Содержание к диссертации
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Биология подкожного овода крупного рогатого скота
2.2. Иммунный ответ крупного рогатого скота на личинки подкожного овода
2.3. Методы диагностики гиподерматоза крупного рогатого скота
2.4. Экономический ущерб от гиподерматоза крупного рогатого скота
2.5. Средства и методы борьбы с подкожными оводами крупного рогатого скота
2.6. Краткая климатогеографическая характеристика Западного региона РФ (Брянская и Смоленская области) СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ,
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Видовой состав подкожных оводов
4.2. Распространение подкожных оводов в Западном регионе РФ
4.3. Изучение динамики образования свищевых капсул и сроков выпадения личинок на окукливание
4.4. Сроки лета имаго оводов
4.5. Сравнительное изучение средств и методов борьбы с подкожными оводами в Западном регионе РФ
4.5.1. Изучение эффективности гиподектина инъекционного при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.2. Изучение эффективности гиподектина накожного при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.3. Изучение эффективности препарата новомек при внутрикожном способе введения при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.4. Изучение эффективности аверцида накожного и абамека накожного при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.5. Изучение эффективности аверцида инъекционного и абамека инъекционного при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.6. Выделение, очистка и характеристика антигенов, предназначенных для использования в иммуноферментном анализе на раннюю диагностику гиподерматоза крупного рогатого скота
4.6.1. Лизат личинки I стадии Н.lineatum
4.6.2. Лизат личинки III стадии H.lineatum
4.6.3. Аффинно-очищенный антиген из личинки III стадии Н. lineatum
4.6.4. Аффинно-очищенный антиген из личинки I стадии Н. lineatum
4.6.5. Антигены, очищенные ионообменной хроматографией из лизата личинки I стадии H.lineatum
4.7. Разработка непрямого твердофазного иммуноферментного анализа для выявления антител к возбудителю гиподерматоза крупного рогатого скота
4.7.1. Получение и характеристика положительного и отрицательного контролей
4.7.2. Условия сенсибилизации лунок антигеном и оптимального разведения антивидового коньюгата
4.7.3. Оптимизация условий проведения иммуноферментного анализа при исследовании проб в одном разведении
4.7.4. Оценка диагностических параметров разработанной иммуноферментной тест-системы
5. ОБСУЖДЕНИЕ :
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ИЗ
Введение к работе
Гиподерматоз — паразитарное заболевание крупного рогатого скота, вызываемое личинками подкожного овода отряда Diptera: Hypoderma lineatum (HL) и Hypoderma bovis (HB). Это заболевание зарегистрировано более чем в 55 странах мира (ФАО, 1984) и представляет большую проблему для стран Европы, Средней Азии и Китая. Известны случаи вспышек гиподерматоза в Австралии и Южной Африке, связанные с импортом пораженного оводом крупного рогатого скота. Распространение этого заболевания в неотропической области (Аргентина, Бразилия, Чили, Эквадор и Сальвадор) и Японии также связано с переносом возбудителей крупным рогатым скотом, импортируемых из других стран, в частности, из США [144].
В Российской Федерации после 1991 года, в связи с началом перестроечных процессов в сельском хозяйстве, прекратилось целевое государственное финансирование борьбы с гиподерматозом. В два раза сократился объем противооводовых мероприятий, вследствие чего заболеваемость среди контролируемого поголовья (около 53%) возросла в 10 - 14 раз (до 2,8 - 4,5%), а среди 47% поголовья, не подвергаемого противооводовым обработкам, достигает 30 - 70%.
Ущерб, причиняемый личинками подкожного овода, складывается из потерь молока и мяса, а также порчи кожевенного сырья. Ежегодные потери молока составляют 8 0 - 2 0 0 л о т каждой больной гиподерматозом коровы, мяса
• от 13 до 18 кг, кожевенного сырья - 8% площади заготовленных шкур. По.
экспертным оценкам общие потери от гиподерматоза в России оцениваются в сумме около 6,5 млрд. рублей в год [2]. У животных ухудшаются племенные качества, хозяйства несут лишние затраты кормов, средств и рабочей силы, а также на организацию и проведение лечебно-оздоровительных мероприятий.
Кроме того, вызванная гиподерматозом иммунодепрессия животных способствует развитию бактериальных, вирусных и паразитарных болезней, ущерб от которых чрезвычайно трудно подсчитать [144].
Для населения гиподерматоз опасен тем, что при употреблении молока и мяса животных, пораженных личинками овода, в организм человека может попадать вырабатываемое личинками высокотоксичное вещество гиподермотоксин, способное оказывать неблагоприятное влияние на здоровье людей.
Поэтому вполне естественно неослабевающее внимание исследователей к этой болезни и ее возбудителю.
В СССР, современной России и за рубежом проведена большая работа по изучению гиподерматоза крупного рогатого скота. Удалось выяснить основные особенности биологии подкожных оводов, предложить новые средства и методы борьбы с этими паразитами.
Несмотря на это, многие вопросы биологии и экологии возбудителя, выбора средств лечения и профилактики болезни в приграничных областях Российской Федерации, в частности, в Западном регионе (Брянская и Смоленская области) остаются недостаточно изученными. Существует большая вероятность заражения и перезаражения крупного рогатого скота в приграничных районах подкожным оводом от неблагополучных по гиподерматозу соседних стран. Поэтому, выяснение особенностей" биологии, экологии, распространения, а также выбор эффективных средств'борьбы с паразитом в приграничных регионах поможет правильно осуществлять противооводовые мероприятия на данной территории, способствуя снижению заболеваемости животных и получению экологически чистых продуктов животного происхождения.
Диагностику гиподерматоза в животноводческих хозяйствах нашей страны проводят по обнаружению у животных личинок II и III стадий паразита в течение весенних и летних месяцев (клинические признаки болезни), или по экспертизе подкожных тканей и органов животного (вскрытие). Это не позволяет диагностировать болезнь на ранней стадии заболевания.
Предлагавшиеся для ранней диагностики болезни реакции непрямой гемагглютинации, внутрикожной пробы, кольцепреципитации, латексагглютинации и двойной диффузии в агаровом геле не лишены недостатков и в повседневной практике почти не используются. Эти методы не обладают достаточно высокой чувствительностью и специфичностью. Кроме того, они не всегда пригодны для рутинных исследований. Поэтому, за рубежом широкое распространение получил иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения личинок I стадии H.lineatum и H.bovis в организме животного.
Существует коммерческий набор «Elisa hypodermosis serum screening» (институт «Pourquier», Франция) на основе непрямого варианта иммуноферментного анализа для выявления антител к возбудителю гиподерматоза в сыворотках крови крупного рогатого скота. Создание высокоэффективной отечественной тест-системы поможет решить проблему ранней диагностики гиподерматоза в Российской Федерации.
В этом связи актуальность решения вышеперечисленных вопросов не вызывает сомнений, что и послужило основанием выполнения наших исследований.
Цель работы. Изучение распространения, биологии и экологии подкожных оводов в Западном регионе (Брянская и Смоленская области) Российской Федерации, разработка и апробация средств лечения, диагностики и профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота.
Основные задачи исследований:
1. Изучить видовой состав и особенности распространения подкожных оводов крупного рогатого скота.
2. Изучить сроки лета оводов, динамику подхода личинок под кожу животных, выпадение личинок на окукливание.
3. Провести сравнительную оценку эффективности средств лечения и профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота.
4. Разработать технологию получения и очистки антигенов возбудителя гиподерматоза крупного рогатого скота.
5. Изучить возможность применения этих антигенов в иммуноферментном анализе для выявления антител к H.bovis и H.lineatum.
6. Разработать диагностическую тест-систему на основе непрямого иммуноферментного анализа для выявления антител к возбудителю гиподерматоза крупного рогатого скота.
Научная новизна работы.
Изучены особенности распространения, биологии и экологии подкожных оводов в Западном регионе России: видовой состав, сроки начала и окончания лета имаго, динамика паразитирования личинок в организме крупного рогатого скота, выпадение личинок на окукливание. Проведен сравнительный анализ эффективности средств лечения и профилактики заболевания на данной территории.
На основе очищенных антигенов из личинки I стадии H.lineatum разработан отечественный метод ранней диагностики гиподерматоза крупного рогатого скота на основе непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. В сравнительных исследованиях показана высокая чувствительность и специфичность разработанного метода и установлена положительная корреляция результатов с коммерческим набором «Elisa hypodermosis serum , screening» (институт «Pourquier», Франция).
Практическая значимость исследований.
Результаты изучения особенностей распространения, биологии и экологии подкожных оводов в Западном регионе России, выбора эффективных средств борьбы с паразитом позволят правильно организовать противооводовые мероприятия на данной территории, способствуя, тем самым, получению экологически чистых продуктов животного происхождения.
Разработанная тест-система на основе непрямого варианта иммуноферментного анализа может быть использована- в исследовательских учреждениях и лабораториях для ранней диагностики гиподерматоза крупного рогатого скота.
Основные положения, выносимые на защиту.
Полученные экспериментальные данные позволяют вынести на защиту следующие основные положения: результаты изучения распространения, биологии и экологии подкожного овода в Западном регионе России;
• результаты сравнительной оценки эффективности средств лечения и профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота;
• результаты разработки и оценки иммуноферментной тест-системы для выявления антител к возбудителю гиподерматоза крупного рогатого скота.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ВНИИВСГЭ (2006, 2007 гг.), на межлабораторном совещании сотрудников ВНИИВСГЭ (г. Москва, 2007 г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано три научные работы.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 130 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка цитированной литературы и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 17 таблицами и 22 рисунками. Список литературы включает 148 источников отечественных и зарубежных авторов.
