Введение к работе
Лістуалмгость проблемі. Исследования, связанные с поиском антигенных дете( іинант вирусных белков, имеют большое значение д.т.' решения проблем диагностики и вакцинопрофилактики вирусных заболеваний. Серьезную*опасность для всемирного здравоохранения представляют вирусные гепатиты, среди которых особое место занимает гепатит В. В настоящее время в мире насчитывается около ТОО млн. носителей поверхностного антигена вируса гепатита В (HB^Ag). Кроме-тоге, в формировании тяжелых, часто летальных форм острого и хронического гепатитов участвует недавно открытый міїешюішШ агент вирус гепатита дельта.
Одним ял методов борьбы с вирусными инфекциями является гак . цинация. В настоянеє время для вакцинопрофилактики* гепатита В практическое применение нашли плазменная субъединичная и рекомби-нантная дрожж-вая ващины, ' имеющие ряд недостатков. Интенсивность иг-учення возможностей создания искусственных вакцин на основе синтетических пептидов обусловлена их преимуществами, которые Исключаются В ХИМИЧесКОИ ГОМОГеННОСТИ, НеИНфЭЙЦИОКЯОСТИ,
производства в больных масштабах, строгой направленности именного ответа и отсутствии побочных зф{*?ктов. В связи с этим представляется перспективной локализация иммунодошнантнь» элитопов Оолкоз вирусов гепатитов В (HBV) и дельта _(HDV) с помощью синтетических пептидов.
Настоящая работа является частью тематики, разрабатываемой в соответствии с Постаї овлением ЦК КПСС N807-от 25.08.85 и Постановлением ГКІГТ СССР II АН СССР от 03.02. 87 Н26/13 ПО программе 0.74. 0j3. , а таїш* согласно координационным планам АН СССР по направлений^ "Тонкий .органический синтез", .""Биоорганическая химия" и комплексной научно-исследовательской программе Минвуза РСФСР "Механизмы интеграции апологических систем" по направлении 4.
Цвльп работы явилось выявление участков полипептмдных цепей, которые могут находиться на поверхности белков'(proSl-область бзл-;«а оболочки HBV и нуклеокапекдного белка HDV) и участвовать с организации иммунодошшантннх зиитопов, с помощью теоретических методов компьютерного анализа аминокислотных последовательностей соответствующих белков, ..синтеза предсказанных участков и их n.-.vy-
яологического тесирования. Научная новизна работы.
-'На основе компьютерного теоретического анализа структуры preSl-области белки оболочки вируса гепатита В Оил выделен участок, соответствующий аминокислотной последовательности 24-41 (субтип ayw), который участвует в организации антигенной детерминанты preS»-области, что било подтверждено взаимодействием соответствующего синтетического пептида с сыворотками крови больных гепатитом а Дополнительный расчет вторичной структуры выбранного фрагмента 24-41 позволил локализовать в его составе гептапелтид, соответствующий аминокислотной последовательиости 30-36, проявляющий свойства иммунодоминантного апитопа;
-' С помощью компьютерных расчетов структуры дельта-антигена (HDAg) 'по различным программам было сдельно предположение о расположении имму.чодоминантного эпитопа в составе области, состветству--идей аминокислотной последовательности 1Ь2-179. и синтезирован ряд пептидов из этого и других перспективных участков дельта-антигена. Действительно, .наиболее воспроизводимое резулА'аты в реакциях с сиворотками больных гепатитом дельта показал пептид 169-179.
Прооткческап цеизгость работы.
Использовашыг б данной работе подходы к исследованию структурной организации белков вирусов .гепатитов В и дельта могут быть применены для изучения вероятной структуры белков других вирусов и предсказания локализации их антигенных детерминант. Полученные данные о наличии взаимодействия сывороток больных и мзноклоналышх антител с синтетическими пептидами могут быть использованы в дальнейшем для разработки доступных средств диагностики гепатитов В и дельта на основе химически синтезированных пептидов.
Шшкзшяя, хыиоснздз 1ачзкуп:у:
-
Исследование структуры preSl-облаети белка оболочки HBV(.субтипа ау\») и дельта-антигена с помощью теоретических^ методов компьютерного анализа, на основании ісоторого предсказано расположение вероятных иммунологически активных участков этих .белков.
-
Синтез пептидов 24-41, 30-36, 31-36, Ы-30 prfSl-области белка оболочки HBY И пептидов 11-19, 17-23, 11-23, 40-49, 82- 94, 106-123, 115-123, 153-167, 1Є9-179) 167-17S HDAg.
* 3. В результате иммунологических исследований, проведенных с сыворотками больных гепатитом В и дельта, и иммунизированных живот-
них, выявлен один из иммунодомшантных зпитопов preSl-области HBV на участке 30-36 и антигенноактивная область HDA? в районе 169-179.
Публикации. По результатам проделанной работы опубликогани 2 статьи и тезиси 8 докладов.
Апробации.
Результат раояту доложены на IX Советско-Индийском симпозиуме "по химии природних соединений п г. Риге, май 1089 г.;на V Московской конфеїіешщи по оргашгческей химии и технологии, июнь 1989 г., на Всесоюзной научной конференции "Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы ч подходи" , г. Москва, ноябрь 1989 г.; на Всесоюзном симпозиуме по химии пептидов , г.Рига, апрель 19SO г.; на иколе-семинаре "Молекулярная биология и медицина", г. Ленинград, мая 1990 г.; на Всесоюзном симповил<ю "Химия белков", г.Тбилиси, май 1990 г.; на Международном симпозиуме "Вирусные гепатиты: фундаментальные проблемы, эпидемиология, профилактика, лечение", г. Ростов, сентябрь 1990 г.
Структура и объем работы.
