Введение к работе
Актуальность работы. Лейкоз является одной из наиболее распространенных инфекционных болезней крупного рогатого скота. Изучению эпизоотической ситуации по данной болезни в разных регионах России, в том числе и в областях Западной Сибири, посвящено значительное число публикаций (А.Ф. Валихов, В.П. Шишков, Л.Г. Бурба 1980; В.М. Нахмансон, 1986; П.Н. Смирнов, 1989, 1991, 1996; А.Т. Левашов, 1994; А.Г. Незавитин, 1995; В.И. Околелов, Ю.С. Притужалов, 1995; B.C. Федоров, 1996 и др.).
С момента открытия вируса лейкоза крупного рогатого ско-га (Miller J. et al., 1969) и до настоящего времени получено довольно много данных, касающихся характеристики возбудителя: по морфологии, биохимии, контагиозности и другим свойствам (Л.Г. Бурба, 1977; В.Г. Шишков, 1979; В.А. Бусол, 1982; В.М. Нахмансон, 1986; П.Н. Смирнов, 1987; Г.Ф. Коромыслов, 1989; В.В. Смирнова, 1992 и пр.). Разработаны и апробированы клинико-морфологические и иммунологические методы диагностики, в том числе реакция иммуно-циффузии (РИД) в агаровом геле, которая включена в методические рекомендации по диагностики лейкоза крупного рогатого скота [1985), радиоиммунный (РИА) и иммунофлюоресцентный (МФА) анализ (К.М. Jacobson et al„ 1985; 1988; В.Г. Арутюнян, 1992; А.В. Киселев 1992; D.R. Monkeetal., 1992).
В настоящее время широко применяется гематологический метод диагностики лейкоза, включающий в себя несколько этапов: подсчет лейкоцитов в камере Горяева, изготовление мазков крови, их окраска и дифференциальный подсчет лимфоцитов, выведение лей-коформулы по «лейкозному ключу». Данный метод диагностики лейкоза крупного рогатого скота требует от врача - гематолога определенных знаний и навыков, все манипуляции довольно продолжительны. К этому следует добавить, что пока еще недостаточно полно изучены вопросы, касающиеся качественного изменения в составе крови крупного рогатого скота при развитии лейкоза и их оценки. Поэтому возникает необходимость в накоплении информации об изменениях как морфологического, так и химического, иммунобиологического статуса клеток под влиянием патогенных факторов (Г.Ф. Коромыслов, 1976; А.В. Чучунов, 1993; А.Г. Незавитин, 1994; И.М. Донник, 1995, 1997 и др.).
Данные последних лет показали, что в патогенезе лейкоза существует стадия, когда комплекс антиген + антитело сорбируется на поверхности эритроцита и затем разносится в кроветворные органы (красный костный мозг, печень), где происходит воздействие на
стволовые клетки, В - лимфоциты. Имеются также публикации, ї которых раскрывается природа и прочность связей в гемопротеиде. зависящих от действия ряда факторов: гомеостаза, температуры, давления, рН среды, интенсивности солнечного света и УФ излучение (М. Петуц, 1966; Б.Ф. Сухомлинов, 1972; О.М. Полторак, Е.С. Чухрай, 1971; M.F. Pezutz, 1976; Л.А. Блюменфельд, 1977; Г.А. Харбури Р.Г. Маркс, 1978; Д.М. Рифкинд, 1978).
Молекулы гемопротеидов служат удобными модельными системами для биофизических исследований: в области фотофизики і фотохимии гемоглобина, изменений энергии между гемом и глобином, взаимовлияний изменений структурного, электронного состояния, а так же фотозащитных и фотосенсибилизирующих зффектої гемопротеидов (Ю.А. Владимиров, 1965; К. Смит, Ф. Хонсуолт, 1972 О.А. Азизова, 1975; И.Д. Волотовский, 1979; К.М. Львов, 1979; Д.И Дошулкин, 1979; И.И. Сапежский, 1988; Н.Л. Векшин, 1988; Ю.А Владимиров, А.Я. Потапенко, 1989; В.Г. Артюхов, 1995).
Одним из важных вопросов, связанным с выяснением механизмов повреждений Q-связывательных способностей гемосодержащи? белков в условиях развития острых и хронических инфекционны> заболеваний, ведущих к изменению в составе крови, является качественное и количественное взаимодействие иммунных и ферментны> комплексов с эритроцитами. В связи с этим возникает необходимое установления достоверной закономерности конформационых изменений, возникающих в структурах гемоглобина при развитии лейкоз? у крупного рогатого скота. Осуществление таких исследований воз можно при наличии современных спектрофотометрических приборов.
Тема диссертационной работы вошла самостоятельным разделом в комплексную тему Института ветеринарной медицины ОмГА\ и имеет номер государственной регистрации 01. 83. 0057603.
Цель и задачи исследований. Цель исследований заключаласі в разработке методологических подходов использования спектрофо тометрии для диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
Для достижения поставленной цели необходимо было решиті следующие задачи:
- определить оптимальные условия подготовки гемолизата дш проведении спектрофотометрических исследований;
выявить зависимость между коэффициентами поглощенш интенсивности излучения световых волн длинной от 264 до 610 HM I гемолизате РИД - позитивных и больных лейкозом коров;
изучить влияние сроков исследования и разных температур на показатели крови животных при спектрофотометрии;
провести сравнительную оценку эффективности спектрофо-тометрического и традиционного гематологического методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области.
Научная новизна. На базе спектрофотометрических исследований гемолизата крупного рогатого скота разработаны методологические подходы к новому гематологическому методу диагностики лейкоза животных. Выявлена положительная корреляция между коэффициентами поглощения светового излучения в гемолизате крови от РИД - позитивных и больных лейкозом коров. Проведена сравнительная оценка традиционного и предлагаемого методов по выявлению больных лейкозом крупного рогатого скота в экспериментальных и производственных условиях. За счет изменения объекта исследования - гемолизата вместо клеток крови, стало возможным проводить исследования в течение 96 часов при хранении проб крови в интервале температур от +10 С до + 20 С и до 3 месяцев при температуре от - 6 С до - 18С.
Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая ценность работы заключается в том, что расшифрованы молекулярно-клеточные механизмы изменений, происходящие в эритроцитах РИД-позитивного и больного лейкозом крупного рогатого скота. Выявлены различия коэффициентов поглощения световых волн гемолизатов в спектрах при фотометрии с учетом влияния температуры и срока хранения проб крови на физико-химические свойства водных растворов гемоглобина.
Практическая значимость работы состоит в том, что изысканы методологические подходы использования спектрофотометрии, позволившие предложить новый метод экспресс - диагностики лейкоза крупного рогатого скота, который дает возможность качественно, с высокой достоверностью за счет автоматизации процесса исследований с помощью ПЭВМ ставить диагноз на данное заболевание.
На защиту выносится:
-
Экспериментальное обоснование нового гематологического метода (спектрофотометрический) диагностики лейкоза.
-
Сравнительная оценка эффективности традиционного и разработанного гематологического метода диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы положены: на научно-практической конференции в ОмГАУ (г. Омск 1997);
на научно-практической конференции, посвященной 80-летию ОмГАУ (г. Омск. 1998); на заседании кафедры эпизоотологии инфекционных болезней с-х. животных ИВМ ОмГАУ (1998); на ученом совете ВНИИБТЖ (г. Омск 1998).
Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 3 научные работы и подана заявка на изобретение.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список литературы, приложение. Работа иллюстрирована 8-ю таблицами, 7-ю рисунками и одной схемой. Список литературы включает 176 источников, в том числе 50 зарубежных.
