Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 9
1.1. Краткий очерк данных литературы о развитии и строении коркового вещества надпочечников 9
1.2. Гистофизиология надпочечной железы и ее роль в жизнедеятельности организма 15
1.3. Регуляция гормональной функции коры надпочечников 25
1.4. Участие коры надпочечников в процессах адаптации 25
Глава II. Материал и методы исследования
2.1. Объекты исследования и характер экспериментов 30
2.2. Гистологические и гистохимические методы... 32
2.3. Биологическое тестирование уровня АКТГ в гипофизе животных 34
Глава III. Возрастная морфология и дифферещйровка коркового вещества надпочечной железы у интактных животных
3.1. Гистохимическая характеристика коркового вещества надпочечников у крысят в раннем постна-тальном онтогенезе 37
3.2. Гистохимические особенности коркового вещества надпочечников взрослых крыс 58
Глава ІV. Влияние острой и хронической (прерывистой) гипоксйческой гипоксии на структуру и функцию надпочечной железы животных разных возрастных груш
4.1. Гистохимические особенности коры надпочечников растущих крысят при воздействии острой гипоксической гипоксии 63
4.2. Гистохимическая характеристика коркового вещества надпочечников взрослых животных в условиях острой кислородной недостаточности 80
4.3. Влияние хронической (прерывистой) гипоксичес-кой гипоксии на гистофизиологию коркового вещества надпочечников взрослых крыс 86
4.4. Влияние хронической (прерывистой) гипоксичес-кой гипоксии на гистофизиологию коры надпочечников растущих крысят 99
4.5. Влияние хронической (прерывистой) гипоксической гипоксии на развитие растущих крысят 122
4.6. Состояние адренокортикотропнои функции аденогипофиза растущих и взрослых животных в условиях острой и хронической (прерывистой) гипоксической гипоксии 126
Глава V. Обсуждение результатов собственных исследований и заключение 138
Выводы 159
Литература 162
- Гистофизиология надпочечной железы и ее роль в жизнедеятельности организма
- Биологическое тестирование уровня АКТГ в гипофизе животных
- Гистохимическая характеристика коркового вещества надпочечников у крысят в раннем постна-тальном онтогенезе
- Влияние хронической (прерывистой) гипоксичес-кой гипоксии на гистофизиологию коркового вещества надпочечников взрослых крыс
Введение к работе
Одной из актуальных проблем современной биологии и медицины является изучение состояния нейро-эндокринной системы растущего организма в норме и при различных экстремальных условиях. Многочисленными экспериментальными и клиническими наблюдениями установлено, что нейро-эндокринная система в ходе индивидуального развития организма претерпевает значительные изменения (Б.В.Алешин,I97I-I98I; Ф.З.Меерсон,1974,1981,1982; М.С. Мицкевич,1978,1981; В.Н.Ярыгин,1979; И.А.Аршавский,1982). Во взрослом организме она осуществляет развитие адаптационных реакций, в ответ на различные воздействия (И.П.Петров,1967; Р.Т. Бойко,1968). Установлено, что в реакциях напряжения, вызванных действием повреждающих факторов, в частности, гипоксии, важная роль принадлежит корковому слою надпочечников (В.Н.Коростовце-ва,1976; И.Д.Горизонтов,1981; И.Д.Горизонтов с соавт.,1983; Selye ,1977,1980, Franzini ,1978). Воздействуя на все виды обмена веществ, гормоны коры надпочечников обеспечивают поддержание постоянства внутренней среды организма и его адаптацию к неблагоприятным условиям (М.И.Митюшев,1976; Кириллов 0.И.,1977; А.А.Корольков, В.П.Петленко,1977; И.Г.Акмаев,1979; Н.А.Юдаев, 1980; А.Е.Панин,1983).
Гипоксия (кислородное голодание) как правило, сопутствует течению многих заболеваний. Несмотря на длительную историю проблемы гипоксии, многие стороны ее еще не изучены. В исследованиях, посвященных надпочечным железам, в основном раскрыто функциональное состояние надпочечников взрослых организмов или эмбрионов. (Я.Лашене,1969; О.В.Волкова, М.И.Пекарский, 1976; С.А.Левина,1976; О.К.Хмельницкий,1982; Swiakcke et al. , 1970; Pollet ,1972; Challis et al. ,1977; Станчев,І977; Bus -ter ,1980; Baqnoli et al. ,1981).
Вместе с тем, до настоящего времени остаются недостаточно выясненными сроки и механизм включения коры надпочечников в приспособительные реакции новорожденного организма. Особенно мало в литературе сведений о механизме действия гипоксии на структуру и функцию кортикоцитов в раннем постнатальном онтогенезе (М.А.Жуковский с соавт.,1977; А.И.Баркалая, М.А.Верхо-тин,1982; М.А.Жуковский,1982). Известно, что кислородное голодание очень часто, особенно для детского организма является одним из ведущих факторов, усугубляющих течение патологического процесса и нарушающих последующее развитие ребенка, перенесшего асфиксию (В.А.Таболин с соавт.,1975; Г.М.Савельева, 1981; И.В.Павлова, 1983). Отсюда очевидна настоятельная необходимость более полного изучения функционального и морфологического состояния тех систем и органов, которые в первую очередь ответственны за резистентность организма к действию гипоксии (А.А.Климов,1975;.Т.Г.Дичев, К.Е.Тарасов, 1976; Е.М.Хватова, Н.В.Мартынов,1976; А.П.Авцын, В.А.Шахламов,1979; В.А.Шахламов, В.И.Сороковой,1983; Akama et al. ,1981; Gabriel Nabie et al., 1983). Весьма перспективным путем изучения механизмов влияния гипоксии следует признать применение гистохимических методов (В.В.Соколовский,І97І,І979).
Все выше изложенное определило направление нашей-работы. Цель исследования: Сопоставить особенности становления и гисто-физиологии коры надпочечников растущего организма в нормальных условиях и при гипоксии (острой и прерывистой хронической).
Задачи исследования: I) изучить сроки зональной дифферен-цировки коры надпочечников в раннем постнатальном периоде развития белых крыс при гипоксии; 2) провести гистохимический анализ функциональной активности секреторных клеток коры надпочечников растущего организма в норме и при гипоксии; 3) выявить половой диморфизм гистофизиологических параметров надпочечных желез растущего организма; 4) сопоставить реакции надпочечной железы на гипоксию у растущего и взрослого организмов; 5) выявить сроки становления гипофизарно-надпочечниковых взаимосвязей в постнатальном онтогенезе при гипоксии.
Научная новизна. Получены новые сведения о состоянии надпочечной железы растущего организма в условиях острой и хронической гипоксической гипоксии, выявлены сроки зональной диффе-ренцировки коркового вещества надпочечников и становления гипофизарно-надпочечниковых отношений (к концу первой недели постнатальной жизни). Прослежены в возрастном аспекте гистохимические изменения, происходящие в корковом веществе надпочечников. Показано, что хроническая прерывистая гипоксическая гипоксия отрицательно влияет на гистофизиологию надпочечной железы растущего организма. Выявлены половые особенности гистохимической картины коры надпочечников в норме и в условиях опыта.
Теоретическое значение. Результаты исследования расширяют представление об участии коры надпочечников молодых животных в общем адаптационном синдроме, о механизме адаптации развивающегося организма к гипоксии. Полученные данные раскрывают некоторые стороны морфогенеза надпочечной железы и ее кор- реляции с гипофизом в нейро-эндокринной системе при экстремальных условиях, что может быть рекомендовано для разработки комплекса профилактических мероприятий в практической педиатрии, детской эндокринологии и спортивной медицине. Предложен и апробирован способ докраски гистологических препаратов после выявления аскорбиновой кислоты, позволяющий получить более полную обзорную картину изучаемой ткани и органа.
В настоящее время выводы, изложенные в диссертации, находят свое применение на курсах гистологии и эмбриологии и педиатрии.
Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены и обсуждены на итоговых научных конференциях Ижевского медицинского института (1975-1983), заседаниях общества анатомов, гистологов и эмбриологов (г.Ижевск,1975-1983), конференциях молодых ученых Удмуртии (1975-1977), Межреспувликанской гистологической конференции (Оренбург,1976), тематической конференции Всесоюзного общества анатомов, гистологов и эмбриологов (Тюмень, 1978), 3-ей зональной межвузовской конференции (Ереван,1978), Всесоюзном совещании эмбриологов (Москва,1981), 2-ой межвузовской конференции гистологов и эмбриологов (Симферополь,1983).
По материалам диссертации опубликовано 10 работ. Оформлено I рационализаторское предложение.
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, методов исследования и 4 разделов собственных данных, обсуждения полученных результатов и выводов. Работа содержит 97 страниц текста, 96 фотографий, 6 графиков, 16 таблиц. Библиография включает в себя 354 названия, в том числе
192 работы отечественных авторов.
На защиту выносятся главные положения и выводы работы касающиеся гистофизиологии надпочечных желез крысят обоего пола в раннем постнатальном периоде в условиях острой и хронической гипоксической гипоксии.
Гистофизиология надпочечной железы и ее роль в жизнедеятельности организма
В настоящее время считается установленным, что клубочковая зона коры надпочечников взрослого организма синтезирует минерало-кортикоиды (Griffith ,1963; Pakravan et al.,I974) функции же двух других зон до сих пор точно не установлены. Предполагают, что в пучковой зоне вырабатываются глюкокортикоиды, в сетчатой зоне -стероиды типа половых гормонов ( Kolanowski , Orteqa ,1976). Элек-тронномикроскопические исследования показали, что в клетках внутренней части пучковой и сетчатой зон содержится большое число митохондрий, цитоплазма клеток богата агранулярной цитоплазматичес-кой сетью, имеющей непосредственное отношение к стероидогенезу (В.М.Гордиенко, В.Г.Козырицкий,1978). Анализ гистохимических реакций дает основание также считать пучковую и сетчатую зону основным местом синтеза глюкокортикоидных гормонов (Ashowerth et al. , 1959)..В противоположность этому Symington (1962) высказывает мнение, что местом непосредственного образования глюкокортикоидов и половых гормонов являются клетки только сетчатой зоны, в пучковой же находятся лишь запасы предшественника гормонов холестерина.
До настоящего времени остается не до конца ясной функция зародышевой зоны надпочечной железы. Установлено, что эта зона полностью подвергается инволюции после рождения у .человека (Such.esion - Cannon ,1968). Этот факт, а также наличие ее далеко не у всех видов млекопитающих свидетельствует о том, что данная зона выполняет какую-то особую роль, необходимую только для эмбрионального периода (Cohen ,1976). Известно, что нормальное протекание беременности обеспечивается большим содержанием эстрадиола. Исследованиями Т.С.Сахацкой (1964) установлено, что специфической функцией фетальной зоны является образование дегидроэпиадростерона (ДЭАС), являющегося предшественником эстрадиола. Раздельное изучение биосинтеза гидрокортизона и дегидроэпиадростерона показало, что ДЭАС в 2-4 раза больше в зародышевой, чем в постоянной коре. Неспособность синтезировать гидрокортизон в первой половине внутриутробного периода Т.С.Сахацкая (1974) объясняет недостаточным количеством эндогенного АКТГ. Этот факт говорит о том, что функция фетальной коры, хотя и в малой степени все же зависит от АКТГ. Наиболее вероятным тропным гормоном для нее является хорио-нический гонадотропин (О.В.Волкова, М.И.Пекарский,1976).
В коре надпочечников взрослого организма различают темные и светлые клетки, функции и генез которых объясняются по-разному. Впервые описавший темные клетки Г.Я.Ясвоин рассматривал их как структуры, находящиеся в состоянии паранекроза. А.А.Богомолец (1956) относил темные клетки к главным, составляющим основную массу, пучковой зоны. Кроме главных, автор выделял немногочисленные, так называемые, деламорфные клетки, которые расцениваются как элементы с максимальным напряжением секреторной активности (А.А.Богомолец, 1956; Ю.Н.Глухих,1971). Другие исследователи (В.И.Прилуц-КИЙД96І; Л.И.Аруин,1967; И.Я.Круминя,1972; Gotte ,1961; Wyllie et al.,I973) рассматривают их как стареющие светлые клетки. В пользу этого свидетельствуют данные Enrenbrand (1959). Автор на основании изучения ультраструктурных особенностей относит темные клетки к дегенерирующим. Syminqton (1962) высказывает мнение, что синтез кортизона в коре надпочечников человека осуществляется темными клетками пучковой зоны, светлые же клетки включаются в процесс гормонообразования лишь при неблагоприятных условиях. Н.К.Богданович (1966,а) характеризует темные клетки, как фазу обновления светлых, а Т.И.Щиткова, Е.И.Тараканов (I960) рассматривают увеличение их числа в пучковой зоне как факт истощения ее секреторных элементов. Следовательно факт наличия двух типов клеток в надпочечных железах доказан, однако их функциональная оценка неоднотипна. Так Ueberberg (1972) считает, что светлые клетки не содержат гормонов. По мнению же Е.П.Смоличевой (1964), Я.И. Лашене (1969) и др. темные и светлые клетки являются переходными формами единой клеточной популяции, морфологические особенности которых обусловлены разными фазами секреторного процесса. По-видимому, в темных клетках, представляющих основную массу паренхимы железы начинается синтез липоидов стероидной природы, в частности, холестерина. Наряду с темными и светлыми клетками в пучковой и сетчатой зонах, в зародышевой коре надпочечников крыс на 10-11 день эмбрионального развития обнаружены гигантские клетки, имеющие крупные размеры (70-90 мкм). Повышенная пиронинофилия их цитоплазмы, а также наличие аскорбиновой кислоты и мелких капель жира позволили Е.П.Смоличевой (1964), М.П.Кравцову (1971,6) отнести гигантские клетки к высокофункциональным.
До настоящего времени в литературе нет четких данных о способе выведения секрета железистыми клетками. Так, ряд авторов (А.Т. . Вольфензон,1954; М.П.Кравцов,1971,a; Gotte ,1961; Syminqton , 1962) указывают, что при различных стрессовых состояниях в клетках коры надпочечника имеет место голокриновый тип экструзии. Высказано мнение, что обогащение клеток надпочечника липидами сопровождается наступающей дегенерацией, выражающейся в проявлении голокринового типа секреции (А.Т.Вольфензон,І94І). В противоположность этому, Н.К.Богданович (1966), И.Я.Лашене (1969), Б.В.Алешин (1973), Mosimann (1969) характеризуют секреторный процесс в кортикоцитах при обычных условиях (состояния ортобиоза) как апочуге-рокриновый. Описана картина последовательной дифференцировки кортикальных клеток с постепенным созреванием липидного секрета и выведением его в кровь только в виде части липидных капель (А.А.Богданович, 1966). В период функционального напряжения, по мнению Я.Ла-шене и Е.Сталиорайтите (1966), начинает отставать фаза синтеза гормональноактивных веществ и привычный мерокриновыи тип секреции не в состоянии удовлетворить возрастающую потребность в гормонах, что и проявляется сменой типа секреции. О.В.Волкова, М.И.Пекарский (1976) решительно отвергают наличие голокриновой секреции в надпочечниках новорожденного организма. Авторы пишут, что "голокриновая секреция в корковых клетках является биологически нецелесообразным механизмом, поскольку эти клетки никогда не накапливают значительное количество гормона, а немедленно выделяют его в кровяное русло. Поэтому распад клеток с выходом всех их компонентов в кровь не повлечет за собой существенного повышения уровня кортикостероидов. Кроме того, современные исследования усьтрастру-ктуры коры надпочечников в условиях ее стимуляции, не позволяет обнаружить признаки голокриновой секреции", (стр.283). Таким образом до настоящего времени вопрос о типе секреции кортикоцитов в измененных условиях остается не решенным.
Биологическое тестирование уровня АКТГ в гипофизе животных
Для гистохимического и морфологического анализа надпочечные железы фиксировали в формол-кальщш по Беккеру (Г.А.Меркулов, 1969), жидкости Германа-Флемминга, заливали в парафин. Срезы из нефиксированных надпочечников готовили на криостате - МК-25. Серийные срезы толщиной 2-5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону. Измерение ширины зон коркового вещества производили при помощи окуляр-микрометра (M0B-I-I5X). На поперечных срезах железы измеряли ширину постоянной и зародышевой коры у новорожденных крысят и ширину клубочковой, пучковой, сетчатой и промежуточной зон у крыс всех возрастов. Измерение проводили в 10 участках коркового вещества надпочечников.
Для суждения о функциональном состоянии кортикоцитов надпочечников в различные периоды постнатальной жизни в норме и при гшюксической гипоксии были использованы также методы гистохимического изучения предшественников синтеза гормонов. (Анализ принципов морфофункционального изучения систем стероидного синтеза приведен у Р.И.Шмурун,1975 и Т.Б.Журавлевой с соавт.,1976). Ли-пиды выявляли окраской Суданом Ш и нильским синим, фосфолипиды -Суданом черным и по Мак-Манусу. Ненасыщенные жирные кислоты -четырехокисью осмия выявляли по Герману-Флеммингу (Ромейс,1954), кетостероиды определяли по методу Каналкара (Пирс,1962), который считается специфичным ( Cunderlik et al. ,1966). Холестерин и его эфиры исследовали в поляризованном свете (Г.А.Меркулов, 1962). Для выявления дисульфидных и сульфгидрильных групп использовали щелочной тетразолиевый раствор на глициновом буфере (Пирс,1962; А.П.Авцын с соавт.,1971; Х.Луппа,1980). Аскорбиновую кислоту определяли по методу Варнетта-Бурна (Лилли,1969); модификация докраски гистологических препаратов (В.Б.Харина,1976) приводится подробно.
В классических методах после выявления аскорбиновой кислоты (Бакхус, Барнетт, Жиру-Леблон и др.) гистологические препараты докрашивают обычно только ядерными красителями (нейтральным красным, паракармином, гемалауном), что не дает полной обзорной картины исследуемой ткани. Вместо этого нами предложено докрашивание различных тканевых структур многоцветной красящей смесью по Foley (Ромейс,1954). Аналогичного докрашивания гистологических препаратов в литературе не обнаружено. Из ядерных красителей в предлагаемой методике отдается предпочтение квасцовому кармину (Кисели,1962). Методика. 1. Фиксация материала для выявления аскорбиновой кислоты по методу Варнетта-Бурна (Лилли Р.,1969). 2. Депарафинирование срезов. 3. Окраска квасцовым кармином 10-15 мин. 4. Ополаскивание в дистиллированной воде. 5. Ъ% р-р фосфорновольфрамовой кислоты - 15 мин. (для протравливания соединительной ткани). 6. Без промывки, окраска в красящей смеси по Foley (световой зеленый - 0,5 г; оранж Ж-1,8 г; ледяная уксусная кислота -8 мл; дистиллированная вода - 92 мл) - 10-20 мин. 7. Дифференцировка в 95 спирте (под микроскопом). 8. Просветление и заключение в бальзам или синтетическую смолу. Результат: гранулы витамина С - черные, ядра малиновые, цитоплазма эпителиальных, мышечных клеток и эритроцитов желто-оранжевая, соединительная ткань.окрашена в светло-зеленый цвет (Автор.свидетельство & 181,1976). Следует подчеркнуть, что "зачерненные" гранулы состоят не из витамина.С, а из восстановленного серебра; их локализация указывает на то, что в этих участках клетки азотнокислое серебро восстановлено витамином (Б.Ромейс Eomejs ,1954, стр.283). Для простоты изложения в описании препаратов нами будет использоваться термин гранулы витамина С.
Количественное содержание АКЇГ в гипофизе определяли по снижению концентрации аскорбиновой.. кислоты в надпочечных железах. Нами использован метод Sudnor , Sayers » (1954). Известно, что данный метод является.объективным.и,позволяет судить о стимуляции АКТГ функции надпочечников (М.А.Ларина,1962). Реципиентами служили крысы-самцы с массой тела около 200 г (всего 120 животных). Подавление секреции АКТГ проводили за 24 часа до начала тестирования преднизолоном (М.Я.Кабак,1968) в дозе 12мг/140 г веса животного (Государственная фармакопея СССР,1967). По нашим данным вес аденогипофиза взрослых крыс составляет 4-5 мг. Поэтому при тестировании гипофизарный экстракт от неполовозрелых крыс готовился из нескольких гипофизов (гипофизы собирались вместе до указанного веса железы взрослых крыс). Всего использовано 135 доноров. Аденогипофизы (неврогипофиз отделяли) взвешивали на тор-зионных весах и переносили в раствор 0,1 соляной кислоты, из расчета 0,5 мл на один гипофиз взрослого животного. Гипофизарный экстракт готовился на центрифуге по методу sudnor , Sayers (1954). Полученный гипофизарный экстракт разводили 0,01 N раствором соляной кислоты из расчета, чтобы в 0,2 мл полученного раствора содержалось 0,01 весовая часть исследуемой ткани передней доли гипофиза. Под эфирным наркозом крыс-реципиентов фиксировали на операционных столах и удаляли левый надпочечник, затем вводили внутривенно приготовленный заранее гипофизарный экстракт. Через час после введения экстракта удаляли правую надпочечную железу. Уровень аскорбиновой кислоты в надпочечнике определяли по методу Roe и Kuether (1943) в модификации Schaff ert , Kings -ley (1955). Полученная разность концентраций аскорбиновой кислоты в правом и левом надпочечниках являлась показателем адренокор-тикотропной активности тестируемых гипофизов.
Таким образом, сравнивая результаты, полученные при тестировании гипофизов контрольной серии, получали объективные данные о состоянии адренокортикотропной функции передней доли гипофиза в условиях острого и хронического дефицита кислорода.
Гистохимическая характеристика коркового вещества надпочечников у крысят в раннем постна-тальном онтогенезе
Корковое вещество новорожденных самцов построено аналогично описанному выше, и представлено теми же слоями (периферическим и зародышевым). Морфометрический анализ показал, что ширина корко-кого вещества и зародышевого слоя у самцов несколько больше, чем у самок и составляет 300,0+11,0 мкм; 253,0+13,0 мкм (табл.2). Ги-стохимически обнаружено, что ненасыщенные жирные кислоты (рис.4), фосфолипиды, кетогруппы и холестерин локализуются только в клетках зародышевого слоя, а в кортикоцитах периферической зоны они отсутствуют (рис.5,6). Половые особенности в содержании и локализации аскорбиновой кислоты в кортикоцитах новорожденных не выявлены. На основании вышеизложенного можно заключить, что в железистых клетках надпочечников новорожденных определяются все биохимические вещества необходимые для синтеза стероидных гормонов, за исключением сульфгидрильных групп. Наблюдаются некоторые половые различия по локализации и содержании кетостероидов, фосфолипидов холестерина в клетках зародышевого слоя надпочечников. Последнее, по-видимому, обусловлено большей потребностью в кортикостероидных гормонах у новорожденных крысят мужского пола.
Кора надпочечников трехдневных самок представлена хорошо выраженными дефинитивными и зародышевым слоями, ширина которых соответственно составляет 40,2+1,2 мкм и 240+5,5 мкм (Табл.2). Между этими зонами можно выделить мелкие клетки кубической формы, располагающиеся в два-три ряда. Подобно элементам суданофобной зоны в коре надпочечников взрослых животных цитоплазма этих клеток не воспринимает судановые красители. Это, так называемая, промежуточная зона (рис.7). Цитоплазма клеток этого слоя железы самок не проявляет реакции на липиды и фосфолипиды, тогда как содержание кетостероидов в них повышено. Осмиофильные насыщенные жирные кислоты в большем количестве локализуются в цитоплазме кортикоци-тов периферического слоя (рис.8). Аскорбиновая кислота выявляется преимущественно в клетках, расположенных непосредственно под капсулой железы. Щелочная тетразолиевая реакция на сульфгидриль-ные грушш отрицательна. При изучении срезов надпочечной железы самцов имеют место некоторые особенности их гистохимических реакций. Так, фосфолипиды и липиды обильно заполняют кортикоциты периферического слоя (рис.9), а реакция Каналкара на кетостероиды-слабоположительная. Ненасыщенные жирные кислоты локализуются в кортикоцитах коры аналогично таковым в железах самок этой возрастной грушш, однако их содержание значительно выше. В поляризационном микроскопе в клетках периферического слоя видны мелкие кристаллы холестерина и его эфиров. В органах 5-ти дневных крысят начинает прослеживаться тенденция в аркадности поверхностных клеток периферического слоя. В кортикоцитах фетального слоя содержание холестерина уменьшено (рис.10). Резких отличий в локализации витамина С в железах самцов не наблюдается. Реакция на сульфгид-рильные группы в надпочечниках данного возраста отрицательная.
Таким образом, у трехдневных крысят кора надпочечников состоит из дефинитивного и зародышевого слоев. К концу 5-го дня пост-натальной жизни наблюдаются первые признаки зональной дифференци-ровки, т.е. образование клубочковой зоны и более выраженное накопление предшественников синтеза гормонов, по сравнению с группой новорожденных. В выявлении фосфолипидов и кетостероидов уже в ранний период онтогенеза наблюдаются некоторые половые различия.
В надпочечных железах недельных крысят-самцов четко выражены клубочковая и пучковая зоны, ширина которых составляет: 30,0+1,2 мкм и 156,0+2,3 мкм (табл.2). Между сформированными зонами находится промежуточный слой (16,0+1,4 мкм), состоящий из клеток расположенных в 2-3 ряда (рис.11). Истинная сетчатая зона слабо выражена, а зародышевая резко уменьшена. Фосфолипиды слабее выявляются только в клетках клубочковой зоны, а ненасыщенные жирные кислоты определяются относительно равномерно во всех клетках коркового вещества надпочечников (рис.II,13). Аскорбиновая кислота в виде мелкой зернистости локализуется по всей цитоплазме клеток клубочковой зоны; в элементах пучковой зоны обнаруживаются более крупные гранулы серебра. Клетки зародышевого слоя содержат аргентофильную зернистость очень редко (рис.14,б). Интересно отметить, что на границе с мозговым веществом встречаются одиночные клетки с обильным содержанием ненасыщенных жирных кислот (рис.11) и кетостероидов (рис.12). Холестерин дает более интенсивное свечение в клетках клубочковой, наружной части пучковой и сетчатой зон (рис.15-6).
В надпочечных железах самок клубочковая (30,9+1,9 мкм) и пучковая (159,0+0,9 мкм) зоны отчетливо дифференцированы. При этом выявляются некоторые гистохимические особенности в локализации предшественников гормонов. В частности, значительно больше выявляется холестерина (рис.15а), количество липидов заметно увеличивается по направлению к фетальному слою (рис.16). Аскорбиновая кислота в виде редких аргентофильных зерен встречается вокруг некоторых ядер кортикопитов клубочковой и пучковой зон (рис.14 а). В некоторых клетках она располагается и по их периферии. Кортикоци-ты железы самок проявляют реакцию на кетогрушш (рис.17) и осмио-фильные соединения (рис.18).
Влияние хронической (прерывистой) гипоксичес-кой гипоксии на гистофизиологию коркового вещества надпочечников взрослых крыс
На основании полученных данных можно отметить, что в гисто-физиологии коркового вещества надпочечной железы у крыс различного возраста при развитии острой гипоксии отмечены значительные изменения. Кровеносные сосуды расширены и гиперемированы. Содержание липидов, фосфолипидов, кетостероидов и ненасыщенных жирных кислот в клетках клубочковой зоны не меняется; в то время как в кортикоцитах пучковой и сетчатой зон количество их резко уменьшается. Эти признаки особенно выражены в надпочечных железах крысят мужского пола. Наряду с уменьшением предшественников гормонов в цитоплазме железистых клеток, отмечается изменение локализации и накопление их в эндотелии кровеносных сосудов. Интенсивность реакции на кетостероиды увеличивается, начиная с недельного пост-натальной жизни. Мозаичная картина содержания метаболитов стероидного синтеза является результатом асинхронного функционирования кортикоцитов.
В возрасте семи-пятнадцати дней отмечается сужение или даже исчезновение промежуточной зоны. В надпочечниках половозрелых крыс, наоборот, имеет место некоторое расширение промежуточной зоны. Значительно увеличивается ширина пучковой зоны и уменыпа-зтся сетчатая.
Таким образом, наши результаты позволяют заключить о том, ЇТО надпочечные железы крысят, начиная с первых суток индивидуальной жизни, реагируют на острый дефицит кислорода. У 3-х дневных, 15-ти дневных крысят отмечается снижение секреторной активности надпочечных желез, а у остальных возрастных групп наблюдается ее активизация. Интенсивность гистохимических реакций в железах взрослых особей значительно выше, чем у новорожденных.
Влияние хронической (прерывистой) гипоксиче-ской гипоксии на гистофизиологию коркового вещества надпочечников взрослых крыс
Кислородная недостаточность привлекает большое внимание исследователей не только как источник опасности, но и как средство позволяющее расширить физические возможности организма (В.Б.Мал-кин, Е.Е.Гиппенрейтер,1977). В связи с важностью проблемы представляет большой интерес изучение функционального состояния клеток коры надпочечников взрослого организма в условиях длительного дефицита кислорода.
Опыты проведены на половозрелых крысах обоего пола. Методические приемы эксперимента приведены в главе 2.1.
Под влиянием семидневной прерывистой кислородной недостаточности железистая ткань коры надпочечников у самцов гипертрофирована, клетки расположены рыхло, кровеносные сосуды расширены. Ширина промежуточного слоя в отдельных участках коркового вещества уменьшается (Р 0,001), вследствии чего клетки клубочковой и пучковой зоны сближаются. Достоверно нарастает ширина пучковой зоны [Р 0,001), а ширина сетчатой зоны в железе опытных животных несколько уменьшается (Р 0,01. Табл.6).
Кортикоциты клубочковой и наружной части пучковой зоны над-ючечников у самцов обильно заполнены липидами и фосфолипидами рис.60). Среди клеток пучковой зоны, богатых лшшдными соедине-шями, встречаются клетки свободные от них; а также кортикоциты, меющие очень незначительное количество суданофильных липидов. В то время, как клетки сетчатой зоны бедны суданофильными соединениями и проявляют слабо положительную реакцию на кетоотероиды. Эндотелий кровеносных сосудов содержит незначительное количество кетогрупи (рис.61). Шифф-положителъные вещества отсутствуют также и в кортикоцитах других зон коркового вещества. Интенсивность содержания осмиофильных капель падает по направлению от клубочковой к сетчатой зоне (рис.62). Относительно равномерное распределение по зонам коры отмечается лишь при выявлении кристаллов холестерина и его эфиров (рис.63).
Витамин С в цитоплазме клеток клубочковой зоны преимущественно локализуется перинуклеарно. Кортикоциты пучковой и сетчатой зон почти свободны от гранул восстановленного серебра, а эндотелий кровеносных сосудов, напротив, богат ими. Общее содержание витамина С в корковом веществе надпочечников при хронической гипоксии значительно уменьшено. Сульфгидрильные группы в большом количестве выявляются в корковом веществе железы, с наибольшим удержанием их в пучковой зоне.
В надпочечных железах самок интенсивно выявляются нейтраль-ше липиды в клубочковой и пучковой зонах (рис.64), а содержание се в клетках сетчатой зоны уменьшено. Выявляемые фосфолипиды создают картину мозаичности клеток пучковой зоны (чередование тем-шх и светлых клеток. Кортикоциты сетчатой зоны не проявляют ре-1КЦИЮ на фосфолипиды. Как и в коре надпочечников самцов ненасыщенные жирные кислоты обильно заполняют клетки клубочковой зоны Ірис.65). В экспериментах с хронической гипоксической гипоксии іами были обнаружены добавочные надпочечные железы. Обращает на ебя внимание факт отсутствия кетостероидов в клетках основной селезы и наличие их в добавочном надпочечнике (рис.66).
