Введение к работе
Актуальность проблемы. Миастения - тяжелое нервно-мышечное заболевание, обусловленное блокадой антителами холи-норецепторов и невозможностью нормального функционирования нервно-мышечного синапса.
Диагноз «миастения» вызывает определенные трудности в связи с полиморфизмом клинической симптоматики заболевания, разнообразием его дебютов, вариабельностью течения и наличием ряда невропатологических симптомов и синдромов, протекающих под маской миастении. Существующие клинические и лабораторные тесты, выявляющие патологическую мышечную утомляемость, степень компенсации мышечной слабости антихолинзстеразными препаратами, патологию вилочковой железы и состояние нейромышечной передачи, помогают в постановке диагноза, но не решают полностью задачу, так как встречаются прозериннегативные формы миастении и формы без изменения тимуса.
Новым направлением в диагностике миастении стала разработка сотрудниками Пермской государственной медицинской академии способов выявления в крови больных миастенией антител к ацетилхояину {А.А.Быкова, М.Ф.Гаришина, Т.А.Юшкова, 1989; А.А.Быкова, Е.Ф.Ольховская, А.А.Шутов, 1997). Базирующиеся на концепции иммунного механизма химического гомеостаза, предложенной д.м.н. ААБыковой и проф. А.С.Заксом в 1976-1977 гг, запатентованные методы диагностики миастении углубляют представления о патогенезе заболевания и используются в клинической неврологии в качестве лабораторных маркеров миастении.
Надёжным диагностическим признаком миастении является обнаружение антител к холинорецепторам нейромышечного синапса, но, по данным литературы (Vincent А., 1997), у 10 - 15 % больных миасте-
нией современными методами исследования антитела к холинорецеп-торам не определяются.
В этой связи становится актуальным поиск новых лабораторных способов диагностики миастении и выявления антител к холинорецеп-торам.
В настоящее время методами конкурентного анализа с меченым изотопом и немечеными лигандами доказано наличие на Т-лимфоцитах периферической крови, а также тимоцитах М-холинорецепторов, экспрессия которых изменяется при антигенной стимуляции (М. Plaut, 1987; Н. Metzger, 1988; А.А.Быкова, 1990). На основании непрямых данных (В.В. Абрамов, 1988; А.Д. Адо, 1993) можно предполагать наличие на лимфоцитах и Н-холинорецепторов. Поэтому для анализа факторов сыворотки крови больных миастенией вместо применяемых традиционно дорогостоящих очищенных холинорецепторов электрического органа ската или электрического угря в качестве объекта можно использовать лимфоциты периферической крови.
Целью настоящей работы является изучение некоторых особенностей взаимодействия сыворотки крови больных миастенией с лимфоцитами крови здорового донора для решения вопроса об использовании их в качестве диагностических и дифференциально-диагностических тестов миастении. Задачи исследования:
-
Изучить стимулирующее свойство сыворотки крови больных миастенией по отношению к интактным лимфоцитам крови донора в реакции розеткообразования с ацетилхолиновым диагностикумом.
-
Изучить блокирующее (антирецепторное) свойство сыворотки крови больных миастенией по отношению к активированным
ацетилхолином лимфоцитам крови донора в реакции розеткообразования с ацетилхолиновым диагностикумом.
-
Провести анализ стимулирующего и антирецепторного свойств сыворотки крови больных миастенией в зависимости от клинической формы, продолжительности, типа течения, степени тяжести заболевания.
-
Сопоставить результаты изучения стимулирующего и антирецепторного свойств сыворотки крови больных миастенией с аналогичными показателями здоровых лиц, больных с заболеваниями периферической нервной системы и больных с заболеваниями, имитирующими миастению.
Научная новизна.
Впервые выявлено, что сыворотка крови больных миастенией в разведении 1:10 и 1:20 обладает стимулирующим свойством по отношению к интактным лимфоцитам крови донора, что проявляется экспрессией их рецепторов и статистически достоверным увеличением числа розеткообразующих клеток в реакции розеткообразования с ацетилхолиновым диагностикумом по сравнению с исходным показателем.
Впервые показано, что цельная сыворотка крови больных миастенией обладает блокирующим (антирецепторным) свойством по отношению к предварительно стимулированным ацетилхолином лимфоцитам крови донора, что характеризуется статистически достоверным снижением по сравнению с исходным показателем числа розеткообразующих клеток в реакции розеткообразования с ацетилхолиновым диагностикумом.
Стимулирующее и антирецепторное свойства сыворотки крови больных миастенией выявляются на всем протяжении заболевания, как при очаговых, так и при генерализованных формах миастении,
имеют прямую зависимость от генерализации процесса, степени тяжести и типа течения миастении, не зависят от пола и возраста больных, продолжительности заболевания. Это явление предлагается использовать в качестве дополнительного диагностического и дифференциально-диагностического теста при миастении.
Практическая значимость. Выявление стимулирующего экспрессию рецепторов лимфоцитов и антирецепторного свойств сыворотки крови больных миастенией, может быть использовано в качестве дополнительного диагностического лабораторного теста миастении на любой стадии заболевания, в том числе в дебюте, при стертых, атипичных и прозеринрезистентных формах заболевания.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Сыворотка крови больных миастенией в разведении 1:10 и 1:20 оказывает стимулирующее влияние на лимфоциты крови донора, что проявляется усилением специфического розеткообразования с эритроцитами барана, нагруженными ацетилхолином.
-
Цельная сыворотка крови больных миастенией оказывает блокирующее (антирецепторное) влияние на активированные ацетилхолином лимфоциты донора, что проявляется снижением специфического розеткообразования с эритроцитами барана, нагруженными ацетилхолином.
-
Предложенные способы выявления стимулирующей и антирецеп-торной активности сыворотки крови больных миастенией информативны в любом возрасте, при различных клинических формах и типах течения, в том числе на ранних стадиях заболевания, могут быть использованы в качестве диагностических и дифференциально-диагностических тестов при заболеваниях со сходной с миастенией симптоматикой.
Внедрение в практику. Способы диагностики миастении, основанные на выявлении стимулирующего экспрессию рецепторов и антирецепторного свойств сыворотки крови больных миастенией, внедрены в работу клиники неврологии на базе неврологического отделения Пермской областной клинической больницы. Материалы диссертации применяются в учебном процессе на кафедре неврологии Пермской государственной медицинской академии.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены
на научно-практической конференции неврологов и нейрохирургов
(Омск, 1997), конференции молодых ученых Пермской государственной
медицинской академии (Пермь, 1997); научных сессиях Пермской
государственной медицинской академии (Пермь, 1997, 1998); на VI
Съезде неврологов Пермской области (Пермь, 1998), на совместном
заседании коллективов кафедр неврологии лечебного и
педиатрического факультетов, факультета последипломного образования и научной проблемной комиссии по иммунологии Пермской медицинской академии (1998).
Публикации. По материалам диссертации имеется 8 публикаций в отечественной печати. Получены две приоритетные справки на изобретения «Способ диагностики миастении» № 97109052 от 16 июня 1997 года и № 98107360 от 27 апреля 1998 года.
Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из
введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований,
заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя
литературы. Общий объем работы составляет 154 страниц
машинописного текста, включая список литературы. Работа
иллюстрирована 29 таблицами, 17 рисунками и 10 клиническими
наблюдениями. Список литературы включает 109 работ
отечественных и 75 - зарубежных авторов.
