Введение к работе
Актуальность темы. Бруцеллез северных оленей на Крайнем Севере Российской Федерации имеет иирокое распространение, является значительным одерживающим фактором дальнейшего развития оленевод-отва и продолжает представлять серьезную социальную опасность.
Многолетний опыт борьбы о бруцеллезом оеверных оленей путем проведения общих хозяйственных и специальных ветеринарно-оанигар-ных мероприятий показал их недостаточную эффективнооть.
Борьба о этой болезнью осложняется также и наличием природных очагов бруцеллеза среди популяций диких северных оленей.
Специфическая профилактика бруцеллеза оленей о использованием вакцин в основном не вышла за рамки экспериментов.
Рядом исследователей Якутии, Магаданской облаоти, Таймыра и Ямала (В.А.Забродин, 1956, 1959 ; М.И.Рудаков , 1956; В.М.Серов, Н.М.Серова, 1956; И.М.Голооов, 1956, 1963; А.Ф.Пинипш, Г.П.Вябо-ров, О.С.Пегухова, 1958, I960; Л.Д.НиколаевскиЙ, А.В.Лаоков,1959; Н.Н.Давыдов, 1961} А.Ф.Пинигнн, О.С.Пегухова,І96І,І962;Г.П.Выборов, 1962,1964; Е.С.Орлов, 1963 и др.) было проведено изучение оте-пени рас прею траления, опоообов диагноогики, оредогв и методов специфической профилактики бруцеллеза оеверных оленей и, в чаотнооти, была испытана иммунологичеокая эффективнооть вакцин иэ штаммов 19 И 82 Brucella abortua.
В результате этих исследований была определена отепень безвредности и иммуногеннооти указанных вакцин и отмечена целесообразность их применения в борьбе о бруцеллезом. Однако,в силу недостаточной интеграции и неотработаннооти ряда вопросов о использовании средств специфической профилактики в общем комплексе про-гйвобруцеллезннх мероприятий производству до настоящего времени
не были рекомендованы оптимальные схемы иммунизации северных оленей указанными выше вакцинами.
Общеизвестно, что культуры бруцелл, ооновным хозяином которых являются северные олени, по культурально-морфологическим, гинкго-риалышм и биохимическим свойствам относятся к 4 биовару вида 8uis
Учитывая, что до настоящего времени нет достаточно эффективных средств специфической защиты северных оленей от бруцеллеза, изыскание вакцинных штаммов из культур, гомологичных данному виду бруцелл, значительно возраотаег..
В 50 - 60 -е годы в нашей стране изучался вакцинный штамм 61 Brucella oule для профилактики бруцеллеза овец (А.Н.Касьянов, 1953). Однако, несмотря на положительный эффект, вакцина из этого штамма до оих пор не нашла практического применения.
На наш взгляд вакцина из штамма 61 B.suis представляет определенный интерес н является перспективной для изучения ее противо-зпизоотической эффективности в системе мер профилактики и борьбы с бруцеллезом северных оленей.
Таким образом, изыскание новых средств и методов специфической профилактики бруцеллеза северных оленей, позволяющих существенно повысить эффективность проводимых профилактических и оздоровительных мероприятий,остается одной из актуальных проблем для отрасли и требует дальнейшего изучения.
Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилось изучение кульгурально-морфологических.тинкториальных и агглю-гинабельных свойств вакцинного штамма 61 B.suie , сроков расселяе-мости, приживаемости бруцелл и иммунологической перестройки орга-ниама морских свинок и северных оленей в ответ на введение вакцины из данного итамма.
Исходя из этого на разрешение били поставлены следующие задачи:
_ 3 -
изучить фенотипические и геногипическле свойства штамма 61 B.suia.
изучить в эксперименте на лабораторних животных антигенные,вирулентные и иммуногенные овойства культуры данного штамма при различных методах ее введения;
изучить орокл расселяемоети и приживаемости культуры вакцинного штамма 61 В.aula в организме морских овинок и северных оленей при различных методах ее введения;
в опытах на мороких овинках и северных оленях установить ре-актогенность вакцины из штамма 61 В.aula при различных методах введения;
изучить динамику антителообразования у морских овинок и северных оленей и аллергическую перестройку организма северных оленей при подкожном и пероральном методах иммунизации вакциной из итамма 61 В. auXaf
изучить динамику иммуноглобулинов М - и о - классов в сыворотке кроЕИ северных оленей пооле иммунизации.
Научная новизна. Шерше проведено изучение реактогзнных, антигенных и вирулентных оеоЙств вакцины из штамма 61 В.виїв на северных оленях.
В строго контролируемом опыте показана более низкая реактоген-ность вакцины из штамма 61 В.виїв при пероральпом методе иммунизации по сраЕвению о подковным.
Впервые изучена динамика специфических антител а сыворотке крови северных оленей в зависимости от дозы и метода введения вакцины из штамма 61 В.au±s.
Практическая ценность. Результаты исследований по изучению свойств и определению оптимального метода введения вакцини из штамма 61 В.aula дадут возмолшосгь при последующем установить
_ 4 -ее эффекгивноогь с целью ооздания высокого иммунного фона в оленьих отадах и ослабления отрицательного влияния природных очагов инфекции на эпизоотическую обстановку по бруцеллезу в ва очег этого получить противоэпизоотический, экономический и социальны! эффект.
Полученные данные открывают перопективу для разработки эффективных схем профилактики и ликвидации бруцеллеза северных оленей.
Апробация работы. Материалы исследований по диссертационной работе доложены и получили положительную оценку на:
научной конференции молодых ученых Республики Саха (Якутия)-, г. Якутск, 12 июня 1993 r.j
Всероссийской конференции "Пути совершенствования научного обеспечения АПК районов Крайнего Севера в условиях перехода к рыночным отношениям", г. Якутск, 2-4 сентября 1993 г.;
научной конференции "Проблемы изыскания,оинтеза и проигводотва новых препаратов для ветеринарии", г. Самарканд, 1994 г.;
заседании Ученого Совета Якутокого НИИ сельского хозяйства, г. Якутск, 1994 г.;
заседания Ученого Совета ВИЭВ, г. Москва, 1994 г.;
- межлабораторном оовещании ВИЭВ, г.Москва, 1994 г.
Публикации. По результатам проведенных исследований опублико
вало 3 научные статьи и 6 находятся в печати.
Объем и структура длсоертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и ооотоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, предложений и списка использованной литературы.
Материалы диссертации иллюстрированы 19 таблицами и 6 рисунками.
Список литературы содержит 171 наименований работ, из них 52 работы зарубежных авторов.
- 5 -' СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы и методы. Работа выполнена о 1991 по 1994 гг. в лаборатории эпизоотологии, диапюотикн и профилактики бруцеллеза ВИЭВ, на опытной базе Выпне-Волоцкого отдела ВИЭВ, в отделе ветеринарии научно-производственного объединения "Якутское" и на базе опыгно-производогвенного хозяйства (ОПХ) "^югейское", Оймяконского района Реопублики Саха (Якутия). При проведении экспериментов было ио-пользовано 160 мороких овинок и Б4 оеверных оленей.
Культурально-морфологнчеокие свойотва штамма 61 B.euie научала по методикам,, рекомендованным комитетом вкопертов по бруцеллезу ФА0/В03 (6-й доклад, 1986).
Видовую принадлежность культур к бруцелдам , помимо реакции агглютинации оо стандартиой бруцеллезной (з -) оыворогкоа а других фенотипичеоких овойотв, определяли по генетическим признакам в реакции ДНК-ДНК гибридизации в ооогветогвии о разработанными в Ш1ЭВ (лаборатория молекулярной биологии и биохимии и лаборатория эпизоотологии, диагностика н профилактики бруцеллеза) "Иетодичео-киьш рекомендациями по идентификации бруцелл методом JIHK-ДНК гибридизации" (1986).
Для изучения иммунологической реактивнооти организма морских овинок и оеверных оленеа при разлачвых дозах и методах введения вакцины из штамма 61 B.euia использовали оледувдие иммунологические теогн: для мороких овинок - реакцию агглютинации в пробирках (РА) и реакцию длительного связывания комплемента на холоде (РДСК), а для северных оленей плаогкнчагую реакцию агглютинации о роз бен-гал антигеном (роз бенгал проба-РШ) ,РА,РДЖ, реакцию агглютинации о 2-меркаптоэтанолом и аллергическую пробу о бруцеллином ВИЭВ.
Во вое сроки исследования определяли количество специфических
иммуноглобулинов М- и е- клаооов в реакции агглютинации о 2-мер-капгоэганолом фирмы "Loba Jeinoheaio" (Авогрия).
Для изучения вирулентнні, антигенных и иммуногенных овойотв штамма 61 В.еиія в «равнении о культурой штамма Рев-1 B.meiiten-sie были проведены 4 опыта на 160 морских овинках.
В первом опыте для изучения ороков раоселяемости и приживаемости культуры штамма 61 В.aula 20 морских овинок иммунизировали подкожным и пероральным методами введения одномиллиардной взвеси культуры данного штамма. Через 30 и 60 дней пооле введения культуры бруцелл. по Б морских свинок из каждой группы убивали и лимфатические узлы и органы (по 10 объектов от каждого животного) подвергали бактериологическому исследованию по методике принятой в лаборатории эпизоотологии.диагностики и профилактики бруцеллеза.
Во втором опыте на 60 мороких овинках изучали в динамике антигенные свойства вакцины из штамма 61 В.зиіз в сравнении о вакциной ив штамма Рев-1 В. aeiiteneia при подкожном,пероральном и коныдак-гивальном методах их введения. Наблюдение за животными вели в течение 90 дней, на протяжении которых через 7,15,30,70 и 90 суток сыворотку крови последовали в РА и РДСК о единым бруцеллезным антигеном. По результатам исследований определяли средний титр антител по каждой группе животных и путем статистической обработки устанавливали их колебания.
В третьем опыте на 70 морских свинках наряду о изучением антигенных свойств определяли иммуногеннооть вакцины из штамма 61 В. euie в сравнении с вакциной из штамма Рев-І В.твіхіелвів.Через 60 дней после иммунизации животных опытных и контрольной групп с целью проверки состояния иммунитета заразили культурой вирулентного штамма 102 Н B.meiitensia ( ВІНКИ ветпрепаратов ) в дозе 500
живых микробных клеток (100 минимальных инфицирующих доз, вызывающих заражение воех интактных животных - ИДІ00). В течение 45 дней пооле заражения животных опытных и контрольной групп иооледовали на бруцеллез серологическими методами - РА и РДСК (через 15 и 45 дней), затем их убивали и лимфатические узлы и органы последовали бактериологическим методом.
Средний индекс инфицированнооти по каждой группе вычиоляли в процентах по формуле: ИИ =-g- х 100, где
ИИ - индекс инфицированнооти; А - количество выделенных культур; В - количеогво объектов, из которых проведены высевы.
В опыте на 54 головах оеверных оленей изучили реакгогенноогь, ороки раооеляемосги и приживаемости культуры вакцинного штамма 61 В.виів , а также иммунологичеоклй ответ организма животных (по данным оерологических и аллергичеоких исследований) в динамике в различные сроки пооле иммунизации.
С целью изучения указанных овойотв вакцины из штамма 61 животных по принципу аналогов разделили на 6 групп по 9 голов в каждой. Оленям I, 2 и 3-ей групп вакцину (пооле разведения отерильннм физиологическим раогвором) вводили подкожно в области средней трети шеи, в дозах 5 млрд., 10 млрд. и 50 млрд.м.к., животным 4, 5 и 6 групп - перорально на корень языка, в дозах 10 млрд., 25 млрд. и 50 млрд.м.к.
Пооле иммунизации у животных в течение 6 дней определяли общую и меотную (при подкожном методе) реакции организма на введение вакцины путем наблюдения за состоянием животных , измерения температуры тела в течение 6 суток и определения размеров и кон-оиотешцш воспалительного отека (в течение 14 дней) в области инокуляция препарата.
Гуморальный иммунный ответ организма северных оленей изучали в динамике через 10, 15, 40, 73 и 115 дней после введения вакцины пугем исследования сыворотки крови животных на бруцеллез в роз бен-гал пробе (РБП), реакции агглютинации (РА) и реакции длительного связывания комплемента (РДСК). Уровень иммуноглобулинов М- и 0-клаосоБ определяли в реакции агглютинации с 2-меркаптоэтанолом.
Аллергическое исследование путем постановки пальпебральной пробы о бруцеллином ВИЭВ проводили через 40 и 73 дня после иммунизации животных.
Спустя 10, 73 и 115 дней после иммунизации По 3 головы северных оленей из каждой группы были убиты, а органы и лимфатические узлы повергнуты бактериологическому исследованию.
Выделенные культуры идентифицировали по фенотипическим свойствам (по общепринят».) методикам) и по генетическим признакам методом ДНК-ДНК гибридизации.
