Введение к работе
Актуальность темы.
По оценке' ФАО вОЗ бруцеллез отнесен к числу наиболее опасных инфекционный заболеваний и в настоящее время Наибольшему риску заражения подвержены категории людей, контактирующие с сырыми продуктами животноводства и персонал, обслуживающий сельскохозяйственных животных. Лереболевание бруцеллезом сопровождается многообразием клинических признаков, длительными нарушениями физиологии и иммунного статуса организма.
Велик и экономический ущерб, причиняемый народному
хозяйству этим заболеванием. Основу потерь составляет
недополучение основной продукции — мяса, молока, резко
і снижается выход приплода из—за абортов, патоморфологических
изменений в органах, связанных с воспроизводительной
функцией. Снижается эффективность селекционной работы.
Увеличиваются затраты на проведение санитарных и
оранизационна—хозяйственных мероприятий .'
Живые противобруцеллезныв вакцины широко применяются ветеринарной практикой в ряде стран, в том числе в Рф. Они обеспечивают выполнении плана оздоровительно-профилактических мероприятий. ФАО ВОЗ считает наиболее приемлемой из живых вакцину из штамма Бруцелла at"орт-с 19 как саму» стабильную и иммуногенную .Но ее свойство индуцировать длительное прояйление серологических реакций затрудняет постванцинальную дифференциальную диагностику бруцеллеза и оздоровление стад .
Работы по поиску новых живых вакцин затруднены, поскольку замыкаются на двух видах вакцин — из О — форм — агглютининогенных и из t\ - форм — слабоагглютининогенных с известными показателями по иммунитету и серопозитивности плюс- минус 10% в ту или иную сторону имея один и тот же экологический недостаток, связанный с сенсибилизацией и проявлением патоморфологических изменений в организме. На современном этапе необходимы высокаиммуногеиные экологически безопасные вакцины и эффективные схемы их применения , что возможно только с применением химически?. вакцин. Увеличение
- 4 -содержания в окружающей среде и продуктах питания таких иммунноактивных микроорганизмов, как.бруцеллы, повышает риск возникновения аутоиммунных и аллергических заболеваний у животных и людей. Химические вакцины предпочтительнее, в там плане, что при испольааании кивык иммунитет нестерилен в начальної! стадии иммунного процесса, а сенсибилизирующая активность химической вакцины в 2-12.раз ниже, чем живой или отсутствует .
На перспективность поиска указывает наличие надежных химических вакцин при других Инфекций», а также возможность повышения и коррекции иммуного ответа с помощью широкого спектра нммуномодулирующих вещес+в.
Широкое распространение бруцеллеза, его социальная опасность и значительный экономический ущерв, наносимый им, указывают на актуальность изучения более эффективных методов профилактики этого заболевания. Исследование антигенной структуры бруцелл, поиск антигенных комплексов, пригодных для Создания высокоэффективных средств специфической профилактики - одно из приоритетных направлений ликвидации заболевания, по заключению экспертной комиссии фДО ВОЭ .
ЦЕЛЬ »1 ЗйДнЧИ исследования.
Детальное изучение антигенов, определение возможности * создания мимической вакцины для профилактики бруцеллеза у крупного рогатого скота на их основе составляет цель настоящего исследования.
В задачи входило «
'— получение различных антигенных фракций бруцелл ;
физико-химическое, иммунна-химическое, иммунна— биологическое изучение иммунологически активных антигенов ;
повышение естественной иммуногениости этих антигенов с помощью существующих fcperiCTB и методов;
сравнение «ммуногемнасти полученный препаратов между совой и с эталонной вакциной из штамма 19 при применении на крупном рогатом скоте.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА Определены химические, иммуннохимические особенности антигенных комплексов бруць.іл, различающихся по иммуннобио-
логической активности.
Изучены особенности проявления протективного эффекта на разным видак лабораторных и крупный животных при применении иммуногенов различного состава.
Испытана на крупном рогатом скоте мимическая противобру-целлезнаа вакцина, применявшаяся при иммунизации людей.
Сконструирован иммуногенный комплекс, позволяющий создавать защиту от заражений выше уровня вакцины из штамма 19. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.
Результаты проведенных исследований дополняют новыми научными данными сведений о возможности создания мимически» лрртивобруцеллезных вакцин, вносят определенный ві.'-ад в изучение антигенные комплексов бруцалл и решение проблемы оптимизации системы специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота .
Составлены методические рекомендации по испытанию в производственных условиях химической вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота. Они утвеждены ГУВ ГК СССР по продовольствию и закупкам.
Составлена HTft (заявка на разработку, техническое задание) на опытную партии химической противобруцеллеэной вакцины.
Наработаны и испытаны лабораторные серии вакцин в количестве 20 тыс. доз для крупного рогатого скота. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.
Материалы по теме диссертации представлены на конференциях ВНИИБТЖ 1986, 1987 гг.; РГБИ - 1987, 1933, 1990 гг.; ИЭВСиДБ-1987,1988,1995 гг.J СибНИИСХоза - } 989 г.і АМН СССР, ВАСХНИЛ, РАСХН-1939,1991 гг.; координационном совещании по туберкулезу и бруцеллезу/ ВНИИбТХ.- ОМСК, 1993.j заседаниям Ученый Советов ВНИИБТЖ 1987-1994 гг.
Номер госрегистрации ....... .
По материалам диссертации опубликовано 16 научных статеґ. НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ і
— результаты физико-химического, иммуннохимического,
иммуннобиологического исследования антигенов бруцелл;
- оптимальный вариант химической противобруцвллезний
вакцины для иммунизации крупного рогатого скота. ОБЬЕИ И СТРУКТУРА РАБОТЫ.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы.собственных исследовании, обсуждения полученным результатов,выводов, практических предложений, списка использованной литературы <всего 667 источников, в том числе 2BI иностранный) и приложения.
Работа изложена на 165 страницах машинописного текста и имеет 34 таблицы, 7 рисунков.
Выращивали бакмассу и проводили бактериологические исследования на обычных производственны» питательный средах — МППГГА, МППГГБ и эритрит-агарв.
Иммунобиологическое воздействие антигенных комплексов бруцелл изучали на 3"?4 морских свинках, ,214 белых мышах, 39 кроликах, 426 крысах линии " WJi^-тІО" и крупном рогатом скоте.
Содержание белка в антигенных препаратах определяли по методу ^?0\лХЧ полисахаридов ho ^ЧО^вЧ .
Спектрофотометри» использовалась для анализа состава антигенных комплексов бруцелл. Анализ в ультрафиолетовой ( 20О - 400 им ) и ближней инфракрасной < 760 - 1100 нм ) областях спектра проводили йа спектрофотометре Еф - 4А* а поглощение в инфакрасной области спектра ! 760 - 1 мм ) на спектрофотометре «Л "> — 20.
Серологические исследования (реакция агглютинации, связывания комплемента, непрямой и пассивной гемагглютинации, кольцепреципитации, Кумйса, Роз-Бенгал проба) проводили по общепринятым методикам с использованием стандартных антигенов.
ИммунодиФфузию в геле Для определения концентраций специфических серологически активных антигенов, в комплексе . выделенных биополимеров, Проводили с целью титрации их для дальнейших мммунохимическии исследований и оценивали па
выраженности 'полос преципитации в агаровом геле или агарозе, содержащий противобруцеллезные антитела.
Иммуноэлектрарез проводили в агаровом геле, содержащем 1,5% агара, при рН 3,6, наслоенном (2,5мм) на стекле.
Гиперчувствительность замедленного типа (ГЧЗТ1 учитывали по выраженности' реакции на внутрикожное введение в области шеи коммерческого бруцеллина ВИЭВ в дозв 0,1мл вакцинированным животным и учете реакции через 24-43-72 часа, а также в тесте отека лап у мышей при сенсибилизации их 100мг атигена и разрешаюей дозе 10 мкг антигена, вводимого на 14-21 сутки сенсибилизации. Учет этрй реакции производился с помощью микрометра, которым через 24 часа после введения тест-системы вычисляли величину отека.
Пратективный эффект определяли путем заражения через один — три месяца после вакцинации иммунизированный животных введением 4 — 10 инфицирующих доз (ИД) двум— суточной вирулентной культуры.
Культуру вводили подкожно (лабораторные животные) или на коныонктиву (крупный рогатый скот).
