Содержание к диссертации
Стр,
ВВЕДЕНИЕ 4
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
КЛАССИФИКАЦИЯ РОТАВИРУСОВ 6
ЭПИЗООТОЛОГИЯ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 8
БИОЛОГИЯ РОТАВИРУСОВ 24
НАТОГЕННОСТЬ И АНТИГЕННЫЕ ВЗАШДОДЕИСТВИЯ
МЕВДҐ РОТАВИРУСАМИ . 28
ИММУНИТЕТ БРИ РОТАВИРУСЯО/І ИНФЕКЦИЙ 36
ДИАГНОСТИКА РОТАВИРУСНО/І ИНФЕКЩ/Ш 39
ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНВДИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ТЕЛЯТ ' 45
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ 51
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 51
I. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ 51
Приготовление первично-трипсинизированной культуры клеток почек эмбрионов коров /ПЭК/ 51
Получение сублинии клеток почек эмбрионов коров /ПЭК/ и изучение изменений морфологии клеток в монослое под воздействием различных факторов 54
Отработка методики культивирования лабораторного штамма ротавируса >А II в монослоях клеточных культур ПЭК и СПЭВ, выращенных на покровных стеклах . 55
Обнаружение специфического ротавирусного антигена в клеточных культурах ПЭК и СПЭВ на покровных стеклах, инфицированных лабораторным штаммом ротавируса обезьян SA II 57
Гипериммунизация коз 58
Гипериммунизация морских свинок 58
Гипериммунизация кроликов 59
Прямой метод реакции иммунофлюоресценции 60
Непрямой метод реакции иммунофлюоресценции 60
1.10. Обнаружение ротавирусного антигена при помощи
* ' РИФ в материалах, отобранных от больных и пав-
ших с признаком диареи новорожденных телят 61
Приготовление мазков из фекалий в полевых условиях 63
Приготовление мазков из фекалий в лаборатории 63
Приготовление мазков со слизистой прямой кишки больных диареей телят 64
Обнаружение ротавируса в фекалиях больных диареей телят на культурах клеток ПЭК и СПЭВ в РИФ 64
Приготовление мазков-отпечатков из слизистой тонкого отдела кишечника павших от диареи новорожденных телят 65
Приготовление гистосрезов стенки тонкого отдела кишечника павших от диареи телят для исследования в РИФ 66
Выяснение возможности титрования ротавируса в суспензии клеток СПЭВ при помощи РИФ 67
Исследование возможности использования РИФ при
* ' титровании ротавируса и постановке реакции ви-
руснейтрализации 68
I.X8.I. Титрование в РИФ ротавируса >А II 68
I.I8.2. Постановка реакции нейтрализации на клетках
ПЭК и СПЭВ по ЦПД и РИФ 69
2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 72
2.1. Приготовление первично-трипсинизированной
' культуры почек эмбрионов коровы /ПЭК/ 72
Получение сублиний ПЭК и изучение изменений морфологии клеток в монослое под воздействием различных факторов 78
Отработка методики культивирования лабораторного штамма ротавируса SA II в монослоях клеточных культур ПЭК и СПЭВ " 84
Обнаружение спевдфического ротавируоного антигена в клеточных культурах ПЭК и СПЭВ на покровных стеклах, инфицированных лабораторным штаммом ротавируса обезьян SA II 86
Результаты исследований в РИФ материалов от
больных и павших с диареей новорожденных телят 90
Исследование возможности использования реакции
иммунофлюоресценции при титровании ротавируса
и постановке реакции вируснейтрализации 102
ОБСУЖДЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ 106
ВЫВОДЫ 115
Практические предложения 117
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 118
_ 4 -
Введение к работе
Продовольственная программа СССР, принятая Майским Пленумом ЦК КПСС /1982/, имеет огромное значение не только для Советского Союза, но и для развития животноводства в развивающихся странах, в том числе и в республике Камерун. Для успешного решения программы необходимо проводить последовательную интенсификацию животноводства и комплекс мероприятий, направленных на оздоровление животных, на разработку мер против инфекционных заболеваний. Среди этих болезней особое место занимают заболевания желудочно-кишечного тракта молодняка крупного рогатого скота, которые представляют наибольшую опасность для крупных животноводческих комплексов и специализированных хозяйств. Возбудителями этих заболеваний очень часто являются различные вирусы* рота-, корона-, адено-, парвовирусы и другие, которые могут вызывать инфекции как самостоятельно, так и в различных сочетаниях /В.В.Никольский, 1964; В.Н.Сюрин и др., 1972; Е.А.Краснобаев, 1972; А.И.Собко, 1981; et ai., , 1974;
Orstavik ot al. , 1976/.
В последние годы заметное распространение приняла ротавя-русная диарея новорожденных телят, которая наносит наиболее существенный экономический ущерб скотоводству.
Большое количество различных заболеваний новорожденных животных, сопровождающихся диареей, обусловливают необходимость быстрой и точной постановки диагноза, что является одним из первоочередных и важных звеньев в комплексе лечебно-профилактических мер при ротавирусной диареи новорожденных телят. Су-
ществующие методы лабораторной диагностики этого заболевания трудоемки, требуют значительных затрат и современное вирусологическое оборудование, в связи с чем используются, в основном, в оснащенных научных лабораториях, а практические специалисты диагностируют эти заболевания на основе клинике-эпизо-отологических данных. Пока ветеринарная практика не располагает простыми и доступными методами лабораторной диагностики ротавирусной инфекции.
Все это послузшло для нас основанием к разработке экспресс-метода лабораторной диагностики ротавирусной диареи новорожденных телят с использованием реакции иммунофлюоресцен-ции. Результаты проведенных исследований изложены в предлогае-мой диссертации.
