Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 9
Применение кормовых добавок в свиноводстве 9
Использование кормовых антибиотиков 11
Использование пробиотиков 20
Использование биопрепаратов 23
Применение добавок, содержащих аминокислоты, их заменители и ферменты 27
Современные витаминно-минеральные добавки, применяемые в свиноводстве 34
Собственные исследования 37
Материалы и методы исследований 37
Результаты собственных исследований 45
Влияние Полизона на гуморальный иммунный ответ 45
Влияние Полизона на функциональную активность перитонеальных макрофагов 48
Влияние Полизона на реакцию «Трансплантант против хозяина» 50
Влияние Полизона на реакции клеточного иммунитета 51
Изучение возможного отдаленного нейротоксического действия Полизона на кур 55
Влияние Полизона на организм свиней 57
1 Изучение влияния Полизона на прирост живой массы поросят 57
2 Влияние Полизона на аминокислотный состав крови поросят 58
3 Влияние Полизона на воспроизводительную функцию хряков 61
4 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при применении Полизона 69
Гистологическое изучение влияния Полизона на структуру печени 72
1 Влияние Полизона на структуру печени крыс 72
2 Влияние Полизона на структуру печени поросят-гипотрофиков 99
Заключение 106
Выводы 114
Предложения 116
Список литературы 117
Приложения 137
- Использование кормовых антибиотиков
- Применение добавок, содержащих аминокислоты, их заменители и ферменты
- Влияние Полизона на реакции клеточного иммунитета
- Влияние Полизона на структуру печени крыс
Введение к работе
Актуальность темы. Прогресс ветеринарной фармакологии характеризуется непрерывным поиском и созданием новых безопасных препаратов. Установлено, что многие факторы окружающей среды: кормление, стрессы различной этиологии неблагоприятно воздействуют на иммунную систему животных. В связи с этим в животноводстве находят широкое применение различные средства, которые позволяют ослабить влияние неблагоприятных факторов (Шахов А.Г., Бузлама B.C. 1990; Лыкасова И.А., 2000; Папуниди К.Х., Фролов А.В., Назаров В.Р., 2002; Аргунов М.Н., Цветикова О.Н., 2002; Самородова И.М., Рабинович М.И., Гюрджи-Оглы С.Ж., 2004; Исмагилова А.Ф. с соавт., 2003).
Мир лекарственных средств в ветеринарии обширен и пока не имеет тенденции к сокращению. Десятки отечественных и зарубежных производителей лекарственной продукции поставляют препараты для ветеринарного использования. В последние годы интенсивно расширяется выпуск биологически активных препаратов различной направленности для лечения при патологических процессах, а также средств, применяемых для повышения продуктивности животных (Александров И.Д., Антипов В.А., 2004).
При нарушениях, сопровождающихся развитием иммунодефицитов у животных различного возраста, ведущим фактором является ослабление переваримости продуктов потребляемых рационов, особенно зерновых, усвоения некрахмалистых полисахаридов, активности полезной микрофауны пищеварительного тракта. У таких животных до 50% продуктов питания проходит пищеварительный тракт транзитом, не подвергаясь биохимической обработке, что на фоне даже рационального питания не сопровождается нормативными показателями прироста живой массы и повышения продуктивности.
Увеличение производства продуктов животноводства является актуальной проблемой. Свиноводство с переходом на новые экономические отношения оказалось в тяжелом финансовом положении. Большое сокращение производства свинины допущено на комплексах Республики Башкортостан. В 1996 году произведено 13,2 тыс.тонн, то есть менее 50 % от проектной мощности. В связи с этим в Республике Башкортостан ставится задача довести в 2005 году до 60 тыс. тонн и восстановить поголовье свиней до 900 тыс. в общественном секторе.
В связи с вышеизложенным ООО «Поливит» проведен целенаправленный синтез препарата Полизон, сочетающий несколько видов фармакологической активности (Струнин Б.П., Антипов В.А., 2001).
Цель работы. Целью настоящей работы явилось изучение токсико-фармакологических свойств Полизона - нового препарата фосфорнокислой соли 2 амино-4-метилтио-(8-оксо-8-имино)-масляной кислоты.
Для реализации поставленной цели нами были определены следующие задачи:
изучить влияние Полизона на иммунную систему лабораторных животных;
изучить возможность отдаленного нейротоксического действия Полизона;
изучить влияние Полизона на продуктивность свиней (среднесуточный прирост массы, сохранность поросят);
изучить влияние Полизона на аминокислотный состав крови поросят;
изучить воспроизводительную функцию хряков;
провести ветеринарно-санитарную экспертизу и изучить товарные качества мяса свиней, получавших в составе рациона Полизон;
провести гистологические и гистохимические исследования печени крыс и поросят-гипотрофиков.
Научная новизна. Впервые изучены отдельные механизмы иммун-нотропного действия Полизона. Изучено влияние Полизона на продуктивность и аминокислотный состав крови поросят, воспроизводительную функцию хряков, проведена ветеринарно-санитарная экспертиза и определена степень товарных качеств мяса. Впервые проведены гистологические и гистохимические исследования печени крыс и поросят-гипотрофиков.
Практическая и теоретическая значимость. Предложены методы и схемы применения нового препарата Полизон для повышения естественной резистентности и продуктивности свиней. Получено наставление, утвержденное Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ от 26 июня 2002 года (протокол №2). Регистрационный № ПВР-2-2.2/00969. Получен диплом в секции «Медицинская техника и фармация. Агробиотехнологии и новые продукты питания» на Второй окружной ярмарке бизнес-ангелов и инноваторов в Приволжском федеральном округе, проходившей 29-30 апреля 2004 года, за предоставленный проект «Токсико-фармакологические свойства Полизона».
Материалы, представленные в настоящей диссертационной работе, используются в учебном процессе на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет».
На защиту выносятся следующие положения:
о фармакологическом спектре и механизме иммуномодулирующего действия Полизона;
о степени безвредности иммуномодулятора Полизон;
о возможности использования Полизона для повышения естественной резистентности и продуктивности свиней.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и получили положительную оценку на:
международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии», (Оренбург, 2003 г).
международной научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданти и здоровье животных» (Воронеж, 2004 г).
международной научно-практической конференции «Наука сельскохозяйственному производству и образованию» (Смоленск, 2004 г).
международную межвузовскую научно-практическую конференцию «Актуальные проблемы сельскохозяйственной науки и образования» (Кинель 2005 г).
ежегодных конференциях ученых Башкирского государственного аграрного университета в период с 2002 по 2005 гг.
Настоящая работа выполнена в соответствии с тематикой научных исследований ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет» (номер госрегистрации 01.86.0 - 07.68.78).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, в которых отражены основные результаты экспериментальных исследований.
Внедрение результатов исследования: опытно-промышленные испытания проведены в СПК колхоза «Октябрь» Кугарчинского района Республики Башкортостан.
Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 141 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов и практических предложений. Работа содержит 15 таблиц и 47 рисунков. Список литературы включает 177 источников, из них 142 отечественных и 35 зарубежных авторов.
Использование кормовых антибиотиков
Антибиотики стали применяться в качестве эрготропных веществ с начала 50-х годов. В США в 1960 году было скормлено 737 т антибиотиков, в 1970 году уже 3314 т, а в период 1971-1975 годов ежегодно скармливалось в среднем 3487 т (Winkelmann Е., Roily Н., 1972; Novokhatsky A.S., Ershove F.I., Timkovsky A.L., 1975; Klein R.D., Luginbuhl G.H., 1977; Hafjstedt В., 1981; Sigel C. W., 1983; Sanders C.C., Sanders W.E., Goering R.V., 1984). К сожалению, нет сравнимых цифр, полученных в других странах. Да и трудно проводить сравнения, поскольку дозы применения антибиотиков различны. Например, флавомицин и отчасти кормогризин применяются в гораздо меньших количествах, чем большинство других антибиотиков. Следует учитывать и добавление в корм в некоторых странах кристаллического сульфата меди (прежде всего в Великобритании).
А.Ф. Исмагилова с соавт. (2000, 2001), Г.Д. Барышников (2003) и Н.Н. Олейник с соавт. (2003) указывают на то, что при раннем отъеме поросят и телят ввиду повышенной нагрузки на организм животных необходимо применять вещества, стабилизирующие кишечную микрофлору. Бройлеры, откармливаемые индейки и свиньи сейчас получают корм, который значительно хуже удовлетворяет их потребности в питательных веществах, чем тот, который им скармливали 20 лет назад. Поэтому в сравнении с тем периодом наблюдаются, как правило, меньшие приросты и большие затраты корма, тогда как благодаря добавкам наблюдается улучшения переваримости корма.
Антибиотики подавляют патогенную микрофлору кишечника, усиливают секрецию пищеварительных ферментов, благоприятствуют всасыванию переваримых веществ из кишечника в кровь, способствуют более высокому усвоению незаменимых аминокислот - лизина, метионина и других, а также ряда витаминов, повышают использование растительных белков на 20-30%, снижают потребность животных в белках и витаминах, увеличивают накопление в тканях витаминов А, В12, кальция, фосфора и многих микроэлементов, повышают у животных аппетит и отложение жира в теле (Watana К., Когп С, Tisone J.S., 1979; Солдатенков Ю.Н., Холма-нова A.M., 1986; Phillips I., King A., Shannon K., 1988; Drlica K., Coughlin S., GennaroM.L, 1990; Олейник H.H. с соавт. 2003). Применение антибиотиков дает возможность повысить коэффициент использования кормовых средств. Это очень важно, поскольку снижение затрат корма на производство единицы продукции - один из основных факторов, определяющих экономическую эффективность кормления животных. Для животноводства выпускаются специальные кормовые антибиотики. Медицинские антибиотики добавлять в корма не разрешается. Попадая в организм с кормом, антибиотики оказывают влияние на микроорганизмы желудочно-кишечного тракта. Антибиотические вещества изменяют видовой состав микрофлоры кишечника в благоприятном для организма хозяина направлении, подавляя или уменьшая количество вредной микрофлоры. Введение антибиотиков в рационы молодых животных ведет к угнетению токсинообразующих микробов и резко сокращает число микроорганизмов, конкурирующих с организмом хозяина в отношении потребления цианокобаламина и питательных веществ. Антибиотики в дозах, стимулирующих рост, не могут непосредственно уничтожать или угнетать болезнетворные бактерии, попадающие в пищеварительный тракт. Они повышают устойчивость полезной микрофлоры, в результате чего она оказывает более активное противодействие патогенным микробам.
Механизм действия антибиотиков, по-видимому, также связан с усилением процесса всасывания питательных веществ в кишечнике. Они способствуют увеличению содержания витаминов в крови, печени и других тканях (Grasso S.I., Meirandi I., de Garneri I., 1978; Венедиктов A.M., Ионас A.A., 1979; Levy J., Klastersky J., 1979; Ribkin G.D., Pack G., 1980).
Антибиотики в малых дозах, скармливаемые в раннем возрасте (до 3 месяцев) свиньям и птице, усиливают их рост до 25-30%, уменьшают расход корма на 10-15% на 1 кг привеса, сокращают отход молодняка в 2-3 раза, улучшают жизнеспособность организма.
При введении в рацион подсвинков кормового биомицина в хозяйствах, где ранее антибиотики не использовались, рост животных ускоряется на 24%. Однако увеличение нормы скармливания биомицина приводит к снижению роста молодняка примерно в 2 раза.
Использование кормогризина и биотетракорма повышает рост животных на 13-15%). В хозяйствах, где периодически применяют антибиотики, при даче биомицина в обычно рекомендуемой норме рост животных ускоряется на 7,2%, при даче кормогризина и биотетракорма - на 11-12% (Солдатенков Ю.Н., Холманова A.M., 1986).
При введении в рацион животных антибиотиков усиливается биокаталитическая активность ферментных систем желудочно-кишечного тракта, интенсивнее происходят обменные процессы между кровью и пищева 14 рительным аппаратом, что ведет к усилению углеводного, белкового и жирового обмена. Установлено, что при скармливании антибиотиков увеличивается выделение желчи, что повышает всасывание жирорастворимых веществ и жирорастворимых витаминов. Это подтверждается тем, что в печени животных, получавших антибиотики, больше отлагалось витамина А, а в кишечном соке наблюдается смещение рН в щелочную сторону. Эффективность использования антибиотиков зависит от вида и возраста животных, их содержания. У молодняка, у которого защитная система организма функционирует еще недостаточно, действие антибиотиков проявляется наиболее отчетливо.
Наибольший эффект дает применение антибиотиков в свиноводстве и птицеводстве. У жвачных животных (крупный рогатый скот и овцы) их действие слабее в связи с наличием в желудке большого количества микроорганизмов (Montay G., Goeffon Y., Roquet F., 1984; Hollos I., Nyerges G., 1986; Fass R.J., Helsel V.L., 1987; Белов A.E., Запровальная О.А., Хусаинов В.P., Кривоногов В.П., Кильметова И.Р., 2000; Барышников Г.Д., Кирилов В.Г., 2003).
Дача антибиотиков медленно растущим, слабым поросятам резко усиливает их рост: отставшие животные растут в 2-3 раза энергичнее, чем внешне здоровые. В несколько раз снижается падеж молодняка (Солдатен-ков Ю.Н., Холманова A.M., 1986; Олейник Н.Н. с соавт., 2003; Барышников Г.Д., 2003).
Установлено, чем медленнее растут животные до введения в рацион антибиотического препарата, тем сильнее у них реакция на него. Замечено несколько большее отложение подкожного жира у животных, которым скармливали антибиотики. Опытами Stenqvist К., Sandberg Т., Ahlstedt А. (1982) показано, что при обильном кормлении животных влияние антибиотиков наибольшее, а при снижении уровня кормления эффективность кормовых антибиотиков резко снижается. Для повышения плодовитости сельскохозяйственных животных применяют кормогризин. Свинкам, хрячкам и бычкам при выращивании его дают из расчета 100 ЕД на 1 кг живой массы, баранчикам и яркам - 200 ЕД до достижения животными половой и хозяйственной зрелости. Применение кормогризина в течение 90 дней взрослым хрякам, быкам и баранам увеличивает количество спермы, повышает ее оплодотворяющую способность: у хряков на 6,4%, у быков на 9,1%, у баранов на 4,3%. Кормогризин повышает плодовитость свиней на 12,7%, овец на 13,5%. При введении препарата в рационы растущих свинок у них повышаются привесы на 10-15%, увеличивается оплодотворяемость и плодовитость, снижается эмбриональная смертность (Солдатенков Ю.Н., Холманова A.M., 1986).
Применение добавок, содержащих аминокислоты, их заменители и ферменты
Все белки построены из аминокислот. Каждый белок имеет свой аминокислотный состав. В состав аминокислот входят: азот, углерод, водород, кислород, аминные и карбоксильные группы. В некоторые аминокислоты (цистин, цистеин, метионин) входит сера. Основные активные группы аминокислот — аминные (NH2) и карбоксильные (СООН) радикалы, которые определяют их химические свойства. В зависимости от присутствия той или иной группы они могут реагировать и как кислоты, и как щелочи. Со щелочами они ведут себя как кислоты и, наоборот, с кислотами - как щелочи. Большинство аминокислот имеют по одной аминной и карбоксильной группе и называются моноаминокарбоно-выми (глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин). В состав серина и треонина, кроме аминной и карбоксильной групп, входит гидроксигруппа (-ОН); они называются оксимоноаминокарбоновыми (Солдатенков Ю.Н., Холманова A.M., 1986; Цогоев Н.Д., Баев К.Д., 1987).
Аминокислоты, которые в организме животных могут синтезироваться в количестве, достаточном для поддержания нормальной жизнедеятельности и для образования продукции, называются заменимыми. К ним относятся аспарагиновая, глутаминовая кислоты, аланин, оксипролин, пролин, серии, глицин (для молодняка птицы пролин считается незаменимой кислотой). Аминокислоты, которые не синтезируются в организме или синтезируются в незначительном количестве, но входят в состав всех важнейших белков, называют незаменимыми. К ним относятся лизин, метионин, триптофан, лейцин, изолейцин, треонин, фенилаланин, гистидин, валин, аргинин. Роуз в 1938 г. установил, что указанные выше аминокислоты должны доставляться с кормом в достаточных количествах. Некоторые аминокислоты могут синтезироваться животными в тех случаях, когда в достаточном количестве имеются другие, необходимые для их образования незаменимые аминокислоты. Их называют частично заменимыми или полузаменимыми. К таким относятся цистин (может образоваться из метио-нина) и тирозин (может образоваться из фенилаланина) (Венедиктов A.M., Ионас А.А., 1979; Гамко Л., Иванов В., Подольников В., Крапивина Е., 2002).
Исключительно важны для сельскохозяйственных животных, особенно для птиц и свиней, так называемые критические незаменимые аминокислоты: лизин, метионин и триптофан. Растительные корма содержат их на 30-40% меньше, чем требуется животным. Между тем физиологическая роль их в организме исключительно велика. Введение в рацион этих аминокислот в достаточном количестве повышает использование других аминокислот в организме (на 20-30%), что позволяет обходиться без белков животного происхождения в рационах при том же ростовом эффекте, более экономно используются растительные корма, можно сокращать на 15-20% существующие нормы протеинового питания (Миколайчик И., 2004).
При недостатке только одной незаменимой аминокислоты наиболее отчетливо проявляется потеря аппетита у животных всех видов, что связано с глубокими нарушениями в организме всего процесса обмена и синтеза белка. Общие симптомы: снижение интенсивности роста, потеря живой массы, снижите оплаты корма.
Поэтому острая недостаточность любой из 10 незаменимых аминокислот в рационах растущих животных оказывает такое же отрицательное влияние на организм, как и острый дефицит протеина. Особенно острый недостаток лизина и триптофана бывает в тех случаях, когда животные получают рационы с максимальным количеством кукурузы, так как в ней очень мало этих аминокислот (Венедиктов A.M., Ионас А.А., 1979; Солда-тенков Ю.Н., Холманова A.M., 1986; Гамко Л., Иванов В., Подольников В., Крапивина Е., 2002). Известно, что протеиновая питательность кормов определяется качеством протеина. Свободные аминокислоты, в отличие от жиров, углеводов, минеральных веществ и витаминов, не депонируются, приток их должен быть постоянным и ритмичным. При недостатке в рационе хотя бы одной незаменимой аминокислоты, животное пополняет ее за счет поедания большего количества корма, затраты которого в этом случае на получение единицы продукции увеличивается, и, более того, ухудшается использование всех питательных веществ рациона (Гамко Л., Иванов В., Подольников В., Карпивина Е., 2003).
Достижение максимальной продуктивности и эффективности производства животноводческой продукции возможно только при условии сбалансированного кормления свиней. На практике давно замечена прямая зависимость между уровнем их продуктивности и повышением питательной ценности кормов. Современные нормативы кормления существенно отличаются от того, что было 5-10 лет назад. Например, комбикорма для свиней балансируются по обменной энергии, лизину, метионину + цистину, треонину, по минеральному, микроэлементному и витаминному составу, а также по доступным аминокислотам и фосфору.
В то же время имеет место тенденция сокращения в комбикормах и рационах для свиней доли кормов животного происхождения: рыбной и мясокостной муки, которые являются основными источниками аминокислот, и в первую очередь источником первой лимитирующей аминокислоты для свиней — лизина. Эти факторы приводят к усложнению процедуры по оптимизации рецептов комбикормов (Венедиктов A.M., Ионас А.А., 1979; Галимов Ш.М., Карибаев К.К., 1984).
Дефицит лизина в комбикормах для свиней в определенной степени возможно устранить путем добавления к зерновой части высокобелковых компонентов растительного происхождения. Это, в первую очередь, жмыхи и шроты, масличные и бобовые культуры. Однако полностью удовлетворить потребность в аминокислотах только за счет этих кормов не всегда удается (Василенко В., Максимов Г., 2004; Миколайчик И., 2004).
В связи с этим целесообразно применение различных добавок, содержащих соответствующие препараты. Одним из таких препаратов и является лизинпротеиновая добавка Липрот, представляющая собой натуральный продукт, полученный путем микробиологического синтеза и содержащий до 40 ценных компонентов.
При применении лизинопротеиновой добавки Липрот приводит к повышению среднесуточного прироста свиней, при этом затраты корма в денежном выражении на 1 кг прироста живой массы снижается за счет уменьшения доли протеина животного происхождения в комбикорме.
И. Панин, Л. Николенко, Н. Демченко (2003) доказали эффективность балансирования комбикормов добавкой Липрот путем изучения биохимических показателей крови доращиваемых свиней. Так, до применения добавки в крови свиней отмечался явный дефицит белка, а также отмечались нарушения соотношения Са:Р и щелочного баланса крови. На конечном этапе применения добавки Липрот авторы отмечали, что гематологический и биохимический статус доращиваемого молодняка находился на высоком физиологическом уровне.
Однако, несмотря на то, что лизинопротеиновая добавка применяется уже достаточно давно, тем не менее, нормы ввода в состав комбикормов для поросят 2-4 месячного возраста изучены недостаточно.
В практике промышленного свиноводства с целью балансировки рационов по аминокислотам применяются еще два современных препарата -Биолиз 60 и L-лизина гидрохлорид (Дегусса А.Г., 2001).
Влияние Полизона на реакции клеточного иммунитета
Действие Полизона на клеточный иммунный ответ оценивали в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана и динитрофторбензолу на мышах линии C57BI и СВА. Соединение вводили внутрь одновременно с сенсибилизирующей дозой динитрофтор-бензола. Результаты представлены в таблицах 6 и 7.
Как видно из таблицы 6, средний процент увеличения отека ушей у мышей опытных групп, за счет выработки медиаторов воспаления, под действием ДНФБ, был достоверно ниже аналогичного показателя в контрольной группе. Это говорит о том, что Полизон в испытуемых дозах (4 и 5 мг/кг) способен ингибировать реакцию гиперчувствительности замедленного типа в ответ на раздражитель (ДНФБ). С целью более полного изучения Полизона на клеточно опосредованные иммунные реакции нами применялся метод формирования ГЗТ у мышей линии C57BI и СВА внутрибрюшинным введением сенсибилизирующей дозы эритроцитов барана (2хЮ6 ЭБ) и субплантарно разрешающей дозы эритроцитов барана (2x108 ЭБ). По приросту в % массы лапки нами определялась интенсивность реакции ГЗТ.
Полизон вводили внутрь за 5 дней до сенсибилизации (для изучения профилактического влияния) или через 5 дней после сенсибилизации (для изучения лечебной активности). Как видно из таблиц 8 и 9, при профилактическом и лечебном введении Полизона мышам линий C57BI и СВА в испытуемых дозах 4 и 5 мг/кг отмечается уменьшение РГЗТ по сравнению с контрольными животными. Необходимо также отметить, что при профилактическом (до сенсибилизации) назначении Полизона угнетение РГЗТ в ответ на введение эритроцитов барана более выражен, чем при лечебном (после сенсибилизации) его назначении.
Таким образом, можно сказать, что Полизон обладает выраженной способностью подавлять реакцию гиперчувствительности замедленного типа в ответ на сенсибилизирующие факторы.
Под отдаленным (замедленным) нейротоксическим действием (ОНД) понимают двигательные расстройства нервной системы, которые возникают постепенно после определенного латентного периода (14-21 день), обычно после перенесенного острого отравления. Этим ОНД отличается от других проявлений нейротоксичности, которые могут сопутствовать отравлению многими веществами.
ОНД характеризуется развитием процесса демиелинизации как в периферической, так и в центральной нервной системе (проводящие пути спинного мозга) и связано с воздействием химических веществ на специфическую мишень - «нейротоксическую эстеразу» (НТЭ) нервной ткани, торможение которой регистрируется еще до проявления клинических и гистологических признаков нейропатии (в первые 3-5 дней после воздействия нейропаралитического препарата).
ОНД свойственно, прежде всего, некоторым фосфорорганическим соединениям (ФОС) (триортокрезилфосфат, лептос, афос, хлорофос и др.).
Вместе с тем, периферические нейропатии могут возникать не только при контакте с ФОС, но и под влиянием препаратов других групп. Так, нарушение функции периферической нервной системы наблюдается у животных, имеющих контакты с органическими растворителями (толуол, гексан), известны случаи развития дистальных аксонопатий при воздействии ряда металлов (свинец, ртуть, кадмий и др.), отдаленные нейропатии могут возникнуть также при отравлении окисью углерода. По требованию Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) препараты, обладающие отдаленным нейротоксическим действием, не должны внедряться в народное хозяйство. В данной серии исследований нами приводятся экспериментальные данные о возможности препарата Полизон оказывать отдаленное нейротоксическое действие. Исследованиями, проведенными И.А. Барановой с соавт. (2004) установлено, что LD50 Полизона при однократном введении в желудок цыплятам - бройлерам равна 1625,0±67,04 мг/кг и соответственно относится к соединениям, обладающим малой токсичностью (IV класс по Медведь Л.И., 1978).
Клиническая картина интоксикации при введении птицам токсических доз Полизона характеризовалась возникновением периодических генерализованных судорог (на фоне общего сопора), диареей, отказом от пищи. Гибель кур наступала, как правило, на 3 сутки после введения препарата с признаками сильной гипотермии, атаксии, параличей и парезов конечностей.
Наблюдения за выжившими птицами в течение 40 дней эксперимента не выявили у них развития симптомов ОНД: нарушения двигательной активности (атаксии), возникновения вторичных парезов и параличей конечностей.
Исследование активности фермента-мишени ОНД - нейротоксиче-ской эстеразы в головном мозге кур показало, что Полизон в полулетальной дозе в отличие от препаратов, обладающих выраженным нейропатологическим действием не оказывает существенного влияния на этот фермент, что выражалось отсутствием достоверного снижения НТЭ как через 24 и 48 часов, так и на 3 сутки опыта, тогда как ингибирование НТЭ у птиц контрольной группы, которые получали среднетоксические дозы афоса, в те же сроки составляло 80-90%.
Влияние Полизона на структуру печени крыс
С целью изучения влияния Полизона на печень крыс нами были сформированы 4 группы по 15 голов в каждой. Животные первой, второй и третьей групп ежедневно, в течение 20 суток получали Полизон в десяти-, двадцати- и шестисоткратных дозах от рекомендуемой (30, 60 и 1800 мг/кг соответственно). Животные 4 группы служили контролем. Через 5, 14 и 21 суток в каждой группе животных производили убой пяти крыс. Печень убитых крыс подвергалась гистологическим и гистохимическим исследованиям.
Печень крыс контрольной группы соответствовала нормативным показателям: покрыта тонкой соединительнотканной капсулой (Глиссона), отдающей вглубь органа очень тонкие прослойки, которые разделяют ее на дольки. Эти прослойки выражены очень слабо и не выявляются. Границы печеночных долек определяются только по расположению междольковых сосудов и желчных протоков, которые составляют «триады», характерные для печени млекопитающих (рисунок 1). Центром полигональной печеночной дольки является центральная вена (рисунок 2). От нее радиально расходятся печеночные пластинки (трабекулы), построенные в основном из двух рядов гепатоцитов - печеночных эпителиоцитов. При окраске гистологических срезов гематоксилином и эозином цитопалазма гепатоцитов окрашивается в ровный розовый цвет. Клетки имеют одно, реже два довольно крупных ядра с хорошо выраженной ядерной оболочкой. Часто в ядрах гепатоцитов выявляются одно или два ядрышка.
Печеночные пластинки разделяются внутридольковыми кровеносными капиллярами - синусоидами. Просвет их в различных участках печеночной дольки неодинаков. В них определяются звездчатые ретикулоэндотелиоциты (клетки Купфера) - крупные звездчатые клетки с базофильным ядром и веретеновидной удлиненной формы эндотелиоциты, выстилающие синусоиды. Печеночные макрофаги значительно выступают в просвет синусоида. Внутридольковые капилляры сливаются в центральные вены. Стенка междольковых желчных протоков состоит из однослойного кубического эпителия, под которым располагается собственный слой соединительной ткани, толщина которого зависит от калибра протока. В стенке междольковых артерий определяется прослойка гладкой мышечной ткани.
При окраске амидочерным 10 В на выявление белка паренхима печени окрашивается равномерно в сероватый цвет (рисунок 3). Морфофункциональная структура печени крыс опытных групп после применения Полизона характеризовалась следующими изменениями: На гистологических препаратах печени крыс первой группы через 5 суток воздействия вещества в дозе 30 мг/кг паренхима печени почти ничем не отличалась от паренхимы печени животных контрольной группы. Она состояла из мелких равномерно окрашивающихся гепатоцитов, которые были выстроены в типичные балочные структуры (рисунок 4). Ядра печеночных клеток четко очерчены, с крупными глыбками хроматина, с 1-2 ядрышками. Выявлялись среди них и двуядерные клетки. Просветы синусоидов не расширены, по ходу синусоидов хорошо просматривались веретеновидные синусоидальные клетки (рисунок 5). Структура печени в области портальных трактов также не отличалась от печени животных контрольной группы (рисунок 6). Строение сосудов и желчных протоков была без особенностей. Иногда выявлялись портальные тракты, в кровеносных сосудах определялся слабый стаз элементов крови (рисунок 7). При окраске препаратов раствором амидочерного 10 В на белок различий с контрольной группой животных выявлено не было (рисунок 8).
Через 14 суток воздействия вещества гистологическая структура паренхимы печени крыс первой опытной группы местами мало отличалась от печени животных контрольной (рисунок 9). Цитоплазма гепатоцитов равномерно окрашивалась в розовый цвет. Округлые ядра разных размеров четко очерчены, с 1-2, иногда 3 ядрышками. Синусоиды обычной формы. Но большей частью паренхима печени состояла из гепатоцитов, в светлой цитоплазме которых просматривались мелкие глыбки вещества, которые при окраске гематоксилином и эозином определялись в виде зернистости голубоватого цвета (рисунок 10). При окраске раствором амидочерного 10 В на белок в паренхиме печени в гепатоцитах, в этот срок, количество белка было выявлено в значительном количестве (до ++). Белок выявлялся в цитоплазме печеночных клеток в виде крупных глыбок черного цвета (рисунок 11). В отдельных портальных венах и артериях определялся стаз крови (рисунок 12). Местами в перипортальных зонах выявлялась интенсивная очаговая пролиферация звездчатых ретикулоэндотелиоцитов (рисунок 13). Вокруг таких участков в синусоидах печени выявлялось большое количество диффузно рассеянных Купферовских клеток.
На 21 сутки после воздействия Полизона в дозе 30 мг/кг выявлялись слабые дистрофические изменения цитоплазмы гепатоцитов в виде разрушения органелл, иногда вплоть до опустошения цитоплазмы (рисунок 14). В таких гепатоцитах ядра уплотнялись и выглядели темными, хроматин и ядрышки не просматривались. В отдельных участках печени определялись гепатоциты с голубоватой зернистостью в цитоплазме (рисунок 15). Гистохимически в них определялись крупные глыбки белка (+++) (рисунок 16). Некоторые синусоидные капилляры расширялись (рисунок 17), а в отдельных портальных сосудах определялись явления стаза кровяных элементов (рисунок 18). Вокруг центральных вен в синусоидах выявлялись агрегации эритроцитов (рисунок 19), сопровождающиеся пролиферацией звездчатых ретикулоэндотелиоцитов (рисунок 20). Выраженных воспалительных инфильтратов в паренхиме печени не обнаружено (рисунок 21).
На гистологических препаратах печени крыс второй опытной группы через 5 суток воздействия вещества в дозе 60 мг/кг при окраске гематоксилином и эозином в цитоплазме гепатоцитов хорошо просматривались голубоватого цвета мелкие глыбки, как в области центральных вен (рисунок 22), так и в области портальных трактов (рисунок 23). При гистохимической окраске на выявление белка в паренхиме печени, в гепатоцитах, в этот срок обнаружены признаки увеличения количества белка (до ++++). На таких препаратах белок выявлялся в цитоплазме печеночных клеток в виде крупных глыбок черного цвета (рисунок 24). Ядра печеночных клеток были четкие, с крупными глыбками хроматина, с 1-2 ядрышками. Выявлялись также и двуядерные клетки. Просветы синусоидов в основном не расширены, обычного строения, по ходу синусоидов хорошо просматривались веретеновидные синусоидальные клетки. В отдельных участках цитоплазма печеночных клеток выглядела более плотной, так же как и их ядра (рисунок 25). Некоторые кровеносные сосуды были с признаками стаза крови (рисунок 26). Изредка выявлялись также участки паренхимы с расширенными синусоидными капиллярами (рисунок 27). Через 14 суток воздействия вещества в дозе 60 мг/кг, у крыс второй опытной группы, печеночные клетки были более мелкие с плотной цитоплазмой и плотнее расположены в балках (рисунок 28). Ядра гепатоцитов разных размеров окрашивались интенсивно. Синусоиды и эндотелиальные клетки в них имели обычное строение.
