Введение к работе
I.I. Актуальность темы. Важную роль в решении проблеми снабжения населения нашей страны наиболее ценными для здоровья продуктами питания играет одна из ведущих отраслей агропромышленного комплекса - молочное скотоводство, на долю которого приходится 99% производимого молока и 40% валовой продукции мяса (В.М.Стародубцев с соавт.,1989; ВЛ.Шишков с соавт.,1989; Е.А.Антонович с соавт., 1990).
Одной из главных причин, сдерживающих повышение эффективности животноводческой отрасли, считается заболевание коров маститом. Современная интенсификация молочного скотоводства сопровождается высокой концентрацией поголовья на ограниченных площадях, применением в процессах обслуживания животных различных средств механизации и автоматизации, гиподинамией, неудовлетворительным санитарно-гигиеническим состоянием помещений, повышением вирулентных свойств микрофлоры, дефицитом запасных частей к доильному оборудовании, недостатком мощих и дезинфицирующих средств. В связи с этим мастит у коров имеет широкое распространение во многих странах мира (В.И.Мутовин,1974; Н.К.Оксамитний,1982; В.И.Беляев с соавт.,1988; М.Г.Миролгбов,1988; В.АЛариков,1990;А.Я.Батраков,І99І; Р.Р.Батькаев с соавт. ,1991\XPbdblrt,e№s\ll.J.'tAAln.e.aJ 1990\HJZbfwll елш/ 1990; PJ. Щспл/ииі.к., 1990; J.SzaC&icu, 1991 и другие).
Многие методы диагностики субклинического мастита у коров предусматривают использование сложной аппаратуры и оборудования, дефицитных питательных сред, значительных затрат труда и времени, что создаёт определённые трудности их применения в условиях производства (Г.А.Немчинов с соавт.,1982; И.Н.Гринько,1984; Г.Ф.Коган с соавт.,1987; Ю.С.Клос с соавт.,1989; Н.И.Полянцев,1990).
Широко применяемые в ветеринарной практике препараты для
лечения больньк иаститом животных, в основном, содержат различные антибиотики и сульфаниламиды, использование которых не всегда при водит к выздоровлении организма. Установлено, что антибиотики угнетают естественные защитные механизмы молочной железы и организма животного, и тем самым способствуит возникновении рецедивов и бактерионосительства. Длительное, бессистемное применение антибио тикосодеряащих средств привело к появление в природе высокоустойчивых к ним рас микроорганизмов и мастита микозной этиологии (Е.В.Ильинский,1977; В.И.Слободяник с соавт.,1991; Д.Д.Логвинов, 1992), а присутствие в молоке остаточных количеств антибиотиков задерживает развитие молочнокислых бактерий, негативно влияет на технологические процессы изготовления сыров и кисломолочных продуктов (Е.В.Себряков,ШЗ; И.И.Архангельский,1974; Е.В.Ильинский, 1977; В.А.Париков,1977; О.А.Симецкий, Г979; В.М.Карташова с соавт 1988; В.И.Хомвнко,1990; В.И.Слободяник с соавт.,1991).
Попадая в организм человека, антибиотики и сульфаниламиды могут вызывать аллергии, анафилаксии, изменения количественного и качественного состава банальной микрофлоры и другие нежелательные явления (В.И.Аксёнов с соавт.,1977; В.А.Париков,1987; В.В.Смеянов с соавт. ,1992;ШисрХ^Л^І, 1989; tf.S^Mdle^c г. ^ 199О; /*I J МЯЛ е..Л., 1991).
Приведённые сведения показывают, что дальнейшее совершенствование методов диагностики, разработка экологически чистых и высокоэффективных средств профилактики и лечения мастита у коров является одной из главных задач ветеринарного акушерства.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью работы явилось усовершенствование пробы отстаивания молока для ускоренной диагностики субклинического мастита и изучение лечебно-профилактической эффективности препарата "Биосан" при различных формах воспаления мо-
лочной железы у коров. Для достижения наиеченной цели были постав- . лены следующие задачи:
-
Изучить степень распространения и причины мастита у коров в хозяйствах Кировской области.
-
/совершенствовать пробу отстаивания молока для ускоренной диагностики субклинического мастита у коров.
-
Изучить кудыурально-биохиыические свойства лактобацилл биосана и их влияние на организм коров при инграцистернальном введении.
-
Изучить терапевтическуп эффективность биосана при субкли-ническом, катаральном и гнойно-катаральном мастите у коров в лактационный период.
-
Установить профилактическую эффективность биосана при мастите у коров в период сухостоя.
-
Определить экономическую эффективность применения биосана при профилактике и терапии мастита у коров.
-
Научная новизна. Впервые на основании установленных антагонистических свойств лактобацилл к основным возбудителям мастита, иммуностимулирующего влияния их на локальные факторы защиты молочной железы и всего организма предложен новый эффективный способ лечения и профилактики мастита у коров путём интрацистер-чального введения биосана, что является существенным вкладом в теорию ветеринарного акушерства.
-
Практическая значимость работы. С целью сокращения сроков постановки окончательного диагноза на субклиническиа мастит у соров предложена проба центрифугирования молока вместо пробы отста-івания.
Разработка нового способа лечения и профилактики мастита у :оров с помощью лактобацилл биосана расширяет показания к приме-ієние препарата, что обогащает ветеринарную практику оригинальны-
- ч -ми средствами для борьбы с акушерскими болезнями.
-
Внедрение результатов исследований. Метод центрифугирования проб молока при диагностике субклинического мастита, а также способ лечения и профилактики воспаления вымени у коров с помощью биосана в течение ряда лет с успехом применяются ветеринарными специалистами в совхозах "Подгорный", "Красногорский" и "Северный" Кировской области. Полученные материалы исследований используются в учебном процессе пр чтении курса "Акушерство, гинекология и искусственное осеменение" студентам ветеринарного и зоо инженерного факультетов Кировского сельскохозяйственного института.
-
Апробация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на научно-практических конференциях (1990-1992г.г.) и ыежкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава ветеринарного факультета (1994) Кировского СХИ; на научно-технической конференции "Экологические проблемы ветеринарной санитарии" , Москва (1993 г.).
1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5
работ.
1.8. Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на
184 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора
литературы, материала и методов исследования, собственных иссле
дований, выводов, практических предложений и списка литературы,
включающего 465 источников, 183 из которых иностранных авторов.
Диссертация иллюстрирована 35 таблицами, I рисунком и 2 фотогра
фиями .
З. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Клинико-экспериментальные опыты проводились на коровах чёрно-пёстрой породы совхозов "Подгорный", "Красногорский" и "Се-
верный" Кировской области в период с 1989 по 1993 годы. Лабораторные исследования образцов крови и молока выполнялись в Кировском сельскохозяйственном институте, Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии, Всероссийском научно-исследовательском институте охотничьего хозяйства и звероводства имени профессора Б.М.Еиткова.
При изучении степени распространения мастита у коров использовали материал статистической отчётности по ветеринарному отделу Кировской области, а также проводили ежемесячные исследования 526 коров на мастит в совхозе "Подгорный" в течение 1990-1992 годов согласно "Рекомендаций по борьбе с маститом коров " (1985).
Для диагностики субклинического мастита применяли молочно-контрольные пластинки (МКП-2) и диагностические реактивы: 5^-ный раствор димастина и 2^-ный раствор мастидина. Из положительно реагирующих долей вымени отбирали пробы секрета для постановки пробы отстаивания по В.И.Мутовину (1974), бактериологического исследования в соответствии с "Методическими указаниями по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени коров" (1983) и подсчёта количества соматических клеток на приборе "Пикоскель". Выявленные культуры микроорганизмов из секрета вымени дифференцировали до вида и определяли их чувствительность к пенициллину, стрептомицину, тетрациклину, левомицетину, эритромицину, неомицину, мономицину и полимиксину.
Степень распространения мастита у коров оценивали в зависимости от их возраста, анатомических особенностей вымени и сосков, способа содержания животных и сезона года, а также от уровня профессиональной подготовки операторов машинного доения.
Для совершенствования пробы отстаивания молока с целью ускоренной диагностики субклинического мастита провели параллельные исследования 7020 проб молока от 1755 коров с е% мастидином, про-
- б -
бой отстаивания и центрифугированием на электроцентрифуге марки ЦЛШ-24 при 1500 оборотах в минуту.
При изучении бактериального препарата биосана провели 3 лабораторных опыта и б - клинических на здоровых и больных маститой коровах.
Препарат биосан для выполнения научной работы получали из Кк ровской производственной ветеринарной лаборатории.
Культурально-биохимические свойства лактобацилл биосана изучали на различных питательных средах, а безвредность-на белых мышах по общепринятым методам.
Оценку антагонистического действия лактобацилл по отношение к стафилококкам, стрептококкам и кишечной палочке проводили по следующей методике. В пробирку с МПБ одновременно засевали по 1,С мл двухсуточной бульонной кутуры лактобацилл в концентрации 10 и.т./ил и иследуешх культур микробов в той же концентрации. Смесь ин.кубировали в термостате в течение 24 часов при температуре 37С. Через 4,24,4В часов из пробирок отбирали по 0,1 мл смеси и вносили на Шк в чашках Петри. Жидкость равномерно распределяли по агару и ставили в термостат при температуре 37С на 24 часа. Количество выросших колоний на агаре исследуемых микроорганизмов выражали в колонеобразувдих единицах (КОЕ) и использовали как показатель жизнеспособности клеток.
Раздражающее действие биосана на молочную железу изучали на 5 клинически здоровых коровах, которым в правые передние доли вымени интрацистернально однократно ввели препарат в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобацилл), подогретый до 38-40С. За животными вели клинические наблюдения и через 24,48,60 и 72 часа после ин-фузии исследовали молоко с % димастинои и 2% мастидином, пробой отстаивания.
Изучение влияния биосана при интрацистернальном введении на
морфологические, биохимические и иммунологические показатели молока и крови провели на 7 клинически здоровых лакирующих коровах. Препарат вводили в правую переднвю долю вымени однократно в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобакгерий), подогретым до 38-40С. Через 2,7,15 и 25 суток от всех' коров взяли кровь из подкожной брюшной вены и.молоко из правых передних долей вымени для лабораторного исследования.
В крови определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, каротина, общего кальция, неорганического фосфора, ыаг-ния, глюкозы, общих липидов, неэстерифицированных жирных кислот (НЭ1К), общего белка и его фракций, щелочной резерв, лизоцимную и пероксидазнув активность, фагоцитарную активность лейкоцитов, циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) и иммуноглобулины классов Q и U. В молоке определяли только содержание иммуноглобулинов классов й и!
Гемоглобин определяли по Сали,глюкозу - по цветной реакции с орто-толуидином, общий белок - рефрактометрически, фракции белка - методом Олла и Маккорда в модификации С.А.Карпюка (1962), общие липиды - с сульфофосфованилиновым реактивом, НЭ1К - спектрофото-метрически с диэтиддитиокарбонатом натрия, общий кальций - коып-лексомегрическим методом с использованием индикатора флуорексона, фосфор неорганический - по Полсу в модификации В.М.Коромыслова и др. (1972) , магний - по цветной реакции с титановым жёлтым, классы иммуноглобулинов - методом радиальной иммунодиффузии по панл** в модификации Б.Е.Караваевой (1983), ЩКи - по методу fji^6"^ (П.В.Стручков и др.,1985), лизоцимную активность - по О.В.Бухарину и др. (1974), пероксидазную активность - бензидиновым методом по БЛ.Плешкову (1976), щелочной резерв - по И.П.Кондрахину (1978), фагоцитарную активность лейкоцитов - по Кост и Стенко, эритроциты и лейкоциты подсчитывали в камере Горяева.
_ 8 -
Изучение влияния биосана на показатели секрета вымени больных долей и крови коров провели на 10 животных с субклиническии маститой, который интрацистернально вводили препарат один раз в сутки в дозе 5,0 ил (6,0-7,5 млрд лактобацилл), подогретый до 38-40С до выздоровления. До лечения, через 48 часов от начала курса лечения и через 7 суток после выздоровления от коров брали кровь из подкожной бршшой вены и секрет из поражённых четвертей для лабораторного исследования. В крови определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, общий белок и его фракции, лизоцимиую активность и выводили лейкоцитарнуї) формулу. В секрете вымени определяли количество соматических клеток, лизоцим U и фагоцитарнуп активность нейтрофилов по методу А.А.Гинзбург и др. (1979).
Сроки приживаемости лактобацилл биосана в вымени изучали на 3 клинически здоровых лактирующих коровах. Препарат вводили интрацистернально в правые передние доли вымени однократно в дозе 5,0 мл (6,0-7,5 млрд лактобацилл), подогретым до Э8-40С. До введения биосана, через 6,24,48 и 72 часа после введения из правых передних долей подопытных коров брали пробы цистернального и альвеолярного молока, разводили в физиологическом растворе 1:64 и 0,2 мл высевали на Шк с добавлением глвкозы и витамина Вт-о. Делали контроль - посев биосана. Учёт роста микрофлоры проводили через 12,24,48 и 72 часа. Из типичных для лактобактерий колоний делали мазки и изучали тинкториальные и морфологические свойства,
При отработке оптимальных доз биосана для терапии различных форм мастита использовали по 15 коров с субклиническии, катаральным и гнойно-катаральным воспалением молочной иелезы. Стандартный биосан содержит 3,0-3,5 илрд лактобацилл в I мл. Перед непосредственным введением во внутрь соска его разводили дистил-
лированной водой. Дозу разведённого препарата для больньк скрытым маститой определили 5,0 мл, а катаральный и гнойно-катаральным -10,0 мл.
Больных животных различными формаш мастита разделили на 3 группы по 5 коров в каждой. Пяти коровай со скрытым маститом био-сан вводили разведённый в следующем соотношении - I мл стандартного препарата и 4 мл дистиллированной воды, то есть вводили 3,0-3,5 млрд лактобактерий (разведение 1:4). Другим пяти коровам вводили дозу 5,0 мл, в которой стандартного биосана было 2,0 мл и 3,0 ыл дистиллированной воды, содержалось 6,0-7,5 млрд лактоба-цилл (разведение 1:1,5). Оставшимся пяти коровам вводили дозу препарата, содержащую 3 мл стандартного биосана и 2 мл дистиллированной воды, то есть инстилировали 9,0-10,5 млрд лактобактерий (разведение 1:0,67), При катаральном и гнойно-катаральном мастите биосан испытали в разведении 1:4, 1:1,5 и 1:1, то есть в первом случае в 10 мл разведённого препарата содержалось 2,0 мл стандартного биосана (6,0-7,5 млрд лактобацилл), во втором - 4,0 мл (12,0-14,0 млрд лактобацилл) и в третьем - 5,0 мл (15,0-17,5 млрд лактобактерий).
Изучение терапевтической эффективности биосана при различных формах мастита провели на 147 больных лактирующих коровах, из которых у 82 - было субклиническое воспаление, у X - катаральное и у 35 - гнойно-катаральное. В качестве контроля использовали 1%~ ный раствор диоксидина. При субклиническом мастите биосан вводили в 53 поражённые доли вымени 49 коровам в дозе 5,0 мл, содержащей 6,0-7,5 млрд лактобацилл, подогретым до 38-40С, один раз в сутки до выздоровления. Диоксидином лечили 33 коровы (33 доли вымени) согласно наставления по применении.
При катаральном мастите биосан вводили 16 больным коровай в 20 долей вымени в дозе 10,0 мл, содержащей 15,0-17,5 млрд лакто-
бацилл, два раза в сутки, подогретым до 38-40С до выздоровления. Диоксидинои лечили 14 коров (I? долей вымени), препарат ин-фузировали по 20,0 мл2раза в сутки через 12 часов.
С гнойно-катаральный маститом лечили биосаном 19 коров (23 доли вимени) и диоксидинои 16 животных (20 долей вымени). Препараты вводили в тех ке дозах и по схеме как и при катаральной ыастите.
Для изучения качественных показателей молока выздоровевших коров, больных субклиническим маститом, после лечения их биоса-нои и диоксидинои провели две серии опытов в осенний и весенний периоды стойлового содериания. В каждой серии опытов формировали две опытные и одну контрольную группы животных аналогов по 5-14 коров. Одну опытную группу коров лечили биосаном (6,0-7,5 млрд лактобацилл), другую - I^-ным водным раствором диоксидина. В качестве контроля использовали молоко клинически здоровых ла-ктирувдих коров. При отборе проб молока выиени первые 3-4 струйки секрета сдаивали в отдельную посуду, а последующие 100 мл надаивали в стерильные стеклянные флаконы, охлаждали до 6-8С и доставляли в лабораторию для проведения исследований. Анализ молока проводили не позднее 3-4 часов от момента выдаивания.
Органолептическую оценку секрета, определение класса, плотности, жира, белка, лактозы, сухих веществ, бактериальной обсе-менённости, кислотности, ингибирущих веществ в молоке проводили по тестированным методам, используемым для оценки качества молока в. молокоперерабатыващей промышленности.
Профилактическую эффективность биосана при мастите у коров в период сухостоя изучали в двух сериях опытов в сравнении с препаратом мастицид-2.
В первой серии опытов препараты животным вводили однократно, во второй - двукратно.
- II -
На первой этапе биосан вводили в каждув доли вымени 36 коровам по 5,0 ил (6,0-7,5 илрд лактобацилл) однократно на 2-3 день сухостойного периода. Мастицидои-2 обработали 21 корову, который прапарат вводили в каждуи четверть вымени по 10,0 мл, тоже однократно и в теже сроки.
Во второй серии опытов препараты вводили дважды 15 коровам каждый раз в тех же дозах и первый раз, как в предыдущей опыте. Повторное введение биосана и мастицида-2 осуществляли за 10-12 дней до предполагаеиого отёла в тех же дозах. Учёт профилактической эффективности препаратов проводили в течение первых 10 дней после отёла по числу незаболевших маститом коров.
Расчёт экономической эффективности применения биосана для лечения и профилактики мастита у коров делали по методикам предложенными В.В.Винокуровым в соавторстве (1977,1979).
Статистическуп обработку полученных результатов проводили по общепринятым методам с использованием вычислительной техники (Е.А.Маринин,1980).
