Содержание к диссертации
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ1.1. Актуальность темы
1.2. Цель и задачи исследования
1.3. Научная новизна работы
1.4. Практическая значимость работы
1.5. Основные положения выносимые на защиту
1.6. Личный вклад
1.7. Апробация и публикация результатов
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Общая характеристика болезни, экономический ущерб, распространение и эпизоотологические данные
2.2. Таксономия вируса болезни Найроби
2.3. Структура вируса болезни Найроби
2.4. Устойчивость вируса в объектах внешней среды
2.5. Культивирование вируса болезни Найроби
2.6. Вирулентные свойства вируса болезни Найроби
2.6.1 Патогенез
2.6.2 Клинические признаки
2.6.3 Патологоанатомические изменения
2.7. Антигенные свойства
2.8. Диагностика болезни Найроби и её дифференциация от других болезней
2.9. Средства специфической профилактики болезни Найроби
2.10. Меры борьбы
2.11. Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1.1 Материалы
3.1.1.1. Вирусы
3.1.1.2. Культуры клеток
3.1.1.3 Питательные среды, растворы и сыворотки
3.1.1.4. Реактивы
3.1.1.5. Оборудование
3.1.1.6. Подопытные животные
3.1.2 Методы исследований
3.1.2.1. Культивирование вируса болезни Найроби
3.1.2.2 Определение инфекционной активности вируса
3.1.2.3. Получение очищенного вируса болезни Найроби
3.1.2.4. Электронная микроскопия
3.1.2.5. Постановка реакции нейтрализации
3.1.2.6.Приготовление мазков крови и техника подсчета количества лейкоцитов
3.1.2.7. Определение стерильности штамма
3.1.2.8. Получение сывороток крови
3.1.2.9. Подготовка тест-препаратов для люминесцентной микроскопии
3.1.2.10. Получение ФИТЦ-иммуноглобулинов
3.1.2.11. Отработка режимов инактивации вируса болезни Найроби
3.1.2.12. Приготовление масляного адъюванта
3.1.2.13. Приготовление экспериментальных образцов инактивированной эмульгированной и ГОА сапониновой вакцины
3.1.2.14. Определение безвредности
3.1.2.15. Изучение антигенной и иммуногенной активности
3.1.2.16. Анализ антигенов вируса болезни Найроби методом иммуноблоттинга
3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.2.1. Адаптация штамма «ММ» вируса БН к первично-трипсинизированным и перевиваемым культурам клеток
3.2.2. Оптимизация условий выращивания культурального штамма вируса БН в культурах клеток ПС и ПО
3.2.2.1. Определение оптимальной множественности заражения
3.2.2.2. Влияние концентрации сыворотки КРС на накопление вируса БН
3.2.2.3 Влияние рН среды Игла-MEM на накопление вируса БН
3.2.3. Разработка роллерной технологии культивирования вируса БН
3.2.4. Определение специфичности культурального вируса БН
3.2.4.1. Определение специфичности вируса в реакции нейтрализации
3.2.4.2. Определение специфичности вируса в реакции прямой иммунфлуоресценции
3.2.5. Изучение иммунобиологических свойств культурального вируса БН
3.2.5.1. Определение безвредности
3.2.5.2 Определение антигенной и иммуногенной активности
3.2.5.3. Изучение гематологических показателей
3.2.5.4. Изучение иммунного ответа у животных с применением метода иммуноблоттинга
3.2.5.5. Определение реверсибельности
3.2.6. Определение условий лиофилизации и хранения культурального штамма «ММ/К-05» вируса БН
3.2.6.1. Подбор стабилизатора
3.2.6.2.Изучение сохраняемости нативного и лиофилизированного штамма при различных температурах
3.2.7. Получение специфической ВН-сыворотки к вирусу БН
3.2.7.1. Оценка специфичности ФИТЦ-иммуноглобулинов к вирусу БН
3.2.8. Изготовление экспериментальных образцов инактивированной вакцины против БН и изучение её антигенной и иммуногенной активности
3.2.8.1 Отработка режимов инактивации культурального вируса БН
3.2.8.2. Конструирование экспериментальных образцов инактивированной вакцины и изучение её антигенных и иммуногенных свойств
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Введение к работе
1.1. Актуальность темы Болезнь Найроби - зооантропонозная, трансмиссивная болезнь овец и коз, характеризующаяся острым течением и проявляющаяся рецидивирующей лихорадкой, геморрагическим гастроэнтеритом, слизисто-гнойными истечениями из носа, поражением органов кровообращения и дыхания. Представляет опасность для человека [1,2,146].
Согласно классификации Госкомсанэпиднадзора вирус БН отнесен ко II группе патогенности (опасности) для человека [6].
Возбудитель болезни Найроби - РНК-содержащий вирус, относящийся к роду Nairovirus семейства Bunyaviridae [54,146].
Болезнь широко распространена в юго-восточной Африке (Кении, Уганде, Заире, Танзании, Мозамбик, Сомали, Эфиопии, ЮАР, Кот-Д'Ивуар) [3,51,56,74,93,132,170]. Впервые болезнь наблюдал Брассей Эдварде в 1910г., расследуя причины массовой гибели овец на пастбищах вблизи г. Найроби (Кения), когда во время вспышки заболевания в течение месяца погибло более 2000 овец. Во время второй и третьей вспышек заболевания на данной территории наблюдали также высокую смертность овец. По данным МЭБ вспышки болезни Найроби были зарегистрированы таюке на Ближнем Востоке (Кувейт 1995г.) и в Европе (Греция 2003г.). Выделенный в Индии вирус коз Ganjam рассматривается в настоящее время как азиатский вариант вируса болезни Найроби [69,111].
Заболевание существенно влияет на экономику неблагополучных стран Африканского континента, поскольку основным направлением их экономического развития является сельское хозяйство. Экономический ущерб, причиняемый болезнью Найроби, складывается из гибели животных (смертность молодняка 70-90%, а взрослого поголовья до 40,0%), недополучения приплода, снижения продуктивности (удоев молока, привесов, качество шерсти), затрат на проведение лечебно-профилактических и противоэпизоотических мероприятий, а также ограничений при международной торговле мелкими жвачными животными и продуктами их убоя [133].
Переносчиками возбудителя болезни являются иксодовые клещи рода Rhipicephalus и Ambliomma, в изобилии встречающиеся на Африканском континенте. Эпизоотии болезни в энзоотичных местностях обычно регистрируются каждые 6 - 7 лет, что, по мнению ряда специалистов, связано с потерей у восприимчивых животных группового иммунитета. Увеличение количества вспышек болезни в неблагополучных районах наблюдается также после периода ливневых дождей, что связано с активностью клещей [51,63,79].
Развивающиеся в настоящее время торгово-экономические и культурные связи между РФ и странами различных регионов мира свидетельствуют о возможности заноса на ее территорию возбудителей различных инфекционных болезней. По данным отечественных исследователей экологической нишей этого возбудителя в природе на территории РФ может стать Кавказский регион, где выявлено 6 видов иксодовых клещей, являющихся потенциальными переносчиками вируса БН [48].
Во ВНИИВВиМ в 70-80-годах прошлого столетия проводились исследования по получению аттенуированного штамма вируса БН. В 1980г. сотрудниками института путем серийного пассирования вирулентного вируса на белых мышах (134 пассажа) был получен атгенуированный штамм «ММ» вируса БН с активностью 6,0-6,2 lg MicLD5o/cM [48]. Этот штамм использовался при конструировании мозговой вирусвакцины и изготовлении диагностических ФИТЦ - глобулинов.
В настоящее время при крупномасштабном получении вируссодержащего сырья для различных целей в качестве накопительной системы широко применяют перевиваемые культуры клеток, их используют и при культивировании вируса БН [F.G. Davies, 1977].
