Введение к работе
Актуальность проблемы. Сальмонеллёз — инфекционная бо-:зиь животных и человека, вызываемая разнообразными серова-.мп бактерии рода .J'rt.^***»-»-*^ &^л .
Первый представитель рода был выделен в 1885 г. американ-ими ветврачами Сальмопом и Смитом.
В настоящее время известно 2234 серовара сальмонелл и Меж-'пародный сальмонеллёзный центр регистрирует ежегодно по —20 новых сероваров.
Сальмонеллёз распространён практически во всех странах іра.
Возникновению болезни способствует высокая концентрация толовья па ограниченной площади, неблагоприятный микрокли-1т, низкое качество кормов и их недостаток, бессистемное исполь-вание лекарственных средств и многие другие факторы.
Сальмонеллёз наносит значительный экономический ущерб, торый определяется высокой летальностью заболевающих житных, затратами на их лечение, расходами на ликвидацию и про-глактику болезни. К тому же, сальмонеллы являются наиболее стыми возбудителями пищевых токспкоинфекций у человека, ээгому борьба с сальмопеллёзом — не только ветеринарная, но и циальная проблема.
В комплексе мероприятий по борьбе с болезнью значительное ;сто занимает антитоксическая поливалентная сыворотка против льмоиеллсза телят, поросят, ягнят, овец п птиц.
Впервые активную сыворотку против сальмопеллёза получили
1892 г. . Д&ых. и Я.Геъ^е-гг.
Сыворотку против сальмопеллёза телят в СССР получил С. К.
:ззубец (1930). Затем разработкой методики получения этой
[воротки занимались С. Н. Вышелесский и Д. К- Бессонов (1932),
П. Борисов (1932), Н. Л. Михин (1931—1934), Н. В. Прокопович
Др.
Сыворотку против сальмонеллёза овец предложил В. С. Каза-н (1935). В дальнейшем работы по получению этой сыворотки сшпрплп и углубили А. И. Нефедьев (1953), И. Н. Никольский 953).
А. Г. Малявин (1940) получил сыворотку против сальмонеллё-, обладающую антимикробным н антитоксическим действием.
В" период с 1967 по 1970 гг. под руководством А. Г. Малявина [ла разработана методика получения от волов-продуцентов по-валентной антитоксической сыворотки против сальмонеллёза те-т, поросят, ягнят, овец и птиц, а затем им же организовано пропиленное изготовление препарата на биофабриках бывшего
:ср.
Однако, производство гипериммунных сывороток, в том чи и названной, представляет собой сложный и длительный процес* котором можно выделить следующие основные стадии: подбор і муногеиных штаммов, приготовление питательной среды для выращивания, культивирование штаммов, инактивация иыращ пых культур, отбор продуцентов, пх гпперпммунпзация, взятие к ви, получение сыворотки, консервация, отстой, фильтрация, рас( совка, этпкетпроваиие и контроль препарата.
Даже этот простой перечень основных звеньев технологичес го процесса получения сыворотки — свидетельство его длнтель стн и трудоёмкости.
Учёт этого обстоятельства, анализ литературных данных, мысление многолетнего опыта изготовления нами сыворотки на I тебской биофабрнке послужили основанием для выполнения пр ставленной работы.
Наряду с гпнериммунными сыворотками для лечения и nj филактпки получают п применяют иммуноглобулины.
По лечебно-профилактическому действию пммуноглобул значительно превосходит сыворотки. Но получение пх, так же, і< и сывороток, многоэтапный, сложный и длительный процесс. П] мышлеиное получение противосальмоиеллёзпого иммупоглобулг, до сих пор не освоено. Учитывая это, мы решили разработать щ емлемую для бнопромышленпостн схему его получения.
Эффективность сыворотки и иммуноглобулина определяеі их специфической активностью. Вместе с тем, регламентированн нормативной документацией методы контроля активности сьіворі ки не позволяют с достаточной степенью достоверности судить лечебно-профилактической эффективности препарата. ^Контро иммуноглобулина на активность также требует разработки бо; достоверного метода.
Очевидна необходимость изучения многих аспектов пронзве ства сыворотки. Так, до настоящего времени недостаточно изучен влияние возраста и сроков эксплуатации продуцентов на нммуі генность препарата, гематологические показатели, динамика Т-В-лнмфоцптов, белковый спектр сыворотки крови волов, влиян адъювантов, места, дозы, метода введения антигена на активное получаемой сыворотки, не предложены способы отбора жнвотні для сывороточного производства, рациональный способ гиперпмк иизацни волов и оптимальный режим их эксплуатации, не найдеї методы очистки сыворотки от липидов, не предложено более сове шейного способа консервации её, не изучена возможность полу1 ния ассоциированной сыворотки против сальмонеллёза и друг болезней.
Всё вышеотмеченное послужило основанием для проведен; исследований, представленных в данной работе.
Цель работы. — Разработка новой технологии изготовления лворотки, получение из нее специфического иммуноглобулина, азработка методов контроля активности этих препаратов, получе-iie ассоциированной сыворотки против сальмонеллёза, пастереллё-1, парагрпппа-3 и инфекционного рииотрахеита крупного рогатого сота.
1. Оценить достоверность применяемого метода контроля ак-
івности сыворотки против сальмонеллёза животных.
2. Усовершенствовать метод контроля активности сыворотки
иммуноглобулина.
-
Изучить иммунный ответ организма волов на сальмонеллёз-ый антиген.
-
Определить содержание кальция, фосфора и каротина в кро-[ продуцентов сыворотки.
-
Разработать способ отбора волов для производства сыво-эткп.
-
Оптимизировать схему гипериммунизацпи и режим эксплуа-1ЦПН волов-продуцентов.
-
Изучить возможность повышения выхода сыворотки из кро-і продуцентов.
-
Усовершенствовать способы консервации, осветления и очи-ки сыворотки от липидов.
-
Разработать промышленную технологию получения специ-ического иммуноглобулина и метод контроля его активности.
10. Получить поливалентную сыворотку против сальмонелле-
1, пастереллеза, парагриппа-З и инфекционного рииотрахеита
зупного рогатого скота.
11. Изучить лечебно-профилактическую активность сыворотки
иммуноглобулина для телят и поросят.
Научная новизна. Новизна работы в следующем.
Разработан метод контроля активности сыворотки в отноше-.
і белых мышах массой 18—20 г, а в отношении &б-А&&*~***#м*' а взрослых голубях, включающий:
иммунизацию сывороткой белых мышей подкожно, голубей іутрпмьшіечно в дозе 0,004 см3, с использованием на каждый се-звар 10 животных;
заражение мышей и голубей 2—3 ЛДбо соответствующего фовара спустя 2—3 часа после введения сыворотки.
Сыворотка является активной при выживании не менее 8 осо-:й из 10 иммунизированных и гибели 8—10 в контроле
Установлено, Что волы, имеющие специфические антитела сальмонеллам до гипериммупнзацни, являются продуцентами и иболее активной сыворотки по сравнению с неннфнцированиым животными.
Разработана новая технология получения гипериммунной сі воротки против сальмонеллеза животных, включающая:
— гипериммунизацпю антигеном из 4 штаммов сальмонел, вместо 18;
цикл гппериммунизации из 7 инъекций, вместо 22;
концентрация антигена 10 млрд/см3, вместо 3 млрд/см3 мі кробных тел;
— введение антигена внутрибрюшинно, вместо подкожного;
доза антигена на инъекцию от 2 до 20 см3 на животное, вмі сто 50—400 см3;
срок отстоя сыворотки до 10 суток, вместо 60.
Получен протпвосальмопеллезный иммуноглобулин методо осаждения иммуноглобулинов «ПЭГ-115».
Разработан способ контроля активности иммуноглобулина г величине ИДбо для белых мышей и голубей.
Получена ассоциированная сыворотка против сальмонеллез пастереллеза, парагриппа-3 и инфекционного рииотрахеита круї ного рогатого скота.
Установлено отсутствие конкуренции антигенов пз названпь микроорганизмов при гппериммунизации волов-продуцентов асс< циированной сыворотки.
Новизна работы подтверждена авторскими свидетельствам]
— «Способ осветления гипернммуной сыворотки против сал
монеллеза» (авт. св. № 1637088, зарег. в Гос. реестре пзобр. ССС
22 ноября 1990 г.);
— «Способ отбора волов-продуцентов протпвосальмопелле: ной сыворотки» (авт. св. № 1655979, зарег. в Гос. реестре нзоб: СССР 15 февраля 1991 г.);
— «Способ получения гиперпммуннон сыворотки против салі
монеллеза животных» (авт. св. № 1754114, зарег. в Гос. реестр
изобр. СССР 15 апреля 1992 г.);
— «Способ консервации сыворотки против сальмонеллеза жі
вотных» (авт. св. № 1777886, зарег. в Гос. реестре изобр. ССС
1 августа 1992 г.);
— «Способ получения гипериммунной сыворотки против раї
пираторных заболеваний крупного рогатого скота» (авт. с:
№ 1795582, зарег. в Гос. реестре изобр. СССР 8 октября 1992 г.).
На изобретение «Способ осветления гипериммунной сыворотк против сальмонеллеза животных» Госкомизобретенпй выдал патег № 1793929, зарег. в Гос. реестре пзобр. СССР 8 октября 1992 г.
Практическая значимость. Внедрена новая питательная среда для культивирования штаммов, включающая гпдролизат крови животных, 40%-ный раствор глюкозы, 10%-ный раствор экстракта дрожжей, 05%-пый раствор биогенного стимулятора торфа. Инактивация антигена проводится 0,2-0,3%-ным формалином и 0,1%-ной перекисью водорода.
Дополнения в инструкцию в форме извещений №№ 1, 2, 3, 4, 5 утв. Генеральным директором Республиканского объединения «Белзооветспабпром».
Нами изменен режим эксплуатации продуцентов и вместо двух инъекций после каждого очередного крововзятия предложено антиген вводить однократно. Это предложение в форме изменений к инструкции утверждено ГУВ при Государственной комиссии Совета Министров СССР по продовольствию и закупкам 13 февраля 1990 г.
Документация, касающаяся схемы гипериммунизации волов и способа контроля активности сыворотки, в виде дополнений к инструкции, утв. ГУВ Республики Беларусь 19 января 1992 г.
Результаты исследований позволили предложить новую «Инструкцию по изготовлению и контролю сыворотки против сальмо-пеллеза животных», а также новые технические условия (ТУ), утв. Генеральным директором Республиканского гособъединення «Белзооветспабпром» и начальником ГУВ Республики Беларусь.
Исключение инъекций антигена в половинной дозе позволило уменьшить расход его на 600 л, дополнительно провести 10 крово-взятий п получить 56 000 л сыворотки в год. В денежном -выражении стоимость сэкономленного антигена и полученной сыворотки составила 22 млрд. 480 млн. белорусских рублей из расчета на 1000 продуцентов (в ценах 1997 года).
Внутрибрюшинное введение антигена сократило расход его в 22 раза — экономия денежных средств составила 240 млн. бела-русских рублей в год.
Взятие крови из расчета 17 см3 на 1 кг массы вола позволила получить дополнительно в год 12 000 л сыворотки, стоимость которой составляет 4 млрд. 800 млн. беларусских рублей.
Применение содо-солевого раствора для повышения выхода сыворотки из плазмы дает возможность получить дополнительно только от одного крововзятия 270 л сыворотки, стоимость которой составляет 5 млн. рублей.
