Содержание к диссертации
Введение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Экологические факторы жизнедеятельности рыбы 7
1.2. Микрофлора воды 16
1.3. Микрофлора рыбы 23
1.4. Инфекционные болезни рыб 27
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 39
2.1. Материалы и методы исследования 39
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 45 45
2.2.1. Экологические факторы озер Еравно-Харгинскойсистемы
2.2.2. Количественный показатель добычи рыбы в озерахЕравно-Харгинской системы 55
2.2.3. Заболеваемость населения Еравнинского районакишечными инфекциями 58
2.2.4. Особоопасные инфекционные болезни рыб в РБ
2.2.5. Определение уровня патогенной микрофлоры в водеЕравно-Харгинских озер
2.2.6. Характеристика микробных изолятов рыбы 81
2.2.6.1.Культурально-морфологическая характеристика
2.2.6.2.Биохимические свойства микробных культур 81 93
2.2.6.3. Антибиотикочувствителыюсть микробных изолятоврыб 95 97
2.3. Паспортное описание выделенных микробных культур .
2.4.Уровень инфицированности организма рыб патогеннымимикроорганизмами 102
2.5. Моделирование аэромоноза рыб
2.6. Разработка иммунологического метода оценкиэпизоотологического благополучия по аэромонозу рыб 104 106
2.6.1. Приготовление аэромонадного антигена идиагностической иммунной сыворотки 106
2.6.2. Испытание антигенного аэромонадного диагностикумапри выявлении специфических антител 108
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИИ 109
ВЫВОДЫ 114 115
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 117
ПРИЛОЖЕНИЯ 136
- Экологические факторы жизнедеятельности рыбы
- Материалы и методы исследования
- Характеристика микробных изолятов рыбы
Введение к работе
1.1. Актуальность темы. Роль рыболовства как поставщика пищевой рыбы в настоящее время возросло. В 90-х годах ХХ века 57% мирового улова пресноводных рыб составили рыбы, выращенные в хозяйствах, в уловах карповых им принадлежало 94%, лососевых – 40%. Одним из факторов, тормозящих дальнейшее развитие прудового рыбоводства, являются паразитарные и инфекционные болезни рыб, наносящие существенный экономический ущерб, (И.М. Беретарь, А.А. Лысенко 2009). На сегодня все рыбные промысловые зоны Бурятии подверглись антропогенной нагрузке, в связи с этим появилась угроза появления инфекционных заболеваний рыб, в частности аэромоноза, и выявление ботулизма у байкальского омуля. Все это говорит об ухудшении экологических условий, которое сказалось на состоянии здоровья, в частности байкальского омуля, повышением чувствительности к инфекционным заболеваниям, выявлением ботулоносительства, что сопровождалось групповыми отравлениями людей со смертельным исходом (Родионов Д., 2002).
Небезынтересен факт появления инфекции рыб в Бурятии, носящий черты эмерджентности таких, как аэромоноз (1993 – 1994, 2002, 2007), морбилливирусная чума плотоядных байкальской нерпы (1987 – 1988) (Зверева О.А., 2002). Поэтому возникает необходимость разработки и внедрения, экстренных мер по предупреждению возникновения заразных заболеваний у рыб, одним из которых является проведение микробиологического и иммунологического мониторинга по оценке эпизоотологического благополучия.
В настоящее время отсутствуют данные по оценке эпизоотического состояния и уровня циркуляции патогенных микробов в водной среде, кормовых угодьях и в организме рыб озер Еравно-Хоргинской системы.
1.2. Цель исследований. Целью данной работы явилось проведение эпизоотологического, бактериологического и иммунологического мониторинга водной среды обитания кормовых угодий и выявление циркуляции патогенных микроорганизмов в организме соровой рыбы озер Еравно-Хоргинской системы.
1.3. Задачи исследований.
1. Изучение экологических характеристик водной среды в местах промысла рыбы.
2. Оценка санитарно-бактериологического состояния воды и микробного пейзажа.
3. Изучение биологических характеристик микробных изолятов, выделенных из исследуемых рыб.
4. Выделение aeromonas hidrophila и изучение его биологических характеристик.
5.Разработка иммунологического метода оценки эпизоотологического благополучия по аэромонозу рыб в озерах Еравно-Хоргинской системы Республики Бурятия.
1.4. Научная новизна. Впервые в полевых экспедиционных условиях проведен комплексный анализ эпизоотологического и микробиологического мониторинга с учетом экологических ситуаций в озерах Еравно-Хоргинской системы о состоянии благополучия по инфекционным заболеваниям промысловых рыб. Разработан иммунологический метод определения уровня циркуляции патогенных аэромонад в организме рыб и в водной среде.
1.5. Теоретическая и практическая значимость работы. Заложены теоретические основы эпизоотологического и микробиологического мониторинга водоемов и рыб. Материалы диссертации использовались в практической деятельности заседаний Рыбохозяйственного совета РБ, составлена справка о результатах бактериологических исследований рыб, обитающих в воде Еравно-Хоргинских озер в Межрайонный специализированный участок по борьбе с болезнями рыб. Материалы диссертации использовались при разработке технологической карты по профилактике инфекционных заболеваний рыб и проведению ВСЭ.
1.6. Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию ФВМ ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» (Улан-Удэ, 2005); на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы экологической, сравнительной, возрастной и экспериментальной морфологии», посвященной 100-летию профессора Ивана Андреевича Спирюхова (Улан-Удэ, 2007); на международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию профессора Юрия Абогоевича Тарнуева (Улан-Удэ, 2009).
1.7. Публикации результатов исследований. Основные результаты научных исследований отражены в 3 печатных работах, из них 1 – в рецензируемом журнале.
1.8. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 144 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Список литературы включают 194 источника, в т.ч. 75 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 5 рисунками.
Экологические факторы жизнедеятельности рыбы
Вода является внешней средой для рыб. Она влияет на дыхание, питание, кроветворение и кровообращение, на нервную деятельность, размножение, рост и развитие. Поэтому для поддержания жизнестойкости на должном уровне должны быть оптимальные зоогигиенические условия. Возникновение эпизоотии обусловлено тремя факторами: наличием возбудителя, восприимчивого хозяина и располагающей к заболеванию стрессовой ситуации [11,46,85]. Так к фурункулезу форели, бактериальному жаберному некрозу лососей, флексибактериозу предрасполагают переуплотнение, недостаток кислорода (ниже 4 мл/л), повышение температуры до 20С и содержания аммиака до 1мл/л, различные процедуры с рыбой (пересадки и др.), даже при резком повышении температуры у фурункулезоустойчивых пород форели нарушается резистентность [191]. Возникновению коринебактериоза форели способствует уменьшение общей жесткости (менее чем до 100), избыток в рационе зерна. Вибриоз провоцируют перевозки, пересадки, снижение содержания кислорода менее 6 мл/л, особенно при температуре воды 10-15С и солености до 15 процентов. Улучшение в кормлении заметно облегчает течение болезни [24]. Анализ вспышек болезней осетра (сапролегниоз, сопровождаемый высоким уровнем бактериальной микрофлоры в паренхиматозных органах с ассоциациями патогенных бактерий) показал, что вспышки болезней происходят тогда, когда устойчивость организма рыбы ослаблена из-за напряжения окружающей среды или к предыдущим болезням другого характера [176].
Среди многообразия факторов внешней среды, играющих важную роль в жизни рыб, мы рассмотрели основные из них.
Температура. Температура, как фактор внешней среды, " имеет определяющее значение для каждого обитателя всех трофических уровней водных экосистем [30]. С одной стороны, температура, наряду с содержанием кислорода, соленостью воды и рН, представляет абиотическую составляющую, с другой - наличие или отсутствие кормовых объектов - одна из биотических составляющих, в совокупности оказывает наиболее сильное влияние на обитателей водной среды. Это подтверждается сообщениями некоторых исследователей [28].
От температуры воды зависит и характер проявления и течения даннных болезней [114]. Температурный оптимум, при котором возбудители инфекционных болезней рыб обладают способностью жить и размножаться в теле рыбы и оказывать на нее патогенное действие, колеблется в широких пределах, -от 10 до 25С [114]. При низкой температуре воды у карпов наблюдается простуда [98],болезнь Штаффа [48]. Вирусная геморрагическая септицемия форели, возникает в относительно холодной воде при 10-12С [10], рабдовирусный дерматит японского угря при температуре воды 15С, а при t - 25С не было ни одной погибшей рыбы [158].Другие, наоборот, наиболее остро протекают при более высокой температуре воды 20-25С сюда относятся аэромоноз (краснуха), воспаление плавательного пузыря (ВПП), бранхиомикоз карпов и др. Так резкое повышение температуры может оказатся стрессорным фактором и вызвать острое течение краснухи карпа [Бауер О.Н.,10]., [32] установили что, после заражения рыб (карп, лещ, плотва) возбудителями инфекций (Aeromonas hydrofila, Staphylococcys aureus, Escherichia coli, Saprolegnia) все исследуемые рыб проявляли реакцию поведенческой лихорадки, избирая после инъекции возбудителя инфекции зоны температур, на 2-6С больше по сравнению контролем. Поведенческая лихорадка или «fever» носит выраженный защитный характер, усиливая сопротивляемость организма рыб и способствуя их большей выживаемости в процессе протекания болезни.
Неблагоприятная температура воды, как указывает [106], приостанавливает или замедляет физиологические отправления организма рыб, нарушает деятельность нервной системы, дыхание, кровообращение, при это образуются сгустки крови, как внутри кровеносных сосудов, так и снаружи [56]. Васильков Г.В. наблюдал массовую гибель рыб (черноморская кефаль, пикша, камбала морская и речная, треска, сельдь, килька и др.) при резком снижении температуры воды. Случаи массовой гибели в естественной среде обитания при значительном и быстром понижении температуры воды указывают на то, что причиной ее является не замерзание тканевой жидкости, а охлаждение протоплазмы, нарушение реактивности белка, приводящего к глубокому нарушению обмена веществ. Массовую гибель рыб вследствие действия высоких, температур - выше 30С наблюдал [47] в рыбхозах западных областей Украины. Подобное явление и гибель в прудах рыбоводных хозяйств Польши отмечает [175]. При высокой температуре воды, даже при кратковременном воздействии, обжигаются жаберные лепестки, а на коже появляется интенсивный беловатый слизистый налет. Через некоторое время поврежденные жаберные лепестки подвергаются некротическому распаду и разрушению: появляются изменения в жабрах, напоминающие клиническую картину бранхиомикоза. В пораженных участках жабер, обусловленных «ожогами», поселяются сапрофитные грибы и бактерии, в результате жизнедеятельности которых развивается патологический процесс и происходит массовая гибель рыб
Воздействие высоких температур воды с наличием других факторов, таких как, накопление большого количества органических веществ, при отмирании водорослей, при «цветении» водоемов, повышенном содержании аммиака, обуславливает вспышку эпизоотии бранхиомикоза [12, 115, 48, 136, 10]. В зависимости от температуры воды резко изменяется характер проявления и течения краснухи, воспаления плавательного пузыря и другие болезни. Вспышки этих болезней имеют выраженный сезонный характер: эпизоотии их возникают, главным образом, в весенне-летний период и наиболее остро протекают при температуре воды в пределах 20-25С и сопровождаются массовой гибелью рыб. Колебания температуры за пределы оптимальных величин отрицательно влияют на развитие в водоеме естественной пищи и потребление ее карпом. В результате задерживается развитие рыб и снижается их упитанность. Особое внимание следует обращать на температуру воды в зонах потенциальной опасности загрязнения водоемов различными пестицидами, удобрениями и другими химикатами, применяемыми сельском хозяйстве. Дело в том, что с повышением температуры воды повышается и токсичность большинства химических веществ для рыб и других гидробионтов. Поэтому направленным изменением температуры можно избежать отрицательного действия ее.
Газовый режим. Водная поверхность, соприкасаясь с атмосферным воздухом, поглощает и растворяет азот, кислород и углекислый газ. Все это оказывает как прямое, так и косвенное влияние на организм рыб.
Наиболее важным для рыб является растворенный в воде кислород. С понижением температуры повышается растворимость кислорода, чем выше атмосферное давление, тем больше его растворимость. Чем больше органических веществ, тем больше расходуется кислорода на их окисление в процессе разложения, и, следовательно, тем меньше остается кислорода в воде, необходимого для дыхания рыб. Недостаток растворенного кислорода вызывает заморы. Происходит накопление органических и размножение сапрофитной микрофлоры, которая может отрицательно действовать на рыб. У рыб, длительное время пребывающих в воде с недостаточным содержанием кислорода, понижается активность, они становятся вялыми, мало потребляют корма, поднимаются в верхние слои , у них наступает истощение и значительно снижается общая устойчивость к неблагоприятным факторам внешней среды и к возбудителям заразных болезней. Ученый-рыбовод Г. И. Шпет указывает, что при содержании в воде кислорода в пределах 2 мг/л карп начинает беспокоиться, чаще заглатывает воздух, а при содержании кислорода, близком к 0,5 мг/л, делает это беспрерывно и теряет аппетит.
Материалы и методы исследования
Исследования проводили с 2005 по 2009 года на кафедре микробиологии, вирусологии и ВСЭ ФГОУ ВПО «БГСХА им. В.Р. Филиппова», в Еравнинской межрайонной ветеринарной лаборатории и в бактериологическом отделе республиканской научно-производственной ветеринарной лаборатории Республики Бурятия.
Материал для исследования взят в Еравнинском районе Республики Бурятии. Было отобрано 65 пробы воды и 650 проб материала от 154 экземпляров соровой рыбы (кровь из сердца, печень, селезенка, жабры, почки, содержимое кишечника). Отбор проб воды проводили согласно календарному плану исследований совместно с ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республики Бурятия в Еравнинском районе». Пробы воды брали на расстоянии 3 — 4 м от берега и на глубине 10—15 см от поверхности водоема. Для бактериологического анализа пробы отбирали в количестве 1 л в стеклянные бутылки с притертой резиновой пробкой с соблюдением правил асептики, для химического - 3 литра. Для отбора проб использовали водоемный батометр. Посуду стерилизовали завернутой в бумагу, и разворачивали их непосредственно перед взятием проб воды. В течение 2 часов после отбора проб воды проводили посев проб.
Санитарно-бактериологическую оценку воды проводили по следующим показателям: общее микробное число — ОМЧ или по сапрофитным микроорганизмам; коли-титр как показатель фекального загрязнения; наличие аэромонад (как показатель возможного неблагополучия водоемов). Определение ОМЧ воды определяли чашечным методом. Из каждой пробы разведения. Затем уже пробы воды в разведениях вносили по 1,0 мл с соблюдением условий стерильности, в стерильные чашки Петри. После внесения воды, также с соблюдением условий стерильности, заливали остуженным питательным агаром в количестве 10,0 — 12,0 мл. Чашки с посевами выращивали при температуре 27 в течение 5 суток. Результат подсчета колоний на каждой чашке выражают в количестве бактерий в 1 мл с учетом произведенных разведений. За окончательное количество бактерий в 1 мл исследуемой воды или разведений принимают среднее арифметическое из результатов подсчета на двух параллельных чашках.
Для определения количества бактерий группы кишечной палочки (БГКП) пробы воды и их разведения засевали в глюкозо-пептонную среду (ГПС), посевы инкубировали при температуре 43±0,5С с последующим пересевом на плотную питательную среду Эндо (температура 37±0,5С, в течение 24 - 48 ч). При росте на среде характерных темно-красных колоний с металлическим блеском их принадлежность к БГКП подтверждали микрокопированием мазков, окрашенных по Граму, и постановкой оксидазного теста. Определение титра БГКП (коли-титр) проводили установлением наименьшего количества воды, в котором находилась одна кишечная палочка.
Наличие аэромонад определяли следующим образом. Пробы воды и их разведения высевали по 0,2 мл на среду Эндо с молоком. Посевы инкубировали в термостате пи температуре 28±0,5С в течение 24 - 48 ч (Методические указания по санитарно-бактериологической оценке рыбохозяйственных водоемов, 1999).
Химический анализ вод в основном выполнен в стационарных условиях. Непосредстветвенно на объекте, в свежеотобранных пробах, определяли температуру воды ориентировочно величину рН. Для измерения температуры применялись калибровочные ртутные термометры (цена деления 0,1). Водородный показатель определяли в свежеотобранных пробах на приборе рН-150М (милливольтметр рН-150). Ориентировочно рН определяли универсальной индикаторной бумажкой.
Содержание кислорода определяли иодометрическим методом Винклера. Кислород фиксировали в кислородных склянках непосредственно у места отбора проб. После отстаивания осадка (не менее чем через 10 мин и не более суток) и растворения его в H2SO4 (1:4) йод оттитровывали рабочим раствором 0,02N раствором тиосульфата по крахмалу, прибавляемого в конце титрования. Биохимическое потребление кислорода (БПК) определяли согласно Методическим указаниям по определению биохимического потребления кислорода при санитарной оценке воды в рыбохозяйственных водоемах (1999). Азот аммонийный, азот нитратный, азот нитритный, фосфаты, сульфаты, общую жесткость определяли по инструкции по химическому анализу вод прудов (1984). На питательные среды, приготовленные заранее, проводили посевы из органов рыб. Отобранную для исследования рыбу обертывали марлевой 5. л меткой, увлажненной спиртом, и удерживали в левой руке. Ножницами разрезали брюшную стенку рыбы по сагитальной линии. Пинцетом отворачивали брюшную стенку и скальпелем осторожно отодвигали внутренние органы, освобождая перегородку околосердечной полости, через которую острым концом пастеровской пипетки проникали в сердце и набирали кровь. Первую каплю крови удаляли стерильным ватным тампоном, а 2 - 3 капли использовали для посева на питательные среды.
Участок печени прижигали шпателем, прокалывали капилляром пастеровской пипеткой, разрыхляли паренхиму, насасывали в пипетку и содержимое пипетки выдували на поверхность питательной среды, шпателем растирали. Аналогично проводили посев из селезёнки. Затем делали посев из кишечника, прижигая его стенку и прокалывая острым концом пастеровской пипетки. Посевы из жабер проводили путем соскоба с последующим его посевом в питательные среды (Гончаров Г.Д., 1973).
Для консервирования материала использовали стерильный 50%-ный водный раствор глицерина. Все посевы на питательных средах инкубировали при температуре 20 и 37 градусов.
Бактериологическое исследование воды проводили согласно Методическим указаниям по санитарно-бактериологической оценке рыбохозяйственных водоемов (1999).
Изучение морфологических, культуральных, тинкториальных, биохимических, гемолитических и патогенных свойств выделенных микроорганизмов проводили методами общей микробиологии (Биргер М.О., 1983; Герхард Ф., 1983; Антонов Б.И., 1986).
Морфологические свойства выделенных бактерий изучали методом световой микроскопии. Препараты готовили из суточных агаровых и бульонных культур микробов. Для световой микроскопии использовали микроскоп МИКМЕД- 1 со встроенными в основание осветителями.
Для изучения тинкториальных свойств мазки микроорганизмов окрашивали по Граму.
Подвижность микроорганизмов определяли просмотром висячей и раздавленной капли, микроскопией в затемненном поле, посевом в полужидкий агар или в конденсат свежескошенного агара методом Щукевича.
Культуральные свойства выделенных микроорганизмов изучали по характеру роста в жидких и твердых питательных средах, пигментообразованию (МПА, МПБ, МГШБ, Китт-Тароцци, бульон с кониной и мальтозой, глюкозно-глицериновый и кровяной МПА, плоских дифференциально-диагностических средах). Рост культур микроорганизмов на питательных средах наблюдали в течение 1—7 суток, при этом отмечали размеры, форму, края, поверхность, блеск, цвет, профиль, консистенцию и структуру колоний, и их скорость роста на питательной среде.
При культивировании микроорганизмов в жидких питательных средах отмечали наличие осадка, его количество и характер, степень помутнения среды, оттенок, толщину и консистенцию пленки при поверхностном росте культуры, также учитывали образование пристеночного кольца и изменение цвета среды. Протеолитическое свойство микроорганизмов определяли путем установления разжижение желатина на МПЖ, свертывать молоко. Степень и глубину расщепления белка определяли по образованию микроорганизмами индола и сероводорода с помощью индикаторных бумажек, пропитанных 12%-ным раствором щавелевой кислоты и 10%-ным раствором уксусного свинца. Соответственно результаты учитывали через 18-24 часа. Контролем служили пробирки, заведомо засеянные индоло- и сероводородообразующими культурами. При определении каталазной активности микроорганизмов на предметное стекло наносили каплю 3%-ного перекиси водорода и в нее вносили петлю испытуемой суточной культуры. Образование пузырьков газа свидетельствовало о наличии у микроорганизмов фермента каталазы.
В целях идентификации и дифференциации микробных культур изучали биохимические свойства. При этом применяли систему индикаторных бумажек (СИБ) для идентификации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae Горьковского НИИ эпидемиологии Минздрава РФ. Также для определения ферментативной активности микроорганизмов применяли пластины ММТ - Е1 и ММТ - Е2 (система мультимикротестов) для биохимической идентификации энтеробактерий Ставропольского научно-производственного объединения «Аллерген», согласно инструкции по применению систем мультимикротестов (1992).
Для изучения сахаролитических микроорганизмов использовали среды Гисса. Посевы культур осуществляли бактериологической петлей по общепринятой методике. Предварительный учет результатов осуществляли после 16-24 часов инкубирования, окончательный - через 14 суток. О ферментации углеводов судили по изменению цвета питательной среды и образованию газов. Покраснение сред Гисса означало расщепление углевода до образования кислоты, если с образованием газообразных веществ, то часть жидкости вытеснялась из поплавка, и пузырьки газа скапливаются в верхней его части.
Чувствительность микроорганизмов к различным антибиотикам определяли методом диффузии в агар с применением стандартных дисков, содержащих антибиотики. Оценку результатов проводили с учетом наличия или отсутствия зоны задержки роста микроорганизмов согласно «Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков» (Чайковская СМ., Гивенталь Н.И., Резван СП., 1984).
Характеристика микробных изолятов рыбы
Характеристика выделенных культур микроорганизмов из рыбы необходимая для составления паспорта микробных культур включает подробное описание культур с обязательным указанием свойств и наличия фактора патогенности.
Культура №1 изолирована из жабер окуня озера Сосновское.
Морфологические свойства. В мазках из суточных агаровых культур обнаружены палочки длиной 1,5 мкм и шириной 1,0мкм, располагающиеся одиночно. По Граму окрашивались отрицательно. Спор и капсул не образовывали. Подвижные.
Культу рал ьные свойства. При посеве на МПБ вызывали помутнение без образования пристеночного кольца и пленки. На дне пробирки образовывали осадок, где находилась биологическая жидкость. На МЛА в чашках Петри проявляли умеренный рост, образовывая гладкие, выпуклые, блестящие с ровными краями колонии (S-форма).
Биохимические свойства. Ферментатировали глюкозу, лактозу, мальтозу, манит, сорбит, арабинозу, рамнозу. Сахарозу, дульцит, раффинозу, салицин, инозит не сбраживали. Не образовывали сероводород. Мочевину не утилизировали, обладали протеолитическими свойствами.
Факторы патогенности. Лизис эритроцитов в супензии на кровяном агаре не наблюдали. ДНК-азная активность - положительная. На основании определения морфологических, культуральных, биохимических свойств данная культура отнесена к роду Escherichia coli.
Морфологические свойства. Прямые палочки с закругленными концами, размером 1,0 0,6-0,8мкм. Располагались одиночно беспорядочно. По грамму окрашивались отрицательно. Спор и капсул не образуют, подвижные.
Культуральные свойства. При культивировании в МПБ вызывали помутнение среды. На МПА образовывали серо-белые выпуклые, гладкие, блестящие S-формы колонии, на Эндо - малиново-красные с металлическим блеском колонии, покраснение среды.
Биохимические свойства. С образованием кислоты Ферментатировали глюкозу, лактозу, мальтозу, манит, раффинозу, салицин, арабинозу, рамнозу. Не ферментировали с образованием кислоты и газа лактозу, дульцит, сорбит, инозит. Сероводородо- и индолоотрицательные. Давали положительную реакцию на каталазу, утилизировали малонат натрия, цитратотрицательные, аргининположительные, лизин и орнитин отрицательные.
Устойчивость. Вегетативные клетки не устойчивы к воздействию высоких и низких температур, кислая среда задерживала рост, а щелочная слабо ингибировала, высокое содержание поваренной соли в среде полностью подавляла рост микробных клеток. Устойчивы к эритромицину, и тетракциклину. Чувствительны к ампицилину, бензилпеницилину, полимиксину, мономицину, стрептомицину, неомицину, левомицетину.
Патогенные свойства. Не лизировали эритроциты барана на кровяном агаре.
Биологическая проба. При внутрибрюшинном введении белым мышам в дозе 0,5 мл взвесь суточный агаровой культуры микроорганизмов ( на физрастворе) из расчета 500 млн микробных кл/мл, гибель животных не вызывала. На основание определения морфологических, культуральных, биохимических свойств данную культуру отнесли к роду Enterobacter, виду Е. aglomerans.
Морфологические свойства. Прямые грамотрицательные палочки, размером 2,5 0,6 мкм, подвижные.
Культуральные свойства. При посеве МПБ вызывали интенсивное помутнение в среде. На МПА (косяк) В виде тонкого сплошного налета, поднимающиеся вверх по косяку МПА.
Биохимические свойства. Каталазоположительные, ферментируют глюкозу, сахарозу, осуществляют окислительное дезоминирование фенилаламина, гидролизуют мочевину, сеоводородооброзующие, индолоотрицательные, обладают протеолитическими свойствами.
Устойчивость. Кислая и щелочная еакция среды значительно сдерживала рост микробных клеток, 8,5%-ная концентрация поваренной соли в среде подавляла рост культуры. Не чувствительны к стрептомицину, слабо чувствительны к бензилпеницилину, тетерециклину.
Чувствительны к ампицилину, полимиксину, мономицину, неомицину, ритромицину, левомицитину.
Патогенные факторы. На кровяном агаре образовывали зону гемолиза.
Биологическая проба. При внутребрушинном введение белым мышам в дозе 0.5 мл взвеси суточной агарной культуры микроорганизмов (на физ.растворе) из расчета 500 млн.м.кл./мл, вызывали гибель животных на вторые сутки. В мазках - отпечатках из внутренних органов трупов белых мышей при микроскопии наблюдали грамотрицательные бактерии. Исходя из выше изложенных исследований, данная индифицировалась как Pr. mirabilis. Культура №4. Изолирована из сердца леща оз. Морфологические свойства. При микрокопировании мазков окрашенных по Граму выявили, что микроб изолят имеет прямые палочки грамотрицательные, размером 1 2мкм. Подвижные. Культуральные свойства. Хорошо растет на обычных питательных средах. На МПБ образует помутнение среды. На МПА образует полупрозрачные S-формы колонии, поверхность гладкая, блестящая. Биохимические свойства. Каталазаположительные, тест на среде Симоса с цитратом отрицательный, обладает активностями лизин декарбоксилазы и орнитиндекарбоксилазы, не утилизируют малонат, ферментируют мальтозу, индолообразующие, тест на фенилаланиндезаминазу отрицательный. Устойчивость. Нечувствительный к исследуемым антибиотикам Патогенные свойства. Не давали гемолиз на кровяном агаре, но обладали ДНК-азной активностью. На основании проведенных исследований данная культура отнесена к виду Edwardsiella tarda. Культура № 5 Выделена из жабер леща. Морфологические свойства. При микрокопировании из культуры окрашенных по Грамму выявили, что клетки имеют сферическую форму, расположенные гроздями, размером 0,7 мкм, неподвижные. Культуральные свойства. Хорошо растет на обычных питательных средах. При культивировании в МПБ образует интенсивную муть, с последующим образованием пристеночного кольца и придонного осадка. На МПА растет виде кремового цвета колоний, поверхность гладкая, блестящая.
На ЖСА образуют кремового цвета колонии, с лецитивизалазной активностью.
Биохимические свойства. Ферментатировали глюкозу, лактозу, мальтозу, манит. Тест на аргининдекарбоксилазу положительный, сероводород образующие, гидролизируют мочевину.
Устойчивость. Высокие температуры инкубирования рост значительно задерживался. Не чувствительный к исследуемым антибиотикам.
Патогенные свойства. На кровяном агаре образуют зону гемолиза. Плазмокоагуляция положительна.
На основе проведенных исследований данная культура идентифицирована как St. aureus, патогенный.
Культура №6. Выделена из печени окуня.
Морфологические свойства. При микроскопирование мазков обнаружены грамположительные сферические кокки, расположенные одиночно и попарно, размером 0,8-0,9 мкм. Не подвижные.
Культуральные свойства. На МПБ - незначительное помутнение бульона, на МПА образует серо-белые, гладкие, S- формы, мелкие колонии.
Устойчивость. Данная культура микробных клеток устойчивая к бензилпеницилину и эритромицину. Слабо чувствительные к полимиксину, тетракциклину, левомицитину.
Патогенные свойства. Зону гемолиз на кровяном агаре с эритроцитами барана не образуют.
Проведенные исследования по изучению свойств микроорганизмов позволяют отнести данный микробный изолят к виду Enterococcus faecalis.
Культура №7. Изолирована из жабер плотвы.
Морфологические свойства. Прямые грамотрицательные палочки, размером 2,5 0,6 мкм. Подвижные.
Культуральные свойства. При посеве в МПБ вызывали интенсивное помутнение среды. На косом МПА в виде тонкого сплошного налета, поднимающийся вверх по косяку МПА. Биохимические свойства. Каталазоположительные, ферментируют глюкозу, сахарозу, осуществляют окислительное дезаминирование фенилаланина гидролизуют мочевину, сероводородобразующие, индолоположительные, обладают протеолитическими свойствами. Устойчивость. Кислая и щелочная реакции среды значительно сдерживала рост микробных клеток, 8.5%-ная концентрация поваренной соли в среде подавляла рост культуры. Не чувствительны к стрептомицину, слабо чувствительны к бензилпенициллину и тетракциклмну. Чувствительны к ампицилину, полимиксину, мономицину, неомицину, эритромицину, левомицитину.
Патогенные факторы. На кровяном агаре образовывали зону гемолиза.
Биологическая проба. При внутрибрюшном введении белым мышам в дозе 0,5 мл взвеси суточной агаровой культуры микроорганизмов (на физ. растворе) из расчета 500 млн. микробных клеток/мл, вызывали гибель животных на вторые сутки. В мазках-отпечатках из внутренних органов трупов белых мышей при микроскопии наблюдали грамотрицательные бактерии. Исходя из вышеизложенных результатов исследований, данная культура идентифицирована как Pr. vulgaris.
