоники печени, уменьшение инфильтрата в паренхиме органа, сохранность некротических изменений среди СГ. При электронно-микроскопическом анализе среди описанных выше разновидностей СГ преобладающее место в содержании принадлежит клеткам, с ультраструктурной организацией, отражающей активную синтетическую деятельность, другая часть среди СГ, представлена клетками с бесструктурными зонами, указывающими на необратимые изменения в подобных гепатоцитах (Рис.26 а, б). При этом среди ТГ увеличивается количество мелких ТГ с вышеобозначенными особенностями ультраструктурной организации. Капиллярный полюс в указанный период исследования выглядит умеренно расширенным с полноценными микроворсинками. Следует отметить уменьшение количества и размеров Купферовских клеток.
Изменение количественного соотношения ТГ и СГ, общеморфологический и ультраструктурный анализ состояния печени денервированных крыс в динамике после острой массивной кровопотери
В первые часы после кровопотери (3 час) в денервированной печени наблюдалось резкое падение численности ТГ с 78% в контроле (через 14 суток после ваготомии) до 66,5% после кровопотери (график №1), (Рис.9 б).
Следует отметить, что в печени интактных животных в этот период времени после кровопотери количество ТГ было практически таким же (66%). Светооптические и субмикроскопические изменения ТГ и СГ в этот и последующие сроки в принципе совпадает с таковыми у интактных крыс после кровопотери, а именно, ультраструктура ТГ остается сохранной и соответствует их высокому энергетическому и синтетическому потенциалу, среди ТГ отчетливо выявляются мелкие с более темной гиалоплазмой клетки, для которых характерно высокое содержание Мх, с плотным матриксом и узкими длинными кристами, ЭПС подобных клеток интенсивно развита с умеренно расширенными канальцами, оплетающими Мх. Структурные особенности части субпопуляции СГ соответствуют их активной синтетической деятельности, сопровождающейся расходованием энергии и резкой активацией органелл. Определенное количество СГ представлено деструктивно измененными и погибающими клеточными формами (Рис. 27 а, б).
Общеморфологический анализ свидетельствует о том, что паренхима ваготомированной печени в первые часы после кровопотери (15 мин — 3 час) была сильно инфильтрована полиморфноядерными лейкоцитами; дескомплектация балок и некротические изменения СГ, возникающие в связи с нарушением адекватной иннервации органа, сохраняли свою распространенность, захватывая при этом, в основном центральные участки дольки (Рис. 28 а, б). Изменения со стороны сосудов в данный срок после кровопотери выражаются резкой дилатацией синусоидов, расширением центральных и поддольковых вен и их полнокровием, мозаичным характером состояния портальных вен: местами редукция, местами расширение; инфильтрацией стенки сосудов лейкоцитами, особенно, ярко выраженной в 15-30 мин после кровопускания (Рис.29 а, б). Субмикроскопическая картина исследования отражает наличие миелиноподобных структур в цитоплазме СГ; гиперплазию эндотелиоцитов; активизацию синусоидальных клеток, с многочисленными цитоплазматическими выростами и вторичными лизосомами в цитоплазме; наличие коллагенового волокна и лимфоидного инфильтрата в сильно расширенном перисинусоидальном пространстве (Рис. 30, Рис. 31).
Таким образом, в ходе ответной реакции на кровопотерю, в денервированной печени в первые часы после воздействия (15 мин- 3 час) происходит резкое падение численности ТГ; изменение со стороны сосудов направлено на депонировании крови в ваготомированной печени (Рис. 32). В дальнейшие сроки исследования (10 час, 24 час после кровопотери) в печени ваготомированных крыс продолжалось падение численности ТГ до 65% и 40,8% соответственно указанным срокам исследования (Рис. 19 б). При общеморфологическом анализе обнаруживаются явления жировой дистрофии, многочисленные зоны некрозов с тенденцией к не распространению, выявлялась направленность к снижению интенсивности лейкоцитарной инфильтрации паренхимы печени и стенок сосудов (Рис.33). Сосуды всех калибров в исследуемый периоа времени оставались расширенными, а портальные вены сохраняли мозаичность изменений (Рис.34). При ультраструктурном анализе отмечалось увеличение количества интенсивно окрашенных ТГ, с высоким содержанием Мх различной формы, крупными ядрами, с параллельно ориентированными канальцами гарнулярной ЭПС в околоядерной зоне (Рис.35). Значительная часть СГ подвергалась деструкции различной степени тяжести вплоть их гибели.
В более поздние сроки после кровопотери (4 сут) количество ТГ в денервированном органе возвращалось к исходному содержанию, что в цифровом выражении составило 76,0% (до кровопотери эта цифра выражалась 78%), (Рис. 25 б). Общеморфологический и ультраструктурный анализы ваготомированной печени в этот период исследования свидетельствовали о сохранении изменений со стороны сосудов, о значительном снижении содержания инфильтратов в паренхиме печени и об уменьшении количества некротически измененных гепатоцитов (Рис.36). При этом среди разновидностей СГ, преобладали СГ с ультраструктурной организацией, отражающей высокую синтетическую деятельность клеток, и в меньшем количестве СГ с элементами деструкции органелл, миелиноподобными структурами в цитоплазме. ТГ имели крупные просветленные ядра, с многочисленными ядерными порами, интенсивно развитой ЭПС в околоядерной зоне (Рис.37). Перисинусоидальные пространства, хотя и оставались расширенными больше не содержали коллагеновых волокон, а их микроворсинки приобретали обычное для них строение. Количество и размеры Купферовских клеток практически не отличалось от физиологических значений, однако в их цитоплазме сохранялось высокое содержание вторичных лизосом.
Таким образом, к концу эксперимента (4 сут) после острой массивной кровопотери происходит возврат числа ТГ к исходному состоянию в печени животных, лишенной адекватной иннервации, при этом морфологическая картина денервированного органа после кровопотери выглядит более благополучной в сравнении с печенью ваготомированных крыс, не подвергавшихся кровопусканию.
Гистоэнзимологический анализ интактной и денервированной печени в динамике после острой массивной кровопотери
Цель этого раздела исследования заключалась в оценке параметров связанных с энергетическим обменом клеток печеночной паренхимы после острой массивной кровопотери. При этом выбор сукцинатдегидрогеназы (СДГ) был обусловлен существующим представлением о важности данного фермента в адаптации организма к различным воздействиям. Известно, что сукцинат способен окисляться в тканях при снижении па цШлъного давления кислорода, когда окисление НАД-зависимых субстратов прекращается, о чем свидетельствует активизация СДГ при гипоксии (Левин Г.В., Халматова Н.М., 1974, Кондрашова М.Н., 1991, Васин М.Н., Королева Л.В., 1999, Лукьянова Л.Д., 2000). Количественный анализ активности СДГ показал, что этот параметр в печени интактных крыс после кровопотери претерпевал отчетливые фазные изменения: выраженные минимумы активности через 15 мин и в период 10-24 час; отчетливо выраженные максимумы через 3 час и 4 сут после оказанного воздействия (график №2), (Рис. 38). Количественный анализ энзима в ткани печени ваготомированных крыс выявил тенденцию к снижению уровня исследуемого фермента по сравнению с печенью интактных животных. В динамике после острой массивной кровопотери изменение активности СДГ в ткани печени денервированных животных имело следующие особенности. Через 15 мин после кровопускания отмечалось увеличение активности фермента, которое сохранялось без изменений вплоть до 3 час после оказанного воздействия. В последующие сроки исследования (10-24 час) в ткани печени ваготомированных крыс происходило снижение активности СДГ, как и в случае с интактной печенью. В поздние сроки (4 сут) после кровопотери в ткани денервированного органа наблюдался подъем активности исследуемого энзима.
Таким образом, результаты количественного гистоэнзимологического анализа активности СДГ в печени интактных и денервированных крыс показали, что изменения активности фермента имели волнообразный характер в обеих группах экспериментальных животных, однако выраженные минимумы и максимумы активности исследуемого энзима проявлялись у интактных и ваготомированных крыс в различные сроки после кровопотери. Следующим аспектом в оценке состояния энергетического обмена клеток печеночной паренхимы после острой массивной кровопотери было изучение изменения активности цитохромоксидазы (ЦХО) в ткани интактной и денервированной печени. Выбор исследуемого энзима был обусловлен литературными сведениями о ЦХО, как ферменте чувствительном к различного рода экспериментальным воздействиям и патологическим ситуациям. В частности, изменение активности данного фермента происходит в условиях геморрагического шока и является свидетельством состояния окислительно-восстановительных и деструктивных процессов, протекающих в Мх, а, следовательно, адаптации организма к условиям кислородного голодания, возникающего в условиях острой массивной кровопотери (Кулинский В.И., 1978, Карташова О.Я., 1975, Гацура В.В., 1993, Юрьева Э.А., Казанцева Л.З., 1999).
Результаты анализа активности ЦХО свидетельствовали о тенденции к ее снижению у ваготомированных крыс по сравнению с интактными (график №3). В динамике после кровопотери активность исследуемого фермента в ткани печени интактных и ваготомированных крыс была различной. Так, у исходно интактных животных в период 15 мин — 10 час после кровопотери исследуемый показатель был повышен. К концу первых суток эксперимента активность данного энзима в ткани печени интактных крыс возвращалось к контрольным величинам, а концу 4 сут значение параметра было ниже исходных показателей.
У ваготомированных животных, как указывалось выше, активность ЦХО еще до кровопотери была сниженной по сравнению с интактными крысами. В ранние сроки после кровопускания (15 мин — 3 час) значение исследуемого параметра в печени денервированных животных не менялось. В последующие сроки исследования (10 час) происходил незначительный рост активности ЦХО, после которого через 24 час после кровопотери активность исследуемого энзима падала, а концу эксперимента (4 сут) вновь повышалась, при этом показатели изучаемого фермента превышали исходные величины.
Таким образом, результаты анализа активности ЦХО в ткани печени исходно интаткных и ваготомированных животных в динамике после острой массивной кровопотери свидетельствовали об отчетливых фазных изменениях. При этом активизация исследуемого фермента у интактных крыс происходит в ранние сроки (15 мин -10 час) после кровопотери, а у денервированных животных - в поздние сроки после кровопускания (4сут). Снижение активности энзима у исходно интактных крыс наблюдали в поздние сроки (4 сут) после экспериментального воздействия, а у ваготомированных животных подобное изменение активности ЦХО выявлялось к концу первых суток после кровопотери.
Одним из показателей состояния энергетического обмена в печени является содержание гликогена. При этом любое поражение органа затрагивает глюкостатическую функцию печени, вызывая изменение процессов синтеза и распада гликогена, что в свою очередь отражается на его содержании в гепатоцитах (Kruszynska, 1991), чем и было обусловлено использование указанного параметра в нашем исследовании.
Полученные результаты показали, что содержание гликогена в печени после ваготомии снижено по сравнению с интактной печенью (Рис. 39). В ответ на кровопотерю в печени интактных крыс происходит плавное снижение уровня гликогена в период 15 мин — 10 час после оказанного воздействия. В поздние сроки постгеморрагического периода (4 сут) в ткани печени интактных животных выявляется тенденция к восстановлению содержания гликогена.
