Содержание к диссертации
Введение
1. Литературный обзор 8
1.1. Лептоспироз и его краткая история 8
1.2. Этиология и морфология лептоспироза 10
1.3. Изменчивость лептоспироза 14
1.4. Эпизоотологические данные 15
1.5. Патогенез 18
1.6. Клинические признаки 20
1.7. Паталогоанатомические изменения 22
1.8. Диагноз и дифференциальный диагноз 23
1.9. Лечение больных животных 28
1.10. Иммунитет и специфическая профилактика 29
1.11. Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом 31
2. Собственные исследования 34
2.1. Материалы, методы и объем исследований 34
2.2. Результаты исследований 38
2.2.1. Эпизоотология лептоспироза лошадей 38
2.2.1.1. Хозяйственно-экологические предпосылки развития эпизоотического процесса лептоспироза лошадей 38
2.2.1.2. Удельный вес заболевания лошадей лептоспирозом и его экологическая ниша 44
2.2.1.3. Территориальные границы лептоспироза в Донецкой области Украины 48
2.2.2. Диагностика лептоспироза у лошадей 53
2.2.2.1. Особенности клинических признаков лептоспироза лошадей 53
2.2.2.2. Паталогоанатомические изменения при лептоспирозе лошадей 57
2.2.2.3. Дифференциальная диагностика лептоспироза от других инфекций 63
2.2.2.4. Выделение, идентификация культур лептоспир 70
2.2.2.5. Серологическая диагностика 75
2.2.2.6. Этиологическая структура лептоспир у лошадей 82
2.2.2.7. Определение биохимических свойств сывороток крови у лошадей 90
2.2.2.8. Определение гематологических свойств крови у лошадей . 95
2.2.3. Терапия лептоспироза лошадей 100
2.2.4. Специфическая профилактика 119
2.2.5. Схема ветеринарно-санитарных, профилактических и лечебных мероприятий при лептоспирозе лошадей 123
2.2.6. Экономическая эффективность лечебных мероприятий при лептоспирозе лошадей 128
3. Обсуждение полученных результатов 141
Выводы 145
Практическое использование результатов исследований 147
Список литературы 148
Приложения 165
- Этиология и морфология лептоспироза
- Материалы, методы и объем исследований
- Выделение, идентификация культур лептоспир
Введение к работе
Актуальность темы: Лептоспироз является опасным зооантропоноз-ным заболеванием. Зарегистрирован на всех континентах и во многих странах. Лептоспиры имеют широкий патогенный спектр. Болеют животные разных видов: крупный рогатый скот, свиньи, лошади, овцы, козы, собаки и другие животные, а также человек.
Возбудитель лептоспироза - Leptospira interrogans семейства Leptospiraceae включает 202 вида патогенных сероваров. Каждый серотип может вызывать заболевание животных лептоспирозом самостоятельно или в сочетании с другими, в виде смешанной инфекции. Разновидности возбудителей лептоспироза морфологически однотипны, они отличаются друг от друга по антигенам, иммунобиологическим и патогенным свойствам. В Республике Украина установлено семь серогрупп патогенных лептоспир, а в Российской Федерации - 20. У каждого серотипа имеется свой постоянный хозяин, к которому он приспособился.
В Донецкой области Украины в 1994-2001 годах лептоспироз установлен среди крупного рогатого скота и свиней. В 1999-2002 годах лептоспироз зарегистрирован у лошадей в конноспортивных базах в 1,2-5,6% случаев.
Из домашних животных наиболее опасны как выделители свиньи, овцы и крупный рогатый скот, из диких - все мышевидные грызуны и крысы.
Лептоспироз у лошадей изучен крайне недостаточно, в то время как у них имеются особенности проявления клинических признаков и патолого-анатомических изменений. Постановка диагноза на лептоспироз взрослых лошадей из-за отсутствия практически значимых разработок по изучению эпизоотологии, диагностики, профилактики заболевания крайне затруднена. Не изучены показания крови у больных лептоспирозом животных, экологическая структура лептоспир, вызывающих это заболевание у лошадей. Отсутствует схема лечения больных животных. Недостаточная изученность этих вопросов и определила выбор темы.
Цели и задачи исследования: Изучить особенности эпизоотического процесса лептоспироза у лошадей, клинические признаки и патологоанато мические изменения; усовершенствовать схему лечебно-профилактических мероприятий при этом заболевании.
Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:
1) Изучить особенности эпизоотического процесса лептоспироза животных в условиях Донецкой области Украины - нозологический профиль инфекционной патологии, удельный вес лептоспироза среди других инфекционных заболеваний, территориальные границы.
2) Изучить этиологическую структуру возбудителя лептоспироза у лошадей.
3) Изучить особенности клинического течения и патологоанато-мических изменений при лептоспирозе у лошадей.
4) Изучить биохимические и морфологические изменения крови у больных лептоспирозом лошадей.
5) Разработать схему лечения больных лептоспирозом лошадей.
6) Усовершенствовать схему профилактики и мер борьбы с лептоспирозом у лошадей.
Научная новизна: Впервые в условиях конноспортивной базы «Локомотив»:
- Изучены особенности эпизоотического процесса лептоспироза животных, нозологический профиль инфекционной патологии и место лептоспироза в нем, территориальные границы заболевания;
- Изучена этиологическая структура возбудителя лептоспироза у лошадей;
- Изучены особенности клинических и патологоанатомических признаков лептоспироза у лошадей;
- Изучены биохимические и морфологические изменения крови у больных лептоспирозом лошадей;
- Разработана схема лечения больных лептоспирозом лошадей с применением Флоксила «С»;
- Изготовлена новая противолептоспирозная вакцина с серовара-ми L. polonica, L. icterohaemorrhagiae, L. bratislava и L. canicola;
- Усовершенствована схема профилактики и мер борьбы с лептоспирозом у лошадей.
Рекомендации производству:
1. Научно обоснована необходимость применения для лечения лептоспироза у лошадей препарата Флоксила «С».
2. На основании проведенных исследований этиологической структуры лептоспир у лошадей рекомендуется для специфической профилактики лептоспироза применение вакцины, содержащей серова-ры L. polonica, L. icterohaemorrhagiae, L. bratislava и L. canicola.
3. Разработана и рекомендована к использованию схема лечебно-профилактических мероприятий для борьбы с лептоспирозом лошадей.
4. Предложены для внедрения в ветеринарную практику рекомендации «Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом лошадей», утвержденная НТС Управления ветеринарии Донецкой области Украины протокол № 2 от 3.10.2005г.
Основные положения, выносимые на защиту:
-Особенности эпизоотического процесса лептоспироза животных в Донецкой области, роль и место лептоспироза в формировании нозологического профиля инфекционной патологии лошадей; территориальные границы заболевания.
- Этиологическая структура возбудителя лептоспироза у лошадей.
- Биохимические и морфологические изменения крови у больных лептоспирозом лошадей.
- Эффективность лечебных мероприятий с применением новых препаратов.
- Противолептоспирозная вакцина для иммунизации лошадей.
- Схема профилактики и мер борьбы с лептоспирозом у лошадей. Реализация результатов исследований:
Схема профилактических и лечебных мероприятий с использованием Флоксила «С» и противолептоспирозной вакцины применяется успешно на конноспортивной базе «Локомотив» и ООО ПКФ Клейнода г.Макеевки и СТОВ Богоявленское Марьинского района Донецкой области, а также при проведении практических занятий на кафедрах эпизоотологии; микробиоло гии, вирусологии и патанатомии Донского Государственного Аграрного Университета.
Внедрение схемы профилактических и лечебных мероприятий в ветеринарную практику позволит сохранить от заболевания лептоспирозом спортивных лошадей.
Апробация работы:
Результаты исследований и основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции «Проблемы развития аграрного сектора экономики и пути их решения» (пос. Персиановский, 2003г.), на Международной конференции «Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных» (г.Ставрополь, 2003г.), на 4-й научно-практической конференции по болезням лошадей (г.Москва, 2003г.), на Международных научно-практических конференциях «Стратегия развития АПК: технология, экономика, переработка, управление» (пос. Персиановский, 2004, 2005 гг.). Опубликовано 5 статей и 1 рекомендации.
Практическое использование результатов исследования:
На основании полученных данных разработана и рекомендуется к внедрению схема лечебно-профилактических мероприятий при лептоспирозе лошадей.
Научные положения диссертации использованы при подготовке рекомендаций: «Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом лошадей».
Результаты наших исследований используются в учебном процессе на кафедрах эпизоотологии; микробиологии, вирусологии и патанатомии Донского Государственного Аграрного Университета.
Структура диссертации:
Диссертация изложена на 165 страницах компьютерного текста (Microsoft Word) и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы и предложения, список литературы и предложения производству. Работа иллюстрирована 17 рисунками, 33 таблицами и 12 фотографиями. Список литературы включает 152 источника, в том числе 56 иностранных.
Этиология и морфология лептоспироза
Возбудителями лептоспирозных заболеваний у животных и людей являются особые спирохетоподобные микроорганизмы, которые, по данным Мюллера (1950), принадлежат к микробам бактерийной природы, к самостоятельному роду лептоспир. В 1983 году Международный комитет по таксономии лептоспир и спирохет выделил лептоспиры в самостоятельное семейство Leptospiraclae, в порядке Spirochaetalis, в которое включен род Leptospira. Род Leptospira включает в себя две группы лептоспир:
1. Сапрофитные (непатогенные) лептоспиры (Leptospira - biflexa) - сво бодноживущие, безвредные для животных организмов. Средою их обитания является вода различных водоёмов или увлажнённая почва, где они обычно постоянно живут и размножаются, легко перенося низкие и высокие температуры. Вид сапрофитных лептоспир содержит 63 серовара и 38 серологических групп.
2. Патогенные лептоспиры (Leptospira-interogans) живут и размножаются в организме животных, питаясь за счёт белка и других веществ, содержащихся в крови хозяина. Вне животного организма, в естественных условиях, они существовать длительное время не могут. Вид патогенных лептоспир включает 202 серовара, которые объединены в 23 серогруппы (Кмети и Дик кен, 1986).
Каждый из этих многочисленных серотипов патогенных лептоспир может вызвать заболевание животных лептоспирозом самостоятельно или в сочетании с другими, в виде смешанной инфекции. При этом животные, переболевшие в результате заражения одним серотипом лептоспир, приобретают иммунитет только к данному серотипу, но они могут заразиться и болеть при внедрении в организм других серотипов лептоспир. Это создаёт чрезвычайно большую трудность при организации специфической профилактики лептоспироза.
Все эти разновидности возбудителей лептоспирозных заболеваний животных и людей морфологически неотличимы. Они отличаются друг от друга только по антигенным, иммунобиологическим и патогенным свойствам.
На территории бывшего СССР выявлено 19 различных сероваров патогенных лептоспир:
Говоря о столь большом числе патогенных лептоспировозбудителей, следует отметить, что хотя каждый из этого большого числа серотипов может вызвать лептоспироз у различных видов домашних и диких животных и у людей, у каждого серотипа имеется свой, постоянный хозяин, к которому он приспособился и в организме которого находит наиболее благоприятные условия для своего питания, размножения, длительного существования и проявления патогенных свойств. Для того, чтобы патогенные лептоспиры, переселившиеся из организма больных или переболевших лептоспирозом животных одного вида в организм другого вида животных, смогли в организме нового хозяина свободно размножаться, вызывать заболевание и длительное время в нём сохраняться, им необходимы определённое время и соответствующие условия для адаптации (43, 49, 72, 90, 97, 109, 124, 125, 126, 139).
Существует также мнение, что сапрофитные лептоспиры могут приобрести патогенные свойства в любое время, при наличии для этого соответствующих условий.
Этиологическая структура лептоспироза в различных природно-географических зонах отличается по числу и сочетанию сероваров лептос-пир, что создает определенные трудности в борьбе и профилактике заболевания (82).
Материалы, методы и объем исследований
Работа выполнялась с 2002 по 2005гг. в соответствии с программой диссертационной работы тема 04 номер госрегистрации - 01.2.00.10.60.88 на кафедре микробиологии, вирусологии и патанатомии ДонГАУ, в Управлении ветеринарной медицины г. Макеевки Донецкой области Украины, в КСБ «Локомотив» и других хозяйствах.
С целью изучения эпизоотологии лептоспироза лошадей и особенностей его возникновения с распространения у животных проанализированы и проведены статистические исследования:
- эпизоотического состояния по лептоспирозу сельскохозяйственных животных в хозяйствах Донецкой области (отчеты ветуправления);
- данных лабораторных исследований областной ветлаборатории материала от грызунов и других объектов.
В работе использован комплексный эпизоотологический подход, включающий современные методы эпизоотологической статистики, эпизоотологического обследования, данные бактериологических, серологических, гематологических и биохимических исследований (табл. 2.1.).
Анализировали причины возникновения лептоспироза
сельскохозяйственных животных, территориальные границы инфекции, этиологическую структуру заболевания. Изучали нозологический профиль инфекционной патологии лошадей и место лептоспироза в нем. Клинические признаки и патологоанатомические изменения при лептоспирозе лошадей изучали в КСБ «Локомотив» г. Макеевки Донецкой области. Проводили клинический осмотр 57 животных, выясняли срок заболевания, определяли характер его течения.
От 47 лошадей исследовали мочу методом микроскопии. Обследовали 136 трупов грызунов на лептоспироз бактериологическим методом. Выделили 22 культуры лептоспир, которые идентифицировали с диагностическими сыворотками 7 серогрупп.
Для серологического исследования в РМА брали кровь от 57 лошадей, в том числе и вновь приобретенных в динамике с 2002 по 2005 годы, всего 830 проб. При постановке РМА использовали диагностический набор, состоящий из 7 штаммов лептоспир различных наиболее часто встречающихся серогрупп возбудителя.
Исследования проводили согласно действующей документации: ГОСТ 25386-91 «Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспирозы», «Инструкции о мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза», «Методическим указаниям по лабораторной диагностике лептоспироза животных» от 15.10.1975г.
Проведено 620 гематологических исследований на наличие гемоглобина, лейкоцитов (эозинофилов, нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, сегментоядерных), эритроцитов, СОЭ.
Биохимические исследования 792 проб проводили на общий белок, альбумины, глобулины, кальций, фосфор, каротин, резервную щелочность.
Опыты про лечению лошадей, больных лептоспирозом и лептоспироносителей, проводили на 36 лошадях (табл. 2.2.) в КСБ «Локомотив» г. Макеевки, для этих целей сформировали три группы лошадей.
Профилактические мероприятия осуществляли путем иммунизации вакциной против лептоспироза лошадей, изготовленной Киевским институтом экспериментальной ветеринарии из штаммов, выделенных нами от лошадей после определения этиологической структуры лептоспир в КСБ «Локомотив». Вакцинировали 59 голов, ревакцинировали дважды 51 и 48 лошадей соответственно.
Экономическую эффективность лечения лошадей определяли в соответствии с «Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» от 21.02.1997 года.
На основании результатов исследований усовершенствовали схему противолептоспирозных мероприятий для лошадей.
Выделение, идентификация культур лептоспир
При наружном осмотре животных, больных инфекционным энцефаломиелитом, обнаруживают травмы в области головы и конечностей, сухость кожи, истощение, желтушность слизистых оболочек и склеры. Трупное окоченение выражено слабо. Подкожная клетчатка желтушна, в области головы, груди и конечностей - серозно-геморрагические инфильтраты. Кровь темно-красного цвета, густая, легкие отечны. На эпи- и эндокарде, в почках отмечаются кровоизлияния. Печень уменьшена в объеме, наполнена кровью, дряблая, мозаичной окраски. Почки застойны. Головной и спинной мозг ги-перемирован, отечны, иногда можно обнаружить точечные кровоизлияния.
Патологогистологические исследования внутренних органов характеризуют жировую дистрофию в печени, в почках - жировую дегенерацию и мутное набухание эпителия извитых канальцев, в головном мозге - дегенеративные изменения в ганглиозных клетках, набухание и пикноз ядра. При вскрытии трупов животных, павших от остро и подостро протекающей инфекционной анемии, слизистые оболочки и коньюктива бледны, слегка желтушны с точечными кровоизлияниями. Подкожная клетчатка жел-тушна, пронизана кровоизлияниями, в отдельных местах содержит инфильтраты. Кровь водянистая, светло-красного цвета. Лимфатические узлы сочные набухшие, гиперемированы. Особенно отмечается увеличение регионарных лимфоузлов печени и селезенки. Кровоизлияния наблюдаются на эпи- и эндокарде. Селезенка увеличена, кровенаполнена, имеет кровоизлияния. Печень увеличена, мозаичной окраски, мягкой консистенции, светло- глинистого цвета или ржаво-коричневого. Почки увеличены, пронизаны кровоизлияниями.
Для хронического течения болезни характерно истощение трупов. Кровоизлияния носят очаговый характер, выражены слабее. Лимфатические узлы увеличены, плотные, серо-белого цвета. Селезенка увеличена незначительно, плотной консистенции, светло-красного цвета, на разрезе зернистая. Печень, в одних случаях плотная, бурового цвета, в других - плотной консистенции с мускатным рисунком.
При патологогистологическом исследовании в паренхиматозных органах, особенно в селезенке и печени, обнаруживают пролиферацию эндотели-альных клеток с обильным отложением гемосидерина (острое и подострое течение). При хроническом течении в селезенке наблюдается увеличение лимфоидных клеток , значительное уменьшение или даже полное отсутствие гемосидерина. В печени резко выражены пролиферация лимфоидных клеток , гемосидероз, дегенерация центральных участков долек печени.
Основным методом диагностики при инфекционном энцефаломиелите служит патологогистологическое исследование кусочков печени и различных отделов мозга. Серологические методы диагностики не разработаны. При ИНАН (инфекционной анемии) проводят серологическое исследование сыворотки крови лошадей в реакции диффузной преципитации (РДП), гистологические и гематологические исследования (ускорение РОЭ, появление в крови гемосидероцитов).
Учитывая преобладание бессимптомных форм течения заболевания лептоспироза у животных в виде лептоспироносительства и лептоспирознои имуннизирующей субинфекции, дифференциальный диагноз, как упоминалось ранее, ставится на основе комплексной диагностики с учетом эпизоото-логических, клинических, патологоанатомических и лабораторных исследований.
Исходя из вышеизложенного, мы можем проследить различия в дифференциальной диагностике вышеуказанных заболеваний от лептоспироза в эпизоотологии:
- при инфекционном энцефаломиелите и инфекционной анемии (ИНАН) лошадей отмечается сезонность заболевания, лептоспироз же протекает в любое время года.
- заражение при лептоспирозе в основном происходит алиментарно при приеме воды и корма, содержащих лептоспир, но может происходить и через поврежденную кожу и слизистые оболочки при купанье в непроточных водоемах или при выпасе животных на заболоченных участках неблагополучных пастбищ, при инфекционном энцефаломиелите и ИНАН - заражение чаще происходит трансмиссивным путем передачи (через кровососущих насекомых).
Учитывая сходство клинических проявлений вышеуказанных заболеваний, патологоанатомических изменений, все же основную роль в дифференциации лептоспироза, имеет лабораторная диагностика, которая включает в себя различные методы.
