Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Никотинамидные коферменты, их биологическая роль и обмен 9
ГЛАВА 2. Токсиколого-биохимическая характеристика кельтана и фосфамида 30
2.1. Кельтан 30
2.2. Фосфамид 36
ГЛАВА 3. Материалы и методы исследования 40
ГЛАВА 4. Влияние однократного введения кельтана и фосфамида и их смеси на содержание нико -тинамидных коферментов в тканях белых крыс 43
4.1. Содержание NAD + и NA0H в тканях и крови при воздействии кельтана .. 43
4.2. Содержание f/AD + жМпОН в тканях и крови крыс при воздействии фосфамида 49
4.3. Содержание в крови и тканях при однократном введении смеси кельтан+фосфамид... 56
ГЛАВА 5. Влияние длительного введения кельтана, фосфамида и их смеси на содержание никотинамидных коферментов в тканях и крови белых крыс . 62
ГЛАВА 6. Влияние кельтана, фосфамида и их смеси на уровень 7 -метилникотинамида в моче 67
ГЛАВА 7. Активность в печени и крови крыс в условиях длительного поступления кельтана, фосфамида и их смеси 74
ГЛАВА 8. Влияние длительного поступления кельтана, фосфамида и их смеси на лактатдегидрогеназную активность тканей 77
ГЛАВА 9. Изменение уровня ппи + в крови и -метилникотинамида в моче людей, контактировавших со смесью хлор- и фосфорорганических пестицидов 83
Заключение 88
Выводы 101
Литература ЮЗ
- Кельтан
- Содержание NAD + и NA0H в тканях и крови при воздействии кельтана
- Влияние кельтана, фосфамида и их смеси на уровень 7 -метилникотинамида в моче
- Влияние длительного поступления кельтана, фосфамида и их смеси на лактатдегидрогеназную активность тканей
Введение к работе
Актуальность проблемы. Многолетнее широкое применение химических средств защиты растений создало реальные условия для проникновения в организм человека и животных ряда, пестицидов, которые, благодаря своим токсикологическим особенностям (токсичность, способность к кумуляции в организме и накоплению в окружающей среде, политропность действия и др.), представляют опасность для здоровья человека. Для понимания генеза патологических процессов, возникающих под влиянием пестицидов и создания на этой основе рациональной профилактики и терапии, важно знать механизмы, определяющие их токсическое действие на организм теплокровных.
В сельском хозяйстве страны, в частности ГССР, в настоящее время наиболее широко применяются хлорорганический пестицид - кельтан, фосфорорганический - фосфамид и их смесь.
Несмотря на имеющиеся данные об инсектицидных и токсических свойствах кельтана, фосфамида и их смеси, метаболизме, клинике отравлений и изменениях функционального состояния некоторых органов и систем, сведения о биохимических механизмах их токсического действия весьма ограничены.
Согласно современным представлениям в проявлении токсического действия хлорорганических пестицидов, важную роль играют нарушения энергетического обмена (Б.И.Хайкина, У.А.Кузь-минская и др. 1970; А.В.Остроухова, Ф.А.Оникиенко, 1970; И.И.Павлова, 1970; С.М.Алехина, 1975). Было показано, что хлорорганические препараты ДЦТ, гексахлорциклогексан, поли-
хлоркамфен изменяют интенсивность окислительного фосфорилиро-вания, активность ряда окислительных ферментов и содержание в тканях нжотшамидаденидинуклеотидов. Известно, что система никотинамидных цуклетидов весьма четко реагирует во всех
случаях, когда посредством чужеродных субстанций затрачивается биоэнергетика клетки. Поэтому её используют в качестве адекватного текста, отражающего сдвиги в процессах биологической оксидоредукции под действием инсектицидов, гербицидов и других соединений.
Учитывая, что кельтан является хлоре од ержащим препаратом, можно цредположить, что в механизме его токсического действия важная роль будет принадлежать нарушениям окислительных процессов и в частности изменениям в системе никотинамидных коферментов. Что касается фосфорорганического препарата - фос-фамида, и особенно смеси препаратов (кельтан и фосфамид), то о механизме их действия данные весьма ограничены.
Цель работы и основные задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение состояния системы никотинамидных коферментов в условиях раздельного и комбинированного воздействия на организм хлор- и фосфорорганических пестицидов кельтана и фосфамида.
Исходя из актуальности проблемы и степени её изученности, были определены следующие основные задачи исследования:
Изучить влияние кельтана, фосфамида и их смеси на содержание NAD eHADH в печени, сердце и крови белых крыс.
Выяснить влияние указанных препаратов на интенсивность экскреции с мочой основного конечного метаболита//ЛО -
- tf'-МНАм.
Исследовать М-гликогидролазную активность печени и крови животных в условиях действия пестицидов.
Изучить НЛО -зависимую лактатдегидрогеназную активность печени и сыворотки крови животных в условиях введения пестицидов,
Провести исследование уровня nnD в крови и ^ -ШАм в моче людей, имевших производственный контакт со смесями хлор- и фосфорорганических пестицидов.
Основные положения, выносящиеся на официальную защиту:
Пестициды (кельтан и фосфамид) как при раздельном, так и комбинированном введении оказывают влияние на состояние системы никотинамидных коферментов в тканях теплокровных.
Изменения лактатдегидрогеназной активности тканей, обнаруженные при введении исследованных пестицидов, связаны с прямым их воздействием на уровень M4D в тканях,
Определение содержания HAD в крови и // -МНАм в моче может быть использовано для оценки состояния окислительных процессов в организме людей, имеющих контакт с пестицидами.
Научная новизна. Изучены некоторые стороны биохимического механизма токсического действия кельтана, фосфамида и их смеси. Выявлены особенности влияния кельтана, фосфамида и их смеси на содержание окисленной и восстановленной форм нико-тинамидадениндинуклеотида в различных тканях экспериментальных животных и характер экскреции с мочой основного его метаболита - Лг -МЕАм, Установлена зависимость выявленных сдви-
гов от дозы и длительности введения препаратов, а также их биологическая значимость.
Показана возможность использования определения содержания NAD в крови и Н -МНАм в моче для оценки состояния здоровья работающих с пестицидами.
Научно-практическая значимость работы. Установленные как общие, так- и специфические для каждого препарата (кельтан, ^фосфамид, их смесь) особенности влияния на систему- никотин-амидного кофермента МЛО расширяют представления о биохимическом механизме токсического действия, на организм теплокровных хлор-, фосфорорганических пестицидов и их смеси.
На основании, полученных результатов разработаны методические рекомендации ийспользование определения содержания ни-котинамидадениндинуклеотида в крови и М -метилникотинамида в моче для оценки состояния окислительно-восстановительных процессов в организме работающих с пестицидами" (утверждены Министерством здравоохранения Грузинской ССР от 21 сентября 1983 года, г.Тбилиси),.
Результаты проведенных исследований включены в материалы по пересмотру ЦЦК кедьтана в воздухе рабочей зоны. В настоящее время материалы находятся на стадии утверждения в Министерстве здравоохранения СССР.
Работа входит в план программы СЮ. «Программа развития научных исследований и ускорения внедрения достижений медицинской науки в отрасли агропромышленного комплекса на период до 1990 г."
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и об-
суждены на итоговых научных конференциях Института гигиены труда и профзаболеваний МЗ ГССР (г.Тбилиси) - 1980, 1981, 1982, 1983 гг.; конференции молодых ученых НИИ гигиены труда и профзаболеваний МЗ УССР (г.Киев) - 1982 г.; конференции молодых ученых ВНИИ гигиены и токсикологии, пестицидов, полимеров и пластических масс, Ш СССР (г.Киев) - 1983 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 статей.
. Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, раздела «Материалы, методы", 9 глав экспериментального материала, списка литературы, включающего 190 источников (отечественных - III, зарубежных - 79). Материал диссертации изложен на 127 стр. машинописного текста, содержит 14 таблиц и 5 рисунков.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Кельтан
Изучение внутриклеточного распределения НАм-коферментов в тканях печени, почек, головного мозга и селезенки показало их наличие почти во всех структурных компонентах клетки /119, 138, 167/. Преобладающая часть НАм-коферментов главным образом в виде окисленных форм сосредоточена в растворимой фракции клеток печени крыс. Это и понятно, так как именно в ней локализованы анаэробный гликолиз, пентозный цикл и связанные с ними дегидрогеназные активности. В микросомах и ядрах содержание никотинамидных нуклеотидов невелико, что, вероятно, обусловлено наличием в них высокоактивной , -азы. В митохондриях локализован трикарбоновый цикл, цепь переносчиков электронов. В этих процессах субстраты дегидрогенизируются, водород и электроны переносятся к кислороду, происходит сопряжение фосфорилирования с окислением. Митохондрии, как органеллы, в которых перекрещиваются многочисленные метаболические циклы, протекающие при участии коферментных форм НК, играют важную роль в регуляции и интеграции обменных процессов.
Первым акцептором электронов в митохондриях обычно слу жит МО и только при дегидрировании изолимонной кислоты пер вым акцептором является ШОР \ Митохондриальный НАОР соста вляет лишь ничтожную долю общего его количества, содержащего ся в клетке /47/. В митохондриях содержится около.36$ всего клеточного и лишь 13$ всего клеточного MADP, а по дан ным Якобсона, и Каплана /153/ - всего 5$. Содержание в митохон дриях превалирует над Шип по-видимому-, вследствие более быстрого окисления последнего цитохромоксидазой /52/. Однако митохондрии печени голубя /6/ содержат намного больше окислен ных коферментов, чем восстановленных, что, возможно, объясня ется крайне незначительной №0 -азной активностью в печени голубя. По-видимому, митохондрии различного типа цри доволь но постоянной концентрации суммы отличаются по содержанию суммы ММ)Р\Н№РН /161, 165/. Наиболее богаты НАм-коферментами митохондрии сердца и менее - митохондрии пе чени. В митохондриях почек и мозга крайне незначительная часть Щ)+ находится в восстановленной форме, тогда как /JfiUP содержится почти полностью в виде HAQrH Всё изложенное свидетельствует о чрезвычайно важной роли никотинамидных коферментов как биоактивных производных НК во внутриклеточных процессах биологической оксидоредукции, энергетического и пластического обмена. Для нормального течения этих процессов существенна стационарность концентрации нико-тинамидных коферментов в тканях животных, которая, в свою очередь, достигается постоянным равновесием между процессами синтеза и распада их /18, 122, 141, 157, 168/.
Существует несколько путей биосинтеза yV/ID +. У человека, животных и грибов возможен эндогенный синтез пиридиновых соединений из триптофана, у высших растений, водорослей и некоторых бактерий пиридиновые соединения образуются из аспарагино-вой кислоты, глицерина или родственных им соединений. Поэтому в зависимости от природы предшественников существуют и различные пути синтеза коферментов в клетке /98/.
Исследование путей биосинтеза никотинамидных коферментов в клетках началось с изучения возможности использования для этого НАм, поскольку он содержится в молекулах никотинамидных коферментов. В физиологических условиях в клетках животных подтвердилась возможность прямого использования НАм в биосинтезе /VAD+ посредством промежуточного образования /vAW /72, 73, 74/, хотя неизвестно, является этот путь по своей значимости основным или же «запасным", реализующимся при истощении возможностей клетки образовывать кофермент другими путями.
Вторым путем биосинтеза считают образование его из НК. В исследованиях Хэндлера была показана способность эритроцитов использовать Ж среды для образования №Р+ (173, 174, 175/.
В исследованиях ряда авторов /114, 132, 140, 152, 186/ показано, что недостаток Ж у млекопитающих, птиц, насекомых и микроорганизмов может быть компенсирован введением триптофана, Установлено, что синтез НЯО из триптофана протекает при промежуточном образовании НКШ, а не свободной НК. Это и объясняет роль триптофана как предшественника tiAD в условиях ограниченного поступления в организм животных Ж или НАм, У организмов, у которых отсутствует триптофанникотиновый путь, в последние годы установлена роль хинолиновой кислоты в биосинтезе №D . Образующаяся из глицерина и аспарагиновой кислоты хинолиновая кислота включается в цепь реакций, ведущих к синтезу МЛ через промежуточное образование /144/.
Согласно современным представлениям /126/, в печени синтез кофермента осуществляется тремя указанными путями. Из трифтофана в ней образуется хинолиновая кислота, которая, реагируя с 5-фосфорибозил-І-пирофосфатом {PRPP), превращается в никотинатмононуклеотид (НКМН). Последний синтезируется и из поступивших в печень НК или НАм. Однако НАм до образования НКШ подвергается воздействию специфической дезамидазы, превращающей его в НК. Помимо этого в печени происходит и прямое использование НАм. При этом конечному синтезу №D предшествует образование
Наличие в тканях ряда.путей биосинтеза NAQ обеспечивается большим количеством специфических ферментов. Это свидетельствует о том, что процесс биосинтеза l)/AD в клетке является в целом результатом функционирования полиферментной системы.
Содержание //$/ и MftDP в тканях строго коррелировало с концентрацией дегидрогеназ, для которых они являются кофер-ментами. Подобная корреляция количественно неоднозначна в различных тканях и зависит от функционального состояния организма. Поэтому для поддержания динамического постоянства внутриклеточной концентрации коферментов требуются определенные механизмы регуляции /103, 120, 158/.
Данные относительно регуляторних механизмов, основанных на каталитических функциях НАм-дезамидазы и ОТ#/-пирофосфори-лазы, легли в основу заключения о двух типах регуляции биосинтеза НЛЬ + из НАм - внутриклеточной и межклеточной /120/. Первая, возможно, осуществляется #№-пирофосфорилазой, активность которой регулируется механизмом ретроингибирования конечным продуктом, вторая - с помощью гормональных воздействий на НАм-дезамидазную активность, действующих через систему ингибиторов.
Содержание NAD + и NA0H в тканях и крови при воздействии кельтана
Выпускается в формах 40 -ного концентрата эмульсии, а также гранулированного препарата (1,6% фосфамид + 1% гамма-изомера ГХЦГ на суперфосфате).
Применяется как системный акарицид и инсектицид против вредителей плодовых, цитрусовых культур и хлопчатника. Совместим с препаратами, не имеющими щелочной реакции. Фосфамид -высокотоксичное вещество (II гр.г.к.); ДЦзд для различных лабораторных животных равна 100-230 мг/кг. При аппликации на кожу ДД50 для крыс - 1120 мг/кг, для кроликов - 1000-1500 мг/кг /54, 123/.
Кумулятивные свойства выражены слабо /6І/ЦУ гр.г.к.) (Ккум. " 9 3) ЩЩ в воздухе рабочей зоны - 0,5 мг/м , в атмосферном воздухе: - максимальная разовая - 0,01, средне-суточная - 0,006 мг/м . ЩК в воде водоемов - 0,03 мг/л. Допустимые остаточные количества во фруктах и цитрусовых - 1,0 мг/кг. Плодовые культуры разрешается обрабатывать не менее чем за 30 дней до сбора урожая. Запрещается использовать на ягодниках /25, 68, 148, 171/. Фосфорорганический пестицид фосфамид, по данным ряда авторов /II, 28, 35, 38, 45, 51, 57, 70, 90, 91, 143, 160, 162/, нарушает функции сердечно-сосудистой и желудочно-кишечной систем, ферментативную активность крови и характеризуется эмб-риотоксическим действием. Важным звеном механизма токсического действия фосфамида является избирательное блокирование активности холинэстеразы, в результате чего происходит накопление ацетилхолина, приводящее к нарушению функции центральной и периферической нервной систем, возникновению сдвигов в других жизненно важных органах По данным Ш.Т.Атабаева и соавт. /10/, при остром отравлении фосфамидом происходит не только снижение холинэстеразной активности, но и уровня свободных аминокислот сыворотки крови. После введения крысам фосфамида в дозе 10 мг/кг в течение 7 дней уменьшается содержание гликогена только в печени на 5-й день исследования, наблюдаются морфологические изменения в селезенке и почках /34/. А.Е.Сумовской, Г.Ю.Объедковой /84/ приводятся данные о влиянии фосфамида на гинекологические заболевания у женщин, имевших контакт с ядохимикатами в процессе обработки садов. У работниц садоводческих бригад по сравнению с контрольной группой обнаружена более высокая частота воспалительных заболеваний половой сферы (25,8%) и функциональных нарушений (30,6$ против 13,3$). Гинекологические заболевания чаще встречались у женщин со стажем работы более 5 лет. Введение крысам фосфамида в дозе 10 мг/кг сопровождалось увеличением содержания сахара в крови с 96 мг% до 137 мг$, снижением активности холинэстеразы мозга, повышением активности в сыворотке крови ACT /154/. При введении кроликам ежедневно в течение 4 мес. по 11,5 мг/кг фосфамида в тканях внутренних органов всех подопытных животных обнаружено снижение содержания цитохрома С, активности цитохромоксидазы и коэффициента окислительного фосфорили-рования. Авторы считают, что при действии препарата происходит нарушение тканевого дыхания и окислительного фосфорили-рования /101/. И.К.Галымерзаевой, Р.А.Сабировой /29/ выявлено, что фосфамид в дозе 1/20 ЛД5д снижает дыхательный контроль сердечной мышцы на 26,9%, не влияя при этом на дыхательный контроль почек и коэффициент фосфорилирования (АЛР/0). Приведенные данные свидетельствуют о явном влиянии фосфа-мида не только на холинэстеразную активность, но и на состояние окислительных, энергетических процессов, обязательным компонентом.которых являются НАм-коферменты. Таким образом, представленные выше материалы свидетельствуют о достаточно широком спектре действия избранных для исследования пестицидов. Однако, как видно из обзора литературы, экспериментальные данные, направленные на выяснение биохимических основ механизма их токсического действия, разрознены, получены на разных экспериментальных моделях, что делает затруднительным их сопоставление и обобщение. Невыясненными остаются вопросы о влиянии отдельных препаратов и их смеси на - содержание в тканях основных коферментов энергетического обмена - никотинамидадениндинуклеотидов, причин изменения их уровня в тканях, биологической значимости наблюдаемых изменений содержания коферментов; зависимости возможных сдвигов от дозы препаратов и времени, прошедшего после введения, а также возможности использования определения уровня 0D в крови и ІЇ -МНАм в моче в качестве критерия воздействия препаратов на человека. Решению этих основных задач посвящена настоящая работа.
Влияние кельтана, фосфамида и их смеси на уровень 7 -метилникотинамида в моче
При однократном действии на организм крыс 1/2 ЛД д фосфа-мида (86 мг/кг) на I, 5 и 15 сутки нами также было выявлено снижение количества ІЇ -МНАм в моче на 57$, 48$ и 39$ (табл. 6.12).
Такая же закономерность сохраняется и при введении 1/20 ЛД50 (8,6 мг/кг) и 1/200 ЛД50 (0,86 мг/кг) фосфамида. Хотя процент снижения уровня экскретируемого ІЇ -МНАм меньше к 15 суткам после введения 1/200 ДЦ50» количество Н -МНАм в моче незначительно отличается от контрольных величин. Как видно-из табл.6.12, при введении 1/20 ДД50 фосфамида уровень // -МНАм в моче снижается на 46$, 41$ и 34$ через 5 и 15 суток,. при однократном введении 1/200 ЛД 0 процент снижения составляет 38$, 30$ и 18$ соответственно срокам исследований.
Таким образом, фосфамид, так же, как и кельтан при однократном введении вызывает снижение содержания И -МНАм в моче, котрое находится в прямой пропорциональной зависимости от дозы препарата и времени, прошедшего после введения. Однократное введение смеси кельтан-фосфамид в наших опытах оказывало противоположное действие на уровень // -МНАм в моче по сравнению с введением препаратов в отдельности, т.е. вызывало увеличение экскреции ы -УШм,
При однократном введении 1/2 ЛД50 смеси (247 мг/кг) количество А/ -МНАм в моче крыс уже через сутки повышается на 65$, через 5 суток - на 54$, и через 15 суток остается выше нормы на 36$ (табл.6.12). 1/20 и 1/200 ЛД50 смеси (24,7 мг/кг, 42,47 мг/кг) вызывают аналогичное действие, однако процент увеличения падает соответственно дозам. Через I, 5 и 15 суток после введения 1/20 ДЦзд смеси количество ft -МНАм в моче повышается на 54%, 44$ и 20$, при поступлении 1/200 ЛДзд смеси эти показатели остаются выше нормы на 50$, 30$ и 16$ соответственно срокам исследований (табл. 6.12). Увеличение экскреции Н -МНАм с мочой при однократном введении смеси препаратов в разных дозах, по всей вероятнос ти, является следствием усиления распада. У At? +, тем более, что общее содержание в печени в этих условиях заметно снижается. При длительном введении в течение 35 дней малой дозы 1/425 ДНзд (I мг/кг) кельтана количество N -метилникотинами-да экскретируемого с мочой, уменьшается на 61$ по сравнению с контролем (рис. 6.1), что скорее всего является результатом обеднения тканей, в частности, печени, никотинамидными ко-ферментами как субстратами для образования N -МНАм. длительное введение фосфамида в дозе I/I72 ДД50 (I мг/кг) в течение 35 дней также приводит к снижению количества N -МНАм в моче на 37$. При длительном введении препарата снижение уровня /J -МНАм значительно выраженнее, чем при однократном введении са- мой высокой дозы препарата. Принимая во внимание данные, представленные в главах 3 и 4, свидетельствующих о стойком снижении уровня в печени, можно полагать, что обнаруженное уменьшение экскреции N -ШАм является следствием подобного снижения. При длительном введении смеси препаратов в дозах, соответствующих ДОК, экскреция с мочой N -МНАм заметно повышается (на 27% по сравнению с контролем (рис.6.1). Это повышение, очевидно, обусловлено усилением расщепления tffiD+. Таким образом, экскреция с мочой N -МНАм, основного метаболита №0+ в организме теплокровных как при однократном, так и при длительном введении отдельных препаратов существенно снижается. Действие же смеси кельтан+фосфамид оказывает противоположный эффект. Проведя сравнительный анализ всех изложенных выше данных наших экспериментальных исследований, можно заключить, что поступление в организм крыс хлорорганического пестицида кель-тана и фосфорорганического пестицида фосфамида, несмотря на. их разную химическую природу, приводит к уменьшению уровня Х#0+ в тканях печени, сердца и крови при одновременнсм вели-чении содержания №№НЪ печени и сердце. Обнаруженное снижение уровня fflD+, вероятно, является результатом нарушения процесса окисления HAVH и усиления реакций восстановления NAV+f вследствие чего существенно изменяется соотношение между окисленными и восстановленными формами указанного кофер- мента. Можно полагать также, что снижение 0+ является результатом нарушения его биосинтеза, т.к. процессы распада в условиях эксперимента заторможены, о чем свидетельствует снижение уровня N -МйАм в моче. При однократном и длительном действии смеси препаратов пестицидов обнаруженное нами снижение как восстановленной, так и окисленной форм никотианмидно-го кофермента (исключая количество ЫЛиН в сердце при однокра.-тном ввеедении,, вероятно, является следствием усиленного их распада, судя по возрастанию в этих условиях экскреции У -МНАм. Содержание HfirV+ в крови отражает уменьшение его уровня в тканях при воздействии кельтана и фосфамида в отдельности, так и в смеси.
Влияние длительного поступления кельтана, фосфамида и их смеси на лактатдегидрогеназную активность тканей
Одним из известных представителей Nf D -зависимых ферментов считается лактатдегидрогеназа ( о( -лактат Л +-оксидоре-дуктаза, ЛДТ, 1,1.1.27), принадлежащая к классу окислительно-восстановительных ферментов и играющая ключевую роль в энергетическом обмене /40/. В анаэробном гликолизе ЛДТ катализи-; рует конечную стадию из последовательности реакций, приводящих к образованию лактата из глюкозы и обеспечивает перевод которая необходима для окисления глицеральде-гид-3-фосфата.
Молекула ЛдТ (молекулярная масса 35 кД) - сложный белок, небелковую часть которого представляет У\/# +. Активный центр ЛДТ содержит специфические участки, взаимодействующие с пури-новым и пиридиновым фрагментами молекулы //Д0+ /20, 24, 159/.
В настоящее время известны 5 изоферментов ЛДТ /53/, один из которых движется к аноду, другой - к катоду, а три остальных занимают промежуточные положения. Все пять изоферментов ЛДТ состоят из четырех субъединиц и имеют довольно близкие значения молекулярных масс. Субъединицы, составляющие изофер-менты ЛДТ, имеют различную первичную структуру, которая, в конечном счете и определяет различия их кинетических, иммуно-химических и иных свойств.
ЛДТ считается одним из наиболее распространенных в природе ферментов. Она находится во всех клетках животных и у большинства микроорганизмов и регулирует в системе концентрацию лактата, пирувата и соотношение окисленной и восстановленной форм MD/II4/.
В литературе имеются немногочисленные данные о влиянии ядохимикатов и лекарственных веществ на активность ЛДТ. Установлено, что после внутримышечного введения крысам пенициллина и стрептомицина по I 0000 ед. один раз в сутки, ЛДТ-актив-ность ткани почек и сыворотки крови изменяется. К примеру, после введения пенициллина ферментативная активность в почках не изменяется, достоверно снижаясь в сыворотке (9,2 + 0,5 мкг пирувата против 11,1 + 0,7 мкг). После введения стрептомицина ЛДГ-активность почек достоверно снижается до 9,7 + 0,7 мкг мирувата при контроле 13,8 + 1,1 мкг, повышаясь в сыворотке до 13,5 + 0,6 мкг против 11,1 + 0,7 мкг. /з/. Авторы работы предполагают, что такое явление можно объяснить гетерогенностью изучаемого фермента, наличием отличающихся друг от друга пяти его изоформ. Каждая ткань характеризуется определенным спектром изоферментов, которые специфично реагируют на воздействие одного и того же антибиотика
В экспериментах на кроликах обнаружено, что при действии большой дозы (30 мг/кг) новокаина наблюдается снижение общей ЛДТ-активности в сыворотке крови (286,3 + 11,3 мкмоль/мл/ч против контроля 344,6 +6,2 мкмоль/мл/ч), а при действии средней дозы (15 мг/кг) новокаина ЛДТ-активность составляет 322,4+14,2 мкмоль/мл/ч /79/.
В исследованиях /194,196/ обнаружено, что активность общей ..ДЦГ снижается в печени и сыворотке крови и при введении крысам хлорорганических пестицидов )j -ГХЦТ и полихлоркам-фена. В частности, после поступления -ИДТ в дозе 1/5 ДД5о (34 мг/кг) отмечается, резкое снижение активности общей ЛДТ на 63$ в сыворотке крови и на 26$ в печени по отношению к контролю, а при введении в малой дозе 1/100 ЛД50 (2,4 мг/кг) общая ферментативная активность ЛДТ сыворотки крови закономерно снижается на 44$, а в печени на. 21$ по отношению к контролю.
Авторы считают, что одной из причин подобного заметного снижения ферментативной активности при введении вышеуказанных пестицидов может быть нарушение энергетического обмена, в котором ключевую роль играет ЛДТ.
Пестициды ДЦТ, линдан и севин при введении крысам в дозе 1/5 дд вызывают различные по величине изменения активности общей ЛДТ сыворотки крови и её изоферментного спектра. Наиболее характерным и общим для действия перечисленных препаратов является увеличение содержания субъединиц М-типа. /4,95/.
В главах 4-7 мы уже упоминали, что введение кельтана, фосфамида и их смеси вызывает снижение уровняblffi жН№дН в тканях. Учитывая роль NAD в энергетическом обмене, в ката- литической активности ряда /уЛИ-завжстшх дегидрогеназ представлялось важным исследовать какую-либо ШО-зависимую ферментативную активность в условиях длительного поступления кельтана, фосфамида и их смеси. Поэтому наши экспериментальные исследования были проведены на примере ЛДТ, которая чувствительна к воздействию хлорорганических пестицидов.
У контрольных животных в наших экспериментах общая ДЦГ-активность печени составляет 485 мкмоль/г ткани, а в сыворотке - 109 мкмоль/мл крови (табл.8.3), что находится в соответствии с данными литературы /6, 59/.
При длительном ежедневном введении кельтана общая ЛДТ-ак-тивность печени резко снижается (на 61$) по сравнению с контролем. В тех же условиях общая ЛДТ-активность сыворотки остается в пределах контрольных величин (рис. 8.3).
При ежедневном длительном введении фосфамида ДЦГ-актив-ность печени снижается еще существеннее - на 68$, тогда как в сыворотке крови она продолжает оставаться в пределах контрольных величин.
