Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Место эндометритов в структуре патологии матки у собак 8
1.2. Патогенез эндометритов у собак 15
1.3. Особенности клинического течения эндометритов у собак 21
1.4. Изменения лабораторных и функциональных показателей при эндометритах у собак 26
1.5. Лечение сук, больных эндометритами 33
1.6. Профилактика эндометритов у сук 37
2. Материалы и методы исследований 39
2.1. Краткая характеристика ветеринарной клиники «Вита» 39
2.2 Подопытные животные и их характеристика 40
2.3. Методика клинического исследования 40
2.4. Методика цитологических исследований 42
2.5. Методики морфологических и биохимических исследований крови 47
2.6. Методика гистологических исследований 48
3. Собственные исследования 51
3.1. Распространение и породная предрасположенность собак к эндометритам 51
3.3. Морфологические и биохимические исследования крови сук, больных эндометритами 55
3.4. Результаты цитологических исследований у сук, больных эндометритами 60
3.5. Результаты гормональных исследований у сук, больных эндометритами 69
3.6. Результаты гистологических исследований у сук, больных эндометритами 72
3.6.1. Гистологическое строение эндометрия у сук в разные стадии полового цикла 72
3.6.2. Пролиферативные, гиперпролиферативные и гиперсекреторные изменения эндометрия у сук 82
3.6.3. Гистологические изменения эндометрия при эндометритах... 88
3.7. Принципы терапии при эндометритах, основанные на цитологической картине 113
3.7.1. Лечение сук с гнойным эндометритом, развившимся в фолликулиновую стадию полового цикла 113
3.7.2. Лечение сук с гнойным эндометритом, протекающим в лютеиновую стадию полового цикла (пиометры) 118
4. Обсуждение результатов исследований 123
5. Выводы 130
6. Практические предложения 133
- Изменения лабораторных и функциональных показателей при эндометритах у собак
- Подопытные животные и их характеристика
- Методики морфологических и биохимических исследований крови
- Морфологические и биохимические исследования крови сук, больных эндометритами
Введение к работе
Актуальность темы. Размножение представляет собой одну из основных функций организма, ответственную за продолжение жизни на Земле. Основой процесса размножения является оплодотворение с последующим делением яйцеклетки и развитием нового дочернего организма, который у теплокровных животных развивается в матке. Матка - вместилище и одновременно «инкубатор» для новой жизни, от ее структурной и функциональной полноценности зависит жизнь и здоровье потомства. В процессе жизни животного матка неоднократно подвергается процессам пролиферации и инволюции, которые подчинены циклическим изменениям эффекторных гормонов.
Функциональная активность матки всецело зависит не только от количества вырабатываемых эффекторных гормонов, их соотношения, но также от последовательности их выброса в кровь. Наряду с этим матка сама подвержена различным эндогенным и экзогенным воздействиям, как механическим (травмы), так и биологическим (бактерии, вирусы, грибы, паразиты). Многофакторность поражения матки, сложная система управления ее функцией приводят к частым нарушениям в этом органе.
В структуре заболеваний репродуктивных органов поражения матки занимают первое место, а среди них преобладают эндометриты.
По данным Х.К. Аминева (1984), А.А. Кудряшова (1999), падеж сук по причине эндометритов составляет от 25% до 35% среди всех патологий у этих животных.
Все более возрастающая актуальность проблемы эндометритов собак связана наряду с увеличением числа больных животных и высокой летальностью при этой патологии со значительными экономическими затратами на лечение.
Объяснение причины стремительного возрастания числа зарегистрированных случаев заключается в увеличении числа сук, страдающих различны-
5 ми эндокринными и иммунологическими нарушениями и в улучшении диагностики заболевания.
Большая роль в этиологии эндометритов отводится, так называемым, вторичным нарушениям функций эндокринной и иммунной систем, возникающим в результате применения кортикостероидных и цитостатических препаратов при терапии дерматологических и онкологических заболеваний, прогестинов - для подавления течки и эстрогенов - для предотвращения беременности. Определенное значение имеет также возрастание популяции этих домашних животных (В.В Никольский, 1966; Е.А. Васильева, 1971; С.Я Любашенко, 1974; Я.В. Бохман, 1983; Я.Е Коляков, 1986; В.В. Абрамченко, 1994; Е.М. Вихляева, 1997; К. Эльце, Д. Миссаль, 1997; В.Э. Ален, 1999; СВ. Бондаренко, 2000; A.M. Hussain, 1989; R.C. Seals, 2003).
Учитывая сложность патогенеза, стадийность течения, многоликость клинических проявлений эндометритов у собак и связанные с этим большие трудности в постановке правильного диагноза, а, следовательно, адекватной терапии, мы поставили цель: изучить морфофункциональные изменения, возникающие в организме сук при эндометритах, разработать современные, отвечающие требованиям практики способы диагностики и неоперативного лечения при этой патологии.
Достижение намеченной цели осуществлялось решением следующих задач:
изучить распространение эндометритов у собак;
разработать диагностический алгоритм при эндометритах у собак;
разработать методы цитологической диагностики различных клини-ко-морфологических форм эндометритов;
выяснить гистологические изменения в матке при эндометритах, возникающих в фолликулиновую стадию полового цикла;
выяснить гистологические изменения в матке при эндометритах, возникающих в лютеиновую стадию полового цикла;
выяснить основные диагностические отличия эндометритов, разви-
вающихся в разные стадии полового цикла;
7) разработать схемы терапии эндометритов у собак.
Научная новизна. Изучено распространение эндометритов у сук в условиях г. Ростова-на-Дону и г. Шахты. Впервые проведены комплексные гистологические исследования с применением окраски эндометрия на маркеры пролиферации. Выявлены основные морфологические изменения в матке у собак при эндометритах, протекающих в различные стадии полового цикла.
Разработан новый способ консервативного лечения собак, больных гнойным эндометритом, блокатором простагландиновых рецепторов мефи-пристоном.
Теоретическая и практическая значимость. На основании проведенных комплексных цитологических, гистологических и гормональных исследований разработаны адекватные схемы терапии при эндометритах у собак, соответствующие различным морфофункциональным показателям при этом заболевании.
Полученные данные по морфологии и патоморфлогии половой системы, морфофункциональным показателям крови и клинико-морфологическому проявлению эндометритов у собак, целесообразно использовать при составлении руководств, учебных и справочных пособий по морологии, физиологии, биохимии и патоморфологии.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных отчетах советов темы Донского ГАУ (2004-2005гг); совместном заседании кафедр микробиологии, вирусологии и патанатомии, акушерства и хирургии Донского ГАУ (протокол № 6 от 26 января 2006 г.), на научных конференциях «Свободные радикалы, антиокси-данты и здоровье животных» (г. Воронеж, 2004), «Актуальные проблемы охраны здоровья животных» (г. Ставрополь, 2004), «Современные проблемы устойчивости развития агропромышленного комплекса России» (п. Персиановский, 2004).
Реализация результатов исследований. Разработанные практические предложения реализуются в практической работе ветеринарной клиники «Вита-Вет» (г. Шахты, Ростовской обл.), используются в практической работе ветеринарными специалистами Ростовской области, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре микробиологии, вирусологии и патанатомии Дон ГАУ.
Внедрены в практику и рекомендованы НТС Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Ростовской области, следующие методические рекомендации: «Превентивная терапия при септических мет-ропатиях у собак», «Профилактика септических метропатий у собак», «Классификация, диагностика и терапия метропатий у собак».
Публикации. По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 7 научных работ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 152 страницах текста компьютерного исполнения, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методики выполнения работы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, предложений для практики и списка литературы. В диссертации приведено 13 таблиц и 55 рисунков. Список литературы включает 186 источников, в том числе 65 на иностранных языках.
На защиту выносятся следующие основные положения:
основные принципы цитологической диагностики цитологической диагностики эндометритов у собак;
гормональные сдвиги, характерные для эндометритов у собак;
цитологическая диагностика эндометритов у собак;
гистологические изменения матки при эндометритах, развивающихся в фолликулиновую и лютеиновую стадии полового цикла;
основные отличия в терапии эндометритов, развившихся в лютеиновую и фолликулиновую стадии полового цикла.
Изменения лабораторных и функциональных показателей при эндометритах у собак
А.А. Кудрявцев (1974), В.Н. Серов (2000), К. Н. Жмакина (1986), Я.П. Сольский (1977) считают, что гнойные эндометриты - полисистемная болезнь, поэтому у животного развивается целый ряд лабораторных изменений: устанавливают повышение СОЭ, лейкоцитоз, моноцитоз, анемию, гипоаль-буминемию, гиперглобулинемию, азотемию, ацидоз, повышенный уровень щелочной фосфатазы, креатинина, мочевины.
С.Н. Карташов с соавт. (2004) в своем исследовании у 37% сук с гнойными эндометритами выявили анемию разной степени тяжести.
Общими симптомами анемий были бледность слизистых оболочек, одышка, сердцебиение, общая слабость и быстрая утомляемость. В легких случаях клинические симптомы анемии отсутствовали. При этом были выявлены несколько нозологических форм анемии.
Нормохромная, не реагирующая на лечение железом, характеризующаяся отсутствием молодых форм эритроцитов в периферической крови, лейкоцитозом и гиперлейкоцитозом; в красном костном мозге отмечалось абсолютное увеличение клеток гранулоцитарного ряда, уменьшение клеток красного ростка кроветворения, снижение количества сидеробластов. Гематокрит у этих животных не снижался ниже 0,3. После операции и адекватной послеоперационной терапии у сук с этой анемией в течение 2-3 недель полностью восстанавливались показатели красной крови.
Гипопластическая анемия развивалась вследствие почечной недостаточности, характеризовалась нормохромным типом, отсутствием молодых форм эритроцитов в периферической крови и нормоцитозом. Миелограмма не отличалась от миелограммы здоровых животных, сидеробластов насчитывалось около 30%. Гематокрит у таких животных не снижался ниже 0,25. У всех животных этой группы был повышен уровень мочевины в сыворотке крови 40 ммоль/л, а также креатинина - до 300 мкмоль/л.
Апластическая анемия характеризовалась гематокритом 0,08, в крови не отмечалось молодых клеток эритроидного ряда. При исследовании красного костного мозга клетки красного ростка кроветворения не были обнаружены. Эту анемию авторы характеризовали как апластическую. С.Н. Карташов с соавт. (2004) выявили, что у сук, больных гнойными эндометритами, развиваются следующие виды анемий: железоперераспреде-лительная, ассоциированная с хроническим воспалительным процессом в матке и нормализующаяся после удаления воспалительного очага; железоде-фицитная, связанная с кровоизлияниями в пораженную матку (этот вид анемии клинически и лабораторно мало отличим от предыдущего); гипопроли-феративная, ассоциированная с вторичной почечной недостаточностью (постоянным «спутником» пиометры); апластическая, возможно связанная с аутоиммунным поражением стволовых клеток ККМ, не исключены и различные сочетания этих патологических процессов.
Эти авторы показали неэффективность использования препаратов железа в лечении анемий, ассоциированных с пиометрой. Усилия должны быть направлены на устранение воспалительного очага и лечение синдрома почечной недостаточности.
Е.В. Карташова (2004), указала на высокую вероятность развития полиорганной недостаточности у сук, больных пиометрой, ассоциированной с различной тяжестью анемии. Все суки, имеющие хроническую анемию разнообразного генеза, исходный уровень показателей гемоглобина менее 70 г/л и гематокрита - менее 0,24, должны расцениваться как пациентки с латентным синдромом ранней полиорганной недостаточности. Данная категория больных требует соответствующих ограничений хирургической и ятрогенной агрессии, а также адекватной предоперационной подготовки.
С.Н. Карташов с соавт. (2004), провели биохимические исследования крови у собак, больных гнойными эндометритами, с определением печеночных трансаминаз, общего белка, альбумина и билирубина. Они выявили снижение количества общего белка и альбумина до 55,5±0,51 и 18±0,31 мМоль/л соответственно, увеличение протромбинового времени с 11,39+0,77 мМоль/л. при легком течении до 18,7±2,6 мМоль/л при тяжелом течении пиометры; аланинаминотрансфераза повышалась до 280±14,5 ЕД, щелочная фосфатаза - до 120±9,5 ЕД. Гнойные эндометриты, протекающие с изменением этих показателей, авторы назвали эндометритами, осложненными гепа-топривным синдромом.
В зависимости от тяжести течения гепатопривного синдрома отмечали увеличение уровня общего билирубина в крови от 9,38±0,22 (при легком течении) до 11,31 ±1,8 мкмоль/л (при тяжелом течении).
Для уточнения диагноза животным с нарастающей тяжестью гепатопривного синдрома они провели цитологическое исследование пунктата печени. При микроскопическом исследовании пунктата печени у сук с пиометрой в гепатоцитах наблюдается выраженная вакуолизация цитоплазмы, полиморфизм клеток и ядер. Некоторые ядра пикнотически изменены, в них невозможно выявить ядрышки. Происходит смещение ядерно-цитоплазматического отношения в пользу цитоплазмы. Имеются участки, содержащие метахромати чески окрашенные клетки. Таким животным авторы рекомендуют в комплексное лечение вводить гепатопротекторную терапию. Н.Г. Ниманд, П.Ф. Сутер (1996), С.С. Фарроу (1996) считают, что наряду с лабораторными признаками пиометры основой постановки диагноза служит рентгеновское исследование, которое должно проводиться в любом случае при подозрении на пиометру. На рентгенограммах брюшную полость на 2/3 заполняют большие овальные тени рогов матки. Р. М. Соколовский (1977), О. И. Топчиева (1983) полагают, если удается пальпировать ампулоподобную, сегментированную матку, то рентгенографию можно не делать, так как последняя не всегда вносит ясность.
Лабораторными исследованиями обнаруживают повышение СОЭ, лейкоцитоз с регенеративным сдвигом ядра влево и моноцитоз, повышение в крови концентрации мочевины, кретинина и активности холинэстеразы, альбуминурию. Диагноз ставят путем исключения других болезней, так как дифференцировать это заболевание по клиническим признакам трудно.
Ф. Барр (1999), И. А. Яковлева (1987), Р. Н. Степанова (1985), А. Но et al. (1994), не исключая важности рентгенографического исследования, подчеркивают, что при помощи УЗИ можно не только наблюдать увеличение рогов матки, но и обнаружить наличие жидкости внутри органа, утолщение его стенок. Тело и рога матки опускаются в брюшную полость.
Подопытные животные и их характеристика
При сборе анамнеза жизни и заболевания особое внимание уделяется характеру питания собаки, моциону, моменту начала заболевания и возможной его связи с периодом полового цикла, стрессовыми ситуациями, изменениями стереотипа жизни, предшествующим назначением гормональных препаратов (особенно эстрогенов и гестагенов). Детально выясняются характер выделений из влагалища (внешний вид, запах, наличие примесей крови, гноя), особенности полового акта (продолжительность, полноценность, болезненность).
Клинический осмотр проводили по общепринятой методике. Исследовали цвет и состояние кожных покровов, тургор тканей, мышечный тонус, состояние языка, форму и размер живота. При пальпации живота выявляют спазмированные, болезненные участки кишечника и матки. Осматривается аногенитальная область, проводится пальцевое ректальное исследование. При последнем обращается внимание на диаметр шейки и тела матки, ее плотность, консистенцию и болезненность.
Осмотр органов грудной и брюшной полостей проводится с применением методов пальпации, перкуссии и аускультации. Оценивается состояние мышц, суставов, скелета, а также неврологический статус животного. В диагностике гинекологического заболевания выделяют два этапа: первичная диагностика и уточненная диагностика.
Главной задачей первичной диагностики является установление диагноза патологии матки. Эта задача в основном решается при первичном приеме больного животного. Уточненная диагностика проводится с помощью специализированных методов исследования.
На первом этапе работы необходимо было из всех поступивших в клинику животных отобрать для исследования сук с патологией матки. Мы разработали алгоритм постановки диагноза на патологию матки. Первоначально выясняются следующие признаки: нарушение общего состояния, повышение температуры тела, анорексия, наличие выделений из влагалища, изменения кожи, аногенитальной области, полидипсия-полиурия, нарушения полового цикла. Чрезвычайно характерны для этой группы различные нарушения полового цикла.
Выявляются животные с воспалительными процессами в матке. При этом в первую очередь выявляли общие неспецифические признаки, которые характеризуют воспалительный процесс (температура тела, частота сердечных сокращений и астения, изменения дыхания), затем - патогномоничные симптомы (выделения из влагалища, полидипсия-полиурия, выявление увеличенной матки при пальпации, данные рентгенологической картины). Температуру тела измеряли ректально термометром. По этим признакам выявляются животные с воспалительными процессами в матке.
Если перечисленные выше симптомы отсутствовали, но у животного отмечались нарушения полового цикла, бесплодие, патологические выделения из влагалища, то ставили диагноз асептический эндометрит. Необходимо отметить, что уточнение диагноза невозможно без проведения диагностической лапаротомии, поэтому всем животным с подозрением на эндометрит проводилась диагностическая лапаротомия.
Гистоструктура влагалищного эпителия подвержена гормональным влияниям. В анэструсе, в период наименьшей концентрации эстрогена и прогестерона, влагалище покрыто 2-3-слойным неороговевшим плоским эпителием. Под влиянием эстрогенов происходит пролиферация клеточных слоев. И когда уровень эстрогенов достигает максимальных значений (90 пг/мл), в норме в конце проэструса, клетки, находящиеся на поверхности, подвергаются ороговению. Пик пролиферации (до 20 слоев) и ороговение, как правило, совпадают с течкой. В этот период количество эстрогенов снижается, а прогестерона резко возрастает. В начале метэструса слоистость эпителия опять постепенно уменьшается, а ороговевшие клетки слущиваются, в этот период происходит падение эстрогена до 10 пг/мл, прогестерон держится на прежнем уровне, около 30 нг/мл.
В комплексной диагностике эндометрита у сук вагинально-цитологическое исследование имеет большое значение. Гормонально обусловленное изменение структуры используется для того, чтобы определить, какая фаза полового цикла соответствует данному эндометриту, эстрогеная или гестагенная. Эти данные имеют решающее значение для окончательной постановки диагноза на эндометрит.
Мазок из влагалища берется по определенной методике. Сначала, во влагалище вводится влагалищное зеркало, можно воспользоваться медицинским ректоскопом. Зеркало вводится в направлении краниодорсально, а затем направление меняется на краниальное, поскольку у сук влагалище имеет выраженный изгиб. Стерильный тампон, смоченный физиологическим раствором, закрепленный на изогнутом зажиме Кохера, вводят во влагалище, стараясь не касаться его преддверия, простирающегося от половых губ до устья уретры. Это важно потому, что изменение структуры эпителия в преддверии не так четко выражено, как во влагалище, и, кроме того, интерпретацию могут осложнить клетки из мочевыводящих путей. При наличии обильных выделений из влагалища их слегка промокают стерильным тампоном, после чего попытка повторяется. Выделения из матки, как правило, заполняют нижнюю часть влагалища и не мешают взятию мазка. Мазок берется путем однократного проведения тампоном по своду влагалища и переноса полученного материала на предметное стекло. Рекомендуется прокатать тампон по стеклу, а не размазывать пробу, так как во втором случае на стекло попадает гораздо меньше клеток, которые к тому же могут быть повреждены. Затем мазок высушивается на воздухе и окрашивается по Паппенгейму или Лейшману.
Методики морфологических и биохимических исследований крови
Для дифференциальной диагностики септических и асептических эндометритов мы использовали также данные морфологического и биохимического анализа крови.
После установления диагноза всем сукам с эндометритами проводили морфологический и биохимический анализ крови. Морфологические и биохимические исследования крови проводились в лаборатории ветеринарной клиники «Вита».
Кровь для биохимического и морфологического исследования брали из подкожной вены предплечья, латеральной вены сафена, а при их плохой выраженности из яремной вены. Морфологический анализ крови включал: определение числа эритроцитов и лейкоцитов в сетке камеры Горяева, определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом, гематокрита по методике, предложенной И.И. Архангельским и Л. П. Сошенко (1993), СОЭ, выведение лей-кограммы по общепринятым методикам.
Биохимический анализ крови включал определение следующих показателей: щелочной фосфатазы по ферментативному гидролизу п-нитрофенилфосфата, активности аспартатаминотрансферазы и аланинами нотрансферазы по методу Райтмана-Френкеля, а-амилазы - по Каравею, глюкозы - орто-толуидиновым методом, мочевины - с помощью био-лахема-теста, белка - с помощью биуретовой реакции, билирубина - по методу Енд-рашика-Грофа, альбумина - по реакции с бромкрезоловым зеленым, креати-нина - методом Яффе, мочевины - по реакции с диацетилмонооксимом в сильно кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа.
Из биохимических исследований, характеризующих воспалительный процесс, проводили определение фибриногена гравиметрическим методом по Рутбергу (В.С.Камышников, 2000), сиаловых кислот - по методу Гесса (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1974), С-реактивного белка - методом реакции преципитации в капилляре.
Гистологические исследования были основой постановки диагноза. Клинические, цитологические, биохимические методы позволяли поставить предположительный диагноз, после чего всем животных проводилась диагностическая лапаротомия с эксцизией матки.
Образцы тканей фиксировали в 10%-ном формалине в течение суток, затем промывали в проточной воде в течение суток. Далее ткань проводили через ряд спиртов возрастающей крепости (60,70,80,90,96%-ный 1 и 2 спирт), в каждом из них кусочек ткани находился в течение суток. Из второго 96%-го спирта кусочек ткани переносили в смесь : спирт+ксилол в равных пропорциях (1:1) на 1,5-2часа, затем в чистый ксилол на 1,5-2 часа, отсюда в смесь ксилола с парафином (при температуре 37С) на 2 часа и далее в чистый парафин с содержанием пчелиного воска 5%-ного на 2часа, затем в парафин с содержанием пчелиного воска 10%-ного на 1,5часа (при температуре 59-61 С). После этого чистый парафин с содержанием 15% пчелиного воска заливали в специальные формочки, в которые затем помещали в нужном положении заливаемые кусочки органов. С парафинового блока при помощи мик ротома делали срезы толщиной 6-8 мкм. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином: 1. Депарафинирование срезов-ксилолом-3-5минут. 2. Обработка срезов спиртом 96С-Зминуты. 3. Промывание дистиллированной водой-5минут. 4. Окраска гематоксилином 4-7минут. 5. Промывание дистиллированной водой-5минут. 6. Обесцвечивание соляно-кислым спиртом 2-5секунд. 7. Затем помещали в водопроводную воду на 20-3Омин. 8. Потом помещали в дистиллированную воду на 1-2мин. 9. Окраска эозином 3-5минут. 10. Промывание в дистиллированной воде 1-2минуты. 11. Обезжиривание окрашенных препаратов спиртом 96 С-ЗОсекунд. 12. Просветление срезов: карбол-ксилол-2 минуты. 13. Ксилол-2 минуты. 14. Нанести 1 каплю канадского бальзма и накрыть покровным стеклом. Морфологический диагноз ставился на основании изучения гистологического препарата. Для выяснения преимущественных процессов пролиферации или секреции, протекающих в матке, что важно для уточнения диагноза проводили иммуногистохимические исследования. Иммуногистохимические способы окраски позволяют визуализировать тканевые (клеточные) антигены. Эти способы основаны на иммунореактивности антител и выявлении комплекса антиген-антитело при реакции с неокрашенным хромогенным субстратом, в результате чего образуется окрашенный конечный продукт в месте локализации антигена. Из образцов тканей, фиксированных в формалине и заключенных в парафин, изготовляли серийные срезы толщиной 4 мкм с последующей им муногистохимией окраской антителами к эстрогенным рецепторам (клон PgR636, Dako, readyo-use), маркеру пролиферации PCNA (клон РС10, Dako, разведение 1:100) и антиапоптическому белку bcl-2 (клон 124, Dako, разведение 1:100). Срезы обрабатывали в микроволновой печи 10 минут на мощности 700Вт с целью открытия антигенных детерминант, блокировали активность эндогенной пероксидазы и инкубировали с первичными антителами 18ч при 4С. Затем срезы обрабатывали вторичными антителами, конъюгиро-ванными с пероксидазой хрена, в течение ЗОминут. Визуализацию осуществляли инкубацией с аминоэтилкарбазолом (АЕС), дающим продукт красно-коричневого цвета в месте локализации выявляемого антигена. При оценке количества клеток, дающих положительную реакцию с антителами к эстро-геновым и прогестероновым рецепторам, учитывалось только ядерное окрашивание. Положительной считалась реакция, при которой процент окрашенных ядер составлял 10% и более (в соответствии с методическими рекомендациями Dako). Индекс пролиферации устанавливался путем подсчета 100 клеток и определения процента окрашенных ядер. При оценке окрашивания антителами к bck-2 учитывалась цитоплазматическая реакция.
Морфологические и биохимические исследования крови сук, больных эндометритами
Из 275 животных с диагнозом гнойный эндометрит у 35 (25%) была выявлена анемия разной степени тяжести. Практически во всех случаях анемия развивалась при гнойном эндометрите, сопровождающемся накоплением гноя в полости матки (пиометре).
Общими симптомами анемий были бледность слизистых оболочек, одышка, сердцебиение, общая слабость и быстрая утомляемость. В легких случаях клинические симптомы анемии отсутствовали.
Всем животным с анемией для определения ее формы проводили лабораторные исследования крови: определение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, величины и насыщенности их гемоглобином, подсчет количества ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, выведение лейкограм-мы, определение мочевины и креатинина. Чтобы судить о функциональном состоянии кроветворной системы, проводили морфологическое исследование пунктата костного мозга, который отбирали из проксимальной части бедренной кости. Для исключения гемолитической анемии сыворотку крови исследовали на содержание свободного гемоглобина, определяли уровень билирубина в крови, концентрацию уробилиногена в моче.
У 21 суки с пиометрой выявлена анемия нормохромного типа, не реагирующая на лечение железом, характеризующаяся отсутствием молодых форм эритроцитов в периферической крови, лейкоцитозом и гиперлейкоцитозом. В красном костном мозге отмечалось абсолютное увеличение клеток гранулоцитарного ряда, уменьшение клеток красного ростка кроветворения,ижение количества сидеробластов. Гематокрит у этих животных не опускался ниже 0,3. После операции и адекватной послеоперационной терапии у всех животных в течение двух-трех недель полностью восстанавливались показатели красной крови.
У восьми животных с пиометрой выявлена анемия нормохромного типа, характеризующаяся отсутствием молодых форм эритроцитов в периферической крови и нормоцитозом. Миелограмма не отличалась от миелограммы здоровых животных, сидеробластов насчитывалось около 30%. Гематокрит у таких животных не опускался ниже 0,25. У всех животных этой группы был повышен уровень мочевины в сыворотке крови до 40 ммоль/л, креатинина -до 300 мкмоль/л. После овариогистерэктомии и лечения препаратами железа, показатели красной крови не улучшались. Три суки с показателями мочевины от 30 до 40 ммоль/л и креатинина от 200 до 300 мкмоль погибли с признаками нарастающей анемии. Повторные переливания крови не принесли успеха. Лишь через четыре недели у оставшихся животных после снижения уровня мочевины до 10 ммоль/л и креатинина до 100 мкмоль/л показатели красной крови стали расти, и к пятой неделе гематокрит у этих собак стал в пределах от 0,4 до 0,45.
У одной собаки гематокрит был 0,08, в крови не отмечалось молодых клеток эритроидного ряда. При исследовании красного костного мозга клетки красного ростка кроветворения не были обнаружены. Эту анемию мы характеризовали как апластическую.
Таким образом, у сук, больных пиометрой, развиваются следующие виды анемий: железоперераспределительная, ассоциированная с хроническим воспалительным процессом в матке и нормализующаяся после удаления воспалительного очага; железодефицитная, связанная с кровоизлияниями в пораженную матку (этот вид анемии клинически и лабораторно мало отличим от предыдущего); гипопролиферативная, ассоциированная с вторичной почечной недостаточностью (постоянным «спутником» пиометры); апласти-ческая, возможно связанная с аутоиммунным поражением стволовых клеток ККМ. Возможны и различные сочетания этих патологических процессов.
Поскольку анемия развивалась только у 30% сук, страдающих пиометрой, это состояние нужно рассматривать как осложнение - нарушение функции красного костного мозга под воздействием различных патогенных факторов.
При тяжелом течении число эритроцитов и количество гемоглобина снижались соответственно до 4,5±0,28 10 /л и 102+3,51 г/л при норме у клинически здоровых собак 8,3±0,16 10 /л и 165+2,8 г/л с высокой степенью достоверности (Р 0,01).
Снижение числа эритроцитов и количества гемоглобина обусловлено депрессией красного костного мозга эндотоксинами бактерий, образующимися при их разрушении в результате воздействия нейтрофилов, и медиаторами воспаления, особенно фактором некроза опухолей, образующимся в результате системной воспалительной реакции.
Отмечены значительные отклонения в СОЭ у сук, больных гнойным эндометритом, до 64±12,3 при норме 2,0±1,1 мм/ч. Скорость оседания эритроцитов четко отображает тяжесть течения заболевания: по мере утяжеления процесса происходит повышение СОЭ.
