Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Этиология и патогенез плацентарной недостаточности 12
1.2. Гормоны фетоплацентарного комплекса в регуляции развития плода при физиологической беременности 16
1.3. Гормоны фетоплацентарного комплекса в регуляции развития плода при патологической беременности 23
1.4. Ферменты фетоплацентарного комплекса при физиологической и патологической беременности 27
1.5. Пептидгидролазы плаценты 32
1.5.1. Основные карбоксипептидазы 32
1.5.1.1. Карбоксипептидаза Н 32
1.5.1.2. Карбоксипептидаза М 34
1.5.1.3. ФМСФ-ингибируемая карбоксипептидаза 36
1.5.2. Ангиотензинпревращающий фермент 38
1.5.3. Лейцинаминопептидаза 40
1.5.4. Лизосомальные протеолитические ферменты 41
1.5.4.1. Катепсин В 42
1.5.4.2. КатепсинЭ 44
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 45
2.1. Материалы исследования 45
2.1.1. Клинические группы 45
2.2. Методы исследования 54
2.2.1. Методы определения активности основных карбоксипептидаз .54
2.2.2. Метод определения активности АПФ 56
2.2.3. Метод определения активности катепсина D 56
2.2.4. Метод определения активности лейцинаминопептидазы 57
2.2.5. Метод определения активности катепсина В 58
2.2.6. Статистическая обработка результатов исследования 58
ГЛАВА 3. Результаты исследования 59
3.1. Исследование активности пептид-гидролаз в плацентарной ткани в норме и при патологии 59
3.1.1. Активность ферментов обмена регуляторных пептидов - КПН, ФМСФ-КП, КПМ, ЛАП, АПФ - в плацентарной ткани в норме и при патологии 59
3.1.2. Активность лизосомальных пептид-гидролаз - катепсина D и В — в плацентарной ткани в норме и при патологии 66
3.2. Корреляционные взаимосвязи активности пептид-гидролаз в плацентарной ткани с клинико-лабораторными показателями новорожденных и их матерей и макроморфометрическими параметрами плаценты 77
3.2.1. Корреляционные взаимосвязи между активностью пептид-гидролаз в плаценте и клинико-лабораторными показателями новорожденных 77
3.2.2. Корреляционные взаимосвязи между активностью пептид-гидролаз и макроморфометрическими показателями плаценты 82
3.2.3. Корреляционные взаимосвязи между активностью пептид-гидролаз плаценты и клинико-лабораторными показателями матерей 84
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 90
Выводы 113
Литература 115
- Гормоны фетоплацентарного комплекса в регуляции развития плода при физиологической беременности
- Ангиотензинпревращающий фермент
- Методы определения активности основных карбоксипептидаз
- Активность ферментов обмена регуляторных пептидов - КПН, ФМСФ-КП, КПМ, ЛАП, АПФ - в плацентарной ткани в норме и при патологии
Введение к работе
Ведущая роль плаценты в физиолого-биохимических процессах сложной биологической системы мать-плацента-плод показана в многочисленных исследованиях последних лет. Ее участие в интеграции большинства обменных процессов между организмами матери и плода обусловливает интерес исследователей к физиологии и патологии этого органа. Доля патологии плаценты, включая ее недостаточность, составляет в структуре причин детской смертности более 20%. Многолетние наблюдения отечественных и зарубежных исследователей за развитием детей, рожденных от матерей с диагностированной плацентарной недостаточностью (ПН), показали, что данная патология обусловливает многочисленные изменения в организме ребенка, которые на протяжении первых лет жизни являются причиной нарушений его физического и умственного развития, а также повышенной соматической и инфекционной заболеваемости. Следовательно, решение вопросов, связанных с ПН, является актуальным в акушерской практике и имеет важное социальное значение для рождения будущих здоровых поколений [5, 10, 55, 56, 57, 64, 65, 66, 74, 75, 275].
ПН - клинический синдром, характеризующийся структурными и функциональными изменениями в плаценте и проявляющийся задержкой внутриутробного развития и гипоксией плода. Данный синдром является результатом сложной реакции плода и плаценты на различные патологические состояния материнского организма (гестозы, анемии беременных, экстрагенитальные заболевания и др) [3, 5, 10, 81].
Природа синдрома ПН до конца не изучена. Под воздействием патологических факторов происходит активация функций плаценты, повышение в ней уровня компенсаторно-приспособительных и метаболических процессов. Однако, при длительном или повторном воздействии повреждающих факторов происходят чрезмерная активация деятельности плаценты и напряжение всех имеющихся компенсаторных
8 механизмов, которое в последующем сменяется стадией угнетения, дезорганизации основных функций и развитием необратимых деструктивных процессов в плаценте. В связи с этим ПН следует рассматривать с учетом двух процессов: деструктивных и компенсаторных, степень сохранности которых и определяет дальнейшее развитие и состояние плода [10].
В плаценте вырабатываются различные биологически активные вещества белковой природы, регулирующие гомеостаз в фетоплацентарном комплексе. В условиях патологии уровень петидов существенно меняется, при этом они вовлекаются в патогенез гестационных осложнений, ведущих к развитию ПН и, следовательно, внутриутробной задержке развития плода и его гипоксии [50, 234].
Изменение уровня биологически активных пептидов в плаценте при физиологическом и патологическом течении беременности во многом определяется ферментами их обмена, к которым, в частности, относятся карбоксипептидаза Н (КПН) [18, 23, 50, 101, 137, 156], карбоксипептидаза М (КПМ) [23, 227], ангиотензинпревращающий фермент (АПФ) [166], лейцинаминопептидаза (ЛАП) [215]. Данные ферменты участвуют в процессинге, модуляции и инактивации регуляторных пептидов. Отсюда представляет интерес изучение их активности в плаценте в норме и при патологиях. Недавно в нейрохимической лаборатории Пензенского государственного педагогического университета (ПГПУ) была открыта фенилметилсульфонилфторид-ингибируемая карбоксипептидаза (ФМСФ-КП), физико-химические свойства, субстратная специфичность и тканевая локализация которой позволяют предположить ее участие в процессинге пептидов [24]. Кроме того, при ПН имеют место деструктивные процессы в плацентарной ткани [65, 66], что вызывает интерес к изучению активности лизосомальных протеолитических ферментов в данном органе.
Таким образом, исследование активности карбоксипептидазы Н, фенилметилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы, карбоксипептидазы М, ангиотензинпревращающего фермента,
9 лейцинаминопептидазы, катепсинов в плацентарной ткани при физиологическом и патологическом течении беременности может способствовать уточнению биологической роли этих ферментов в фетоплацентарном комплексе, а также выяснению механизмов функционирования пептидэргических систем в норме и при осложнениях гестационного процесса. Результаты исследований могут быть использованы при разработке методов коррекции метаболических нарушений в фетоплацентарной системе.
Целью нашей работы было изучение роли основных карбоксипептидаз (карбоксипептидазы Н, фенилметилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы и карбоксипептидазы М), ангиотензинпревращающего фермента, лейцинаминопептидазы, катепсинов В, D в патогенезе гестационных осложнений, в том числе, в формировании компенсаторно-приспособительных механизмов в фетоплацентарном комплексе.
При выполнении работы были поставлены следующие задачи:
Изучить активность основных карбоксипептидаз (карбоксипептидазы Н, фенилметилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы и карбоксипептидазы М), ангиотензинпревращающего фермента, лейцинаминопептидазы, катепсинов В, D в плацентарной ткани при физиологическом течении беременности.
Изучить активность карбоксипептидазы Н, фенилметил-сульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы, карбоксипептидазы М ангиотензинпревращающего фермента, лейцинаминопептидазы, катепсинов В, D в плацентарной ткани при осложнениях гестационного процесса.
Исследовать корреляционные взаимосвязи между активностью ферментов в норме и при патологии.
Исследовать корреляционные взаимосвязи между активностью ферментов и: клинико-лабораторными показателями новорожденных и их матерей; макроморфометрическими параметрами плаценты.
Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые изучена активность основных карбоксипептидаз (карбоксипептидазы Н, фенилметилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы и карбоксипептидазы М), ангиотензинпревращающего фермента, лейцинаминопептидазы, катепсинов В, D в плацентарной ткани при внутриутробной задержке развития плода, хронической внутриутробной гипоксии плода, поздних гестозах легкой степени тяжести, анемии беременных. Установлены корреляционные взаимосвязи между активностью ферментов в норме и при патологии, а также выявлен ряд корреляций между активностью пептидгидролаз и: клинико-лабораторными показателями новорожденных и их матерей; макроморфометрическими параметрами плаценты.
Полученные результаты представляют интерес для понимания механизмов функционирования пептидэргических систем и проясняют роль пептид-гидролаз плаценты в норме, а также при гестационных осложнениях и могут быть использованы для разработки эффективных методов профилактики и коррекции нарушений метаболизма в фетоплацентарной системе в условиях патологии.
Положения, выносимые на защиту:
Уровень активности КПН, ФМСФ-КП, КПМ, АПФ, ЛАП, катепсинов В и D в плаценте при физиологической беременности.
Закономерности изменения активности КПН, ФМСФ-КП, КПМ, АПФ, ЛАП, катепсинов В и D в плаценте при внутриутробной задержке развития плода, хронической внутриутробной гипоксии плода, анемии, поздних гестозах легкой степени тяжести.
3. Формирование представлений о биологической роли исследуемых ферментов, как факторов, регулирующих уровень биологически активных пептидов и как инструментов в понимании процессов обмена белка, его перестройки в плаценте при патологии.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены на научных конференциях Российской Академии Естествознания (Тунис, июнь, 2005), на IV национальном научно-медицинском конгрессе «Здоровье человека» (Ереван, 2005) и на итоговых научных конференциях ПГПУ (2004, 2005 гг.). По теме диссертации опубликовано 7 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из 6 разделов: введение, обзор литературы по теме диссертации, материалы и методы исследований, результаты, обсуждение, выводы. Работа изложена на 148 страницах, иллюстрирована 18 таблицами и 11 схемами. Список литературы содержит 287 наименований на русском и иностранных языках.
Гормоны фетоплацентарного комплекса в регуляции развития плода при физиологической беременности
В развитии и поддержании беременности важнейшая роль принадлежит фетоплацентарному комплексу, который синтезирует целый ряд местных и гуморальных регуляторов, в том числе и гормональной природы. Со II триместра плацента и плод синтезируют все гормоны, необходимые для нормального их развития [261]. Из стероидных гормонов наиболее важными являются прогестерон, эстрогены, кортизол.
Прогестерон (Пг) синтезируется из холестерина в синцитиотрофобласте с ранних сроков беременности. В надпочечниках и печени плода гормон превращается в нейтральные стероиды (главным образом в дегидроэпиандростерон и его производные), которые с кровью плода поступают в плаценту и через андростендион и тестостерон трансформируются в эстрогены. Ведущая роль плаценты в синтезе прогестерона проявляется, начиная с 5-6-й недели беременности. К 7-8-й неделе концентрация Пг возрастает в 2 раза и продолжает постепенно повышаться до 37-38-й недели.
Пг подготавливает эндометрий к имплантации, а после нее способствует сохранению беременности: подавляет активность гладкой мускулатуры матки; воздействуя на ЦНС, поддерживает сформированную доминанту беременности; стимулирует развитие концевых секреторных отделов молочных желез и рост матки, стероидогенез; оказывает иммунодепрессивное действие, подавляя реакцию отторжения плодного яйца [41,66,84,89].
Эстрогены (эстрадиол, эстрон, эстриол) различаются по своему строению и биологической активности. Гормоны воздействуют на обменные процессы и рост матки, принимают активное участие в развитии родового акта, стимулируют пролиферацию выводных протоков молочных желез, активируют пластические процессы в организме плода. Полагают, что эстрогены способствуют росту плода. Местом выработки эстрогенов является синцитиотрофобласт. Продукция их находится в прямой зависимости от состояния маточно-плацентарного кровообращения и наличия предшественников, вырабатываемых в организме матери и плода. Эстрогены относят к гормонам фетоплацентарного комплекса. Особенно это касается эстриола (ЕЗ), поскольку его синтез осуществляется при активном участии плода. Содержание эстриола возрастает почти в 10 раз с 7-8-й до 25-26-й недели беременности и продолжает увеличиваться до конца беременности [41, 66, 84, 89].
Вторым гормоном фетоплацентарного комплекса, продуцируемым в большой мере при участии надпочечников и печени плода, является кортизол (Кр). На основании концентрации кортизола в крови матери можно оценить состояние плода. Данный гормон играет важную роль в развитии альвеолярного эпителия и секреции сурфактанта, которые способствуют расправлению легких при первом вдохе. Концентрация кортизола в течение беременности постепенно увеличивается и накануне родов в 5 раз превышает первоначальный уровень [41, 66, 84].
Во время беременности чрезвычайно многообразен спектр гормонов белковой природы и характеризуется появлением как новых, характерных только для беременности, так и существенным изменением продукции присущих организму в норме биологически активных молекул. К гормонам беременности следует отнести в первую очередь: хорионический гонадотропин (ХГ), плацентарный лактоген (ПЛ), хорионический тиреотропный гормон (ХТТГ), хорионический адренокортикотропный гормон (ХАКТГ), релаксин. Следующая группа гормонов продуцируется как плацентой, так и гипофизом, и гипоталамусом: пролактин, кортикотропин-рилизинг-фактор (кортиколиберин, КТРФ), гонадотропин-рилизинг-фактор (ГТРФ), тиреотропин-рилизинг-фактор (тиролиберин), соматостатин, альфа-меланоцитстимулирующий гормон (а-МСГ), бета-липотропин, эндорфины, энкефалины [38, 50, 134, 234, 241, 261]. Пептидные гормоны, попадая в кровь матери и плода, вызывают изменения в метаболизме, иммунных процессах, а также участвуют в регуляции маточно- и фетоплацентарного кровотока. В процессе беременности создается определенный баланс между этими пептидами, который может быть нарушен при гестационных осложнениях [234].
Гонадотропин-рилизинг-фактор - гипоталамический декапептид. М-РНК про-ГТРФ обнаружена в цито- и синцитиотрофобласте. ГТРФ стимулирует синтез ХГЧ, регулирует процессы имплантации и плацентации [95, 100, 118, 176, 189, 199,246,270,282,283].
Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) вырабатывается как цитотрофобластом, так и синцитиотрофобластом, имеет Mr около 36700, относится к -тому же семейству гликопротеиновых гормонов, что и лютеинизирующий (ЯГ), фолликулостимулирующий (ФСГ) и тиреотропный гормоны (ТТГ), продуцируемые передней долей гипофиза. Высокая гомология между ЛГ и ХГЧ определяет общность их биологической функции, так как они взаимодействуют с одним рецептором. Синтез ХГЧ в плаценте регулирует ГТРФ [41, 84].
ХГЧ транспортируется преимущественно в кровь матери, где его уровень в 10-20 раз выше, чем в крови плода. В первые 4-6 недель беременности содержание ХГЧ в биологических жидкостях организма увеличивается в 2 раза каждые 2 дня, достигая максимума (50-100 МЕ/мл) на 9-12 неделе. Во втором триместре беременности содержание ХГЧ стабилизируется на невысоком (около 20 МЕ/мл) уровне, а затем несколько возрастает [41, 84,199].
В ранние сроки беременности ХГЧ стимулирует стероидогенез в желтом теле яичника, во второй половине - синтез прогестерона и эстрогенов в плаценте, участвуя в ароматизации андрогенов. ХГЧ усиливает стероидогенез в коре надпочечников плода, принимает участие в дифференцировке пола плода, а также тормозит сократительную деятельность миометрия [41, 84].
Ангиотензинпревращающий фермент
Ангиотензинпревращающий фермент (АПФ, дипептидилкарбоксипептидаза А, кининаза II, карбоксикатепсин, пептидилдипептидаза, КФ 3.4.15.1) - гликопротеин, 2п2+-содержащая дипептидилкарбоксипептидаза. Впервые был выделен Скеггом и соавт. из сыворотки крови лошади. Основная масса фермента находится в мембранно-связанном состоянии - он является интегральным белком плазматической мембраны. Почти вся молекула АПФ локализована вне клетки, гидрофобный трансмембранный участок находится на карбоксильном конце полипептидной цепи, а внутриклеточный гидрофильный участок насчитывает всего 30 остатков аминокислот [15, 39, 171].
Фермент располагается на внешней поверхности плазматической мембраны разных клеток - эндотелиальных (артерии, вены, капилляры), специализированных эпителиальных, находящихся в местах интенсивного всасывания или выделения жидкости и солей (канальцы почек, слизистая оболочка кишечника, сосудистые сплетения мозга, цилиарное тело глаза, плацента), нейроэпителиальных (дендриты, аксоны, нервные окончания), на клетках мононуклеарного ряда (моноциты, макрофаги, фибробласты, лимфоциты), а также в репродуктивных органах [15, 35, 39]. Растворимая форма фермента присутствует практически во всех биологических жидкостях: плазме, лимфе, слезной, спинномозговой, внутриглазной, амниотической жидкостях. До недавнего времени считалось, что растворимая форма освобождается из мембранно-связанной формы в результате отщепления С-концевого якорного фрагмента протеолитическим ферментом - секретазой, находящейся также на поверхности мембраны. Однако в 1998 г. было показано, что существует второй путь образования растворимой формы АПФ, что она может синтезироваться внутри клетки. В эндотелиальных клетках пупочной вены человека была обнаружена мРНК, кодирующая растворимую форму АПФ, не имеющую трансмембранного гидрофобного участка [15, 35, 39]. Плацентарный АПФ был выделен при помощи аффинной хроматографии с каптоприлом. Молекулярная масса фермента при использовании хроматографических методов - 300000, а при электрофорезе с додецил-сульфатом Na - 85000, полученные данные указывают на олигомерную структуру АПФ [271].
Фермент в большом количестве содержится в микроворсинках плацентарного синцитиотрофобласта, эмбриональных оболочках, миометрии, строме эндометрия [171, 271]. Количество м-РНК АПФ в плаценте увеличивается по мере прогрессирования беременности. Активность фермента отрицательно коррелировала с днем беременности в децидуальной ткани и миометрии, положительно - в плаценте и эмбриональных оболочках. Обнаружено, что активность АПФ выше в миометрии в диэструсе, чем в эструсе [256]. PI фермента из различных органов и тканей колеблется в пределах от 4,6 до 5,1. Фермент имеет рН-оптимум 7,0-8,0; активируется ионами СГ, NO3 , SO4 [15, 35], ингибируется соединениями, содержащими SH-группу, хелаторами (ЭДТА, о-фенантролин), брадикининпотенциирующим фактором (Ki 40 нм), ДТТ, 2-меркаптоэтанолом, додедилсульфатом натрия [34, 35]. Кроме того, существуют специфические ингибиторы АПФ - каптоприл (1С5о 20 нм), лизиноприл (1С5о 3-Ю нм), эналаприл (1С5о25-35 нм) [34, 195, 224]. Фермент катализирует превращение ангиотензина І в ангиотензин II (Km 4-70 мкМ), последовательно отщепляет два дипептида с С-конца брадикинина (кининазная реакция с участием АПФ осуществляется преимущественно в плацентарном цитозоле) [195, 271], расщепляет неокиоторфин с образованием киоторфина (Km 0,25 мМ), Met-энкефалин-А 6-Рпе7 с образованием Met-энкефалина (Km 0,30 мМ), вещество Р и вещество К, холецистокинин и гастрин, энкефалин, нейротензин, нейрокинины А и В, рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона. АПФ осуществляет образование МеЬэнкефалин-А 6 из Met 40 энкефалин-Arg -Gly -Leu , отщепляет последовательно два дипептида с С-конца динорфина А 1-8, расщепляет натрийуретический фактор из мозга и предсердий, вазопрессин, окситоцин [15, 34, 35, 122, 166, 263].
В плаценте обнаружен весь спектр компонентов ренин-ангиотензиновой системы (РАС) - проренина, ренина, ангиотензиногена, ангиотензина I, ангиотензина II и АПФ [195, 233, 242, 256, 269]. Предполагается, что утероплацентарная РАС вовлекается в процессы децидуализации эндометрия, имплантации, плацентации, регенерации эндометрия после родов, абортов. Также РАС осуществляет регуляцию потока крови в фетоплацентарном комплексе, контролирует работу почек плода, участвует в синтезе простагландинов и секреции эстрадиола [233]. Вероятно, при различных осложнениях беременности и родов РАС включается в компенсаторно-приспособительные механизмы плаценты. Данные предположения вызывают интерес к изучению активности АПФ в плацентарной ткани при различных патологиях, особенно при позднем гестозе беременных.
Методы определения активности основных карбоксипептидаз
Уровень активности катепсина D в плаценте при физиологической беременности составил 0,376 нмоль тирозина, образовавшегося за 1 минуту инкубации в пересчете на 1 мг белка (табл. 6). Результаты исследования показали достоверное повышение активности катепсина D в плацентарной ткани при всех изучаемых патологиях, кроме анемии. При ВЗРП отмечено повышение активности фермента на 21%, при ХВГП - на 15%, при ВЗРП в сочетании с ХВГП - на 27%, при сочетанном ОПГ-гестозе - на 16%, при «чистом» ОПГ- гестозе - на 16%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с маловодием - на 15%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с анемией - на 19% по сравнению с нормой (табл. 6). Обнаружено также достоверное повышение активности фермента при всех исследуемых патологиях по сравнению с анемией: при ВЗРП - на 30%, при ХВГП - на 24%, при ВЗРП в сочетании с ХВГП - на 37%, при сочетанном ОПГ-гестозе - на 25%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с маловодием - на 25%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с анемией - на 29%, при «чистом» ОПГ-гестозе - на 26% (табл.6). Катепсин D - аспартильная протеиназа, играющая важную роль в процессах внутриклеточного протеолиза, который активируется при патологическом течении беременности. Вероятно, поэтому обнаружено повышение активности фермента при изучаемых патологиях. Уровень активности катепсина В в плаценте при физиологической беременности составил 0,0261 мкмоль Р-нафтиламина, образовавшегося за 1 минуту инкубации в пересчете на 1 мг белка (табл. 7). Результаты исследования показали достоверное повышение активности катепсина В в плацентарной ткани при ВЗРП - на 34%, при ХВГП - на 67%, при ВЗРП в сочетании с ХВГП на 107% по сравнению с нормой (табл. 7). В группе с ВЗРП выявлено достоверное повышение активности катепсинов при ВЗРП в сочетании с ХВГП на 55% по сравнению с ВЗРП. Обнаружено также достоверное снижение активности катепсина В во всех подгруппах с ОПГ-гестозом по сравнению с ВЗРП в сочетании с ХВГП, ХВГП, ВЗРП. По сравнению с ВЗРП в сочетании с ХВГП активность ферментов в группе ОПГ-гестозов снижается следующим образом: при сочетанном ОПГ-гестозе на 50%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с маловодием - на 42%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с анемией - на 53%, при «чистом» ОПГ-гестозе - на 42%; по сравнению с ХВГП - при сочетанном ОПГ-гестозе на 38%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с маловодием - на 28%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с анемией - на 41%; по сравнению с ВЗРП - при сочетанном ОПГ-гестозе на 23%, при «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с анемией - на 27%. Кроме того, обнаружено достоверное снижение активности ферментов при анемии на 41% по сравнению с ВЗРП в сочетании с ХВГП (табл. 7). По данным дисперсионного анализа обнаружена зависимость активности катепсина В от количества околоплодных вод (Рф=10,652 ). Значительное увеличение активности фермена наблюдается при многоводии. Обнаружена также зависимость активности фермента от степени гипотрофии новорожденного: значительное увеличение активности катепсина В обнаружено при гипотрофии II и III степени (F j,= 4,040 ). Таблица 7. Активность катепсина В в плацентарной ткани в норме и при патологии (мкмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка; М±т; -р 0,05, -р 0,01 относительно нормы; л-р 0,05, " ллл ___ р 0,01, -р 0,001 относительно ВЗРП в сочетании с ХВГП; - р 0,05, -р 0,01 относительно ХВГП; с-р 0,05 относительно ВЗРП). Корреляционные взаимосвязи между активностью пептидгидролаз в плаценте в норме и при патологиях По данным общего корреляционного анализа выявлены следующие взаимосвязи между активностью ферментов в плаценте при патологии (схема 2): положительная корреляция обнаружена между активностью КПН и ФМСФ-КП (г (коэффициент корреляции)=0,2034 (127)), КПН и КПМ (г=0,2912 (125)), КПН и АПФ (г=0,2049 (136)), ЛАП и катепсина В (i=0,2412 (134)), катепсина В и катепсина D (г=0,4682 (125)); отрицательная корреляция обнаружена между активностью КПН и катепсина В (г= -0,3301 (132)), активностью КПН и катепсина D (г= -0,2959 (123)), КПМ и ФМСФ-КП (г= -0,2256 (119)), ФМСФ-КП и катепсина В (г= -0,1807 (127)). Положительная корреляция между активностью КПН (фермент процессинга пептидов) и ФМСФ-КП, отрицательные корреляции между активностью ФМСФ-КП и катепсина В (фермент протеолиза), КПН и катепсинами, ФМСФ-КП и КПМ (фермент модуляции и инактивации пептидов) позволяют предположить участие ФМСФ-КП в процессинге нейропептидов в плаценте. Положительные корреляции между активностью КПН и КПМ, КПН и АПФ могут указывать на то, что изменение процессинга нейропептидов под действием КПН влечет за собой изменение скорости их инактивации и модификации при участии КПМ и АПФ в плаценте. Положительная корреляция между активностью катепсинов, а также вышеуказанные корреляции, вероятно, указывают на участие протеиназ, в основном, в процессах протеолиза в плаценте. Положительная корреляция активности ЛАП с катепсином В позволяет предположить участие ЛАП в инактивации пептидов. а) Корреляционные взаимосвязи между активностью пептидгидролаз в плаценте при физиологической беременности и родах По данным корреляционного анализа обнаружена положительная корреляция между активностью катепсинов (г=0,4459 (22)) в плаценте в норме. Вероятно, это может быть связано с объективными метаболическими условиями повышенного неспецифического протеолиза, складывающегося при беременности. При этом баланс в системе протеолиз-антипротеолиз не нарушен.
Активность ферментов обмена регуляторных пептидов - КПН, ФМСФ-КП, КПМ, ЛАП, АПФ - в плацентарной ткани в норме и при патологии
Положительная корреляция активности ФМСФ-КП с КПН, отрицательная - с катепсинами позволяют предположить участие фермента в процессинге пептидов.
Необходимо отметить, что при ХВГП активность КПН не участвовала в образовании корреляционных связей, а активность ФМСФ-КП отрицательно коррелировала с активностью катепсинов и КПМ в плаценте. Кроме того, обнаружена отрицательная корреляция активности ФМСФ-КП с активностью катепсинов в группе ВЗРП. Вероятно, фермент играет важную роль в патогенезе гипоксических состояний, которые имеют место и при ВЗРП. На это могут указывать также положительная корреляция активности ФМСФ-КП в плаценте с результатами КТГ и отрицательная - с состоянием новорожденных в периоде адаптации, течение которого зависит от статуса плода в атенатальном периоде.
В связи с тем, что ФМСФ-КП существует в мембраносвязанной форме [24, 31], снижение активности фермента можно также объяснить изменением состояния мембран под действием продуктов ПОЛ.
Результаты исследования показали достоверное снижение активности КПМ в плацентарной ткани при ВЗРП, ВЗРП в сочетании с ХВГП, анемии, сочетанном ОПГ-гестозе, «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с маловодием, «чистом» ОПГ-гестозе в сочетании с анемией по сравнению с нормой.
Как указывалось выше, любое осложнение беременности является стрессовым фактором для фетоплацентарного комплекса [37, 89, 134]. Известно, что ос-неоэндорфин, динорфин 1-13 в качестве С-концевой аминокислоты содержат лизин, следовательно, они могут выступать в качестве субстратов для КПМ [262]. Обнаруженное снижение активности фермента, вероятно, замедляет разрушение этих пептидов, обладающих способностью проявлять седативное действие. По результатам общего корреляционного анализа выявлена положительная корреляция между активностью КПМ и КПН в плаценте. Данная взаимосвязь обнаружена также при ОПГ-гестозах и анемии. Вероятно, можно предположить, что в силу угнетения активности КПН, наблюдающегося в условиях патологического течения беременности, снижается процесс образования опиоидов под влиянием энкефалинконвертазы, но при этом уменьшается скорость их деградации под влиянием КПМ, что может расцениваться как компенсаторно-приспособительная реакция.
Кроме того, в патогенезе патологий, при которых имеет место уменьшение активности КПМ, важную роль играют сосудистые нарушения (спазм, нарушение тонуса сосудов и микроциркуляции) [3, 42, 61, 70]. Доказано, что при физиологически протекающей беременности плацентарные сосуды находятся в состоянии дилатации и не реагируют на сокращающие стимулы. Это обстоятельство обеспечивает равномерное поступление кислорода и питательных веществ к плоду. Рефрактерность сосудов плаценты и системы кровообращения матери в целом к вазопрессорам обеспечивается за счет возрастающей продукции эндотелиальных факторов релаксации - простациклина и оксида азота. Синергичное действие этих простаноидов служит основным условием адаптации материнских сосудов к увеличению нагрузки на кровоток, обеспечивает системную вазодилатацию и снижение артериального давления по мере прогрессирования беременности [3, 222, 251].
Патология плацентарного кровообращения развивается в тех случаях, когда инвазивная способность трофобласта снижена или процессы инвазии охватывают спиральные сосуды неравномерно. При этом в сформировавшихся плацентарных сосудах частично сохраняется гладкомышечная структура, адренергическая иннервация, и, следовательно, — способность реагировать на вазоактивные стимулы. Таким образом, участки плацентарных сосудов, сохранившие эндотелиальные и гладкомышечные элементы, становятся мишенью для действия медиаторов, циркулирующих в кровотоке. Структурные изменения, происходящие в сосудах в ответ на их расслабление и сокращение, лежат в основе нарушений плацентарного кровообращения [43,47]. Выраженность клинических проявлений плацентарной
недостаточности предопределяют два обстоятельства: недостаточная инвазия трофобласта в спиральные артерии матки, вследствие чего меньшее число материнских сосудов вовлекается в плацентарное кровообращение; и дисфункция эндотелия, которая выражается в нарушении продукции факторов, обеспечивающих дилатацию плацентарных сосудов, что является важным этапом в патогенезе ОПГ-гестозов. Изменения в эндотелии на ранних стадиях заболевания приводят к выделению токсичных для эндотелия - эндотелина и циркулирующего фактора эклампсии, к снижению синтеза вазодилататоров, клеточных дезагрегантов (брадикинина, простациклина, N0). При этом обнажается мышечно-эластическая мембрана сосудов, что повышает их чувствительность к вазоактивным веществам. Таким образом, снижение биосинтеза простациклина и оксида азота в маточном и плодово-плацентарном кровообращении сопровождается спазмом сосудов в этом регионе и "отграничением" материнского кровотока от фетального. Описанные изменения приводят к нарушению микроциркуляции и локальным ишемическим изменениям в плацентарной ткани [3, 8, 43, 47, 61, 63, 76, 78, 92, 96, 98, 106, 119, 145, 244, 253, 273].
Учитывая участие КПМ в деградации брадикинина [113] и локализацию в эндотелиальных клетках кровеносных сосудов [113, 227], можно предположить, что угнетение активности фермента связано с уменьшением деградации брадикинина, что может способствовать снижению спазма сосудов в ФПК. Это можно рассматривать как компенсаторно-приспособительную реакцию в условиях нарушенной микроциркуляции.
