Введение к работе
Актуальность проблемы. ДНК-зависимые ДНК-полимеразы (К.Ф.2.7.7.7.) одни из ключевых ферментов репликации ДНК. Они обеспечивают передачу генетической информации в ряду поколений живых организмов. Поэтому, изучение механизма действия ДНК-полимераз дает один из ключей к пониманию основ стабильности генома. Знание механизма действия этих ферментов может быть использовано для создания высоко эффективных противораковых, противовирусных и антибактериальных лекарственных средств.
Лель работы. Целью работы является I) исследование взаимодействия ДНК-полимераз с нуклеотидами 2) оценка вклада этапа связывания ферментами (ШТР в наблюдаемую In vitro точность синтеза ДНК 3) сопоставление механизма действия ДНК-полимераз про- и эукариатического происхождения, ДНК-полимеразы а человека и ДНК-полимеразы I Е. coll 4) создание новых аффинных реагентов на основе нуклеотидов для необратимого подавления активности ДНК-полимераз.
Научная новизна и практическая ценность работы. В данной работе описаны новые аффинные реагенты ДНК-полимераз, фосфо-рилирунцие аналоги нуклеотидов - имидвзолиды оЖР и dKHP. Проведено исследование взаимодействия ДНК-полимеразы а п ДНК-полимеразы I с нуклеотидами. Впервые изучено влияние матрично-затравочного комплекса на это взаимодействие. Впервые проведена оценка вклада связывания ДНК-полимеразами dNTP в точность репликации ДНК в системе In vitro. Показаны общность и различие во взаимодействии ДНК-полимеразы а и ДНК-полимеразы I с нуклеотидами. Предлокена оригинальная модель узнавания нуклеотидов ДНК-полимеразами.
Полученные данные по механизму действия ДНК-полимераз могут оказаться полезными при создании новых ингибиторов репликации ДНК.
Объем работы. Диссертация изложена на 124 страницах, включая 22 рисунка, 4 таблицы и список цитированной литературы (135 ссылок). Работа состоит из шести глав: Глава I -Введение, Глава II - Обзор литературы. Глава III - Материалы и методы, Глава IV - Результаты и обсувдение, Глава V -Выводы, Глава Г7 - Список литературы.
Публикация и апробация работы. По материалам диссертации опубликовано S печатных работ. Результаты работы докладывались на I (Гатчина, 1984), II (Новосибирск, 1986), III (Тбилиси, 1988), IV (Пущино, 1990) Всесоюзных совещаниях "Энзимология матричного синтеза нуклеиновых кислот**, International Symposium on Phosphorus Chemistry Directed Towards Biology (Poland, Lodz, 1987).
