Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Современные представления об эпидемиологии, распространении, патогенезе, клинике, диагностике и профилактике дирофиляриоза 10
1.1. Место дирофиляриоза в структуре филяриатозов 10
1.2. Дирофиляриоз человека и собак 17
1.3. Современные аспекты клинико-цитологических параллелей при воспалительных заболеваниях конъюнктивы, вызванных паразитами 26
Глава 2. Материалы и методы исследования 29
2.1. Материал исследования 29
2.2. Паразитологическая диагностика дирофиляриоза 30
2.3. Морфологическая диагностика дирофиляриоза (гистологические, гистохимические, цитологические, морфометрические методы) 30
Глава 3. Собственные исследования клинико-морфологические особенности дирофиляриоза человека и собак в Волгоградском регионе 33
3.1. Дирофиляриоз человека в Волгоградском регионе 33
3.1.1. Клинико-морфологические особенности дирофиляриоза в глазной практике (офтальмодирофиляриоз) 39
3.1.2. Роль D.repens в развитии воспалительных заболеваний переднего отдела глаза. Сравнительная количественная характеристика изменений клеточной реакции конъюнктивы в мазках больных людей дирофиляриозным (D. repens), демодекозным (D. folliculorum), микст-инфекционным (D. repens и D. folliculorum), аллергическим конъюнктивитами и собак с наличием и отсутствием микрофилярий в крови 50
3.1.2.1, Количественный анализ содержания нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, плазматических клеток и гистиоцитов в мазке с конъюнктивы больных людей дирофиляриозным, демодекозным, микст инфекционными, аллергическим конъюнктивитами и собак с наличием и отсутствием микрофилярий в крови 54
3.1.2.2. Количественный анализ содержания дистрофических эпителиоцитов, слизистых нитей и бокаловидных клеток в мазке с конъюнктивы больных людей дирофиляриозным, демодекозным, микст-инфекционным, аллергическим конъюнктивитами и собак с наличием и отсутствием микрофилярий в крови 62
3.1.3. Клинико-морфологические особенности дирофиляриоза в хирургической практике 71
3.2. Дирофиляриоз у собак в Волгоградском регионе 78
Глава 4. Обсуждение результатов исследования 85
Выводы 96
Указатель литературы
- Современные аспекты клинико-цитологических параллелей при воспалительных заболеваниях конъюнктивы, вызванных паразитами
- Паразитологическая диагностика дирофиляриоза
- Клинико-морфологические особенности дирофиляриоза в глазной практике (офтальмодирофиляриоз)
- Количественный анализ содержания нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, плазматических клеток и гистиоцитов в мазке с конъюнктивы больных людей дирофиляриозным, демодекозным, микст инфекционными, аллергическим конъюнктивитами и собак с наличием и отсутствием микрофилярий в крови
Современные аспекты клинико-цитологических параллелей при воспалительных заболеваниях конъюнктивы, вызванных паразитами
Клиническое течение гельминтозов зависит от вида возбудителя, интенсивности инвазии, состояния организма больного и рядя других факторов (76,89,95). Диагностика основана главным образом на обнаружении в фекалиях яиц или личинок паразитических червей с помощью различных методов (102,128). Для лечения гельминтозов применяют противоглистные средства. В большинстве случаев дегельминтизация в комплексе с патогенетической терапией способствует быстрому выздоровлению, применяют и хирургические методы лечения (137,140,145). Социальная значимость проблемы побуждает вновь привлечь внимание медицинской общественности к этой группе болезней. В России широко распространено около 30 видов гельминтов, остальных обнаруживают в единичных случаях. В последние годы, в связи с широкими миграционными процессами, число видов гельминтов обнаруживаемых у больных в нашей стране значительно возросло за счет завоза тропических гельминтозов (шистосомозы, филяриатозы, анкилостомидозы др.) (6,24,31).
Эти вытянутые несегментированные цилиндрические черви имеют очень сходное строение и жизненные циклы. Обычно они серого, белого или розового цвета, а иногда полупрозрачные. Размеры паразитических форм варьируют в значительной степени; например, самки возбудителей дракункулеза достигают в длину до 1 м, тогда как длина взрослых особей Strongyloides не превышают 2 мм. Жизненный цикл этих паразитов всегда включает стадию яйца, четыре личиночных стадий и стадию взрослого гельминта (151,148). Паразиты раздельнополы, взрослые гельминты никогда не бывают гермафродитами. Четыре личиночные стадии для удобства можно обозначать как личинки LI, L2, L3, и L4. Большинство нематод - это мелкие или мельчайшие свободноживущие животные; паразитические виды имеют небольшое число специализированных органов, хотя некоторые из них отличаются большими размерами. Тело нематод покрыто непроницаемой белковой кутикулой, секретируемой специальным слоем пшодермальных клеток (144). Кутикула отличается прочностью и эластичностью и состоит из нескольких слоев, параллельные волокна которых проходят во взаимно пересекающихся направлениях. Под гиподермой располагается слой продольных мышечных клеток, разделенных дорсальной, вентральной и латеральными продольными хордами на 4 ленты. Полость тела представляет собой псевдоцеле, в котором отсутствует мезотелий. Жидкость находится в полости тела нематод под большим гидростатическим давлением, что вместе с плотной кутикулой способствует сохранению формы тела паразита и позволяет продольным мышцам обеспечивать синусоидные движения и перемещения, которые эти гельминты производят без помощи отсутствующих у них кольцевых мышц (6,24,31).
Кишка имеет вид простой трубки. Ротовое отверстие раполагается на переднем конце гельминта и может быть окружено губами. Ротовая полость короткая; у некоторых гельминтов имеются зубцы. В ротовую полость открываются протоки трех желез, помогающие осуществлять процесс пищеварения. Пищевод снабжен хорошо развитой мускулатурой; в задней его части имеется мощный трехлучевой клапан, который регулирует поступление пищи в среднюю кишку. Один слой цилиндрических эпителиальных клеток, выстилающий среднюю кишку, обеспечивает всасывание питательных веществ. Далее расположены прямая кишка, анус и клоака. Мускулистый пищевод необходим для преодоления высокого гидростатического давления внутренней среды гельминта, чтобы обеспечить заполнение средней кишки; задняя кишка опорожняется спонтанно при расслаблении анального сфинктера (40,55).
Самцы нематод короче, чем самки, и их хвостатый конец загнут в вентральную сторону. Мужская половая система представлена одной трубкой, которая последовательно делится на извитые семенники, семяпровод, семенной пузырек и эякуляторный (семяизвергательный) канал, ведущий в клоаку. Во время копуляции самец прикрепляется к телу самки с помощью цементных желез и одной или двух спикул, которые вводятся во влагалище. Специальное образование — губернакулюм — контролирует движение спикул через клоаку. У самцов некоторых видов, в том числе и паразитических нематод, на хвостовом конце тела имеется широкий кутикулярный отросток, укрепленный ребрами. Это образование называется копулятивной бурсой; она усиливает прикрепление самца к самке во время копуляции. Женские половые органы состоят из одинарной или двойной трубчатой системы, открывающейся на поверхности тела влагалищем, которое обычно располагается в передней части вентральной поверхности гельминтов. Каждая генитальная трубка дифференцирована на извитой нитевидный яичник, яйцевод, семяпроводник, матку, яйцеизвергатель и влагалище. Яйца оплодотворяются в семяприемнике и одеваются оболочкой в проксимальной части матки. Стенка яйца состоит из трех слоев. Хорнональная мембрана и истинная хитиновая оболочка образуются эндогенно в оплодотворенном яйце, а наружное белковое покрытие секретируется маткой. Белковая оболочка становится желтой или коричневой в результате ее дубления; яйца тех видов гельминтов, у которых данная оболочка отсутствует, бесцветны. Яйцеизвергатель представляет собой мышечный сфинктер, регулирующий выход яиц из матки. Матка у большинства5 взрослых гельминтов заполнена яйцами. Больше всего их образуется у Ascaris lumbricoides - около 200 000 яиц в день. Некоторые нематоды (Trichinella, Dracunculus) живородящие; у них из матки выходят личинки в начальной стадии развития. Нитчатки (филярииды) продуцируют микрофилярии, являющиеся по сути дела молодыми эмбрионами, которые могут быть окружены чехлом, образовавшимся из оболочки яйца (54,77,97,131).
Паразитологическая диагностика дирофиляриоза
Следует отметить, что в наших наблюдениях, у лиц, инвазированных D. repens период инкубации продолжался от 2 месяцев до одного года, отсутствовал продромальный период, не было проявлений интоксикации, лихорадки.
Сроки постановки клинического и ларазитологического диагнозов в большинстве случаев не совпадали. Своевременная диагностика зависила от тяжести болезни, а так же степени информированности врача о дирофиляриозе.
С целью определения уровня информированности пациентов нами был проведен контент-анализ материалов на медицинские темы в волгоградских газетах (проанализировано 555 газетных номеров «Волгорадской правды», «Городских вестей» за 2002-2003 гг., где встречено 350 материалов, посвященных различным проблемам здравоохранения) который показал, что, несмотря на неуклонный рост заболеваемости дирофиляриозом людей и собак, информация о данном заболевании в СМИ (на наш взгляд, единственном доступном для основной массы населения источнике) отсутствует.
Клинико-морфологический анализ офтальмодирофиляриоза у 26 больных показал следующее. Дирофиляриоз в глазной практике чаще встречается у женщин (59%), чем у мужчин - (41%). Поражаются D. repens веки, конъюнктива, передняя камера глаза, орбитальная ткань. Наиболее частая локализация гельминтов у больных дирофиляриозом отмечается под кожей век или под конъюнктивой (табл. 2). Таблица 2. Клинико-морфологическая характеристика офтальмодирофиляриоза человека в офтальмологической практике Волгоградского региона.
Количество случаев Локализация гельминта Симптомы, клинические проявления Первичныйклиническийдиагноз Морфологическаяхарактеристика(длина в мм) Орбитальная ткань Боль в глазном яблоке,опухолевидное образование в области орбиты глаза І Іовообразовшніеорбиты глаза,экзофтальм,тенонит,терминальнаяглаукома При гистологическом исследовании: гранулематозное воспаление вокруг погибщей особи D. repens собызвествлением и образованием соединительнотканной капсулы
При поражении D. repens век развивается гиперемия, отек, пастозность, малоподвижность, боль в покое и при пальпации, иногда зуд и слезотечение, птоз, блефароспазм, хемоз, ощущение инородного тела. Под кожей образуется опухолевидное образование, протекающее чаще всего под маской халязиона, рецидивирующего ячменя, абсцесса, новообразования век (рис. 6).
При поражении D. repens конъюнктивы (пример 1), как следствие миграции гельминта отмечаются воспалительные явления, слезотечение, хемоз, зуд, сильные боли. Конъюнктива часто піперемнрована, отечна, через нее может просматриваться извитое тело нитевидного гельминта (рис. 7). В большинстве случаев все перечисленные симптомы исчезали, после того как гельминт мигрировал в другие структурные элементы глаза или удалялся хирургически.
Результаты паразитологического и морфологического исследования извлеченного гельминта показали следующее. Размеры удаленного хирургическим путем живого гельминта колебались от 7 до 14 см. (рис. 8). В нескольких случаях удавалось извлечь лишь фрагменты паразита. При гистологическом исследовании в световом микроскопе под малым (хЮО) и большим увеличением (х400) поперечных срезов нематод (рис. 9) и идентификации их до рода Dirofilaria по кутикулярным «шипам», соответствующим вершинам продольных кутикулярных гребней на теле паразита во всех исследуемых случаях была идентифицирована неполовозрелая самка D. repens (рис. 10). Яиц и личинок обнаружено не было.
Поражение передней камеры глаза возникает при проникновении в нее дирофилярии, которую обнаруживают офтальмологи по характерным движениям.
В четырех случаях частично обызвествленный гельминт был обнаружен в орбитальной ткани (пример 2). В двух из четырех случаев поражения тканей орбиты была произведена энуклеация глаза из-за необратимых изменений в структурных элементах глазного яблока. Ни в одном из 4 наблюдений поражения D. repens орбитальной ткани клинический диагноз дирофиляриоза поставлен не был, что свидетельствует о недостаточной информативности и настороженности врачей-офтальмологов по данному заболеванию, хотя врач этой специальности по частоте первичного обращения больных к специалисту стоит на втором месте после хирурга. У таких больных регистрировались клинические проявления терминальной глаукомы, абсцесса, новообразования орбиты, конъюнктивита со снижением остроты зрения. Гистологическое исследование показало, что поражению D. repens тканей глазницы способствует образование гранулемы вокруг гельминта (рис. 11, 12) с последующим формированием соединительнотканной капсулы (рис. 13, 14), что приводит к сдавлению гланого яблока с развитием в его структурных элементах дистрофических, атрофических, воспалительных изменений, сопровождаясь экзофтальмом, тенонитом, конъюнктивитом, диплопией. В одном случае выраженное обызвествление, склероз и гиалиноз, затрудняли идентификацию в связи с чем был выставлен предположительный диагноз (рис. 15). В нескольких случаях несвоевременного удаления гельминта локализующегося под кожей век развился абсцесс из которого вместе с гноем и некротизированной тканью удалялось нитевидное образование или его фрагменты (рис. 16), а в многослойном плоском эпителии кожи века в месте миграции гельминта обнаруживались явления гиперкератоза, акантоза и формирование петрификатов (рис. 17). У преобладающего большинства больных офтальмодирофиляриозом отсутствовал продромальный период, а в случаях поражения D. repens орбитальной ткани, отмечался длительный инкубационный период от двух месяцев до одного года.
Клинико-морфологические особенности дирофиляриоза в глазной практике (офтальмодирофиляриоз)
Как показали наши исследования такое паразитарное заболевание как офтальмодирофиляриоз занимает важное место среди воспалительных заболеваний переднего отдела глаза в том числе и таких как дирофиляриозный конъюнктивит. D. repens, являясь факультативным паразитом конъюнктивы человека и собак, в определенных условиях может вызвать развитие воспалительных процессов в конъюнктиве.
По гистологическому строению в конъюнктиве различают эпителиальный слой и соединительнотканную основу (tunica propria). Эпителий конъюнктивы век - многослойный, цилиндрический, содержит различное число бокаловидных клеток, выделяющих слизь (рис. 18). На конъюнктиве склеры в поверхностных слоях клетки постоянно становятся плоскими и без резкой границы переходят в эпителий роговицы.
Клеточный состав в соскобе с нормальной конъюнктивы, с эпителиоцитами и бокаловидными клетками. Окраска по Романовскому-Гимзе х 250. К преобладающим этиологическим факторам воспалительных заболеваний переднего отдела глаза относят паразитирование в веках железницы угревой, которая относится к роду Demodex, аллергические заболевания и прочие бактериальные и вирусные инфекции. В целях дифференциальной диагностики конъюнктивитов демодекозной, дирофиляриозной, микст-инфекционной (D.repens и D.folliculorum), аллергической этиологии нами был проведен количественный цитологический анализ клеточной реакции в мазках с конъюнктивы больных людей дирофиляриозом (D.repens), демодекозным (D. folliculorum), микст-инфекционным (D.repens и D.folliculorum), аллергическим конъюнктивитами и собак с наличием и отсутствием микрофилярий в крови. Для этого нами был разработан алгоритм цитологического исследования (табл. 3) мазков с конъюнктивы 16 больных дирофиляриозным, 16- демодекозным, 8- микст-инфекционным и 16 аллергическим конъюнктивитами, а также 16 собак с наличием микрофилярий в крови и 10 собак без микрофилярий в крови. Таблица 3. - наличие и характер экссудата (серозный, фибринозный, гнойный, геморрагический, смешанный);. (пр., лев.) - слизистые нити; (пр., лев.) - фибриновые нити; (пр., лев.) - бактерии; (пр., лев.) - мицелий; (пр., лев.) - дирофилярии; (пр., лев.) - демодекс ( в мазке, на ресничках век); (пр., лев.) - клеточный детрит; (пр., лев.) - псевдомембрана; (пр., лев) - наличие воспалительных клеток (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, лимфоциты, плазматические клетки, гистиоциты); (пр., лев) - наличие гигантских и синтициальных многоядерных клеток; (пр., лев) - наличие дистрофических или некротизированных эпителиоцитов (вакуолизация ядра, вакуолизация цитоплазмы, кариопикноз, кариорексис, кариолизис, фрагментация ядра); (пр., лев.) - явления кератинизации; (пр., лев) - наличие патологических включений в ядре или в цитоплазме (кокки, инициальные или элементарные тельца, вирусные тельца); (пр., лев) - изменения ядерно-цитоплазматического отношения; (пр., лев) - гиперактивные бокаловидные клетки; (пр., лев)
У больных демодекозным и микст-инфекционным конъюнктивитами подсчитывалось общее количество клещей (акарограмма), которое колебалось от 4 до 8 на шести ресницах (рис. 19, 20).Такая акарограмма расценивалась как патологическая (допустимой нормой считается один клещ на двух ресницах) (68).
Количественный анализ содержания нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, плазматических клеток и гистиоцитов в мазке с конъюнктивы больных людей дирофиляриозным, демодекозным, микст-инфекционным, аллергическим конъюнктивитами и собак с наличием и отсутствием микрофилярий в крови. При хроническом конъюнктивите не только клинически, но и лабораторно трудно определить ведущую причину заболевания. Исключая этиологические факторы, выявляемые при офтальмологическом обследовании и специальном лабораторном исследовании (в частности, на демодекоз), цитологическому методу отводится решающая роль в обнаружении этиологического фактора и проведения дифференциальной диагностики.
Хронический конъюнктивит - полиэтиологическое заболевание. Это усложняет процесс диагностики и вынуждает проводить чаще симптоматическое лечение, что, несомненно, отражается на его эффективности. Таким образом, одной из основных задач врача-офтальмолога является ранняя этиотропная диагностика конъюнктивитов.
Лабораторная диагностика конъюнктивитов является важным, а порой и необходимым звеном в установлении этиологии процесса. Общепринятым является взятие мазка или соскоба с конъюнктивы для последующего цитологического или иммунофлюоресцентного исследования. Наиболее наглядно клеточную реакцию конъюнктивы удалось проследить, рассматривая различные клеточные популяции и их количественные и качественные изменения. Морфометрическое исследование содержания нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, плазматических клеток и гистиоцитов в мазке с конъюнктивы больных с исследуемыми нами конъюнктивитами, а также собак с наличием и отсутствием микрофилярий позволило выявить следующие цитологические особенности (табл. 4., рис. 21.).
Количественный анализ содержания нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов, плазматических клеток и гистиоцитов в мазке с конъюнктивы больных людей дирофиляриозным, демодекозным, микст инфекционными, аллергическим конъюнктивитами и собак с наличием и отсутствием микрофилярий в крови
Нами впервые проведен анализ заболеваемости дирофиляриозом на территории Волгоградского региона (Волгограда и Волгоградской области). Заражение дирофиляриозом человека и собак может происходить в Волгоградской области, при этом нельзя исключить и возможность заражения дирофиляриозом непосредственно в Волгограде в зонах отдыха на реке Волге и на ее водохранилищах. Отмечаемые в южных регионах России, в частности Нижнем Поволжье и Волгоградской области, отчуждение ранее окультуренных земель, активное освоение необжитых территорий, значительные миграционные процессы, возросшие торгово-экономические и туристические связи, естественное и вынужденное перемещение животных из одного региона в другой, ввоз редких и породистых собак из зарубежных стран без должного ветеринарного контроля, способствуют возникновению новых очагов заболевания, и оказывают ярко выраженное антропогенное влияние на экосистему Волгоградского региона (6,13,27,47,48,50,52).
Проведенный нами анализ заболеваемости этим гельминтозом людей и собак за последние 10 лет, убедил нас в необходимости отметить, что в г. Волгограде и на территории Волгоградской области сложились условия, благоприятно влияющие на рапространение дирофиляриоза, поэтому город Волгоград и область следует признать зоной, эндемичной для дирофиляриоза, ранее не типичного для нашего региона заболевания, которое в соответствии с современной терминологией, можно рассматривать как «возникающую инфекцию», быстро расширяющую свое присутствие с соответствующим возрастанием количества случаев заболеваний. Отмеченная нами тенденция роста инвазирования человека в Волгоградском регионе за последние годы указывает на необходимость тщательной регистрации и анализа всех выявленных случаев с целью последующего статистического анализа выявления устойчивых тенденций в заболеваемости с определением районов наибольшего риска заражения, усовершенствования методов диагностики, лечения и профилактики.
Полученные результаты в целом соответствуют характеру проявлений гельминтоза в Российской Федерации и странах СНГ (5,10,11,15,16,18,23.35,39). Общей тенденцией является относительная устойчивость к заболеванию детей и преимущественное поражение женщин.
В связи с тем, что заболеваемость дирофиляриозом является спорадической, и единичные случаи этой инвазии выявляются в различных районах Волгоградской области, клиническая симптоматика неспецифична, лечение лишь хирургическое за исключением 2 случаев извлечения гельминта самими больными, а методы диагностики основаны на паразитологическом и морфологическом исследовании удаленного хирургическим путем червя, создаются объективные трудности в клинической и лабораторной диагностике этой инвазии, что может вести к несвоевременной диагностике, задержке лечения и, соответственно, развитию осложнений.
Дирофиляриоз характеризуется достаточно продолжительным инкубационным периодом, длящимся от 1-2 месяцев до двух лет.
Наши наблюдения показали, что клинические проявления у людей весьма разнообразны и зависят от места нахождения гельминта. В большинстве случаев, в подкожном или подслизистом слое появляется безболезненная или болезненная «опухоль», сопровождающаяся локальным жжением и зудом, с гиперемией над ней. Наиболее частый симптом-подвижность «опухоли», это связано со способностью гельминта мигрировать даже на расстояние нескольких десятков сантиметров. Большинство авторов отмечает, что миграционный период не сопровождается развитием интоксикационного синдрома и клинически значимым изменением картины общего анализа крови, что можно объяснить минимальным токсико-аллергическим воздействием гельминта и продуктов его метаболизма на организм человека в связи с отсутствием микрофиляремии и обнаружением только единичных особей (29,64,74,79,83,128). У больных дирофиляриозом, в связи с отсутствием общих проявлений заболевания, нет необходимости на начальных стадиях инвазии обращаться за медицинской помощью.
Наши исследования показали, что именно локализация, как правило, и «определяет» профиль врача, к которому обращается инфицированный пациент. Это могут быть хирурги, офтальмологи онколога, в единичных случаях педиатры и терапевты. В связи с тем, что на основании объективного обследования, как правило, поставить правильный диагноз сложно, то нередко пациентам с дирофиляриозом ставят диагноз липомы, фибромы, атеромы, кисты или аллергического отека.
В 43% зарегистрированных у человека случаев заболевания приходится на дирофиляриоз органов зрения-офтальмодирофиляриоз. При этом поражаются веки, конъюнктива, передняя камера глаза, орбитальная ткань. Веки становятся пастозными, малоподвижными, закрывают глаз, характерны гиперемия кожи век, птоз, блефароспазм. У многих пациентов возникает зуд разной интенсивности, ощущения инородного тела в глазу, воспалительные явления (конъюнктивит). При морфологическом исследовании во всех случаях поражения век под кожей обнаруживалась гранулема вокруг гельминта характеризующаяся полиморфноклеточной инфильтрацией со значительным количеством нейтрофильных гранулоцитов, фибробластов, эпителиоидных клеток, гигантских многоядерных клеток инородных тел. У нескольких больных вокруг погибающей дирофилярии развивался абсцесс при несвоевременном удалении гельминта. Вокруг погибшего гельминта формировалась соединительнотканная капсула. В наших наблюдениях частота поражения век и конъюнктивы оказалась одинаковой (по 11 случаев).