Введение к работе
Актуальность проблемы. Во всех живых клетках биосинтез белка осуществляется на рибосомах. Понимание тонких биохимических механизмов, обеспечивающих точность и надежность процесса трансляции требует детального изучения структурной организации ее функциональных центров. В связи с этим, актуальной задачей является исследование функциональной топографии рибосом.
Цель работы состояла в изучении структуры мРНК-связываюшего центра рибосом E.coli методом фотоаффинной модификации с использованием в качестве аналогов мРНК синтетических матриц, содержащих природные сигналы инициации трансляции, а в качестве фотоаффинной метки-фотоактивируемых производных нуклеотидов: 4-тиоурнднна, 5-йодуриднна, 6-тиогуанозина. Для проведения исследований был выбран метод фотоаффинной модификации как один из немногих, позволяющих получать информацию о тонкой структуре рибонуклеопротеидного комплекса.
Научная новизна » практическая значимость. В настоящей работе впервые было проведено систематическое изучение расположения 5'-кониевого некодирующего участка мРНК на рибосоме, взаимодействие которого с различными компонентами рибосомного комплекса играет важную роль на всех этапах белкового синтеза. В результате фотоаффннной модификации рибосомных комплексов аналогами мРНК, содержащими 4-тиоурндин как фотоаффинную метку, были определены основные контакты 5'-концевого участка мРНК как с 16S рРНК, так и с белками малой рпбосомной субчастицы, которые вместе с полученными раннее данными послужили основой для построения модели мРНК-связывающего центра рибосомы.
Была показана возможность использования для изучения топографии мРНК на рибосоме таких фотоаффинных реагентов как 5-йодуридин и 6-тиогуанозин. Результаты исследования позволили обнаружить новые особенности в организации мРНК-связывающего центра и рассмотреть возможность широкого применения данных реагентов для изучения топографии других компонентов аппарата трансляции.
Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на
Международной конференции "Современная энзимология: проблемы и
направления", Москва 1992 г., Международной конференции
"Трансляционный аппарат", Берлин, Германия, 1992 г., 10-ом Советско-немецком симпозиуме, Суздаль 1993 г., Международной конференции "Взаимодействие лигандов с рибосомой", Москва-Крым, 1994 г., Международной конференции "Трансляционный контроль ", Колд Спринг
Харбор, США, 1994 г., 16-ом международном Конгрессе по биохимии и молекулярной биологии, Дели, Индия, 1994г.
Структура И объем_ря&ГЩ. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты и обсуждение, материалы н методы, выводы. Материал иллюстрирован рисунками и таблицами. Библиографический указатель включает цитированных работ.
