Введение к работе
Актуальность темы. Наметившиеся новые тенденции в медицине XI века ориентированы на профилактику и выявление ранних нарушений показателей здоровья, поэтому в настоящее время требуется новая тактика лабораторных исследований и необходима диагностика, позволяющая выявлять контингенты повышенного риска патологий, методические приемы, в том числе упрощенные для массовых исследований и контроля реабилитации. Наиболее перспективной является разработка новых высокоинформативных чувствительных и специфичных способов диагностики. При этом особое место должно отводиться методам профилактического обследования населения с целью раннего выявления заболевания, что диктует необходимость повышения требований к показателям диагностической эффективности скрининговых тестов (Дмитриев Г.А., Фриго Н.В., 2004; Лосева О. К., Ловенецкий А.Н., 2002).
Следовательно, актуальны простые по исполнению методы, позволяющие обнаружить причинные антигены и маркеры в минимальных и следовых количествах в большом объеме анализируемых образцов в различных стадиях течения заболевания. В сфере первичной помощи пациентам экспресс-диагностика может существенно улучшить исходы заболеваний за счет более широкого скрининга с целью выявления пациентов, которые нуждаются в применении специального обследования, а также за счет систематического мониторинга (включая самомониторинг) эффекта лечебных мер у амбулаторных больных.
Таким образом, основным предметом нашего исследования стали изучение применения нативных и рекомбинантных антигенов, в качестве биолигандов в гидрозольных препаратах для экспрессной иммунодиагностики.
Цель работы. Разработка и апробация нового оригинального экспресс метода с применением нативных и генно-инженерных антигенов в реакции гидрозольной агглютинации для выявления антител к вирусам гепатита псовых, птичьего гриппа, к микобактериям туберкулёза, детекции хорионического гонадотропина человека в тесте на беременность.
Задачи исследования:
-
Разработать гидрозольные антигенные диагностикумы для выявления антител к вирусу гепатита псовых, птичьего гриппа, M.tuberculosis.
-
Изучить возможность применения гидрозольных диагностикумов с нативными и генно-инженерными антигенами с целью обнаружения антител в исследуемом материале.
-
Разработать гидрозольный антительный диагностикум для выявления антигена хорионического гонадотропина человека (ХГЧ).
-
Определить диагностическую ценность реакции гидрозольной агглютинации для диагностики ряда заболеваний.
Научная новизна работы. Впервые разработана технология получения гидрозольных препаратов на основе коллоидных растворов оксида железа (Fе3O4) и гексацианферрата (II) железа (III), проведена их сравнительная характеристика. Доказана целесообразность и эффективность их применения для детекции в исследуемом материале:
-
Антител к вирусу гепатита псовых.
-
Антител к вирусу птичьего гриппа.
-
Антител к M. tuberculosis.
-
Антигена хорионического гонадотропина человека (ХГЧ).
Научно-практическая значимость работы. На основании полученных результатов исследования осуществлён синтез основных реагентов для экспресс-тестов, показана простота и экономичность постановки анализа, достаточная чувствительность и специфичность реакции гидрозольной агглютинации в выявлении антител к вирусам гепатита псовых, птичьего гриппа, M. tuberculosis, антигена хорионического гонадотропина человека, что позволяет рекомендовать разработанные нами экспресс-тесты для использования в ветеринарии и медицинской практике.
Апробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на научных и научно – практических конференциях: V съезде общества биотехнологов России им. Ю.А.Овчинникова (Москва, 2008); XI межрегиональной научно-практической конференции молодых учёных и студентов с международным участием «Молодёжь и медицинская наука в XXI веке» (Киров, 2009); IV Всероссийской итоговой студенческой научной конференции (Самара, 2010); V Международной (XIV Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2010).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, из которых 4 – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждений, выводов, практических предложений, списка использованной литературы (105 источников, из них 27 - иностранных авторов), приложений. Работа изложена на 119 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц, 8 рисунков.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Реакция гидрозоля, нагруженного соответствующим антигеном, может быть использована для обнаружения антител к вирусу гепатита у собак, вирусу H5N1 птичьего гриппа, M. Tuberculosis.
-
Реакция гидрозоля, нагруженного мышиными моноклональными антителами к бета-субъединице ХГЧ, может быть использована для обнаружения антигена хорионического гонадотропина человека в тесте на беременность.
-
Реакция гидрозольной агглютинации при выявлении в сыворотке крови и капиллярной крови антител к M. Tuberculosis по своим основным характеристикам не уступает традиционным микробиологическим методам.
-
Гидрозоль на основе гексацианферрат (II) железа (III) обеспечивает наиболее оптимальный комплекс иммунохимических свойств разработанных тестов.
