Содержание к диссертации
Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
1.1. Особенности эпизоотического процесса бруцеллеза 9
1.2. Система противоэпизоотических мероприятий при профилактике и ликвидации бруцеллеза овец 12
1.3. Иммунитет 14
1.3.1. Понятие иммунитета 14
1.3.2. Особенности иммунитета при бруцеллезе 15
1.3.3. Местный иммунитет 17
1.3.4. Противобруцеллезные вакцины 21
1.4. Оптимизация методов и способов иммунизации животных живыми противобруцеллезными вакцинами 26
1.5.Заключение по обзору литературы 34
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 36
2.1. Материалы и методы исследований 36
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 37
2.2.1. Агглютиногенные и иммуногенные свойства вакцины из штамма у овец при конъюнктивалъной и подкожной прививке 37
2.2.1.1. Иммунитет и иммунологические реакции у овец, привитых вакциной из штамма 19 конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. после заражения 38
2.2.1.2. Иммунитет и иммунологические реакции у овец, привитых подкожно вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к. после заражения... 40
2.2.1.3. Иммунитет и иммунологические реакции у овец, привитых первично и повторно вакциной из штамма 19 конъюнктивально
в дозе 4 млрд. м.к. после заражения 43
2.2.1.4. Иммунитет и иммунологические реакции у овец, привитых первично и повторно вакциной из штамма 19 подкожно
в дозе 40 млрд. м.к. после заражения 45
2.2.1.5. Иммунитет и иммунологические реакции у овец, привитых первично вакциной из штамма 19 подкожно в дозе 40 млрд. м.к. и реиммунизированных конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. после заражения 47
2.2.1.6. Иммунологические реакции у интактных овец, инфицированных вирулентной культурой В.теШегшз (контроль) 49
2.2.1.7. Обобщение результатов эксперимента по изучение иммунитета и иммунологических реакций у овец, привитых вакциной из штамма 19
по разным схемам и методам 52
2.2.2. Поствакцинальные реакции у овец, привитых вакциной из штамма 19 по различным схемам и методам 56
2.2.2.1. Иммунологические реакции у овец, привитых вакциной из штамма 19 по различным схемам и методам в экспериментальных условиях 56
2.2.2.2. Поствакцинальные реакции у овец, привитых однократно вакциной из штамма 19 конъюнктивальным методом в дозе 4 млрд. м.к 58
2.2.2.3. Поствакцинальные реакции у овец, однократно привитых подкожно вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к 61
2.2.2.4. Поствакцинальные реакции у овец, многократно привитых вакциной из штамма 19 конъюнктивальным методом в дозе 4 млрд. м.к 64
2.2.2.5. Поствакцинальные реакции у овец, многократно привитых вакциной из штамма 19 подкожно в дозе 40 млрд. м.к 66
2.2.2.6. Обобщение результатов изучения поствакцинальных реакций у овец, привитых вакциной из штамма 19 по различным схемам и методам 67
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 70
ВЫВОДЫ 78
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 80
- Особенности иммунитета при бруцеллезе
- Иммунитет и иммунологические реакции у овец, привитых первично вакциной из штамма 19 подкожно в дозе 40 млрд. м.к. и реиммунизированных конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. после заражения
- Поствакцинальные реакции у овец, однократно привитых подкожно вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Специфическая профилактика бруцеллеза мелкого рогатого скота, как показал опыт борьбы с этим зоонозом в нашей стране, играет решающую роль в противоэпизоотичсеких мероприятиях. При этом непременным условием эффективности применения противобруцеллезных вакцин является обеспечение непрерывного и напряженного иммунитета у восприимчивых животных на весь период оздоровления неблагополучного хозяйства и далее в течение 4-х лет в целях предотвращения рецидивов инфекции.
Применительно к агглютиногенной вакцине из штамма 19 это достигалось путем ежегодной ревакцинации маточного поголовья без предварительного исследования, поскольку поствакцинальные реакции (РА + РСК) при подкожном введении 40 млрд. м.к. сохранялись на протяжении длительного времени и не позволяли в поствакцинальный период осуществлять ни диагностику, ни дифференциальную диагностику. Оздоровление хозяйств от бруцеллеза достигалось после постепенной поотарной замены всего неблагополучного маточного поголовья изолированно выращенными здоровыми ярками. Критерием для снятия ограничений служили косвенные эпизоотологические и эпидемиологические показатели - свежие случаи заболеваемости людей бруцеллезом, заражение баранов-производителей и аборты бруцеллезной этиологии (И. А. Коси- лов, 1959-1995; Т.Н. Глотов, 1969; Т.Е. Какоулин, 1975; В.И. Ким, 1991 и др.).
Этими же показателями ориентируются и при эпизоотическом контроле за привитым поголовьем в благополучных (угрожаемых) хозяйствах.
Вместе с тем, в связи с известными реформами в АПК страны после 1991 года, вследствие распада совхозов и колхозов и формирования мелких фермерских хозяйств, крестьянских подворий , АО и др., поотарная замена неблагополучных по бруцеллезу овец из-за малочисленности поголовья стала невозможной по экономическим и техническим причинам.
В современных условиях требуются новые подходы к специфической профилактике. А именно: применение такого метода, способа иммунизации животных, который позволял бы создавать достаточно прочный иммунитет при слабовыраженной серопозитивности, позволяющий осуществлять не только диагностику бруцеллеза для выявления больных животных из оздоравливаемых отар, но и эпизоотический контроль в поствакцинальный период.
Одним из путей решения этого вопроса является применение конъюнкти- вально /метода иммунизации живыми агглютиногенными вакцинами в уменьшенных дозах. Перспективность такого метода прививки в эксперименте на крупном рогатом скоте с использованием вакцин из штаммов В.abortus 19 или 104-М была доказана A.A. Лим, 1985-1989; A.A. Лим, А.Н. Касьянов, З.П. Ма- матова, 1987; М.П. Альбертян, Р.П. Яраев, 1994; Р.Г. Ягудин, К.И. Минжасов, И.С. Байбурин и др., 1995 и др.
В 6-ом докладе объединенного комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ (1986) указывается, что конъюнктивальная иммунизация крупного рогатого скота вакциной из штамма 19 в дозах 5-10 млрд. м.к. живых бруцелл с интервалом в 4 - 8 месяцев, создает напряженный иммунитет при слабо выраженном и быстро проходящем серологическом ответе.
Что касается бруцеллеза овец, то к началу наших исследований (1997), в литературе имелись источники, относящиеся к изучению конъюнктивального метода с использованием вакцины из штамма B.melitensis Рев-1 (Е.А. Бровик, 1990, 1991; Е.А. Бровик, А.Н. Касьянов, 1991 и др.).
Применительно к штамму В.abortus 19 такие исследования проводили И.А. Косилов и др. (1995), П.К. Аракелян, Е.Б. Барабанова, А.Т. Рукин (1997), А.Т. Рукин (1998), относящиеся к экспериментальному изучению иммунитета у животных при конъюнктивальной прививке вакцины в дозе 4 млрд. м.к. и угасания у них поствакцинальных реакций, Однако полученных данных было явно недостаточно для разработки целостной системы специфической профилактики бруцеллеза овец, ибо многие вопросы были не изучены.
В частности: продолжительность и напряженность иммунитета у животных, привитых различными методами и способами (конъюнктивально однократно, конъюнктивально многократно, подкожно + конъюнктивально под контролем регламентированных наставлением методов). Не изучена была и динамика угасания поствакцинальных реакций при указанных выше способах иммунизации овец в различных дозах вакциной из штамма 19 (40 и 4 млрд. м.к.).
Эти вопросы и составляли предмет наших исследований в экспериментальных и производственных условиях.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Целью настоящих исследований являлось изучение эффективности конъюнктивального метода иммунизации овец против бруцеллеза вакциной из штамма 19.
При этом в задачи исследований входило:
Изучить продолжительность и напряженность иммунитета у овец при использовании различных методов и способов их прививки вакциной из штамма 19.
Изучить динамику угасания поствакцинальных реакций у интактных животных, иммунизированных вакциной из штамма 19 по разным схемам.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В экспериментальных и производственных условиях доказана эффективность конъюнктивального метода иммунизации (как однократной, так и многократной) овец вакциной из штамма 19 в дозе 4 млрд. м.к. (по сравнению с подкожным - 40 млрд. м.к.), выражающаяся в иммунитете достаточной напряженности и продолжительности (13 мес.) и коротких сроках угасания поствакцинальных реакций (5 месяцев вместо 12 и более).
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Полученные данные об иммунитете и динамике угасания поствакцинальных реакций у овец, привитых разными методами и способами вакциной из штамма 19 (конъюнктивально, подкожно, однократно, многократно, в дозах 4 и 40 млрд. м.к., а также в различных сочетаниях) послужили основой для разработки оптимальной схемы специфической профилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота, позволяющей в более ранние сроки, чем существующая, осуществлять диагностику в целях выявления больных животных и дифференциальную диагностику для эпизоотического контроля за привитым поголовьем в поствакцинальный период.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены на Всероссийских координационных совещаниях по туберкулезу и бруцеллезу животных (Новосибирск, 1999; Омск, 2000), на заседаниях ученого совета ВНИИБТЖ (1997-2001 гг.).
ПУБЛИКАЦИИ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ. По теме диссертации опубликовано 3 научные работы.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 106 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, приложений.
Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 5 рисунками. Список литературы включает 235 источников, из них 186 - отечественных, 49 - зарубежных авторов.
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. Полученные результаты научных исследований нашли отражение во «Временном наставлении по применению вакцины живой сухой из штамма 19 бруцелла абортус конъюнкти- вальным методом при бруцеллезе мелкого рогатого скота (в порядке широкого производственного опыта), принятом Департаментом ветеринарии МСХ РФ (1998) в ветеринарную практику для широкого производственного испытания, а также в методические рекомендации «Оптимальные схемы специфической профилактики и поствакцинальной диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота», утвержденных подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН 16.10.2002 г. (протокол № 1).
Особенности иммунитета при бруцеллезе
Под иммунитетом в широком смысле этого слова (от латинского ттипш - невосприимчивость) понимается совокупность процессов и механизмов, направленных на сохранение постоянства внутренней среды организма от болезнетворных чужеродных для него агентов, в том числе и заразного материала.
Механизм и факторы иммунитета довольно многообразны: защитные свойства кожи и слизистых оболочек; воспаление, фагоцитоз, гуморальная система (антитела, бактерицидность крови, комплемент и т.д.); реактивность клеток, тканей. В связи с этим возникла необходимость классификации различных форм иммунитета. Различают иммунитет естественный - врожденный, или видовой, и иммунитет специфический, или приобретенный. По механизму действия выделяют иммунитет антимикробный и антитоксический. Разграничивают также иммунитет общий и местный, стерильный и нестерильный или инфекционный.
Но, как и все биологические системы являются в известной степени условными, так и классификация различных форм иммунитета имеет относительное значение. Наблюдения показали, что четко разграничить один вид иммунитета при этом заболевании от другого почти невозможно, так как процессы, протекающие в организме, неразрывно связаны. Относительны и такие определения иммунитета, как антимикробный и антитоксический или клеточный и гуморальный, ибо все эти факторы проявляются в совокупности (И.А. Косилов, 1992).
За последние годы среди исследователей сложилось определенное представление о ведущей роли клеточных факторов в формировании иммунитета при бруцеллезе преимущественно с антимикробным механизмом действия.
Помимо макрофагов доказано участие в защите других видов клеток, в частности, лимфоцитов. Лимфоидная система (тимус, фабрициева сумка, пейе- ровы бляшки, костный мозг, селезенка, лимфатические узлы) рассматриваются как самостоятельная иммунная система организма (Р.В.Петров, А.Н.Чередеев, А.А.Михайлова и др., 1972; Р.В.Петров, Л.А.Захарова, 1976; В.И.Покровский, М.М.Авербах, В.И.Литвинов и др., 1979; Г.А.Объедков, 1982 и др.).
Современная иммунология рассматривает процесс защиты макроорганизма в кооперировании Т-лимфоцитов, макрофагов и В-лимфоцитов.
Иммунитет и иммунологические реакции у овец, привитых первично вакциной из штамма 19 подкожно в дозе 40 млрд. м.к. и реиммунизированных конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. после заражения
В предыдущих двух фрагментах опыта (первая и вторая группа) было установлено, что после однократной прививки овцематок вакциной из штамма 19 как коъюннктивально, так и подкожно иммунитет к 13 месяцам угасает у большинства животных. И к очередной окотной кампании его недостаточно, чтобы противостоять заражению овцематок именно в этот наиболее опасный в эпизоотическом отношении период.
Поэтому в следующих трех группах (третья, четвертая и пятая) ставилась задача выявить наиболее целесообразный способ ревакцинации, который бы обеспечивал формирование напряженного иммунитета при слабовыраженной поствакцинальной серопозитивности.
В третьей группе животных (девять голов) первично и повторно с интева- лом 12 месяцев прививали вакциной из штамма 19 в дозе 4 млрд. м.к. конъюнктивально. После реавакцинации через 50 дней овцематок заражали вирулентной культурой одновременно с животными остальных групп. Серологические исследования (РА+ РСК) проводили до и после заражения через 7, 14 и 30 дней, результаты исследований приводятся в таблице 3 .
Прежде всего необходимо отметить выраженный иммунитет у овец после проведенной ревакцинации: из девяти животных заразилось только двое, что составляет 77,8%. При этом было выделено всего 4 культуры (ИИ - 4,0), из которых только одна из внутренних органов (генерализованная инфекция).
Касаясь иммунологических реакций следует особо отметить тот факт, что перед заражением после конъюнктивальной ревакцинации (через 50 дней) лишь только у двух овец была слабо выражена поствакцинальная РСК (1:5).
Несмотря на почти полное отсутствие антител иммунитет был четко выражен у большинства животных (77,8%). Этим примером подтверждается теория о клеточном иммунитете при бруцеллезе. Гуморальный фактор играет подсобную роль. Не отражают серологические реакции ни степени напряженности иммунитета, ни его прорыва, то есть инфицированности животного. В нашем случае, даже наоборот, у двух зараженных животных (№№ 4290 и 5986) отсутствовали агглютинины в патологических титрах, а комплементсвязывающие антитела не превышали концентрацию 1:5 - 1:10. в то время как у стерильных животных (№№ 5980 и 5984) РСК была отмечена в более высоких титрах (1:40).
Обращает на себя внимание также более низкая диагностическая ценность РА по сравнению с РСК. Даже если исходить из концепции о том, что при использовании вакцины из штамма 19 серологические реакции свидетельствуют не об инфицированности привитых животных, а об их контакте с заразным началом, то и в этом случае РА по своей чувствительности значительно уступает показаниям РСК. В нашем примере в девять раз: одна положительная РА и девять РСК.
В целом на поставленный вопрос получен положительный ответ: двукратная ревакцинация овцематок вакциной из штамма 19 конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. обеспечивает формирование иммунитета высокой напряженности (77,8%) при весьма слабовыраженной серопозитивности (через 50 дней после последней прививки положительно реагировало в низких титрах в РСК только 22,2%).
Четвертая группа овцематок являлась своего рода контрольной к предыдущей, поскольку искомая схема иммунизации сравнивалась с официальной, регламентированной Наставлением по применению вакцины из штамма 19 (1996 г).
Условия проверки иммунитета и изучения иммунологических реакций были аналогичными. Результаты отражены в таблице 4. Главное, что необходимо отметить, это высокий иммунитет у животных, двукратно привитподкожно вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к. - 88,9% при индексе ин- вазивности всего 5,0.
Схема 40 + 40 млрд. м.к., имея преимущество перед схемой 4 + 4 млрд. м.к. по иммуногенности (на 11,1%), значительно уступает последней по такому показателю как продукция поствакцинальных антител. Отрицательный момент заключается в препятствие в поствакцинальный период возможности осуществления диагностики бруцеллеза и эпизоотического контроля за привитым поголовьем.
Что касается характеристики серологических реакций, то в силу резко выраженной агглютиногенности вторичного иммунного ответа у всех животных при подкожном введении 40 млрд. м.к. вакцинного штамма отметить какие-либо особенности в их проявлении не представляется возможным.
Поствакцинальные реакции у овец, однократно привитых подкожно вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к
В материалах эксперимента по изучению иммунитета у овец, привитых вакциной из штамма 19 по разным схемам и методам, изложенных в предыдущей главе, одновременно проводились исследования по определению динамики угасания поствакцинальных реакций. Срок наблюдений ограничен 50 днями, то есть до заражения подопытных животных вирулентной культурой с целью определения у них состояния иммунитета. Данные серологических исследований (РА и РСК до предельного титра) приводятся в таблице 9. Таблица 9. Результаты серологических исследований овец, привитых вакциной из штамма 19 разным схемам и методам
Прежде всего обращает на себя внимание полное отсутствие или слабо- выраженная серопозитивность у овец после конъюнктивального введения им вакцины из штамма 19 в уменьшенной дозе (4 млрд. м.к.). При однократной прививке РА и РСК во все сроки исследования были отрицательными. А в третьей группе, где овцематок двукратно иммунизировали конъюнктивальным методом, РА и РСК были отмечены на 14 день только у 12,5% животных в низких титрах: соответственно - 50 МЕ и 1:10. К 30-му дню реакции уже появились у 25,0% животных. Несколько повысились и титры антител: РА - 37,5 МЕ, а РСК - 1:20. Но к 50-му дню после конъюнктивальной ревакцинации по аналогичному иммунному фону агглютинины угасали полностью, а комплементсвязывающие антитела регистрировались только у 12,5% животных в низком титре - 1:5.
Вместе с тем, при иммунизации овец подкожно вакциной в дозе 40 млрд. м.к. даже однократно поствакцинальные реакции сохранялись длительное время: через 12 месяцев РА у 11,1% (50 МЕ), а через 13 - у 22,2% (37,5 МЕ).
В четвертой группе, где овцематок двукратно иммунизировали подкожно (40 млрд. м.к.) поствакцинальные РА и РСК на протяжении всего срока исследования сохранялись на высоком уровне. К 50 дню после ревакцинации агглютинины регистрировались у 88,8% животных в концентрации 65,6 МЕ, а комплементсвязывающие антитела - у 77,7% в титре 1:21.
При конъюнктивальной ревакцинации овец по иммунному фону от первично проведенной прививки вакцины в дозе 40 млрд. м.к. (пятая группа) активное проявление синтеза антител связано, по-видимому, с явлением провокации антител их у животных, имевших выраженный грунд-иммунитет с длительно сохраняющейся информацией иммунокомпетеными клетками.
Исследования проводились в двух благополучных по бруцеллезу овец хозяйствах, где животных прививали конъюнктивальным методом вакциной из штамма 19 в дозе 4 млрд. м.к. После однократной прививки овцематок исследовали в РА и РСК до предельного титра в различные сроки после иммунизации. Результаты выборочного исследования животных в АО «Родина» Курганской области показаны в таблице 10.
Анализ материалов показывает, что поствакцинальные реакции выражены слабо как по продолжительности персистенции антител, так и по концентрации, особенно агглютининов. Уже через 90 дней РА была отрицательной у всех 245 овцематок. Максимальный титр составлял лишь 100 МЕ, который был зафиксирован на 15 день у одного животного и к 30 дню - у двух. Преобладали сомнительные результаты в РА (25 МЕ).
Комплементсвязывающие антитела сохранялись также непродолжительное время - к 90 дню РСК была отмечена у 8 овцематок. Причем концентрация антител была также не высокой (максимальный титр составлял 1:10, но 1:5 преобладал во все сроки исследования).
В АО «Спартак» Курганской области был повторен опыт с конъюнктивальной иммунизацией овцематок вакциной из штамма 19 в дозе 4 млрд. м.к. Однократно иммунизированных овцематок выборочно (по 250 - 310 голов) исследовали на 14 день после прививки и далее ежемесячно в следовали-на 14-день поеле прививки и далее ежемесячно в течение года. Результаты проведенных исследований отражены в таблице 11, которые подтвердили предыдущие данные о слабо выраженной агглютиногенности вакцины из штамма 19, примененной конъюнктивально в уменьшенной дозе (4 млрд. м.к.).
Как и в предыдущем производственном опыте, агглютинины полностью угасли к 90 дню после прививки, а максимальное количество положительных РА на 60 день (у 2,0 %).
Комплементсвязывающие антитела персистировали более длительно - до 90 дня, но у небольшого количества животных — всего 10,7% на 30-ый день. Динамика поствакцинальных РА и РСК у животных, однократно иммунизированных конъюнктивально вакциной из штамма 19 в дозе 4 млрд. м.к. наглядно показана в рисунке 1, из которого следует, что по истечении 4 месяцев после введения вакцины практически можно уже осуществлять диагностику бруцеллеза или эпизоотический контроль за привитым поголовьем.
В благополучном по бруцеллезу овец хозяйстве (АО «Нива» Курганской области) отара овцематок была привита официальным методом по Наставлению подкожно вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к. Для изучения динамики угасания поствакцинальных реакций (РА и РСК до предельного титра) животных выборочно исследовали в различные сроки после их иммунизации. Результаты этих исследований отражены в таблице 12.
Приведенные данные показывают, что в отличие от предыдущей группы животных, привитых конъюнктивально в уменьшенной дозе (4 млрд. м.к.), после подкожного введения вакцины в дозе 40 млрд. м.к. у подавляющего большинства овцематок отмечался активный синтез антител: как агглютининов, так и комплементсвязывающих веществ, наиболее ярко выраженный на 14-30-ый дни (РА отмечали соответственно в 98,5 и 82,1% случаев; РСК - в 93,8 и 81,7%). Максимальная концентрация антител отмечалась на 30 день. Титр РА достигал 400 МЕ у 8-ми животных, 200 МЕ вотных, 1:80-у 29 и 1:40-у 51.
Таблица 12 Поствакцинальные реакции у овец, однократно привитых подкожным методом вакциной из штамма 19 в дозе 40 млрд. м.к. (274 головы)
Даже по истечению 270 дней поствакцинальные реакции продолжали сохраняться у значительного числа животных: РА - у 40 (14,5%), РСК - у 28 (10,2%). Через год еще у отдельных овцематок в отаре продолжали выявлять РА ( у 12 животных - 4,3%) и РСК (у 1 - 0,4%), но уже в низких титрах.
Параллельно аналогичные исследования выборочно проводили в АО «Спартак» Курганской области. Результаты, приведенные в таблице 13 и рисунке 2, подтверждают высокую агглютиногенность вакцины из штамма 19, введенной подкожно в дозе 40 млрд. м.к. На 14-ый день в РА положительно реагировало 78,8%, в РСК - 93,8% от исследованных животных. На 30-ый день соответственно реагировало 63,5 и 81,8%.
Существенные различия в динамике угасания поствакцинальных реакций у животных в зависимости от метода и дозы введения вакцины из штамма 19 весьма показательны при сравнении рисунков 1 и 2. Даже при однократной подкожной прививке у овец на длительный срок сохраняются иммунологиче ские реакции, препятствующие проведению диагностики бруцеллеза и эпизоотической оценке отар в поствакцинальный период.
2.2.2.4. Поствакцинальные реакции у овец, многократно привитых вакциной из штамма 19 конъюнктивальным методом в дозе 4 млрд. м.к.
В предыдущих разделах (2.2.2.2. и 2.2.2.3.) настоящей главы приводились результаты изучения первичного иммунного ответа при различных методах и схемах применения вакцины из штамма 19. Но при этом, как показали материалы главы 2.2.1., иммунитет после однократной прививки непродолжительный, Он недостаточный на весь период оздоровления неблагополучных хозяйств от бруцеллеза. Для поддержания его на необходимом уровне необходима повторная прививка. Динамика угасания поствакцинальных реакций при вторичном иммунном ответе в результате неоднократных реиммунизаций вакцины по разным схемам и методам и составляет предмет последующих исследований.
Что касается изучения поствакцинальных реакций у овец, многократно привитых конъюнктивально вакциной из штамма 19 в дозе 4 млрд. м.к., то по этому вопросу мы проводили исследования в благополучных по бруцеллезу овец хозяйствах Курганской области - АО «Спартак» и «Сухменское».
Результаты проведенных исследований (таблица 14, рисунок 3) показывают, что при вторичном иммунном ответе в аналогичных условиях опы- та(метод введения вакцины, доза) продукция, главным образом, комплементс- вязывающих антител происходит активнее, чем при первичном иммунном ответе. Так, после однократной прививки в РСК реагировало на 14 день 0,4%, а после ревакцинации - 92,9%, на 30 соответственно - 10,7% и 95,0%, а на 90 - 3,3% и 28,1%. Хотя по длительности персистенции антител различий не установлено. К 5-му месяцу после конъюнктивальной прививки животных, независимо от кратности введения вакцины, РСК угасает полностью. Что касается РА, то значительных различий (как в случае с РСК) в динамике накопления, перси- стенции и угасания антител у животных при первичном и вторичном ответе в нашем примере не отмечено.
Этот вопрос также изучался в благополучных по бруцеллезу овец хозяйствах Омской и Курганской областей (АО «Чистовское» и «Сухменское»). В обобщенном виде результаты представлены в таблице 15 и рисунке 4. При сопоставлении их с предыдущей группой животных, т.е. многократно привитых конъюнктивальным методом, особо демонстративны различия в активности продукции антител и длительности их персистенции. Например, если через 90 дней после подкожного введения вакцины в РА реагировало 60,0% и в РСК - 36,6%, то после конъюнктивальной прививки соответственно - 1,6% и 28,1%. Через 270 и 360 дней различия еще более существенные. При подкожной реим- мунизации РА соответственно сохранялась у 40,0% и 2,1%, РСК - у 30,0% и 20,9%, тогда как у животных, ревакцинированных конъюнктивально, поствакцинальные реакции к этому сроку полностью угасали. Практически РА и РСК в этой группе уже не выявлялись с 150-го дня.
Интерес представляют данные по сравнению качества проявления поствакцинальных реакций у овцематок при подкожном применении вакцины после первичного и вторичного иммунного ответа. Если в первом случае преобладала продукция агглютининов, то во втором - синтез комплементсвязываю- щих антител. Особенно это было показательно в отдаленные сроки после введения вакцины: через 360 дней при вторичном ответе РСК отмечалась у 20,9%,
Если в действующем Наставлении по применению вакцины из штамма 19 (1996) схема оздоровления хозяйств от бруцеллеза овец ориентирована на замену неблагополучных животных и, следовательно, поствакцинальные реакции при этом не имеют практического значения, то в новых условиях ведения отрасли (крестьянские подворья, фермерские хозяйства) при отсутствии возможности (из-за малочисленности поголовья) осуществлять поотарную замену, этот показатель играет весьма существенную роль. На основании иммунологических реакций (РА + РСК) проводится—и--диагностика- для выявления больных животных, и дифференциальная диагностика при эпизоотическом контроле привитых овец.
Обобщенные данные по результатам изучения поствакцинальных реакций у овец, привитых вакциной из штамма 19 по разным схемам и методам, схематично изображенные на рисунке 5, наглядно показывают возможность и целесообразность использования конъюнктивального метода вакцинации, при котором иммунологические реакции синтезируются в незначительном количестве и угасают сравнительно рано.
Так после однократной конъюнктивальной иммунизации вакциной в дозе 4 млрд. м.к. в комплексе РА + РСК достигали своего максимума на уровне 22,2%. Но уже по истечению 150 дней поствакцинальные реакции полностью угасли.
При вторичном иммунном ответе, т.е. после неоднократной конъюнктивальной прививки в указанной дозе, концентрация агглютининов и комплемен- тсвязывающих антител достигает высокого уровня: 97,2% положительно реагирующих. Несмотря на это к 150 дню поствакцинальные реакции также полностью угасают.
Следовательно, к этому сроку овец, привитых конъюнктивально в дозе 4 млрд. м.к. даже многократно, уже можно исследовать РА и РСК как для выявления больных животных из оздоравливаемой отары, так и с целью эпизоотического контроля в поствакцинальный период.
Вместе с тем, при иммунизации овец официальным методом, т.е. подкожно в дозе 40 млрд. м.к., поствакцинальные антитела синтезируются у абсолютного большинства животных (в нашем примере у 100%) и на длительный срок. При первичном иммунном ответе они сохраняются через год у 3,2% животных, а при вторичном - у 22,3%. Естественно, при такой схеме иммунизации вопрос о дифференциальной диагностике не стоит, что и зафиксировано в нормативных документах (Наставление по применению вакцины из штамма 19, Инструкция, Сборник санитарных и ветеринарных правил).
