Содержание к диссертации
Введение
1. Общая характеристика работы 4
2. Обзор литературы 10
2.1. Основные свойства рабического вируса 11
2.2. Эпизоотологические данные по бешенству животных 13
2.2.1. Распространение бешенства в сопредельных для Европейской территории России странах 14
2.2.2. Распространение бешенства в Южном Федеральном Округе России 22.
2.2.3. Сезонность, интенсивность и цикличность проявления эпизоотического процесса при бешенстве 24
2.2.3.1. Сезонность проявления бешенства 24
2.2.3.2. Цикличность эпизоотии бешенства 27
2.2.4. Резервуары и источники вируса бешенства 30
2.2.4.1. Резервуары и источники рабического вируса при эпизоотиях городского типа 30
2.2.4.2. Резервуары и источники рабического вируса при эпизоотиях природного типа 31
2.3. Методы диагностики бешенства 34
2.4. Методы профилактики и борьбы с бешенством животных 36
3. Собственные исследования 42
3.1. Материал методы исследований 42
3.2. Результаты собственных исследований 50
3.2.1. Характеристика эпизоотии бешенства животных в Ставропольском крае 50
3.2.1.1. Общая характеристика природно-климатических условий Ставропольского края 50
3.2.1.2. Анализ особенностей динамики проявлений эпизоотического процесса бешенства в Ставропольском крае 52
3.2.1.3. Распространение бешенства в Ставропольском крае по различным природно-климатическим зонам 58
3.2.1.4. Изучение цикличности эпизоотического процесса бешенства в Ставропольском крае 61
3.2.1.5. Сезонность эпизоотии бешенства животных в Ставропольском крае 63
3.2.2. Картографирование очагов бешенства и краткая их характеристика 72
3.2.3. Клинические признаки бешенства у животных 83
3.2.4. Патологоанатомические и гистологические изменения при бешенстве животных 90
3.2.5. Диагностика бешенства животных 91
3.2.5.1. Отбор патологического материала и его транспортировка .92
3.2.5.2. Обнаружение телец-включений 92
3.2.5.3. Обнаружение антигена вируса бешенства с помощью реакции преципитации 95
3.2.5.4. Обнаружение антигена рабического вируса с помощью реакции иммунофлуорисценции (РИФ) 96
3.2.5.5. Обнаружение вируса бешенства методом биопроб 98
3.2.5.6. Дифференциальная диагностика бешенства от других сходных заболеваний 101
3.2.6. Профилактика и меры борьбы с бешенством в Ставропольском крае 103
4. Обсуждение результатов исследований 112
5. Выводы 128
6. Практические предложения 130
7. Список используемой специальной литературы 131
- Распространение бешенства в сопредельных для Европейской территории России странах
- Характеристика эпизоотии бешенства животных в Ставропольском крае
- Обнаружение антигена вируса бешенства с помощью реакции преципитации
Введение к работе
Актуальность темы. Бешенство относится к числу наиболее опасных болезней вирусной этиологии. Оно регистрируется на всех континентах с широким распространением заболевания, кроме Австралии и Антарктиды (И.А. Ба-кулов, В.А. Бударков, И.Ф. Вишняков и др., 1998). Бешенство представляет важную проблему для ветеринарной медицины, экологии и социально - экономического развития. В изучении свойств вируса, эпизоотологии, эпидемиологии, методов диагностики бешенства имеются значительные достижения (Б.Л.Черкасский, 1985; М.А.Селимов, 1987, 1998; В.А.Ведерников, С.А.Юрик, 1997; И.Ф.Вишняков, В.А.Седов, В.А.Ведерников, В.Е.Землянова, 1998; В.М. Авилов, В.А.Седов, С.А.Коломыцев и другие 1998; В.Н. Сюрин, А.Я,. Самуй-ленко, Б.Н. Соловьев, Н.В. Фомина, 1998; Л.К. Груздев, В.И. Уласов, К.Н. Груздев, 2000).
Однако повышение эффективности мероприятий по борьбе с бешенством требует большего внимания, особенно в региональном плане. В каждой региональной зоне имеются свои природно-климатические, географические и социально — экономические особенности, что значительно влияет на эпизоотический процесс бешенства. Таким регионом является и Ставропольский край. Изучение особенностей эпизоотического процесса бешенства в крае является актуальным, так как он относится к числу наиболее неблагополучных по данному заболеванию среди других регионов Северного Кавказа. Край имеет особые эколого-географические и социально - экономические условия. Поэтому уточнение закономерностей проявления эпизоотического процесса бешенства необходимо для прогнозирования и реальной оценки эпизоотической обстановки. Большой опыт ветеринарных специалистов края даёт возможность провести оценку методов диагностики заболевания, разработать и проводить научно обоснованные профилактические мероприятия.
Известно, что резервуаром и источником вируса бешенства являются дикие и домашние плотоядные, особенно животные семейства псовых (Canidae), кошачьих (Felidae). Они же являются основными источниками и распространителями вируса. Эпизоотический процесс бешенства связан с экологией указанных носителей и распространителей рабического вируса, а именно с их численностью, плотностью размещения, биологией размножения. Немаловажное значение для Ставрополья имеют военные действия в Чеченской Республике. В течение десяти лет здесь проходили и продолжаются вооруженные столкновения. Дикие и домашние животные мигрировали и мигрируют из зоны военных действий в более спокойные регионы, что естественно повлияло на эпизоотическую ситуацию по бешенству в крае, особенно в северо-восточных районах края. Кроме того, в последние годы изменился характер эпизоотических процессов бешенства. Помимо эпизоотии бешенства животных природного типа, довольно часто стали регистрироваться эпизоотии бешенства смешанного и городского типов.
С учётом изложенного была определена цель и поставлены задачи иссле-дований по данной проблеме.
Цели и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение особенностей мониторинга эпизоотии бешенства в Ставропольском крае и на основании полученных результатов дать оценку методов диагностики и совершенствовать систему профилактики заболевания. Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:
• Провести мониторинг эпизоотологической ситуации по бешенству за 1971 -2003 годы;
• составить картосхему распространения бешенства домашних, диких плотоядных и сельскохозяйственных животных в Ставропольском крае за период 1993 - 2002 годы;
• провести анализ методов диагностики бешенства и дать оценку их эффективности;
• совершенствовать систему оптимальных мероприятий по профилактике бешенства животных в крае;
• разработать методические рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации бешенства в Ставропольском крае.
Научная новизна темы. Впервые для Ставропольского края наиболее полно изучена эпизоотологическая ситуация по бешенству животных с учетом общей характеристики природно-климатических, географических и социально-экономических условий данного региона ЮФО. Дан полный анализ динамики бешенства животных в целом по краю за 1971-2002 годы, а также в разрезе четырех природно-климатических зон края за 1993-2002 годы. При этом пэказано, что в структуре бешенства в последние 10 лет в первой и второй агроклиматических зонах преобладающими были сельскохозяйственные животные (КРС, овцы, лошади и свиньи), а в третьей и четвертой зонах - домашние и дикие плотоядные (собаки, кошки, лисицы, волки и другие). Показано, что в крае имеют место три типа эпизоотии бешенства: природный, смешанный и городской. Кроме того, изучены цикличность, сезонность и интенсивность эпизоотии бешенства. При оценке эпизоотии бешенства впервые составлена картосхема распространения заболевания в крае в разрезе природно-климатических зон.
Дана оценка методов диагностики бешенства. Она должна быть комплексной с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патолого-анатомических изменений. Однако решающим в подтверждении бешенства являются лабораторные исследования. Из них наиболее полными и доступными являются реакция иммунофлуоресценции анализа (РИФ) и биопробы на лабораторных животных, обеспечивающие 100%-ную гарантию постановки диагноза на бешенство.
Применяемые для профилактики вакцины обеспечивают снижение уровня заболевания животных бешенством в неблагоприятных пунктах и угрожаемых зонах Ставропольского края. Что касается оральной вакцинации диких животных методом применения вакцин с приманками, то для края он оказался затруднительным, особенно на стадии учета эффективности такой иммунизации.
Практическая значимость работы и реализация результатов исследо-вания. Результаты исследований в виде рекомендаций используются в ФГУ «Ставропольская межобластная ветеринарная лаборатория», районных и зональных ветеринарных станциях. Основные их положения отражены в следующих научно-технических документах:
• Методические рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации бешенства в Ставропольском крае (утверждены зам.министра, начальником отдела ветеринарии МСХ СК, Главным государственным ве Щ, теринарным инспектором Ставропольского края В.М. Парахиным 19 ап реля 2004 г).
• Картосхема распространения бешенства в различных агроклиматических зонах Ставропольского края, используемая как документ для прогнозирования заболевания, как в целом, так и в различных зонах региона (одобрена НТС МСХ СК на секции животноводства и ветеринарии 23 апреля 2004 года).
• Рекомендации районным ветеринарным станциям и ветеринарному пер-соналу по проведению мероприятий против бешенства по результатам экспертиз по диагностике заболевания.
• В порядке разъяснительной работы среди населения в 2000-2003 годах организована публикация в краевых журналах десяти работ ветеринарных специалистов по диагностике бешенства и организации ветеринарно-санитарных мероприятий по профилактике заболевания и его ликвидации.
Кроме того, материалы исследований используются в учебном процессе в Ставропольском ГАУ при чтении лекций и проведении лабораторных занятий по вирусологии и эпизоотологии. Ф Основные положения, выносимые на защиту:
• Особенности динамики проявлений эпизоотического процесса бешенства в Ставропольском крае позволяют расшифровать степень его распространения по краю в целом и в разрезе четырех природ но-климатических зон, а также установить структуру, очаговость, цикличность, сезонность и интенсивность эпизоотии заболеваний животных.
• Картографирование очагов бешенства используется при прогнозировании и организации мероприятий по профилактике заболевания.
• Комплексная диагностика, включающая методы эпизоотологиче-ских, клинических, патологоанатомических и лабораторных исследований, гарантирует 100 %-ную надежность в постановке диагноза на бешенство.
• Неспецифическая и специфическая профилактика позволяет обеспечить снижение уровня распространения и уровня заболеваний бешенством сельскохозяйственных животных в Ставропольском крае.
Апробация работы. Основные положения и результаты исследований, изложенные в диссертационной работе, доложены и одобрены на научных конференциях СтГАУ (1997, 2000, 2002, 2004 гг.), на второй региональной конференции по «Актуальным проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных на Северном Кавказе» (Донской ГАУ, 1999 г.), на НТС МСХ СК (2004 г).
Публикация результатов исследований. Основные научные положения и практические рекомендации опубликованы в шести работах в сборниках научных трудов Ставропольского и Донского ГАУ, в журналах «Вестник ветеринарии» и «Ветеринарная служба Ставрополья», а также в «Методических указаниях по диагностике, профилактике и ликвидации бешенства в Ставропольском крае».
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на страницах компьютерного текста, проиллюстрирована 16 таблицами, 16 рисунками, в том числе одной картосхемой. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов, методик, результатов исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы, включающего 200 источников, в том числе 73 зарубежных, а также приложения.
Распространение бешенства в сопредельных для Европейской территории России странах
В некоторых странах Европы раньше бешенство протекало как эндемическая инфекция. Эти страны в последующем стали начальными пунктами для возникновения эпизоотии бешенства среди волков и лисиц. Так в Германии, Франции, Италии, Польше в первой половине XX века, бешенство выявляли в основном у собак. Но затем эпизоотическая ситуация по бешенству изменилась. В годы второй мировой войны в бывшей Восточной Пруссии был обнаружен очаг лисьего бешенства (Wachendorfer, 1978). Он дал начало новой, природной эпизоотии, распространившейся на запад, юг и восток европейского континента. Поражались все новые и новые ранее благополучные территории. Если до 1965 года бешенство лисиц официально регистрировали лишь в восьми западноевропейских странах, т о в 1996 году - уже в 15.
В Польше первый очаг лисьего бешенства был обнаружен ещё в годы второй мировой войны, но заметный подъём заболеваемости лисиц начался лишь в 1956-1957 годах ( Baszynski, 1977). В дальнейшем интенсивность эпизоотии постоянно повышалась. Число выявленных случаев бешенства лисиц в период с 1967 по 1975 гг., возросло с 133 до 1176. Большинство этих случаев выявляли в районах, граничащих с Германий и Чехословакией, а также в некоторых районах центра и юго-востока страны. В 1984 году в 42 неблагополучных воеводствах было зарегистрировано 1555 случаев бешенства у животных, в том числе 942 - у лисиц (Serokowa, Labunska, Wsciklizna 1981; Badyoczek,1985). В 1985 году выявили 1073 случая болезни, в 1986 - 1987 (из них 739 - у лисиц). С 1987 по 1992 год число случае болезни возросло с 1686 до 3084. В 1996 году выявили 2526 случаев, из них 1780 у лисиц ( Rabies Bull. Eur., 1996). Первые 10 случаев занесенного из Польши бешенства диких животных были выявлены в 1947 году в северных районах Германии. В 1956- 1957 г.г. природная эпизоотия охватила всю территорию страны. В 1967 — 1976 годах зарегистрировали 13993 случая болезни, из которых 70,5% пришлось на лисиц, в 1965-1974 годах зарегистрировали более 40000 случаев бешенства животных, а в 1975-1983 годах - 61180, из них 73,1% - у лисиц. В бывшей ГДР за 1975 -1984 годы зарегистрировано 11690 случаев бешенства, из которых 89% пришлось на лисиц, в 1985 году выявлено 1650 случаев болезни, в 1986 году -1490, в том числе 1321 случай - у лисиц.
Распространяясь из Польши на юг, волна природной эпизоотии бешенства уже в 1947 — 1948гг достигла приграничных районов Чехословакии. Если в 1948 г. было зарегистрировано 146 случаев болезни (в основном у лисиц), то в 1975 году— 328 (Kauker,1975; Polak et al., 1976). До 1976 г., ареал болезни охватывал, преимущественно, горные районы на границах с Германией и Польшей, но затем началось дальнейшее распространение эпизоотии в глубь страны. В 1975 — 1984 годах в стране зарегистрировано 11690 случаев бешенства, из которых 89% пришлось на лисиц (Matouch,1985).
В 1966 году в результате заноса лисьего бешенства из Германии, возникла эпизоотия бешенства в Австрии, охватившая западную ее часть страны. В 1983 году на долю Австрии пришлось 6,7% случаев болезни, зарегистрированных в неблагополучных странах Европы. В 1985 году был отмечен очередной подъём заболеваемости (1741 случай). В 1987 году выявлено 2042 случаев бешенства, но с 1993 года началось снижение заболеваемости (675 случаев) до 14 случаев в 1996 году.
В Югославии продолжительное время преобладало бешенство городского типа. Но уже в 1996 году в Словении зарегистрировано 488 случаев бешенства различных животных, в том числе у 209 лисиц.
В Венгрии в её северо — восточной части выявились лишь единичные случаи. С 1954 по 1966 годы зарегистрировали всего лишь 94 случая заболеваний бешенством. Однако рост численности лисиц уже в 1967 году обусловил активизацию эпизоотии заболевания и к 1971 году она охватила всю территорию страны. За 1967-1976 годы было зарегистрировано 4808 случаев бешенства животных, главным образом лисиц. Затем произошел некоторый спад эпизоотии. За пять лет (1977-1981 годы) было зарегистрировано- 4503 случая бешенства у животных. В 1996 году вновь наблюдался подъем эпизоотии. За этот год было выявлено всего 1357 случаев бешенства животных, из них 1086 — у лисиц.
Первый занос бешенства, связанный с миграцией лисиц из Германии, произошел в Дании в 1964 году, когда выявили 83 случая болезни. Второй занос состоялся в 1969 году. Из 155 выявленных случаев бешенства 123 пришлись на лисиц. В сентябре 1977 года новая волна природного бешенства ещё раз пересекла датскую границу. В течение 1977-1982 гг. зарегистрировали 375 случаев болезни.
В Бельгии первые случаи бешенства лисиц (занос из Германии) выявлены в июне 1966 года. Эпизоотия в 1968 году достигла максимума (454 случая болезни), сменившегося резким спадом, и была ликвидирована в 1972 году. Однако в январе 1974 года зарегистрировали около 480 случаев болезни — второй пик эпизоотии, за которым вновь последовал заметный спад заболеваемости (Depierreus, 1971,1976). С 1981 года отмечается осложнение ситуации. В 1982 году выявлено более 600 случаев бешенства, в 1986 году - 342, в том числе 178 - у лисиц (Marchal et al., 1984). В 1986 году количество заболеваний снизилось до 44 случаев.
Бешенство диких животных в Румынии начали регистрировать с 1967 года. В 1968 году выявили 271 случай болезни у животных. Эпизоотия охватила вначале северные и западные районы страны и распространялась лисицами. За 1967 — 1976 годы на них пришлось 66% выявленных случаев бешенства, затем число заболеваний уменьшилось до 42 случаев в 1996 году.
Бешенство лисиц, из Германии, было занесено в Швейцарию (Steck, 1982), во Францию (Matthieu, 1971; Andral, Joubert, 1973), в Нидерланды (Smak, 1985). В 1977 году в северные районы страны Италии было занесено бешенство лисиц из Австрии, (Schoop, 1979; Irsaraetal., 1982). Позже сюда происходили новые заносы природного бешенства из Швейцарии, Франции, Югославии. Эпизоотия распространялась на юг страны и в 1985 году оказались неблагополучными 6 провинций, выявлено 126 случаев болезни.
Подобная ситуация по бешенству была в Греции (Mastroyanni, Mangana., 1982), в Испании (Fernandez, Rodriguez, 1976), других странах Европы.
Приведенный анализ показал, что главным центром природной эпизоотии бешенства по-прежнему в Европе оказалась Польша.
Характеристика эпизоотии бешенства животных в Ставропольском крае
При проведении мониторинга инфекционных заболеваний у животных и людей достоверность результатов научных исследований зависит от характера базы первичной информации, которая закономерно повышается при использо вании необходимых данных за многолетний период. В своей работе при изуче нии особенностей эпизоотии бешенства мы использовали статистическую ин ф формацию по характеристике природно-климатических условий по годовой и по месячной динамике заболеваний бешенством сельскохозяйственных домашних и диких животных за 1971-2002 годы. При этом выявленные случаи бешенства мы трактовали как неблагополучные пункты или эпизоотические очаги. Общие сведения о динамике бешенства в Ставропольском крае за период более чем в 32 - х летний (1971-2002 годы) представлены в таблице 2 и 3. Данные таблицы 2 свидетельствуют, что бешенство животных в Ставро польском крае регистрируется достаточно часто. Так, за 32 - х летний период w (1971-2002 годы) подозрения о заболевании бешенством животных было заре гистрировано в 9210 случаях. При этом лабораторное подтверждение бешенства составило 28,2%. За этот период из числа лабораторно подтвержденных случаев, бешенство регистрировалось у жвачных животных и составило 62,0%, а у плотоядных - 36,5%. Следовательно, на долю других видов животных (лошади и свиньи) приходится 1,5% случаев подтвержденного бешенства. Отмечено, что с 1971 года напряженность эпизоотической ситуации по степенно нарастала до максимума, который пришелся на 1974-1979 годы. Ре кордное число неблагополучных пунктов выявлено в 1974 году (288 пунктов) и в 1975 году (248 пунктов). Другой пик (223 эпизоотических очага) пришелся на м 1978 год. Затем интенсивность эпизоотического процесса заметно ослабевала, хотя в отдельные годы число неблагополучных пунктов было свыше 100 (1979, 1982 годы). Затем при сохранении цикличности инфекционного процесса подъемы эпизоотии были уже не так выражены (39 эпизоотических очагов в 1986, 22 - в 1992, по 8 - в 1993 и 1995 годах).
Кроме того, данные таблицы 2 отражают характер изменений эпизоотической ситуации по бешенству животных в Ставропольском крае за период с 1971 по 2002 годы. Анализ структуры заболеваемости бешенством животных позволяет предположить, что первоначально наблюдались эпизоотии бешенства природного типа, а затем она стала больше характеризоваться эпизоотией смешанного типа и в последние годы в отдельных случаях стали иметь случаи эпизоотии городского типа.
При общем анализе эпизоотологической ситуации по бешенству следует иметь ввиду, что на распространение этого заболевания в Ставропольской крае влияют и природно-климатические условия.
На территории Ставропольского края имеется четыре ландшафтно-эпизоотические зоны, различных по природно-климатическим условиям. Это:
1. Полупустынная зона, включающая Апанасенковский, Арз гирский, Курский, Левокумский, Нефтекумский и Степновский т районы.
2. Равнинно-степная зона, включающая Благодарненский, Бу денновский, Георгиевский, Ипатовский, Кировский, Новосе лицкий, Советский и Туркменский районы. 3. Предгорно-степная зона, включающая Александровский, Ан-дроповский, Грачевский, Изобильненский, Кочубеевский, Красногвардейский, Минераловодский, Новоалександровский, Петровский, Труновский и Шпаковский районы. 4. Лесостепная зона представлена одним Предгорным районом. Таким образом, первая и вторая зоны составляют восточную часть Ставрополья, которая весьма засушлива, но в ней обитает большое количество диких животных. Это хищники - лисицы, волки, корсаки; степные хорьки, являющиеся потенциальными природными векторами рабического вируса; грызуны — суслики, тушканчики, хомяки, мыши, крысы. Самые крупные животные этих зон — сайгаки и степные антилопы.
Третья зона менее засушливая, но она богата дикой фауной, которая более разнообразна. Кроме названных выше животных ( первая и вторая зоны), здесь встречаются из плотоядных — енотовидная собака; из насекомоядных — летучая мышь, ушастый еж, землеройки; из грызунов — малый тушканчик, степная пеструшка, мыши-полевки, зайцы; из группы синантропных животных - рыжая крыса и домовая мышь. Из крупных животных встречаются кабаны, косули.
В четвертой, более увлажненной и более оптимальной по эколого-климатическим условиям зоне, встречаются кроме названных выше — несколько разновидностей летучих мышей, белки, барсуки; из хищных встречаются шакалы и дикие коты, ареал которых стал распространяться и в третью, вторую и первую зоны.
Обнаружение антигена вируса бешенства с помощью реакции преципитации
Реакция преципитации (РП) проста по выполнению и специфична по биологической сути, что позволяет исследовать даже несвежий патологический материал, контаминированный бактериальной микрофлорой.
Реакцию преципитации ставили на обезжиренных предметных стёклах, на которые предварительно наносили каплю расплавленного агара, пипеткой рав І номерно распределяли её по стеклу в виде тонкого слоя. На застывший слой агара наливали сверху 2,5 см3 агарового геля толщиной приблизительно 2 мм, затем металлической или костяной трубочкой диаметром 4-5,6 мм согласно трафарету делали в нем лунки (центральные и периферические). Центральные лунки заполняли профильтрованной эмульсией из патологиче ского материала, а в периферические вносили диагностический антирабический иммуноглобулин, л Одновременно ставили контрольные опыты с положительными и отрица тельным антигенами, но каждый на отдельном стекле. После заполнения лунок компонентами предметные стёкла помещали в чашки Петри с увлажнённым дном, ставили их в термостат при температуре 37С на 6 часов. Затем чашки выдерживали при комнатной температуре ещё 42 часа.
Реакцию преципитации учитывали через 6,24,48 часов после её постановки. Реакцию считали положительной при выявлении 1 или 2-3 линий преципитации любой интенсивности между лунками, содержащими антиген и иммуноглобулин. Однако следует заметить, что частота выявления антигена вируса бешенства в исследуемом материале в РП (по литературным данным) составляет от 45 до 70%.
В своей работе для оценки РП как диагностического теста мы исследовали с помощью этой реакции пробы мозговой ткани от 55 павших животных с позитивными результатами по РИФ. По результатам наших исследований совпадение положительных результатов по РП было в 49,1 % случаев в сравнении с РИФ.
Одним из основных современных и наиболее точных и быстрых методов постановки диагноза на бешенство является реакция иммунофлуоресценции (РИФ). Результаты РИФ на 99-100 процентов совпадают с методом биопробы на лабораторных животных, поэтому в практической работе вирусологов, она является наиболее приемлемой.
В диагностической работе используют прямой метод РИФ, который проводят с применением диагностического антирабического флуоресцирующего иммуноглобулина ДАФИ, которым обрабатывают мазки — отпечатки из мозга больных животных. Фиксацию мазков - отпечатков проводят в охлажденном ацетоне не менее 4 часов. В качестве контроля используют мазки - отпечатки головного мозга здоровых белых мышей. Результаты учитывают визуально с помощью люминесцентного микроскопа и на основе оценки интенсивности свечения комплекса «антиген — антитело» делали заключение. Антиген вируса бешенства выявляется в виде ярких желто - зеленых или зеленых гранул различной формы и величины в клетках, чаще вне их. Диагноз считают установленным, если в поле зрения обнаруживается не менее 10 типичных гранул с ярким зеленым свечением или множество мельчайших точек. В контроле подобного свечения не обнаруживают. В своей работе за десять лет (1993-2002 годы) нами исследовано по РИФ 13736 мазков — отпечатков от 1717 животных (1717x8), обработанных указанным диагностикумом (ДАФИ). Из них выявлено 359 позитивных результатов, что составило 96,2 % совпадений от общего числа (373) лабораторно подтвержденных случаев бешенства, с учетом 14 положительных биопроб. Для доказательства специфичности свечения комплекса (антиген + антитело) используют метод подавления иммунофлуоресценции (МПИФ), который заключается в способности рабического антигена, связанного с неспецифическими антителами, вторично не вступать в соединения с флуоресцирующими специфическими антителами. Для этого на фиксированные препараты, приготовленные из исследуемого головного мозга, наносят 5-процентный антираби-ческий нефлуоресцирующий иммуноглобулин, выдерживают 30 минут при 37С во влажной камере, промывают физиологическим раствором, а затем обрабатывают флуоресцирующим антирабическим иммуноглобулином. В обработанных таким образом препаратах флуоресценция отсутствует. По 18 исследуемым пробам все результаты были положительными.
Кроме установления заболевания животных бешенством после их гибели метод РИФ применяется для прижизненной диагностики при исследовании подозреваемых в заболевании бешенством животных, а также клинически здоровых собак и кошек, покусавших людей и животных, путём обнаружения вируса бешенства в клетках роговицы глаз. Для этого готовили отпечатки из роговицы глаз, соблюдая при этом все правила личной безопасности. Мазки - препараты высушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне и обрабатывают антирабическим флюоресцирующим гамма - глобулином. Учет РИФ осуществляют таким же способом. В препаратах полученных от больных бешенством животных или находящихся в конце инкубационного периода болезни, в цитоплазме многих эпителиальных клеток наблюдали ярко светящиеся гранулы вирусного антигена различных форм и размеров.
Результаты микроскопии считают положительными, если в мазках — отпечатках из роговицы животного обнаруживают более 11% клеток с характерными очагами свечения. При исследовании 50 мазков — отпечатков из роговицы глаз животных тельца Бабеша-Негри выявлены в 50 % случаев.
РИФ может выявить вирус бешенства также и в тканях слюнной железы павших животных. Метод РИФ дает возможность ускорить выдачу ответа до окончательных результатов поставки диагноза с учетом биопробы. Диагноз при этом может быть установлен уже на 4-8 сутки после заражения мышей исследуемым материалом.
