Введение к работе
Актуальность проблемы. Важным направлением биофизики и
биохимии является изучение мышечного сокращения. Центральная
роль в регуляции мышечного сокращения принадлежит саркоплаа-
матическому ретикулуму ( СР ) скелетных мышц, который регули
рует концентрацию внутриклеточного Са2+. Выход Са2+ иэ внут
реннего пространства СР в саркоплазму обеспечивает система
освобождения Са2+, которая расположена в терминальных цистер
нах СР ( ТЦСР ). -
К настоящэму времени остается невыясненной роль отдельных белков СР в регуляции функционирования системы освобождения Са2+ ТЦСР. Известно, что в ТЦСР локализован кальсеквест-рин ( м. в. 42 435 Д ), примембранный белок внутреннего ком-партмента ТЦСР ( Hoffman, 1989 ). ffii основании экспериментальных данных постулируется роль кальсеквестрина в регуляции системы освобождения Са2+ ТЦСР( Ikeraoto, 1989 ). В этой связи вопрос изучения кальсеквестрина и его роли в функционировании системы освобождения СаЯ+ ТЦСР скелетных мышц является актуальным.
Цель и вадачи исследования. Целью данной работы являлось сравнительное изучение активности систем освобождения CaS-t-ТЦСР как содершиэя кальсеквестрин во внутреннем компартменте-веаикул , так и лишенной кальсеквестрина. Исходя из цели работы были поставлены следующие задачи:
1 - изучить способность различных детергентов и пептида ала-
ыетицина селективно солюбидиаировать кальсеквестрин из веаикул ТЦСР;
2 - разработать методику получения замкнутых везикул ТЦСР,
очищенных от кальсеквестрина;
3 - определить остаточные количества кальсеквестрина в мемб-
ранах ТЦСР после процедуры очистки;
4 - исследовать влияние олигомеров Са2+-АТРааы на проницае-
мость веаикул ТЦСР; 6 - сравнить активность Са2-»-каналов везикул ТЦСР содержащих
и не содержащих кальсеквестрин под действием различных
активаторов системы освобождения Са2+. Научная новизна^ Разработана методика очистки мембран ТЦСР от кальсеквестрина с исполвеованием аламетицина и детергентов.
' - я -
Впервые было продемонстрировано, что каналоформирующий антибиотик аламетицин при определенных концентрациях приводит к высвобождению кальсеквестрина из внутреннего компартмента мембран ТЦСР. Освобождение кальсеквестрина с использованием аламетицина практически не влияет на функциональную активность системы освобождения Са2+ ТЦСР.
Обнаружена способность углеводородов блокировать каналы утечки Са2+, сформированные олигомерами Са2+-АТРазы в плоскости мембраны.
Практическая ценность. Результаты проведенных исследований дают новые представления о регуляции активности Са2+-ка-налов ТЦСР. Блокирующее действие углеводородов на каналы пассивной утечки Са2+ может быть применено в клинической практике для усиления барьерной функции биологических мембран, излученные данные могут быть с успехом использованы для разработки методов трансмембранного переноса нивкомолекулярных белков и других молекул.
Апробация работы. Результаты работы были представлены на VI Всесоюзной конференции по биохимии мышц ( Тбилиси, 1989 ), на семинаре лаборатории мембрапологии и заседании ученого совета НИИ физиологии Киевского госуниверситета.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 2 работы.
Структура диссертации. Диссертационняя работа состоит из введения и пяти глав, включающих обзор литературы, описание материалов и методов, изложение результатов и их обсувдеиие, а также выводов и списка цитированной литература Диссертация наложена на 102 страницах, содержит 17 рисунков и 3 таблицы.
