Введение к работе
Актуальность проблемы. В последние года Оолыное внимание уделяется изучению структуру индивидуальных кошоненентов сократительной система, выяснения механизмов их функционирования в процессе сокращения и принципов организации сократительного элемента. В 70-ых годах были открыты и выделены белки связывающиеся с тонкими и толстыми фйлшентами и белковые сомплекси регулирущие актомиозиновое взекиодейстше (тропонин, а-актинин, тррпошга-тропомиознговый комплекс и др.). С момента открытия а-актинина , минорного белка сократительной системы, были достигнуты значительные успехи в исследовании молекулярной организации миозина, актина, трогонина и др. Для а-актинина было установлено, что он состоит из двух идентичных субъедениц с закрытыми N-концаш с молекулярными массами около ІООкДа. а-актинин увеличивает СПП и АТФ-азу реконструированного актошозина, но непосредственно взаимодействует только с Ф-актином, связывая его поперечными мостиками. Предпологается, что субъеденицы а-актинина ориентированы антипаралельно и центр связывания с актином расположи в н-домэнв. Несмотря на значительные сведения о физико-химических- свойствах, фукции и структуры а-актинина, его роль при функционировании, актсшюзинового комплекса до конца не вияснена. В связи с этем нам представлялось цэлесоооразным провести подробное исследование структурной организации а-актиняна, а также изучить его взаимодействие о актином на уровне первичной структура.
Цель работы. Настоящая работа представляет собой часть комплексных исследований по выяснению струїстурной организации и кзханизма фупкционироввния минорного белка а-актиккна. Основной целью исследования Сто детальное ' изучение структуры и свойства а-тггкшша выделанного из поперечнополосатой кшши кролика для уточнения гипотетической ггоделя его молекулярной организация.В
процессе работы з наши задачи входило:I) изучение сеойств а-актинина модифицированного бифункциональными реагентами; 2) получение пептидов " нативного гидролиза модифицированного а-актинина-, 3) исследование взаимодействия и установление центров связывания а-актинина и актина.
Научная новизна и практические ценности работы. При помощи бифункционального реагента диметилсуберимидата получен внутримолекулярносвязанный а-актинин, изучены свойства модифицированного а-актинина, кинетика его ферментативного расщипления и продукты нативного трипсинолиза. Обнаружено, что бифункциональным реагентом поперечно связываются С-домены а-актишша, н-домен с С-концом С-домена и нет сшивок между N-концевыми доменами, которые обеспечивают связь мевду актином и а-актинином.Таким образом были полученные данные подтвервдащие молекулярную организацию а-актинина. Установили, что связывание бифункциональными реагентами вызывает конформационное изменение структуры белка, вследствии чего а-актинин теряет свойство связывания Ф-актиновых нитей.
Сопоставление способностей Ф-актина и Ф-актина полученного химической модификацией, взаимодействовать с а-актинином, свидетельствует о важной функциональной роли катионов в белок-Селковом взаимодействии. Полимер Ф-актина в отсутствии солей не взаимодестЕует с а-актинкном.
Путем выравнивания первичной структуры n-концєвого домена,
найдено, что в полипептидной цепи этого домена существуют схожие
участки 64-78 и 176-190. Мощность сходства которых составляла
4.48BD. - -
Проведенные в работе исследования расширяют и дополняют
представления о структуре и механизме функционирования минорного белка а-актинина. Экспериментальные материалы, сочетание современных методов исследования ж подходы к . решению поставленных зацачь могут представлять интерес при изучении многокомпонентных биологических систем и исспользоваться при выяснешш регуляции биологической подвикности.
Апробация работы.Основные результаты работы были доложены на следущях конференциях и симпозиумах: Международном симпозиуме "Молекулярная организация биологических структрур" (Москва, 1у89), 6-ой всесоюзной конференции по биохимии мышц (Тбилиси, 1989), Всесоюзном симпозиуме "Химия белков" (Тбилиси, 1990).
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора літератури, изложения результатов и их обсуждения, вывода и списка литературы. Диссертационная работа изложена на страницах, включая 2 таблицы, 3 схемы и 21 рисунка.
