Содержание к диссертации
Введение
I. Обзор литературы 11
1.1. Экономический ущерб, распространение и особенности эпизоотического процесса при фасциолезе 11
1.2. Особенности иммунитета при гельминтозах 25
1.3. Патогенез и иммунитет при фасциолезе 40
1.4. Методы диагностики при фасциолезе животных и их модификации 46
1.5. Комплексные лечебно - профилактические мероприятия при фасциолезе 54
II. Собственные исследования 66
2.1. Материал и методы исследований 66
2.2. Результаты исследований 90
2.2.1. Эпизоотический процесс при фасциолезе крупного рогатого скота в северо - западном регионе РФ 90
2.2.1.1. Источник возбудителя инвазии 94
2.2.1.1.1. Распространение фасциолеза крупного рогатого скотав Ленинградской и Новгородской областях 95
2.2.1.1.2. Распространение фасциолеза крупного рогатого скотана примере АОСХ «Котельский» Кингисеппского района Ленинградской области 102
2.2.1.2. Механизм передачи 104
2.2.1.2.1. Возрастная динамика фасциолеза крупного рогатого скота в хозяйствах Ленинградской области 107
2.2.1.2.2. Возрастная динамика фасциолеза крупного рогатого скота в хозяйствах Новгородской области 110
2.2.1.2.3. Сезонная динамика фасциолеза крупного рогатогоскота в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей . 111
2.2.1.2.4. Сезонная динамика фасциолеза крупного рогатого скота в АОСХ Котельский Кингисеппского района 114
2.2.1.3. Восприимчивое животное 117
2.2.1.3.1. Иммунный статус телят при экспериментальномфасциолезе 117
2.2.1.3.2. Кинетика ферментов переаминирования, щелочнойфосфатазы, 7- глютамилтранспептидазы и лактатдегидрогеназыу крупного рогатого скота, инвазированного фасциолами 130
2.2.2. Противоэпизоотические мероприятия при фасциолезе животных. 139
2.2.2.1. Прижизненная диагностика фасциолеза 140
2.2.2.2. Специфичность фасциолезных антигенных препаратов и чувствительность (информативность) в ИФА и РЫТА 149
2.2.2.3. Сравнительное изучение чувствительности антигенных фракций фасциол (ЭСФАг и СФАг) в ИФА и РИГА 153
2.2.2.4. Сопоставление результатов серологического (ИФАи РНГА), гельминтологического и послеубойного исследований крупного рогатого скота на фасциолез в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей 155
2.2.2.5. Аллергическая диагностика фасциолеза крупногорогатого скота 167
2.2.3. Терапия при фасциолезе крупного рогатого скота 171
2.2.3.1. Эффективность сантела 171
2.2.3.2. Эффективность клозальбена 174
2.2.3.3. Эффективность тетраксихола 176
2.2.3.4. Эффективность дисалара 10% 178
2.2.3.5. Испытания эффективности сантела, клозальбена, тетраксихола и дисалара при фасциолезе 179
2.2.3.6. Эффективность альбена - супер 181
2.2.3.6.1. Токсикологические свойства альбена - супер 181
2.2.3.6.2. Эмбриотропное действие (эмбриотоксическиеи тератогенные свойства) альбена - супер 186
2.2.3.6.3. Иммунотоксические свойства альбена - супер 191
2.2.3.6.4. Определение остаточных количеств альбена - супер (альбендазола) в организме крупного рогатого скота 195
2.2.3.6.5. Определение антгельминтной эффективности альбена -супер при фасциолезе крупного рогатого скота 197
2.2.3.7. Иммунокоррегирующая терапия при фасциолезе крупного рогатого скота 201
2.3. Обсуждение результатов исследований 257
Выводы 290
Практические предложения 293
Список использованной литературы 295
Приложение 339
- Особенности иммунитета при гельминтозах
- Распространение фасциолеза крупного рогатого скотав Ленинградской и Новгородской областях
- Восприимчивое животное
- Аллергическая диагностика фасциолеза крупногорогатого скота
Введение к работе
Актуальность проблемы. Среди гельминтозов сельскохозяйственных животных фасциолез. является одним из экономически значимых и представляет часть экологической проблемы не только Российской Федерации, но и других регионов мира, где возрастает интенсивность вредоносного воздействия паразитических червей на природу.
Информация о широком распространении фасциолеза среди крупного рогатого скота и овец подробно представлена в работах отечественных и зарубежных исследователей (Н.В.Демидов, 1965; А.М.Сазанов, 1965 - 1976; Ю.Ф.Петров и соавт., 1985, 1986, 1993, 2003; Х.С.Абдуллаев, 1995; В.В.Горохов и соавт., 1997; В.В.Горчаков, 1997; В.В.Сочнев и соавт., 1998; Ю.С.Докторов и соавт., 1999; А.В.Зубов, М.Ш.Акбаев, 2001; А.ИЛтусевич, Н.Н.Андросик, 2001; D.A.Armstrong, 1982; F.Lucchese et al., 1996; M.S.Mas-Coma et al., 1999).
Значительное распространение болезни обусловлено повсеместным расселением промежуточного хозяина фасциолы обыкновенной -моллюска малого прудовика, который является ведущим звеном в циркуляции трематод.
Сложившаяся эпизоотическая ситуация подтверждает необходимость проведения комплексных оздоровительных и профилактических мероприятий при фасциолезе животных.
Учеными установлено, что гельминтозы, в том числе и фасциолез, вызывают вторичные иммунодефицита, поэтому необходимо учитывать иммунный статус животных на момент их лечения (Э.Х.Даугалиева, В.В.Филиппов, 1991; Э.Х. Даугалиева, 2000).
Своевременная и достоверная диагностика является важным звеном профилактики. Используемые в ветеринарной практике лабораторные методы исследований не позволяют объективно оценить эпизоотическую ситуацию. С помощью метода последовательных промываний и различных модификаций гельминтоовоскопии яйца фасциол выявляют в фекалиях 45 -50 % зараженных животных (Г.А.Котельников, 1984).
В период миграции ювенильных форм фасциол установить диагноз с использованием общепринятых методов прижизненного исследования не представляется возможным. Поэтому практическое значение имеет разработка и применение иммунодиагностических тестов, которые весьма эффективны при диагностике фасциолеза.
В последние два десятилетия в Российской Федерации и за рубежом достаточно широко апробированы и используются для выявления трематодозов серологические методы: РДПАГ, РИГА, ИФА, ПЦР и др. При этом антигены приготавливают из различных компонентов трематод.
В качестве иммунодиагностического теста для выявления животных, зараженных Fasciola hepatica, сотрудниками ВИГИС (В.В.Клименко и соавт, 1997) предложена реакция диффузионной преципитации в агаровом геле (РДПАГ); метод рекомендуется использовать для распознавания острой формы фасциолеза.
Таким образом, выполненные в этом направлении изыскания в Российской Федерации не многочисленны и на практике не применяются.
На наш взгляд, следует уделять внимание разработке иммунодиагностических тестов на основе доступного и недорогого сырья с условием небольшой трудоемкости, простоты постановки, высокой информативности методов. Важно учитывать возможность адаптации получаемых диагностических препаратов для рутинных серологических методов, так как одной из задач является одновременное исследование на фасциолез большого количества животных за короткий период времени.
Не менее значимым для ветеринарной практики является аллергический метод диагностики фасциолеза. Длительно сохраняющаяся после переболевания в острой форме сенсибилизация тканей экскреторно — секреторными антигенами Fasciola hepatica обусловливает стимулирование клеточных факторов иммунитета, что подтверждает возможность применения внутрикожной аллергической пробы.
В пользу использования аллергической диагностики при фасциолезе свидетельствует высокий уровень эозинофилии и IgE в острый период.
Попытки отечественных исследователей получить отвечающий необходимым требованиям аллерген принесли разноречивые, но обнадеживающие результаты.
Методы серологической и аллергической диагностики должны применяться комплексно, планомерно в острый и хронический периоды фасциолеза, а полученные результаты эпизоотологического мониторинга необходимо рассматривать как важный этап оздоровительных и профилактических мероприятий.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота в северо - западном регионе России на примере Ленинградской и Новгородской областей, разработка иммунобиологических методов диагностики в комплексе мероприятий по проведению эпизоотологического мониторинга и совершенствование терапии при данном заболевании.
Для осуществления поставленной цели решались следующие задачи:
1.Провести ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по фасциолезу крупного рогатого скота в северо - западном регионе России на примере Ленинградской и Новгородской областей;
2.Изучить роль возбудителя и источника возбудителя в эпизоотическом процессе при фасциолезе крупного рогатого скота;
3.Выявить влияние фасциол на иммунобиологическую реактивность и иммунный статус крупного рогатого скота, экспериментально и спонтанно зараженного гельминтами;
4.Разработать и установить возможность использования ИФА и РИГА для диагностики фасциолеза и определить эффективность разработанных методов;
5.Провести сероэпизоотологические обследования крупного рогатого скота в хозяйствах северо — западного региона, выяснить показатели экстенсивности инвазии, чувствительность (информативность) ИФА и РИГА при острой и хронической формах фасциолеза;
б.Оптимизировать терапию и разработать иммунопрофилактику при фасциолезе крупного рогатого скота.
Научная новизна. Впервые: -детально изучены особенности эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота в северо — западном регионе Российской Федерации (распространение, сезонная и возрастная динамика), особенности иммунитета и патогенеза;
-разработана серологическая и аллергическая диагностика фасциолеза крупного рогатого скота, которая применена на практике;
-разработаны параметры приготовления экскреторно - секреторных и соматических антигенов Fasciola hepatica для иммуноферментного анализа (ИФА) и реакции непрямой гемагллютинации (РЫТА), установлена возможность их применения для диагностики фасциолеза;
-предлагается оценивать положительные результаты серологического исследования коров, в печени которых не выявлены половозрелые фасциолы, как следствие клеточно - гуморального иммунного ответа, обусловленного продолжительной сенсибилизацией тканей животных экскреторно - секреторными антигенами F. hepatica;
Сопоставление результатов серологического и послеубойного исследований крупного рогатого скота на фасциолез позволило установить четкую корреляцию.
Подано заявление о выдаче патента Российской Федерации на изобретение «Способ диагностики фасциолеза крупного рогатого скота». Регистрационный номер 2004109943 от 7 апреля 2004 г.
Оптимизирована терапия и разработана иммунопрофилактика при фасциолезе крупного рогатого скота, предложены эффективные схемы лечения и профилактики с применением отечественных препаратов.
Практическое значение. Эпизоотологический мониторинг при фасциолезе (изучение динамики, интенсивности эпизоотического процесса и эпизоотологической географии) позволяет своевременно, на регламентированной основе осуществлять комплекс оздоровительных и лечебно — профилактических мероприятий.
Разработаны оптимальные параметры получения иммунореагентов для ИФА и РИГА с целью диагностики фасциолеза.
Получены данные, на основании которых можно устанавливать конкретные сроки и кратность диагностических исследований на фасциолез в разиличные сезоны года. Эффективность лечебно -профилактических обработок следует выяснять на основании изучения динамики снижения титров антител к F. hepatica после дегельминтизации животных. Важным является учет особенностей динамики эпизоотического процесса при фасциолезе в конкретном регионе России.
На основании исследований разработаны и внедрены в производство:
1.«Наставление по применению препарата альбен
для дегельминтизации сельскохозяйственных животных, пушных зверей и кур» (утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 27.03.2002 №13-3-04/0385).
2.Методическое пособие «Прижизненная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2002 г).
3.Методическое пособие «Посмертная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2003 г).
4.Методические рекомендации «Современные методы диагностики фасциолеза крупного рогатого скота» (утверждены северо-западным научно-методическим центром РАСХН, 2004 г).
Научные разработки используются в учебном процессе на ветеринарных факультетах вузов Минсельхоза России и стран СНГ.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы
доложены на следующих научных и научно-практических конференциях: 1.Международной конференции, посвященной 125-летию академии (Казань, КГАВМ им.Н.Э.Баумана, 1998).
2.Ш международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины на Северном Кавказе» (Персиановский, 2000).
3.Международной межвузовской конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2001, 2002,2003, 2004).
4.ІУ международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2002).
5.Конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, ВИГИС, 2003, 2004)
6.XI Московский международный конгресс (Москва, 2003).
7.Международной конференции и III съезда паразитологического общества
при РАН «Проблемы современной паразитологии» (Петрозаводск, 2003).
8.П международный Конгресс (Алматы, 2003)
9.Конференции аграрного факультета РУДН «Концепции, практика и перспективы современного земледелия» (Москва, 2003)
10.Конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПГАВМ (Санкт-Петербург, 2001, 2002, 2003, 2004).
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Эпизоотический процесс при фасциолезе крупного рогатого скота.
2. Особенности иммунитета и патогенеза при спонтанном фасциолезе.
3. Диагностика при фасциолезе крупного рогатого скота.
4. Терапия и иммунопрофилактика фасциолеза крупного рогатого скота.
Публикации. По материалам диссертации опубликованы 54 научные работы, в том числе монография.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 338 страницах машинописного текста, включает 62 таблицы, 34 рисунка, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих 3 раздела, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений. Список литературы включает 365 источников, из них 228 отечественных и 137 иностранных.
Особенности иммунитета при гельминтозах
Иммунная ответная реакция на заражение гельминтами - это сложная многокомпонентная система, включающая специфическую фазу иммунитета, обусловленную антителами (гуморальный тип), сенсибилизированными лимфоидными клетками (клеточный тип) и неспецифическую - с различными клетками и системами. Ю.Н.Федоров (1981), Э.Х.Даугалиева, В.В.Филиппов (1991) указывают, что разработка принципов оценки иммунного статуса животных и выявление иммунодефицитного состояния должны проводится с учетом функционального состояния Т- и В- клеточных систем иммунитета.
К основным иммунологическим показателям, характеризующим особенности иммунного ответа Х.М.Векслер (1981) относит количественные и функциональные параметры субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, макрофагов в крови и тканях, а также циркулирующие гетерологичные и аутологичные антитела. Особое внимание уделяется иммуносупрессивному влиянию гельминтов на организм хозяина. Этот вопрос рассмотрен в работах Е.С.Лейкиной (1978, 1981, 1987), О.Г.Полетаевой (1978, 1984), Н.И.Тумольской (1988), А.С.Бессонова, Р.А.Пеньковой (1984), К.М.Лобан (1986), Э.Х.Даугалиевой (1986, 1992, 1996), А.Гаджиевой (1985, 1986), Р.Т.Маннаповой (1997а, 19976), Z.Willirms (1985), S.I.Cerone (1985), G.A. Grandall, R.B. Grandall (1976), H. Nogami (1980), O.M.Barta (1986), M.W. Schnaper (1986), I.H. Boerseme (1987), A.Capron (1992). О.Г.Полетаева (1972, 1975, 1977, 1978, 1983, 1984) глубоко изучила феномены Т- и В- систем иммунитета при аскариозе, их диагностическое и протективное значение. Ею установлено, что иммунный ответ хозяина на антигены аскарид характеризуется многообразием проявлений, обусловленным активизаций Т- и В- систем иммунитета и стадийностью в миграционной фазе инвазии при ре- и суперинвазиях, по сравнению с первичным ответом. Степень выраженности иммунного ответа зависит от интенсивности и кратности заражения, от генетически детерминированных особенностей и физиологического состояния организма хозяина. Активизация Т- системы иммунитета наблюдается со 2 - го дня, В- системы со 2 - 5 дня после первичного заражения и в первые дни реинвазии. Ее проявлением на клеточном уровне в этот период является рост пролиферативной активности Т- и В- клеток, усиление продукции лимфокинов Т- клетками и увеличение числа В- клеток с рецепторами к С3 компоненту комплемента. Несколько позднее (5-10 дни первичного заражения) в крови появляются агглютинирующие и преципитирующие антитела. В преимагинальной стадии генерализованный иммунный ответ постепенно снижается, наблюдаются проявления местного иммунитета, Т— система нормализуется, В- система сохраняет повышенную активность (наличие Ig G и Ig Е). В период достижения аскаридами половозрелой стадии усиливаются реакции местного иммунитета (аллергические воспаления), а также падает функциональная активность Т- и В- лимфоцитов. Этим же автором установлена при аскариозе протективная роль гуморальных антител IgM и IgG и непосредственное или опосредственное действие клеток лимфоидной ткани. Е.П.Михайлова (1975) изучила плазмоцитарную и эозинофильную реакцию у поросят при аскариозе, до и после дегельминтизации их пиперазином гексагидратом. Ею установлено, что первыми (при однократном заражении) реагируют брыжеечный и портальный лимфоузлы, а затем - бронхиальный. При многократном заражении в лимфоидной ткани развиваются процессы торможения. Введение пиперазина гексагидрата способствовали нормализации лимфоидной ткани к 10-му дню после дачи препарата. Эозинофильная реакция при однократном, повторном заражении и реинвазии была сильно выражена. По мнению Е.С.Лейкиной (1984) при нормальной иммунной системе между организмом хозяина и гельминтом устанавливается состояние равновесия, которое поддерживается со стороны хозяина регуляцией активности разных субпопуляций Т— клеток (хелперов, супрессоров), модуляцией действия эозинофилов, смягчающих неблагоприятные для паразита реакции аллергического типа, регуляцией антителообразующих В- клеток. М.В.Якубовский (1986) изучал динамику Т— и. В- лимфоцитов в крови поросят при заражении их аскаридами, трихоцефалами, эзофагостомами и при смешанном инвазировании животных этими гельминтами. При нематодозной инвазии происходила активизация Т- розеткообразующих лимфоцитов периферической крови. Через 1 день после заражения гельминтами в крови наблюдалось резкое увеличение содержания Т- лимфоцитов при аскаридозе на 86,72%, при трихоцефалезе - на 22,0% и эзофагостомозе - на 53,05%, при смешанной инвазии -/ на 79,69%. С развитием патологического процесса наблюдалось дальнейшее нарастание в крови количества Т- лимфоцитов..; При исследовании В- лимфоцитов установлено достоверное увеличение на 3 день инвазирования поросят аскаридами в 2,26 раз, трихоцефалами в 1,87, эзофагостомами в 2,51 раза. В период развития инвазионного процесса происходило некоторое колебание уровня В- лимфоцитов, но их количество оставалось на достоверно высоком уровне в течение более 2 месяцев после заражения поросят гельминтами. В.К.Чернуха, А.А.Гапич (1986) изучая показатели качества Т- и В- лимфоцитов в крови поросят, инвазированых аскаридами, трихоцефалами и эзофагостомами, в отличие от здоровых, наблюдали значительное уменьшение факторов иммунитета, что по мнению авторов свидетельствовало об угнетении иммунной системы иммунитета, низкой естественной резистентности и гельминтозной иммуносупрессии. По данным В.С.Ершова (1984) антигены гельминтов стимулируют обе популяции иммунокомпетентных клеток: Т— и В— лимфоцитов.
Распространение фасциолеза крупного рогатого скотав Ленинградской и Новгородской областях
В условиях областных мясокомбинатов Ленинградской области при проведении ретроспективного статистического анализа результатов послеубойной ветеринарно - санитарной экспертизы на фасциолез (1992 -2002 гг.) выяснены средние показатели экстенсивности инвазии - 7 — 16%.
Экстенсивность инвазии крупного рогатого скота в Новгородской области была значительно выше и составила 9,4 - 22,5% по результатам ветеринарно - санитарной экспертизы на фасциолез (за 1992 - 2002 г.г). Результаты представлены в таблице 1.
Пораженная фасциолами печень крупного рогатого скота утилизирована в 1219 (1999 г.) и 359 случаях (2001 г.).
При послеубойной экспертизе печени крупного рогатого скота больного фасциолезом на областных мясокомбинатах обращали внимание на наличие половозрелых трематод, клеточного детрита и продуктов воспаления в желчных ходах. Установлены следующие патологические изменения: интерстициальный гепатит и фиброзно - известковый холангит.
Мариты фасциол выявлены у 25041 животных в Ленинградской области (максимальный показатель интенсивности инвазии -68 экземпляров) и у 28020 животных в Новгородской области (максимальный показатель ИИ — 73 экземпляра).
В условиях кафедры паразитологии СПГАВМ трематоды по морфометрическим показателям определены как вид Fasciola hepatica.
В партиях дегельминтизированных и выбракованных коров трематод в печени обнаружили в 2 - 5% случаев, при этом у всех животных зарегистрированы характерные для фасциолеза патологические изменения.
Результаты исследований на фасциолез крупного рогатого скота при послеубойной экспертизе печени в 17 районах Ленинградской области представлены в таблице 2.
Интенсивность эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота максимальна в Выборгском (16,07%), Кингисеппском (19,46%)), Кировском (16,15%)) и Тихвинском (20,58%) районах Ленинградской области, что подтверждено статистической информацией по ВСЭ туш.
В Бокситогорском и Гатчинском районах зараженность фасциолами крупного рогатого скота составляет 13,49 и 6,83% соответственно. метеорологическими факторами 2000 и 2001 гг., наличием благоприятных условий для развития промежуточных хозяев — моллюсков — лимнеид.
Менее высокая зараженность фасциолами крупного рогатого скота в Лужском районе ( 1,36%) объясняется регулярным проведением лечебно - профилактических мероприятий (дегельминтизаций).
В хозяйствах Приозерского района используют круглогодовое стойловое содержание животных с интенсивным обеспечением зелеными кормами.
При анализе эпизоотической обстановки по фасциолезу крупного рогатого скота (на основании результатов гельминтоовоскопии) в 17 районах Ленинградской области установлена тенденция увеличения заболеваемости с пиками инвазии в 2000 - 2001 гг.
В Новгородской области до 80% были заражены животные в Любытинском районе и Демянском районах (79,8% и 79,7% соответственно), в Солецком и Старорусском районах экстенсивность инвазии составляла 45,43% и 45,12% соответственно.
В хозяйствах Новгородского, Пестовского и Холмского районов экстенсивность фасциолезной инвазии колебалась от 1,5% до 2,2%.
Анализируя эпизоотическую ситуацию по фасциолезу районах Новгородской области, мы также отмечаем рост заболевания.
Следует учитывать недостаточную эффективностьгельминтоовоскопических методов исследования при диагностике фасциолеза. Использование метода последовательных промываний позволяет выявлять только 45 - 50% зараженных животных.
Таким образом, при соответствующих поправках к средним показателям экстенсивности инвазии при фасциолезе (16 - 30%, 20 — 40%) возрастание заболеваемости еще более показательно.
Результаты изучения динамики эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота на основании статистических данных по гельминтоовоскопическим исследованиям ветеринарных лабораторий Ленинградской области представлены в таблице 3.
В целом, изменение интенсивности эпизоотического процесса при фасциолезе в различных районах как Ленинградской, так и Новгородской областей характеризуется одновершинной кривой. Причем в годы с высокими показателями экстенсивности инвазии зарегистрирован максимальный уровень среднегодовых осадков (620 мм и более).
Восприимчивое животное
Под опыт были взяты 10 телят 8 - 8,5 — месячного возраста, которых разделили на две группы по принципу аналогов. Первую группу заразили адолескариями фасциол в дозе 500 экземпляров на животное, вторая группа составила незараженный контроль. Достоверная разница в общем количестве Т— лимфоцитов отмечена нами на 5 день после заражения. С 10-го дня наблюдали снижение общего количества Т— лимфоцитов у подопытных телят. Т- клетки у телят этой группы продолжали накапливаться и достигли уровня 41,2+1,2 % на 90 день при показаниях контроля 40,2+0,8%. К концу наблюдений (на 120 день) произошло резкое падение Т— клеточной популяции до уровня 32,2+0,4 %, что было ниже контроля в 1,3 раза. На 15 день после заражения продолжалось снижение Е-РОК в первой группе телят до 36,0+1,1 %. С 30 дня констатировали тенденцию к увеличению общего количества Т- лимфоцитов в опытной группе, на 60 день количество Е— РОК достигло 39,2+1,1 %. 10 15 30 60 Дни исследований контроль Попыт Рисунок 6 Динамика абсолютного содержания Т- хелперов (клеток/мкл) _ Фоновые значения Т- хелперов были в пределах 16,4+1,1 - 16,2+0,9 % (первая и вторая группы, соответственно). На 5 и 10 дни после заражения количество Т- хелперов в крови телят первой группы снизилось до уровня 8,0+0,2 % против 15,8+0,1% в контроле. Некоторую стабилизацию клеточных популяций в крови телят обеих групп отмечали на 15 день, но уже к 30 дню исследований количество Т- хелперов в крови телят опытной группы вновь упало с 10,4+0,4 %. В последующие дни наблюдений не выявлено каких - либо изменений в динамике Т- хелперов и к 120 дню в крови зараженных телят наметилось снижение клона Т- хелперов до 8,2+0,3 % против 17,8+0,1 % в контроле.
На 10 день количество Т- супрессоров снизилось, но было достоверно выше, чем у контрольных животных. Позднее у телят первой группы относительное количество ТФЧ- РОК увеличилось до 12,4+0,8 % и продолжало расти вплоть до 90 дня опыта и их количество составило 13,8+0,8 % при показаниях контроля 5,2+0,4 %. К моменту окончания опыта у зараженных телят резко изменилось количество Т- лимфоцитов и числовые Изменения индексов иммунорегуляции (таблица 13. рисунок 8).
С целью получения дополнительной информации и выявления регуляторных и эффекторных механизмов иммунного ответа определяли индексные значения. Это соотношение теофиллинрезистентных Т- клеток и теофиллинчувствительных Т- клеток.
Анализ индексов иммунорегуляции перед началом эксперимента находился в пределах 1,1+0,2 - 1,4+0,2. Далее, если показатель ИИ по группам вписывался в доверительный интервал, то его расценивали как фактор, отражающий сбалансированность иммунной системы. Через 5 дней после заражения зарегистрировано достоверное снижение ИИ в группе телят, получившей адолескарии Fasciola hepatica, в 3 раза. Он равнялся 0,4+0,09 при показаниях контрольной группы 1,2+0,09.
В последующие три дня исследований мы не выявили количественных различий в опытной и контрольной группах. Только к 60 дню опыта удалось обнаружить повторное достоверное снижение результатов в первой группе телят. Эта тенденция сохранилась и на следующий день эксперимента, где ИИ составил 0,3+0,02 при контрольном значении 1,2+0,1. К концу эксперимента значения ИИ в обеих группах выровнялись. Статистически значимых различий нами не обнаружено.
Динамика фагоцитарной активности макрофагов (таблица 14, рисунок 9).Через 5 дней после заражения количество макрофагов составило 135,8+14,8 кл/мкл в первой группе и 92,6+3,2 кл/мкл - во второй.
На 10 день наблюдений отмечено увеличение количества макрофагов в зараженной группе животных до 212,4+17,6 кл/мкл, что было на 50% выше показателей контроля. Абсолютное количество макрофагов достоверно снизилось на 15 день до 95,5+1,3 кл/мкл. Затем у телят первой группы постепенно повышалось их содержание и на 60 день опыта составило 221,6+16,7 кл/мкл, что достоверно отличалось от контрольной группы, где показатель НСТ - теста находился на отметке 145,6±11,5 кл/мкл (Р = 0,05). К 90 дню отмечали вновь снижение макрофагов у телят подопытной группы до 113,2+1,7 кл/мкл, а к 120 дню количество НСТ - положительных клеток снизилось до 78,1+17,8 кл/мкл. У контрольных телят количество макрофагов было в пределах 156,9+24,0 кл/мкл. Динамика В-лимфоцитов (таблица 15, рисунок 10). После заражения телят культурой адолескариев Fasciola hepatica количество В- клеток в крови подопытной группы составило 18,4+0,4 %, что в 1,6 раз превышало показатель контроля. Затем произошло резкое снижение количества В- лимфоцитов и на 10 день опыта числовые значения составили 10,4+0,7 % в контроле и 8,2+0,3 % в зараженной группе. Снижение уровня В- лимфоцитов в крови телят первой группы выявили на 30 и 60 дни и достоверность различий между двумя группами составила Р 0,05. К 90 дню относительный процент В- лимфоцитов в первой группе незначительно отличался от такового в контроле, их значения колебались в пределах 6,2+0,2 - 8,8+0,4 %, соответственно.
Аллергическая диагностика фасциолеза крупногорогатого скота
Методика получения и очистки диагностического препарата, а также параметры проведения контроля и оценки результатов аллергической пробы представлены в разделе «Материалы и методы исследований». Аллерген - фасциолин вводили при помощи безыгольного инъектора БИ - 7 внутрикожно в дозе 0,2 мл в область средней трети шеи. Учет результатов аллергической пробы осуществляли через 40 - 60 минут. Утолщение кожной складки на 5 мм и более оценивали как положительный результат на фасциолез. Одновременно с аллергическим исследованием у животных брали кровь из яремной вены с целью последующего серологического скрининга на фасциолез. Всего исследовано 758 голов крупного рогатого скота, из них 520 коров старше четырех лет и 238 телок 18-20 месяцев. Обследование проводили в зимний, весенний сезоны, а также в пастбищный период и осенью до и после дегельминтизации. Сопоставление результатов аллергического и серологического исследований на фасциолез представлены в таблице 35 и на рисунке 16. Исходя из данных таблицы 35, можно наблюдать корреляцию результатов аллергической внутрикожной пробы и серологического исследования (ИФА) на фасциолез. Как в острый, так и хронический периоды болезни наблюдается соответствие результатов аллергической пробы и серологических исследований. Хроническая форма фасциолеза диагностируется двумя вышеуказанными тестами с меньшей информативностью. В целом, это обусловлено снижением интенсивности сенсибилизации тканей животных антигенами фасциол, в первую очередь, ювенильных мигрирующих форм. Как следствие, отмечается уменьшение уровня специфических антител с предшествующим изменением активности взаимодействия иммунокомпетентных клеток. Примечание: у 70-75% животных отмечено утолщение кожной складки на 5 - 11 мм, 25 - 30% - на 12 - 20 мм; уровни титров антител к Fasciola hepatica в хронический период составляют в среднем 1:400 — 1:800, а в острый период - 1:800 - 1:3200. Согласно данным, представленным на рисунке 16, наиболее высокий уровень корреляции результатов аллергического и серологического исследований на фасциолез зарегистрирован в июле - 14 и 21%, августе — 27 и 35%, т.е. в острый период болезни. Максимальное соответствие показателей гельминтоовоскопии, аллергического и серологического исследований отмечено в весенние и осенне - зимние месяцы ( март - 4, 6,9 и 9%; ноябрь - январь — 24, 30 и 47% ), т.е. в хронический период. Интенсивная активация макрофагов, тучных(гистаминопродуцирующих) клеток и аллергические процессы в тканях животных, индуцированные действием гистамина и высокой концентрацией в крови, тканях иммуноглобулинов IgE, наблюдаются преимущественнопри острой форме фасциолеза. Последняя сопровождается лейкоцитозом (эозинофилией), что подтверждается гематологическими исследованиями.
Полученные результаты предполагают использование аллергического метода диагностики для выявления острой формы фасциолеза.
Хронический фасциолез следует диагностировать комплексно -на основании сероэпизоотологического (РИГА и ИФА), копроовоскопического и периодических контрольных послеубойных исследований.
В настоящее время существует целый ряд антгельминтиков, которые используются при фасциолезе.
В последние годы на Российский рынок поступило большое количество различных антгельминтных препаратов иностранных и отечественных фирм, рекомендованных при фасциолезе жвачных животных.
В связи с этим мы провели оценку фасциолоцидной активности некоторых препаратов на крупном рогатом скоте: сантела, тетраксихола, дисалара, клозальбена и альбена - супер. Вся работа по определению антгельминтной эффективности препаратов проведена в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей.
Сантел представляет собой лекарственную форму клозантела в двух формах, разработанную совместно НПФ «ВИК» (Россия) и «Чемотехника Синтиал» (Аргентина). Препарат выпускают в виде 10% - ного раствора для парентерального применения крупному и мелкому рогатому скоту в форме 7,5% - ного раствора для перорального применения.
Фирмы - производители рекомендуют применять сантелпри гиподерматозе, фасциолезе, гемонхозе, буностомозеи эзофагостомозе крупного рогатого скота, эстрозе, фасциолезе и желудочно — кишечных нематодозах овец.
Кроме того, имеются сообщения об эффективности сантела в повышенной дозе против некоторых родов иксодовых и чесоточных клещей.
