Содержание к диссертации
Введение
2. Связь витамина в5 с гемостазом (обзор литературы) 12
2.1. Общие сведения о витамине В5 . 12
2.2. Влияние ниацина на свертывание крови 17
3. Материалы и методы исследований 34
4. Результаты экспериментальных исследова ний . 42
4.1 . Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, фибринолиз, толерантность к тромбину, состояние ЛПО при содержании крыс на сбалансированном рационе без ниацина и с его избытком 42
4.2. Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, состояние ЛПО и АОП в них, фибринолиз и толерантность к тромбину, при содержании крыс на сбалансированном рационе, включающем атерогенные компоненты без никотиновой кислоты и с её избытком 45
4.3. Влияние прооксиданта свинца на эффекты, вызываемые у крыс отсутствием НК и её избытком (коагулоактивность ТЦ, плазменный уровень маркеров ВТФ, ф.ХНа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП тромбоцитов, толерантность к тромбину) gj
4.4. Влияние антиоксиданта димефосфона на эффекты, вызываемые у крыс отсутствием НК и её избытком (коагулоактивность ТЦ, плазменный уровень маркеров ВТФ, ф.ХНа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП тромбоцитов, толерант- 57 ность к тромбину)
4.5.Динамика изменений фибринолиза и толерантности к тромбину внутривенного введения НК 61
5. Обсуждение результатов 65
6. Выводы 87
Литература 89
- Общие сведения о витамине В5
- Влияние ниацина на свертывание крови
- . Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, фибринолиз, толерантность к тромбину, состояние ЛПО при содержании крыс на сбалансированном рационе без ниацина и с его избытком
- Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, состояние ЛПО и АОП в них, фибринолиз и толерантность к тромбину, при содержании крыс на сбалансированном рационе, включающем атерогенные компоненты без никотиновой кислоты и с её избытком
Введение к работе
Витамин В5 (витамин РР, никотинамид, ниацин, никотиновая кислота) и его препараты с момента обнаружения витаминных свойств (1937 г) быстро приобрели широкое распространение в медицинской практике, прежде всего, естественно, как радикальное средство от пеллагры, благодаря чему это заболевание, достаточно распространенное в прошлом, практически исчезло (исключая особые условия питания). Используются различные препараты витамина В5 в лечении заболеваний сердечнососудистой системы (в терапии декомпенсированных пороков сердца, при стенокардии, коронарной недостаточности), в коррекции нарушений, связанных с заболеваниями центральной и периферической нервной системы, пищеварительного тракта, секреторную активность желез которого определяет никотиновая кислота. Участвует никотиновая кислота в поддержании уровня сахара крови, в обмене железа, используется при лечении ате-росклеротических изменений и связанных с ними осложнений [В.В.Ефремов, 1949; Б.А.Лавров , 1951; К.Г.Урбанюк, 1961а; И.Л.Герасимова, 1962; М.Г.Шершевский, 1963; С.М.Бременер, 1966; Г.Х.Довгялло и др., 1967; З.А.Эристави, 1968; Ю.М.Лопухин и др, 1983; Л.А.Цейтлин , 1987; П.Н.Шараев, 2004; В.П.Мищенко и др., 2005; S.M. Y.S.AH е.а., 2008; S.Rapoport, 1965; S.Fazio, 2008; R.B. Goldberg, TA.Jacobson, 2008].
Оказывает ниацин и влияние на процессы свертывания крови. Как видно будет при знакомстве с обзором данных литературы, касающихся этой проблемы, публикации достаточно многочисленны, однако их содержание противоречиво в оценке важного вопроса - следует ли использовать никотиновую кислоту как средство снижения опасности тромбозов, или же она способствует активации свертывания.
Несомненно, участие ниацина в виде коферментных форм во многих метаболических реакциях окислительно-восстановительного характера, в энергообеспечения.
Выраженные метаболические нарушения при его недостаточности, широкое, и нередко не опирающееся на результаты систематизированных исследований, использование никотиновой кислоты в терапевтических целях, указывают на то, что её введение изменяет состояние гемостаза. Косвенно это подтверждается участием ниацина в обмене липидов, нарушения которого протекают с гемостатическими изменениями [Б.А.Лавров, 1951; А.Ш.Бышевский, 1978; Г.Ф.Еремин, А.Г.Архипов, 1982]. Подтверждается это влиянием ниацина на состояние и функции нервной и сердечно-сосудистой систем [М.Г.Шершевский, 1963; А.Ш.Бышевский, и др., 2006 б], его фармакодинамическим эффектом на состояние сосудистого русла - важного компонента системы гемостаза [Н.Я.Павлова , 1951; К.Г.Урбанюк, 1961 а, б; М.И.Смирнов (редактор), 1974; K.Shibata, K.Mu-rata, 1986; Y.S.Ali e.a., 2008 ].
Имеются данные, свидетельствующие о способности ниацина активировать фибринолиз в цельной плазме и в её эйглобулиновой фракции, свободной от антиплазминов. Противоречивы, однако, сведения об изменениях общей свертываемости крови и отсутствуют данные о влиянии ниацина на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК).
Ограничены изучением «тромбопластической» активности тромбоцитов и изменением их числа в ответ на введение ниацина данные о коагу-ляционной активности этих клеток при избытке или дефиците ниацина [Г.В.Андреенко, Л.А.Мигалина, 1969]. Вместе с тем, тромбоциты в значительной мере определяют интенсивность НВСК [А.С.Шитикова , 2000; M.P.Gawaz, 2001], которое в свою очередь, определяет наклонность к тромбофилии или кровоточивости [Р.Г.Алборов, 2003; А.В .Пустынников и др., 2007а, б; R.G. M.P.Gawaz, I.Ott, 1996; M.P.Gawaz, 2001; Alborov, 2004]. И это при том, что имеется, хотя и единственная, публикация, в которой отмечается снижение интенсивности противосвертывающей реакции, оцениваемой по частоте выживания экспериментальных животных
при экзогенной гипетромбинемии. Мало изучены эффекты длительного введения никотиновой кислоты, хотя и показано, что это приводит к ослаблению фибринолитического ответа на повторную инъекцию [[А.Ш.Бы-шевский, 1966]. Главное, неясным остается состояние непрерывно осуществляющегося с малой интенсивностью внутрисосудистого свертывания крови в условиях физиологической нормы. Неизвестно, ослабляет или усиливает дополнительное введение препаратов витамина В5 или его дефицит наклонность к тромбообразованию или, напротив, ограничивает скорость тромбиногенеза, следовательно, и скорость взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ). Вместе с тем, интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген является индикатором степени напряжения многокомпонентной системы гемостаза [Д.М.Зубаиров, 2000; А.П. Момот, 1990; А.Ш.Бышевский и др., 1990; А.И.Грицюк и др., 1994; З.С.Баркаган, 1998;; В.П.Скипетров и др., 1999; В.Ф.Киричук и др., 2002; Haszon е.а., 2003; Spronk, 2003]. Изменения скорости ВТФ указывают на наклонность к тромбозам или к гипокоагуляции [З.С.Баркаган, 1998; Д.М Зубаиров и др., 1989; И.Н.Бокарев, 2002; Haszon е.а., 2003; Levi М., 2004; Spronk , 2003], и это особенно четко показано при изучении интенсивности НВСК в зависимости от времени суток и времени года [Б.И.Кузник, и др., 1976; А.Ш.Бышевский и др.„ В.Н.Кожевников, 1986].
К сожалению, нередко оценку биохимического компонента гемостаза не сопровождает контроль за тромбоцитами [И.Е.Попова, 1999; Ю.И.Ци-рук, 1998; W.J.Chen, S.L. Yeh, 2003]. Вместе с тем, тромбоциты - клетки, весьма зависимые от интенивности липидпероксидации (ЛПО) [В.В.Юдин, 2002; И.А.Карпова, 2002; N.I.Gromnatskn, I.N.Medvedev, 2003; A.R.Gear, D. Camerini, 2003].
Высокая частота синдрома гипероксидации [Е.Б.Бурлакова, 1997; В.З.Ланкин, 1997; С.Л.Галян и др., 2002; В.А.Садова и др., 2007 а, б; В.А.Садова, 2008 а, б; I.N.Pasechnik е.а., 2001; J.J.Manson, D.A. Isenberg, 2003] требует выяснить зависит ли интенсивность ВТФ от скорости ЛПО
и величины антиокчсидантного потенциала (АОП). Важно и охарактеризовать эту зависимость.
Сказанное выше обусловливает целесообразность изучения в экспериментальных ситуациях интенсивности непрерывно протекающего внут-рисосудистого свертывания крови - процесса, чрезмерное ускорение которого может инициировать диссеминированное внутрисосудистое свертывания крови [И.Н.Бокарев, 2002; Э. А.Шабанов, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2006а, б; И.В.Зверева и др., 2008; R.F.A.Zwaal, 1992; H.Wada е.а., 2003]. Необходимо наряду с оценкой коагулоактивности тромбоцитов и состояния в них процессов липидпероксидации и антиоксидантного потенциала.
Цель работы
Изучить интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, толерантность организма к тромбину, коагуляционную активность тромбоцитов, ЛПО и АОП в них в зависимости от содержания в рационе ниацина с тем, чтобы оценить его влияние на «готовность» организма к ускоренному тромбинообразованию, и выяснить, не связан ли эффект витамина Р5 с его про- или антиоксидантными свойствами.
Задачи:
Изучить уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, толерантность к тромбину, состояние ЛПО и АОП после 1, 2, 5 и 15 дней содержания крыс на сбалансированном рационе без витамина Р5;
То же изучить при введении с рационом витамина Р5 в количествах, превышающих суточную потребность в 2, 4, 8 и 16 раз;
Повторить действия пункта 1 и 2, используя атерогенный рацион питания, отбирая пробы крови через 15, 30, 45 и 60 дней от начала опыта;
Определять уровень ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, толерантность к тромбину, состояние ЛПО и АОП при содержании крыс на сбалансированном рационе без витамина Р5 и с его увеличенной дозой, добавляя в рацион прооксидант или антиоксидант. Дозу витамина Р5 и сроки отбора
проб определить по результатам, полученным в опытах пунктов 1 и 2.
5. Изучить динамику изменения общей свертываемости крови, фибрино-лиза и толерантности к тромбину после внутривенных введений разных доз витамина Р5.
Дизайн экспериментов
В условиях полноценного питания и питания рационом без витамина В5 (с
тем, чтобы оценить его влияние на готовность организма к ускоренному
тромбинообразованию и выяснить, не связан ли эффект витамина РР с его
про- или антиоксидантними свойствами), определять у крыс интенсивность НВСК, толерантность организма к тромбину, коагуляционную активность тромбоцитов, ЛПО и АОП в них при содержании ниацина в рационе в количествах, превышающих суточную потребность крыс, а также при отсутствии ниацина в рационе (полноценном и атерогенном)
Группа опытов 1-я:
после 1, 2, 5 и 15 дней содержания крыс на сбалансированном рационе без НЦ и с НЦ в дозах 0.5, 1.0, 2.0 и 4 мг/кг массы тела
Группа опытов 2-я: после 15, 30 и 60 дней содержания крыс на атерогенном рационе питания с разными количествами НЦ, выбранными по результатам опытов 1-й группы
Группа опытов 3-я: повторение опытов группы 1-й, с количеством ниацина, оказавшимся наиболее эффективными (по результатам опытов 1-й группы), вводя их на фоне рациона, содержащего антиоксидант димефосфон
Группа опытов 4-я:
повторение опытов группы 1-й с количествами
ниацина, оказавшимся наиболее эффективными
(по результатам опытов 1-й группы),
шодя их на фоне рациона, содержащего прооксидант (ацетат свинца) или
антиоксидант (димефосфон)
Группа опытов 5-я Изучить динамику сдвигов общей свертываемости крови, фибрино-лиза и толерантности к тромбину после внутривенного введения нейтрализованных растворов НК
Научная новизна
Впервые установлено, что у крыс, получающих рацион питания, сбалансированный по макро- и микронутриентам, отсутствие в его составе витамина В5 сопровождается к концу второй недели снижением общей коагуляционной активности, ослаблением интенсивности высвобождения факторов Р3 и Р4, замедлением взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке, замедлением лизиса фибрина в эйглобулиновой фракции плазмы крови и уменьшением толерантности к тромбину.
Показано, что включение в состав такого рациона никотиновой кислоты в двукратном в сравнении с суточной потребностью количестве предупреждает все перечисленные изменения, а никотиновая кислота в количествах, превышающих суточную потребность в 4, 8 или 16 раз повышает коагуляционную активность тромбоцитов, содержание в плазме маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген, дозазависимо активирует фибринолиз и повышает толерантность к тромбину также пропорционально дозе.
Впервые установлено, что эффекты В5-авитаминного питания, включающего атерогенные компоненты, на все перечисленные выше изменения гемостаза остаются такими же.
Впервые выявлено отсутствие связи между сдвигами интенсивности липидпероксидации и антиоксидантного потенциала с одной стороны и гемостатическими сдвигами с другой при содержании животных на рационе без витамина В5 и рационе с его избытком, а также то, что включение в рацион прооксиданта или антиоксиданта не изменяет эффектов никотиновой кислоты на гемостаз.
Впервые изучена дозазависимость эффектов никотиновой кислоты на фибринолиз и толерантность к тромбину и установлена тесная положительная связь между их изменениями при оральном и внутривенном путях введения.
Практическая ценность работы
Подтверждено в разнообразных экспериментальных ситуациях недавно сформулированное представление о тесной положительной связи между плазменным уровнем маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантностью к тромбину, что подтверждает возможность использовать в клинике доступные методы определения маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген у больных с нарушениями гемостаза для выявления наклонности к тромбозу или тромбофилии.
Показано, что внутривенное введение никотиновой кислоты сопровождается кратковременной гиперкоагуляцией, вскоре сменяющейся гипокоагулемией, и это сопровождается активацией фибринолиза, интенсивность которого пропорциональна толерантности к тромбину. Видимо можно использовать никотиновую кислоту как неспецифический антикоагулянт или фибринолитик, вводя её одновременно или вскоре после гепарина.
4. Данные о зависимости интенсивности фибринолиза и толерантности к тромбину от дефицита или избытка витамина В5 обращают внимание практикующих врачей на необходимость учитывать обеспеченность организма пациента витамином В5 при заболеваниях, протекающих с наклонностью к тромбогеморрагиям.
2. Полученные нами данные использованы при подготовке кафедрами биологической химии и гигиены с основами экологии ТГМА книги «Антиок-сиданты в коррекции гемокоагуляционных сдвигов» (М.: Медицинская книга.-2004.-79 с).
Положения, выносимые на защиту
1. Отсутствие в рационе витамина В5 ведет к снижению коагулоак-тивности тромбоцитов и замедлению процесса взаимодействия между тромбином и фибриногеном в кровотоке, при одновременном снижении толерантности к тромбину и замедлении фибринолиза.
2.Избыток в питании витамина В5, адекватный лечебным дозам, ис-
пользуемым в лечебной практике, приводит при обычном и атерогенном питании к росту коагулоактивности тромбоцитов, ускорению взаимодействия тромбин-фибриноген, сопровождающимися, однако, активацией фибринолиза и увеличением толерантности к тромбину.
3. Эффекты никотиновой кислоты на гемостаз не сопряжены с его способностью изменять липидпероксидацию и антиоксидантный потенциал тромбоцитов - они реализуются через свойство НК активировать фибринолиз, который находится в тесной положительной связи с толерантностью к тромбину.
Апробация и публикация
Результаты работы доложены на научной конференции регионального отделения РАЕ (Тюмень, 2007), на заседании Тюменского Областного отделения ВБО (2008), на электронных конференциях РАЕ (2007-2008), на III научной международной конференции в Варадеро (Куба, 2008, март), III научной международной конференции (Москва, 2008, май), на совместном заседании кафедр биохимии и гигиены с основами экологии ТГМА (2008) и опубликованы в медико-биологических журналах (4 статьи) и в материалах международных научных конференций (4 публикации).
2. СВЯЗЬ ВИТАМИНА В5 С ГЕМОСТАЗОМ (обзор литературы)
Общие сведения о витамине В5
Буквенное обозначение витамина В5, как и ряда других витаминов, не является единственным - для него наряду с аббревиатурой от английского pellagra preventive (РР) существуют и другие - ниацин, антипеллагри-ческий фактор (тривиальные названия), кислота никотиновая, никотина-мид (наименования, предложенные Международным союзом чистой и прикладной химии - IUPAC). Мы чаще используем наиболее краткое наименование - ниацин (НЦ), однако при рассмотрении публикаций пользуемся и терминологией авторов, тем более, когда речь идет о конкретном препарате витамина В5 - никотиновой кислоте и её амиде. При описании собственных экспериментов используем термин никотиновая кислота, (НК) препарат которой мы применяли в экспериментах.
Синтез ниацина (НЦ) осуществляется в преобладающем большинстве растительных и животных организмов. Его предшественником является аминокислота триптофан [А.И.Колотилова, Е.П.Глушанков, 1976; S.M.Pa-poport, 1965; Y.Egashira е.а., 2006; Т. Fukuwatari, К. Shibata, 2007; S.L.Thorn, G.S.Young, 2007]. Источником ниацина в питании являются преимущественно продукты животного происхождения - мясные продукты, особенно печень, исключение - яйцо и молоко. Однако и оба последних продукта обладают ниацинсберегающей способностью за счет высокого содержания в них триптофана [L.M.Bermejo е.а., 2007; Y.Egashira е.а., 2007; Pivots е.а., 2007].
Из растительных продуктов особенно богаты ниацином бобовые. В маисе и вообще в зерновых ниацин содержится в связанном в форме эфира состоянии - ниацитина, который не усваивается организмом. Так как кукурузный белок лишен триптофана, использование кукурузы в качестве основного продукта питания может обусловливать недостаточность витамина РР [В.В.Ефремов, 1949; Б.А.Лавров, 1951; П.Е.Калмыков, М.Н.Ло гаткин, 1974; М.И.Смирнов, 1974; Y.Egashira е.а., 2007].
Существенно, что ниацин не разрушается при автоклавировании и переносит кипячение при низких значениях рН, поэтому при кулинарной обработке ниацин практически не разрушается: обычные виды термической кулинарной обработки продуктов приводят к потере не более 15-20% ниацина [П.Е.Калмыков, М.Н.Логаткин, 1974; М.И.Смирнов, 1974; А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1991; П.Н.Шараев, 2004; B.Alberts е.а., 1990; SharaM. е.а., 2007].
Алиментарная недостаточность НЦ проявляется как симптомоком-плекс, называемый пеллагрой. В основе заболевания лежит одновременное отсутствие или дефицит в питании не только витамина В5, но и других витаминов группы В [K.Shibata, K.Murata, 1986; H.Okamoto е.а., 2003].
У человека для пеллагры характерны дерматит на участках, доступных действию света, стоматит и атрофический глоссит (сглаженность сосочков языка, его фуксиноподобное окрашивание и болезненность), нарушения пищеварения, проявляющиеся в виде тяжелой диареи. При более выраженных формах заболевания возникают кровоизлияния на протяжении всего желудочно-кишечного тракта, и развивается деменция [A. Dar-vay е.а., 1999; L.C.Alvaro е.а., 2007].
Эндогенный гиповитаминоз возникает при разнообразных внешних воздействиях: рентгенооблучении, хирургических вмешательствах, термических ожогах, длительном применении сульфаниламидных препаратов, при хроническом колите, брюшном тифе, у больных с ограниченной резекцией желудка [М.И.Смирнов, 1974; А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1991; П.Н.Шараев, 2004; P.Thankachan е.а., 2008].
По химической природе ниацин - (3-пиридинкарбоновая кислота, химическая природа которой установлена ещё в XIX веке. Так как антипел-лагрическим действием обладает амид никотиновой кислоты, собственно никотиновую кислоту можно рассматривать как провитамин [T.Fukuwaari, K.Shibata, 2007].
Пиридинкарбоновые кислоты существуют в виде трех изомерных форм (а, (3 и у) - соответственно пиколиновая, никотиновая и изоникоти-новая кислоты. Более устойчива Р-форма, которая и отличается наиболее высокой специфической активностью в качестве антипеллагрического фактора, т.е. собственно никотиновая кислота. Следующим по антипел-лагрической активности является амид никотиновой кислоты [А.П.Гав-рилов и др., 1966]. Как и ряд других витаминов, ниацин функционирует в качестве составной части простетической группы ферментов, т.е. кофер-мента (коэнзима).
Перечень ферментов, содержащих в составе простетической группы ниацин, систематическое и рабочее их название, а также шифр по МКФ [Л.А.Цейтлин, 1967; П.Е.Калмыков, М.Н.Логаткин, 1974; А.И.Колотилова, Е.П.Глушанков, 1976; А.Ш.Бышевский, 1978; Д.Мецлер, 1980; S.Dagley, D.E.Nicolson, 1970] представлены ниже (табл. 1):
Влияние ниацина на свертывание крови
Связь ниацина со свертыванием крови изучали в здоровом организме и при патологических состояниях, причем, как в прошлые годы, так и в последние десятилетия преимущественно у больных с нарушениями ли-пидного обмена [В.В.Ефремов, 1949; М.Г.Шершевский , 1963; Г.Х.Довгял-ло и др., 1967; А.Ш.Бышевский, 1978; Pires J.A., 2007]. Главным образом внимание уделялось его влиянию на плазминовую систему, а также изучению результатов применения препаратов витамина РР в лечении тромбозов в условиях клинике, а также в эксперименте.
Разнообразие заболеваний человека, различия в приемах экспериментальных исследований и в оцениваемых компонентах гемостаза, при которых изучали эффекты ниацина, не позволили нам прибегнуть к какой-либо рубрикации в их описании, и поэтому мы отчасти придерживаемся хронологической последовательности, отклоняясь от неё в тех случаях, когда результаты более поздних работ подтверждают, объясняют или не согласуются с полученными ранее данными.
Так, Л.А.Черкес и соавт. [1942] отметили, что при оральном или подкожном введении никотиновой кислоты (в дозах, аналогичных верхнему уровню терапевтических доз или их превышающих), у экспериментальных животных время свертывания крови, извлеченной из сосуда, сокращается, причем максимум укорочения свертывания совпадает с максимальной тромбоцитопенией. Сокращение времени свертывания, и развитие тромбоцитопении характеризуются как быстро преходящие. То же находили и у здоровых людей, и у больных с гепатитом [З.И.Малкин и др., 1948], у лиц с заболеваниями пищеварительного тракта [С.М.Бременер, 1966]. В условиях эксперимента было отмечено гипотензивное действие никотиновой кислоты [Я.Б.Максимович, 1949], не сопровождающееся изменением уровня протромбина.
Совпадение во времени максимальной тромбоцитопении и роста свертывающей активности крови, позволило предположить, что никоти новая кислота вызывает разрушение тромбоцитов, обусловливая выход в кровоток тромбокиназы. Тот факт, что ниацин in vitro не возмещает дефицита протромбина или тромбоцитов [Л.А.Черкес, Л.А.Шекун, 1947], казалось бы, подтвердил это предположение. Однако ему противоречит то, что после введения ниацина концентрация тромбоцитов в периферической крови обусловливается их перераспределением - ростом концентрации тромбоцитов в сосудах полостных органов [М.С.Климова, 1947; Р.Д.Ту-рова, 1947].
Спустя 10 лет было показано, что через 1 ч после внутривенного введения ниацина в дозах 1, 10 и 100 мг на особь не только сокращается время свертывания цельной крови, но и растет толерантность плазмы к гепарину, снижается уровень свободного гепарина и антитромбопластическая активность (активность ингибитора пути тканевого фактора?). Эти изменения возникали, видимо, нервно-рефлекторным путем, так как в условиях наркоза введение никотиновой кислоты не изменяло перечисленных показателей [Г.В.Аветисьян и др. 1963].
То же наблюдали и в опытах, исключавших за счет предварительной нейтрализации способность никотиновой кислоты изменять рН крови при её внутривенном введении [S.Sen & S.Sen, 1956]. После парентерального введения никотиновой кислоты в дозах 100 мг и более у здоровых людей также наблюдается кратковременное укорочение времени свертывания крови. При инъекции малых доз ниацина (0,16 мг/кг) через 10-20 мин снижается уровень ф. II (на 25-50%), и это сохраняется в течение 40-50 мин [В.И. Юдицкая, 1957].
Подтвержден противосвертывающий эффект никотиновой кислоты и клиницистами - усиливается кровотечение и увеличивается его продолжительность при парентеральном введении никотиновой кислоты лицам с разнообразной патологией [P. Nicola, G.Frandoli, 1962], хотя по результатам определения времени рекальцификации и данным тромбоэластогра фического исследования у больной гипертонией время свертывания практически не изменялось [M.Weiner е.а., 1958].
У 28-летней женщины с ангиографически доказанным тромбозом одной из пазух головного мозга назначения ниацина, напротив, сопровождалось снижением свертываемости крови [A.Girolami е.а., 1981]. Изучая время свертывания рекальцифицированной плазмы у больных с атеросклерозом до и после однократного орального приема ниацина в дозах от 90 до 200 мг, нашли, что через 2-3 ч свертываемость крови заметно замедляется: при дозе 90, 120 или 200 мг выявлялось замедление против исходного значения в 1.5-2 раза, нормализация наступала через 3 ч. Автор сочла этот эффект позитивным, отмечая, что замедление свертывания крови уменьшает возможность тромбоза, к которому предрасположены лица с атеросклеротическими изменениями [И.Л.Герасимова, 1962а]. Снижалась у этих больных и толерантность к гепарину, а через 3 ч наблюдалось ещё и повышение уровня гепарина. Отмечалось у больных и просветляющее действие ниацина, связанное, по мнению автора, с повышенным гепаринообразованием.
Исследователи отметили также и то, что частота случаев с позитивным эффектом была прямо пропорциональна дозе ниацина, что антикоа-гулирующий эффект был нестойким, и его продолжительность не увеличивалась и после приема ниацина в течение двух недель. Наряду со снижением общей свертывающей активности крови наблюдались также признаки активации противосвертывающей системы: снижение толерантности к гепарину, рост уровня гепарина, активация липопротеинлипазы [И.Л.Герасимова, 19626, 1963; Samson S.L е.а., 2006].
Наблюдая за больными с силикозом выявили, что назначение никотиновой кислоты (100 мг 3 раза/день в течение 2-3 недель) снижает содержание фибриногена, повышает тромбопластическую активность, не изменяя толератности плазмы к гепарину [Г.А.Абрашитова, 1966]. В опытах на кроликах никотиновая кислота (0.3 мг/кг) умеренно усиливала свертываемость крови, удвоенная доза также вызывала умеренную гиперкоагуляцию тотчас после введения, сменяющуюся через 2 ч гипокоа-гулемией. В том же направлении действовал на перечисленные показатели и гепарин. Гипокоагулемия при совместном введении ниацина и гепарина была существеннее [Н.К.Казиева и др., 1963]. Показано, что вызываемые введением гепарина тромбоцитопения, усиленная агрегация тромбоцитов и снижение продукции простациклина эндотелием могут быть предотвращены инъекцией гепарина в комплексе с никотиновой кислотой (1.5 мг/кг) и дипиридамолом (2.5 мг/кг) [I.K.Tlepshukov, 1986].
Выявлено также, что при лечении пациентов с лучевым поражением вазодилататорами и ниацином, последний потенцирует способность вазо-дилататоров уменьшать функциональную активность тромбоцитов и активировать фибринолиз [S.I.Chekalinae.a., 1985]. У части лиц с наклонностью к тромбообразованию, обусловленной разными видами патологии, однократное внутримышечное введение ниацина (по 100 мг) вызывало укорочение времени свертывания крови на 50%. Максимум достигался через 1 ч, эффект сохранялся в течение 6 часов [G.Tudorani е.а., 1960].
У родильниц с пороками сердца при выраженной наклонности к тромбообразованию введение никотиновой кислоты вызывало снижение адгезивности, агрегации тромбоцитов и толерантности фибринового сгустка к плазмину, сопровождающееся активацией фибринолиза [З.А.Эри-стави, 1968].
. Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, фибринолиз, толерантность к тромбину, состояние ЛПО при содержании крыс на сбалансированном рационе без ниацина и с его избытком
Сформированы следующие подопытные группы: 1 контрольная и 5 подопытных с примерно одинаковой массой тела (169±8,5 г). Контрольная группа (контроль) получала рацион с НЦ в количестве, равном суточной потребности (0.25 мг/кг). Крысы одной из подопытных групп ниацин не получали (В3-авитамин-ная группа), крысы остальных групп получали рацион, содержащий ниацин в количестве, превышающем суточную потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (0.5, 1.0, 2.0 и 4.0 мг/кг массы тела соответственно). В группу включали по 25 особей, число наблюдений на этапах опытов (п) приводится в таблицах. Кровь в контроле брали на 1-й и 15-й дни опыта, усреднив несущественно отличающиеся данные. В подопытных группах пробы брали через 1, 2, 5 и 15 дней от начала опыта. В пробах определяли все намеченные к оценке показатели, исключая толерантность к тромбину (ТкТР), для определения которой из каждой группы брали по 5 крыс. В табл. 2 приведены все полученные в эксперименте результаты. Здесь видно, что в отсутствии ниацина в рационе в течение 1, 2, и 5 суток изменения в гемостазе не обнаруживаются, а через 15 суток выявляются признаки ускоренного взаимодействия тромбин-фибриноген (рост уровня всех маркеров этого процесса, сопровождаемый снижением уровня фибриногена). К этому же сроку обнаружены признаки ускорения процессов липидперокси-дации (рост уровня ДК и ТБК) и признай угнетения антиоксидантного потенциала в тромбоцитаз ( укорочение ПИ и повышение СО).
Видимо, отсутствие ниацина в рационе, сбалансированном по макро- и микронутриентам, к концу 2-й недели приводит к ускорению НВСК, что проявляется увеличением плазменного уровня его маркеров. Выявляется это на фоне ускорения ЛПО, снижения АОП и замедлении фибринолиза. Таблица 2. Коагулоактивность ТЦ, плазменный уровень маркеров ВТФ, ф.ХНа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП тромбоцитов у крыс, не получавших ниацина (В5-авитаминная группа) и получавших его в количествах, превышающих суточную потребность (1-я строка - 1-й, 2-я - 2-й, 3-я - 5-й, 4-я - 15-й день от начала опытов). Показатели Контроль,-НК 0. 25 мг/кг Крысы (n = 5 в каждой группе) п = 10 получали НК (мг/кг массы тела) из расчета: Об означения: ПЦ Ф - продукты деградации с эибрина, РКМс э-растворимь іе комплексы мс мерного фибрина, D-Д - D-димеры, ДК - диеновые конъюгаты, ЛП - липид, ТБК - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ - период индукции, СО - скорость окисления; знак - достоверное отличие от соответствующего срока во 2-й колонке, знак + - то же относительно 3-й колонки Введение НК в дозе 0.5 мг/кг исключило сдвиги, возникающие при его отсутствии в рационе. Это относится ко всем определявшимся показателям, что позволяет связывать изменения, возникшие у крыс, получавших В5- ави-таминный рацион, с отсутствием ниацина в питании. Введение ниацина в количестве 1.0 мг/кг вызвало к концу наблюдений (15-й день) рост уровня всех без исключения маркеров ВТФ, причем тенденция, не подтверждаемая статистически, обнаруживалась уже на 5-й день опытов. К этому же сроку снизился уровень в тромбоцитах липидпероксидов (ДК и ТБК), снизилась скорость окисления (СО) и удлинился период индукции (ПИ), т.е. наблюдались признаки замедления липидпероксидации и роста антиоксидантного потенциала (АОП). Как и в уровне маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ), тенденция к изменению липидпероксидации и антиоксидантного потенциала выявлялась уже на 5-й день содержания животных на экспериментальных рационах.
При количестве ниацина в рационе, равном 2.0 мг/кг, изменения в целом сходны с теми, которые наблюдали при меньшем его содержании, однако они были заметнее и появлялись раньше: статистически значимые отклонения найдены уже на 2-й день эксперимента (при количестве ниацина, равном 1.0 мг/кг, они выявлялись на 5-й день).
Следует отметить, что общая коагуляционная активность тромбоцитов (ОКАТ) к 5-му дню и особенно к 15-му дню опытов снизилась, что, видимо, является следствием истощения кровяных пластинок - чрезмерного выброса фф. Р3 и Р4. В те же сроки выявилось снижение интенсивности ЛПО и некоторое увеличение АОП.
При введении ниацина в количестве 4.0 мг/кг изменения той же направленности выявляются, однако, в более ранние сроки и выражены они значительнее. Отдельно о фибринолизе: при отсутствии НК в рационе лизис фибрино-вого сгустка в эйглобулиновой фракции плазмы замедляется, нормализуясь при введении НК в количестве 0.5 мг/кг. При дальнейшем увеличении содержания ниацина в рационе фибринолиз ускоряется пропорционально приросту количества НК, и это обнаруживается во все сроки наблюдений.
Уровень маркеров ВТФ, коагулоактивность тромбоцитов, состояние ЛПО и АОП в них, фибринолиз и толерантность к тромбину, при содержании крыс на сбалансированном рационе, включающем атерогенные компоненты без никотиновой кислоты и с её избытком
Атерогенный рацион не изменяет существенно характера сдвигов со стороны гемокоагуляционного и тромбоцитарного компонентов гемостаза, вызываемых отсутствием витамина В5 в питании, но усиливает гиперхолесте-ролемический эффект рациона. При введении в составе рациона НК в количестве, двукратно превышающем потребность крыс в нем, отклонений от контроля не наблюдается, как это было найдено и в предыдущей серии экспериментов (табл. 2). Однако отличия имеются при введении НК на фоне атерогенного рациона: - на 30-й и 60-й дни наблюдений высвобождающая способность тромбоцитов при атерогенном питании становится выше контрольной (растет уровень фф. Р3 и Р4 в плазме), выше контрольной оказывается и общая коагуля-ционная активность тромбоцитов (ОКАТ); - увеличивается интенсивность ВТФ, о чем свидетельствует рост уровня маркеров этого процесса с 30 дня наблюдений; - активность фибринолиза в условиях атерогенного питания, хотя и замедляется, но в меньшей мере, чем при питании без атерогенных компонентов; - несколько ослабляется прирост скорости ЛПО и степень угнетения АОП, вызывающиеся В5-авитаминным рационом; - степень прироста холестеролемии не изменяется. Следовательно, на эффектах, вызываемых введением никотиновой кислоты в системе гемостаза, сказываются изменения в обмене холестерола, хотя исследуемая доза НК на степень холестеролемии не повлияла в пределах изученных сроков. При введении в составе рациона НК в четырехкратном против суточной потребности количестве, ещё заметнее ускорилось высвобождение фф. Р3, Р4, ОКАТ, и повысилась интенсивность ВТФ (отметим, что степень прироста совсем невелика, однако касается всех исследованных маркеров ВТФ, что свидетельствует о несомненном наличии этой тенденции). Отметим, что все это заметнее происходило на фоне атерогенного рациона питания. Кроме того, существенно активировался фибринолиз, особенно на фоне атерогенного питания. Видимых изменений в интенсивности ЛПО и величине АОП никотиновая кислота в этом количестве не вызывала. Уровень холестеролемии был несколько ниже только к концу наблюдений.
При введении в составе рациона НК в восьмикратном против суточной потребности избытке все описанные выше сдвиги усилились, особенно активность тромбоцитов, уровень D-димеров и фибринолиз. Холестеринемия оставалась такой же, как и при 4-кратном избытке НК.
При введении НК в шестнадцатикратном против суточной потребности избытке изменения уровня фф. Р3, Р4 и ОКАТ остались на прежнем уровне как при обычном, так и атерогенном рационе. То же относится и к содержанию маркеров ВТФ. Замедлился фибринолиз, особенно на фоне атерогенного рациона. Вместе с тем, появились признаки ослабления ЛПО (уровни ДК и ТБК в тромбоцитах уменьшились против величин, найденных при восьмикратной дозе НК), снизился АОП тромбоцитов (сократился период индукции и увеличилась СО). Уровень холестерола в крови оставался таким же, как и при меньших дозах НК. Более детальный анализ связей холестеролемия-гемостаз-нагрузки никотиновой кислотой будет проведен при обсуждении всей совокупности результатов в разделе «Обсуждение...». На данном этапе исследований можно отметить лишь, что на фоне атерогенного питания эффекты НК на липидпероксидацию и на гемостаз неодинаковы, а также то, что с увеличением количества НК в рационе (обычном и атерогенном) отсутствует прямая зависимость между дозой витамина и эффектами на гемостаз, липидпероксидацию и антиоксидантный потенциал.
Изменения ТкТР представлены в табл. 5. Они указывают на то, что от сутствие НК в рационе снижает толерантность к тромбину уже на 5-й и особенно на 15-й дни. На фоне атерогенного рациона этот эффект более заметен. Толерантность к тромбину у крыс, получавших НК (на фоне атерогенного и обычного рациона) в дозе, равной суточной потребности, у не получавших НК, и получавших её в количествах, превышающих потребность в 2, 4, 8 и 16 раз (1-я строка - 1, 2-я - 2, 3-я - 5 и 4-я 15 дней). Курсивом на сером фоне выделены резуль таты, полученные при атерогенном питании Обозначения: - достоверное отличие от контроля, + - от В5-авитаминных крыс
Введение двукратного количества ниацина вызывает наклонность к увеличению ТкТР, выявляемую через 1, 5 и 15 суток. На фоне атерогенного рациона, который приводит к снижению ТкТР, выявляется способность ниацина в этой дозе ограничивать угнетение ТкТР к 15-му дню наблюдений. Ещё заметнее ускоряет фибринолиз введение 4-. 8- и 16-кратной доз НК. Так же как 2-кратная доза, в этих количествах НК заметнее активирует фибринолиз на фоне атерогенных добавок. Влияние прооксиданта свинца на эффекты, вызываемые у крыс отсутствием НК и её избытком (коагулоактивность ТЦ, плазменный уровень маркеров ВТФ, ф.ХПа-зависимый фибринолиз, ЛПО и АОП тромбоцитов, толерантность к тромбину)
Как следует из данных раздела 4.1., наиболее заметные сдвиги основной массы изучавшихся величин происходили при введении в рацион НК в количествах, равных 2.0 и 4.0 мг/кг массы тела животных, и у крыс, не получавших НК (табл. 2). Так как изменения уровня маркеров ВТФ плохо согласовываются с изменениями скорости ЛПО и величин АОП, мы провели эксперименты с введением НК в этих количествах (0.0, 2.0 и 4.0 мг/кг) на фоне прооксиданта. При некоторых экспериментальных и клинических ситуациях выявляется прямая зависимость между интенсивностью ЛПО в тромбоцитах и содержанием маркеров ВТФ в плазме крови, наряду с обратной зависимо стью между АОП и содержанием плазменных маркеров ВТФ [С.Л. Галян и др., 2002; Р.Г.Алборов , 2004; А.Ш.Бышевский и др., 2006а; А.В.Пустынников и др., 2007а]. В наших опытах такая зависимость не была достаточно выраженной. В связи с этим нельзя говорить по результатам наших наблюдений о том, что активация тромбоцитов у крыс, инициирующая ускорение ВТФ, является следствием ускорения ЛПО и снижения АОП, хотя и нельзя исключить такой возможности, так как НК обладает (хотя и слабо выраженной) ан-тиоксидантной активностью. Можно, однако, уточнить, существует ли связь между интенсивностью ЛПО и величинами АОП с одной стороны и сдвигами коагулоактивности тромбоцитов, уровнем маркеров ВТФ и другими определявшимися нами величинами - с другой. С этой целью мы модифицировали эксперимент, описанный в разделе 4.1. Так как в случае, когда какой-либо эффект связан с антиоксидантными или прооксидантными свойствами испытуемого вещества, он будет ослабляться или усиливаться одновременным введением прооксиданта [М.К.Умутбаева, 2005; Э.В.Багумян и др., 2007; А.В.Шидин и др., 2007; R.G. Alborov, 2004].
