Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 9
Современные методы и средства борьбы при гнильцовых болезнях пчел 9
Основные методы контроля антибиотиков, поллютантов в продуктах пчеловодства 15
Перспективные подходы к проблеме снижения численности клеща Varroajacobsoni Oudemans(1904) в традиционном пчеловодстве 22
Материалы и методы исследований 31
Результаты исследований 38
Апииндикация и изучение фонового загрязнения окружаю
щей среды токсикантами в промышленной зоне города Уфа.. 39
Наличие солей тяжелых металлов в кормовых запасах пчели
ных семей, как фактор нарушения их жизнедеятельности
и гомеостаза 42
1 Изучение влияния экологической чистоты корма на морфологию отдельных стаз медоносной пчелы 44
2. Влияние солей тяжелых металлов на развитие расплода 48
3 Влияние разной степени экстенспораженности клещами варроа на морфометрические показатели пчел и трутней 52
Разработка средств и методов борьбы с гнильцовыми болезнями и варроатозом пчел 58
1 Новые антибактериальные препараты для лечения и профилактики гнильцовых болезней пчел 59
3.3.1.1 Сравнительные испытания эффективности ряда новых средств хинолонового ряда для лечения пчел 61
3.3.1.2 Определение токсичности пефлоксацина для теплокровных животных 63
3.3.1.3 Определение токсичности пефлоксацина для медоносных пчел 71
3.3.1.4 Создание оптимальной композиции препарата и отработка дозы 73
3.3.1.5 Лабораторные испытания специфической активности препарата апифлоцид 74
3.3.1.6 Пасечные испытания специфической активности препарата апифлоцид 78
3.3.1.7 Разработка метода обнаружения препарата апифлоцид в меде. 83
3.3.2 Разработка средств и методов борьбы с варроатозом пчел... 88
3.3.2.1 Определение токсичности препарата вапамит для теплокровных животных 90
3.3.2.2 Изучение токсичности препарата вапамит для пчел 92
3.3.2.3 Пасечные испытания терапевтической эффективности препарата вапамит при варроатозе пчел 94
3.3.2.4 Изучение санитарного качества меда, обнаружения остатков амитраз в меде семей пчел, обработанных препаратом вапамит 97
3.3.3 Технология оздоровления пасек от европейского гнильца в условиях варроатозной инвазии 99
3.4 Устранение негативного влияния биологических и техногенных факторов с использованием биологически активных препаратов растительного происхождения 102
3.4.1 Влияние биологически активного препарата на основе растительного сырья пчелкас на силу пчелиных семей 105
3.4.2 Влияние пчелкас на динамику роста печатного расплода и среднесуточную яйценоскость маток 108
3 Влияние пчелкас на физиологическое состояние и массу однодневных рабочих пчёл 109
Экономическая эффективность проведенного исследования... 111
Выводы 113
Предложения для практики 115
Список литературы 116
Приложения 134
- Современные методы и средства борьбы при гнильцовых болезнях пчел
- Перспективные подходы к проблеме снижения численности клеща Varroajacobsoni Oudemans(1904) в традиционном пчеловодстве
- Определение токсичности пефлоксацина для теплокровных животных
- Пасечные испытания терапевтической эффективности препарата вапамит при варроатозе пчел
Введение к работе
Особую проблему в технологии получения продуктов пчеловодства вызывает увеличение количества неблагополучных пасек по различным заболеваниям в зонах повышенной антропогенной экологической нагрузки.
Существенным препятствием развития пчеловодства являются заразные болезни пчел, и в первую очередь, варроатоз, гнильцовые болезни, получившие в последние десятилетия широкое распространение на пасеках многих стран, в том числе и в республике Башкортостан.
Болезни различной этиологии сводят на нет усилия пчеловодов по использованию современных технологических приемов пчеловодства, обусловливают снижение продуктивности семей пчел, вызывают массовую гибель расплода и взрослых особей, задерживают рост и развитие семей.
Технологические и зоотехнические параметры здоровья семьи определяются равновесием гомеостаза, то есть количеством расплода, силой семьи, запасами корма, работой матки и условиями окружающей среды.
Рассматривая вопросы технологии производства продуктов пчеловодства, а также физиологических показателей семей пчел необходимо учитывать любое вредное воздействие, напряжение или состояние, делающее организм более восприимчивым к болезням (Смирнов A.M., 1993,1997).
Когда пчелиная семья теряет способность к эффективным предохранительным инстинктам: изгнанию больных особей, поведенческим реакциям, санитарной очистки сотов от травмированных личинок, пчелы становятся более восприимчивыми к различным болезням и признаки заболевания проявляются тут же.
Клещ Varroa jacobsoni Oudemans (1904) наносит вред взрослым особям пчелиной семьи в течении всего года, а в активный - и расплоду. В процессе паразитирования на медоносной пчеле (Apis mellifera mellifera) создает благоприятные условия для проникновения в ее организм патогенной микрофлоры -возбудителей бактериальных болезней.
Ассоциативное течение инфекции и инвазии обостряет патогенный процесс, наносит существенный экономический ущерб и, как правило, семьи погибают.
Отечественной и зарубежной наукой и практикой накоплен большой опыт по организации зоотехнических, лечебных, профилактических мероприятий в пчеловодстве. Несмотря на наличие разнообразных акарицидных средств, антибиотиков, изучение и использование нового поколения препаратов остается весьма актуальной задачей, ввиду повышения устойчивости возбудителей заболеваний пчел к имеющимся лекарственным средствам. Некоторые технологические вопросы остались нерешенными, требуют доработки и углубленного изучения.
Целью работы явилось изучение влияния отдельных поллютанов на жизнедеятельность пчелиных семей и разработка технологии оздоровления пасек от европейского гнильца на фоне варроатозной инвазии.
Исходя из цели работы, были поставлены следующие задачи:
изучить влияние отдельных поллютантов на зимовку, весенне-летнее развитие и продуктивные показатели семей пчел и экстерь-ерные показатели рабочих пчел и трутней;
выявить влияние препаратов на биологические и хозяйственно-полезные признаки пчел при европейском гнильце на фоне варроатозной инвазии;
разработать технологии оздоровления пасек при ассоциативном течении болезней пчел;
определить экономическую эффективность использования новых технологических подходов внедрения комплекса зоотехнических и лечебных мероприятий на пасеках.
Научная новизна работы состоит в том, что впервые изучено влияние отдельных поллютантов на жизнедеятельность пчелиных семей. Для профилактики и лечения пчелиных семей от европейского гнильца предложен новый высокоэффективный бактерицидный препарат на основе фторированных хи-
7 нолонов, обладающий широким спектром антибактериального действия и проведена зоотехническая оценка. Разработаны новые технологические подходы снижения численности клеща варроа, позволяющие вести борьбу с вар-роатозом в весенний период и активно воздействовать на развитие пчелиных семей, продолжительность жизни рабочих пчел, выращивание расплода, медо-собирательную, гнездостроительную деятельность и качество зимовки пчелиных семей.
Научная новизна разработок защищена Патентом Российской Федерации на изобретение № 2121789 от 20.11.98 года.
Теоретическая и практическая значимость. Полученные результаты в значительной степени дополняют имеющиеся данные об экологическом состоянии местности нахождения пасеки, могут использоваться в нормативно-технических документациях, при оценке зоотехнических хозяйственно-полезных признаков, характеризующих устойчивость к соответствующим условиям внешней среды, при разработке системы мероприятий по оздоровлению пасек, неблагополучных одновременно по варроатозу и европейскому гнильцу
В практическом отношении использование профилактических и лечебных комплексных методов позволяет оздоровить пасеку от европейского гнильца в условиях варроатозной инвазии, ускоренно наращивать силу пчелиных семей и максимально использовать пчел на главном медосборе.
Реализация результатов. По результатам исследований разработаны утверждены:
1. Технические условия на изготовление препарата апифлоцид
ТУ 9310-032-00008064-98, одобрено Ветфармбиосоветом РФ, протокол № 3 от 18.06.98 года;
2. Временное наставление по применению препарата апифлоцид при
бактериальных болезнях пчел, утверждено Департаментом Ветерина
рии МСХиП РФ, 17.07.98 года
Результаты исследований используются при чтении лекций и проведения лабораторно-практических занятий по пчеловодству и зоологии в Башкирском государственном аграрном университете.
Апробация работы. Основные теоретические и практические положения работы доложены и получили положительную оценку на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава Башкирского ГАУ (1994-2003), Ученых советах ВНИИВСГЭ (г.Москва), расширенном заседании кафедры пчеловодства и зоологии Башкирского ГАУ, научно-практической конференции «Пчеловодство Башкортостана: «Состояние и проблемы», Уфа, 1997; научно-практической конференции «Актуальные проблемы животноводства Республики Башкортостан», Уфа,2000; Республиканских конкурсах пчеловодства, 2001, 2002; международной научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития агропромышленного комплекса регионов России.», Уфа,2002; международной научно-практической конференции «Пути повышения эффективности АПК в условиях вступления России в ВТО, XIII международной специализированной выставке «АГРО-2003», Уфа,2003; научно-практической конференции «Передовые технологии в пчеловодстве, Рыбное, 2003.
Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы изложены в 8 статьях.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, описания результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и практических предложений. Список литературы включает 227 работ, в том числе 86 иностранных. Диссертация написана на 134 страницах, иллюстрирована 38 таблицами, 4 графиками.
Современные методы и средства борьбы при гнильцовых болезнях пчел
В последние годы вновь получили широкое распространение заболевания, под общим названием, гнильцовые болезни пчел. Гнильцовые болезни пчел вызывают гибель пчелиного и трутневого расплода, вызывая тем самым ослабление и гибель семей пчел.
В поисках средств борьбы с гнильцовыми болезнями пчел в различных странах испытывались различные химические и биологические препараты. Среди них имеются препараты, обладающие высокой бактерицидной активностью в отношении возбудителей этих болезней пчел. В последние годы с этой целью широко используются различные антибиотики, которые часто скармливаются пчелам с профилактической целью в виде, так называемых, стимулирующих подкормок для повышения продуктивности семей пчел. Бесконтрольное применение антибиотиков способствует загрязнению меда и других продуктов пчеловодства остаточными количествами препаратов, так как часть получаемого пчелами лечебного сиропа перерабатывется в мед (Аксенов В.И. и др., 1977; Головнев В.И., 1981; Горинова Л.П., 1976; Серра и др., 1983; Тис-се К. и др., 1976; Шакарян Г.А., Акопян З.М., 1973; Gilliemen М., 1975; Glinski Z., 1980; GonnetM., 1960; Rousseau М., 1962).
В России впервые применили антибиотики для лечения бактериальных болезней пчел в 1952 году. Использовали пенициллин при европейском гнильце в качестве лечебного средства в смеси с сахарным сиропом (Зябкий А.С., Полтев В.И., 1952).
Первые данные по определению чувствительности возбудителей европейского гнильца к антибиотикам из группы тетрациклина-окситетрациклина (террамецина) в пчеловодстве были опубликованы в 1952 году (Katznelson Н., 1952; Gubler H.U. et. al., 1952; Gochnauer T.A.,1953). До настоящего времени окситетрациклин является одним из основных антибиотиков для лечения бактериозов пчел (Гробов О.Ф. и др., 1987; Клочко Р.Т., 1990; Таши Ж. и др., 1975; Eckert F.A., 1961; Glinski Z. et. al.., 1979; Rousseau M., 1962). Успешно применяли для лечения европейского гнильца стрептомицин (Беспалько И.Г., 1955) и окситетрациклин (Katznelson Н., 1952; Gubler H.U., 1952; Moffet J., 1953; Wilson W.T., 1974).
Были испытаны лечебные действия эритромицина (Moffet J., 1953; Wilson W.T., 1974). Положительные результаты при американском гнильце были получены при применении стрептомицина, хлортетрациклина и синтомицина. В 1974 году положительные результаты показали испытания эффективности канамицина и бициллина-3 для лечения европейского гнильца пчел (Шакарян Г.А., 1981).
В пчеловодстве в дальнейшем для лечения гнильцовых болезней пчел находили применение и новые антибиотики - мономицин, неомицин, пасоми-цин, экмоновоциллин и другие (Куликов Н.С., 1961; Люцканов Д., 1971; «Методические указания по применению антибиотиков в ветеринарии», 1974; Руссо М., 1965; Саркисов А.Х., 1968; Тришкина Е.Т., 1983; Чанышев З.Г., 1961; Brizard А., 1961 и др.).
Полусинтетические антибиотики из группы тетрациклина испытыва-лись, начиная с 1981 года. Определена чувствительность возбудителей европейского гнильца пчел к метациклину (Шакарян Г.А., 1981), но в дальнейшем этот антибиотик не применялся для лечения пчел.
Анализ доступной нам литературы показал, что в настоящее время во многих странах мира, в том числе и в России для лечения болезней расплода пчел наиболее эффективными и чаще всего применяемыми являются антибиотики из группы тетрациклина - тетрациклин, хлортетрациклин, окситетрациклин. В Японии допольнительно используют полусинтетические производные окситетрациклина метациклин, доксициклин, диметилхлортетрациклин и ми-ноциклин (Ока Н., et al.,1987). Тетрациклины - антибиотики широкого спектра действия, обладающие высокой активностью in vitro в отношении большого числа грамположитель-ных и грамотрицательных бактерий, микоплазм, спирохет, лептоспир, риккет-сий, хламидий. Группа тетрациклинов состоит из нескольких близких по химическому строению и биологическим свойствам антибиотиков. Основой молекулы тетрациклинов является полуфункциональное гидронафтаценовое соединение с родовым названием тетрациклин. Механизм действия заключается в угнетении белкового синтеза у микроорганизмов. Связываясь с субьедини-цей бактериальной рибосомы, тетрациклин подавляет энзимы, катализирующие присоединение аминоацил-т РНК к рибосомальным акцепторам (Тетрациклины, 1985).
Тетрациклины представляют собой желтые кристаллические вещества, обладающие амфотерными свойствами. На этом основана их способность образовывать соли с органическими и неорганическими кислотами, щелочными и щелочноземельными металлами. Они хорошо растворимы в этиленгликоле, пиридине, кислотах и щелочах, хуже в органических растворителях и воде. В сухом виде стабильны. Устойчивость в растворах зависит от рН среды - антибиотики наиболее устойчивы в кислой среде, в щелочной - их активность быстро снижается (Доксициллина гидрохлорид, 1987; Тетрациклины, 1985).
Устойчивость микроорганизмов к тетрациклинам in vitro развивается медленно по сравнению с другими антибиотиками (Талной Б., 1979).
В последние годы в мире отмечается выраженная тенденция к сокращению применения природных тетрациклинов и росту потребления их полусинтетических производных, так как процесс получения последних менее трудоемок и экономически выгоден. Из полусинтетических производных ок-ситетрациклина в нашей стране выпускаются метациклин и доксициклин (Тетрациклины, 1985). По своему строению они являются структурными аналогами окситетрациклина. Сохраняя спектр, тип и механизм действия, характерный для тетрациклинов, метациклин и доксициклин отличаются рядом преимуществ, основными из которых являются быстрое всасывание при приеме внутрь, достижение высоких и длительно сохраняющихся концентраций в крови и органах, активность в отношении ряда штаммов некоторых грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, устойчивых к действию других тетрациклинов (Невашин СМ., Фомина И.П., 1982; Докси-циллина гидрохлорид, 1987; Zavarne J. et. al., 1984). Обладая рядом преимуществ, новые полусинтетические антибиотики нашли широкое применение в медицине. В ветеринарии, и в частности, в пчеловодстве, для лечения гниль-цовых болезней пчел они не применялись.
Несмотря на наличие разнообразных антибиотиков, изучение и разработка новых препаратов остается весьма актуальной задачей, ввиду постоянно возрастающей устойчивости возбудителей инфекционных болезней пчел к существующим лекарственным средствам.
Исходя из анализа вышеизложенных литературных данных по использованию лекарственных препаратов для борьбы с гнильцовыми болезнями пчел, следует отметить, что в пчеловодстве не используются антибактериальные химиотерапевтические средства на основе фторированных хинолонов. В современном арсенале синтетических бактерицидов нового поколения важное место принадлежит высокоэффективным препаратам хинолонового ряда, обладающих значительно более широким спектром активности (Смирнов A.M., 1998; Туктаров В.Р., 2000).
Механизм действия хинолонов принципиально отличается от механизмов действия используемых в настоящее время групп антибактериальных препаратов - пенициллинов, тетрациклинов, цефалоспоринов, аминогликози-дов, повреждающих микробную стенку или нарушающих синтез белка, что особенно важно для лечения инфекционных заболеваний, вызванных резистентными к этим препаратам штаммами.
Перспективные подходы к проблеме снижения численности клеща Varroajacobsoni Oudemans(1904) в традиционном пчеловодстве
Накопленный опыт борьбы с варроатозом показывает, что успешно вести борьбу с этим опасным заболеванием можно лишь при осуществлении системы мероприятий, включающей в себя организационно-хозяйственные, охранно-карантинные, лечебные и ветеринарно-санитарные мероприятия (Смирнов A.M., Карпов В.Н., 1988). В настоящее время для борьбы с варроатозом пчел разработаны и используются различные средства и методы, включая химические, биологические, физические, генетические или их сочетания (Гробов О.Ф. с соавт., 1981).
Исследователи единодушны во мнении, что решить проблему варроа-тоза одним каким-либо способом практически невозможно (Смирнов A.M., 1977; Bretschko J., 1986; Ritter W., 1988 и др.).
По литературным данным российских и зарубежных исследователей, вследствие особой остроты ситуации при варроатозе наиболее радикальной мерой борьбы с клещами является применение химиотерапевтических средств, так как биологические методы не дают 100%-ной эффективности. Изыскание лечебных препаратов для борьбы с клещами варроа - сложная задача, для решения которой необходимо учитывать целый ряд особенностей экологии этого паразита. Применяемые в настоящее время акарицидные средства не действуют на генеративную часть популяции клеща, расположенную под защитой восковых крышечек в ячейках запечатанного расплода, действуя, главным образом, только на самок клеща варроа, находящихся на пчелах (Ланге А.Б. и др., 1976; Столбов Н.М., 1978; Таций В.М., 1982 и др.).
Другие трудности борьбы с клещом связаны с устойчивостью паразита к широко применяемым в данное время акарицидам, а также с опасностью попадания остатков таких средств в мед.
За последние годы отечественной и зарубежной наукой и практикой накоплен определенный опыт в области профилактики и терапии варроатоза пчел, испытано более двухсот пятидесяти препаратов химического и биологического происхождения.
Новым этапом в борьбе с клещами варроа является применение пирет-роидных инсектицидов, обладающих акарицидными свойствами.
Пиретроиды - синтетические аналоги пиретроидов - природных инсектицидов, содержащихся в цветках ромашки рода пиретрум. Синтетические пиретроиды (перметрин, циперметрин, аллетрин, биоаллетрин, ресметрин, фенвалерат), используемые в качестве инсектицидов и инсектоакарицидов, для борьбы с различными эктопаразитами животных, находят все более широкое применение в сельском хозяйстве. С недавнего времени их стали применять в пчеловодстве, в частности для борьбы с варроатозом пчел.
Препараты на их основе отличаются простотой в употреблении , не требуют многократных обработок, обладают высокой акарицидной активностью.
По общему признанию, одним из наиболее эффективных средств борьбы с данным заболеванием является флувалинат. Флувалинат относится к группе цианопиретроидных инсектицидов и содержит в качестве активного вещества производное аминокислоты валин. Препараты на основе флувалина-та обладают сильным инсектицидным и акарицидным действием. Известно несколько препаративных форм флувалината. Фирма «Сандоз» (Швейцария) выпускает этот инсектицид под названиями: клартан - концентрированная во 24 дорастворимая стойкая суспензия; маврик - эмульсионный водорастворимый концентрат; маврик В - состав флувалината для обработки свеклы.
Практически во всех сообщениях о флувалинате отмечается его низкая токсичность для пчел. Токсичность этих препаратов для пчел исследовал F.Jeanne (1986) различными методами в лабораторных и полевых условиях. Им было установлено, что сравниваемый перметрин был значительно токсичнее препаратов флувалината. Первый убивал 90% пчел при концентрации 100 млн"1., а при обработке пчел вторым, даже при концентрации, достигающей 100000 млн"1., пчелы сохраняли способность к полету. Японские исследователи установили, что ЛД50 флувалината составляет 1,22 мкг/особь. При этом отмечалось, что токсичность флувалината увеличивалась при снижении температуры. Так, при температуре 20С флувалинат был в 4 раза токсичнее для пчел, чем при 32С (Nijima К., Osawa К., Yashida Т., 1985).
Barnovon М. (1985) при проведении испытаний контактной и кишечной токсичности для пчел инсектицида флувалинат и двух препаратов на его основе - клартана и маврика, установил ЛД5о для пчел, равную 18,4 мкг/особь, что позволило автору отнести флувалинат к нетоксичным для пчел соединениям. Так, среди тридцати испытанных пиретроидов с различной степенью токсичности для пчел, флувалинат оказался наименее (в среднем 25 раз) токсичным, а остаточная токсичность соединения практически отсутствовала.
Полученные многими авторами данные подтверждают безопасность флувалината и его препаративных форм клартана и маврика для медоносных пчел. Кроме того, флувалинат, в отличие от некоторых пиретроидов, не обладает репеллентным действием на пчел-сборщиц.
В официальных сообщениях института пчеловодства, проводившего исследования по борьбе с варроатозом (Франция) и Краснополянского матко-выводного пчелоразведенческого хозяйства (Мельник В.Н., 1983), приводятся данные об испытании клартана в качестве акарицидного препарата.
Lubinevski Y. е.а. (1984) сообщил о борьбе с клещами варроа путем обработки препаратом маврик в условиях субтропического и тропического кли 25 мата. При применении 20%-ной водной эмульсии (240 г д.в.) отмечает снижение популяции клещей варроа со 125 до 5 особей при увеличении в контроле с 200 до 500 особей. При этом не обнаружено влияния препарата на расплод, пчел и яйцекладку пчелиных маток.
Низкая токсичность и ярковыраженный акарицидный эффект позволили применять флувалинат для борьбы с варроатозом пчел. Наибольшую популярность приобрела разработанная и предложенная фирмой «Сандоз» препаративная форма, которая получила торговое название Апистан. Одна полоска апистана содержит 800 мг флувалината.
Применение апистана было разрешено во многих странах Западной Европы: Австрия, Польша, Германия, Швейцария, Испания, Франция, Греция, Нидерланды (Ritter W., 1988). С 1990 года он применяется и в нашей стране (Клочко Р.Т., Луганский С.Н., Шатрова Т.С., 1990).
Данные о применении апистана в борьбе с варроатозом пчел свидетельствуют о высокой (99-100%) эффективности, отсутствии отрицательного влияния на развитие пчелосемей, простоте и доступности в применении, о практическом отсутствии остаточных количеств акарицида в продуктах пчеловодства (Borneck R., Merle В., 1989; Jouffrou С.Е., 1989; Herbert E.W. et al., 1988; Клочко P.T. и др., 1990).
Определение токсичности пефлоксацина для теплокровных животных
В ходе экспедиционного анализа пасек ряда районов Республики Башкортостан нами изучена истинная эпизоотическая ситуация по болезням пчел.
Наиболее часто встречающимися заболеваниями в РБ являются варроатоз и европейский гнилец. Массовое распространение клеща варроа по всей республике с высокой экстенспораженностью семей пчел привело к тому, что варроатоз принял характер панзоотии, удельный вес заболеваемости достиг 99,5%. Заболевание охватило все хозяйства, где имеются пчелы; повысилась заболеваемость пчел другими болезнями, особенно гнильцовыми; пчеловодству наносится огромный экономический ущерб.
Европейский гнилец в республике встречается повсеместно, наибольшее распротранение имеет на пасеках экономически неблагополучных районов. При смешанном течении варроатоза и европейского гнильца в пчелиной семье взаимодействуют биологические патогены: клещ Varroa jacobsoni и несколько возбудителей Bac.alvei, Bac.orpheus, Str.pluton, Str.apis. Нами выявлено паразитирование клеща в условиях неблагоприятной экологической обстановки приводит к резкому ослаблению жизненных функций пчелиной семьи, в ней становится меньше полноценных особей, способных своевременно очистить ячейки сотов от гнилостной массы погибших личинок. Постепенно патологический процесс в течение летнего сезона распространяется внутри гнезда и по всей пасеке, охватывая основную часть рас-плодных ячеек. Семьи пчел слабеют, так как старые пчелы постепенно отмирают, а пополнение их молодыми особями весьма незначительное. Даже при наличии в природе хороших медосборных условий практически не участвуют в приносе нектара и пыльцы. Без помощи человека пасека, одновременно пораженная варроатозом и европейским гнильцом, погибает. Среди многих сложных инстинктов пчелиной семьи наиболее сильно проявляются инстинкты, обеспечивающие поддержание оптимального микроклимата в гнезде, поиск, сбор и переработку нектара, совместное выращивание расплода, строительство сотов, роение, защиту гнезда и т.д.
Наши наблюдения по исследованию значения чистки ячеек, как защитного механизма от клещей варроа показали, что медоносные пчелы и все другие популяции медоносных пчел не имеют поведенческих приспособлений и предотвращению паразитирования клещей варроа. Это, по нашему мнению, вероятно, объясняется непродолжительностыо отношения хозяин-паразит, и ввиду специфической видовой разницы они не могут так сильно воздействовать своими мандибулами, как индийская пчела.
В целях решения проблем лечения и профилактики семей пчел, больных бактериальными болезнями и варроатозом пчел, была поставлена задача: разработать высокоэффективные препараты на основе химиотерапевтических средств нового поколения и отечественного производства.
Для решения вопросов лечения и профилактики семей пчел, больных бактериальными болезнями пчел была поставлена задача - разработать высокоэффективный препарат против бактериальных инфекций пчел на основе новых антимикробных средств хинолонового ряда.
В современном арсенале антибактериальных химиотерапевтических препаратов важное место принадлежит препаратам хинолонового ряда. Открытая в 1962 году налидиксивая кислота и ее аналоги (оксолиниевая, пиро-мидиевая, пипемидиевая кислоты и циноксацин) нашли широкое применение при лечении заболеваний, вызванных грамотрицательными патогенами. Однако эти соединения проявляли слабую активность в отношении псевдомонад, грамположительных штаммов, бактерий и анаэробов и при лечении системных инфекций. Указанных недостатков лишены фторированные аналоги на-лидиксовой кислоты, первый представитель которых норфлоксацин положил начало многочисленной группе высокоэффективных антибактериальных агентов- «фторхинолонов».
За рубежом, в ветеринарии и медицине, в основном применяются препараты на основе следующих клинически наиболее важных фторхинолонов: норфлоксацин, пефлоксацин, ирлоксацин эноксацин, ломефлоксацин, флерок-сацин, ципрофлоксацин, энрофлоксацин, дифлоксацин, темафлоксацин, то-зуфлоксацин, офлоксацин.
Механизм действия хинолонов показывает, что они проникают через клеточные мембраны и влияют на процессы размножения бактерий путем ин-гибирования бактериальной топоизомеразы II (ДНК-геразы) - фермента, отвечающего за разрыв и восстановление двойной спирали ДНК. Согласно принятым представлениям, в молекуле фторхинолонов можно выделить несколько доменов, ответственных за связывания с ДНК-гиразей, а также за проникновение в клетку. Молекулы хинолона связываются с ДНК, образуя сложный комплекс, в котором участвуют четыре молекулы хинолона, двойная спираль ДНК и ДНК-гираза. Образование такого комплекса препятствует восстановлению двойной спирали ДНК. Этот механизм принципиально отличается от механизмов действия других групп антибактериальных препаратов - пеницил-линов, цефалоспоринов, аминогликозидов, что особенно важно для лечения инфекционных заболеваний, вызванных резистентными к этим препаратам штаммами.
Нами в целях использования активнодействующим веществом исследован пефлоксацин, который является производным 6-фтор-4-оксохинолин-3-карбоновой кислоты. Относится к III поколению фторхинолонов и обладает широким спектром антибактериального действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, в том числе E.coli, haemophilius, pasteurella, pseudomonas, stafilococcus, streptococcus, actinobacilus, Clostridium, а также микоплазм.
Пефлоксацин впервые получен в 1985 году совместными работами японского и французского исследовательских центров. Пефлоксацин зарегистрирован в Российской Федерации. Клинические испытания в медицине проходили препараты «Пефлацин» фирмы «Роже Беллон» (Франция) и препарат «Абактал» фирмы «Лек» (Югославия).
В России промышленная технология получения фторированных производных хинолонкарбоновых кислот не разработана, хотя потребность в них велика. Страна вынуждена тратить сегодня значительные валютные средства на их закупку за рубежом. В этой связи остро стоит вопрос о разработке препаратов на основе фторхинолонов для ветеринарной химиотерапии, в частности, лечения и профилактики инфекционных болезней в пчеловодстве. Нами использован пефлоксацин, синтезированный по разработанной отечественной технологии на основе орто-дифторбензола (Патент РФ. №1766921, от 21.04.1993 г.).
Пасечные испытания терапевтической эффективности препарата вапамит при варроатозе пчел
Следующим этапом исследований было создание композиций препарата на основе пефлоксацина. Поиск химических веществ, обладающих специфической активностью в отношении возбудителей гнильцовых болезней пчел, привел к разработке рецептуры препарата апифлоцид - Технические условия на изготовление препарата апифлоцид ТУ 9310-032-00008064-98, одобрено Ветфармбиосоветом РФ, протокол № 3 от 18.06.98 года.
Апифлоцид является препаратом широкого спектра действия, на основе новых антимикробных средств хинолонового ряда, с высокой активностью в отношении возбудителей бактериальных инфекций пчел. В состав препарата входят: пефлоксацин, аскорбиновая кислота, глюкоза кристаллическая.
На основании поиска химических веществ, обладающих специфической активностью в отношении возбудителей европейского гнильца, нами разработана рецептура препарата апифлоцид. Апифлоцид является препаратом широкого спектра действия на основе новых антибактериальных средств фторхинолонов.
Учитывая тот факт, что препарат для лечения бактериальных болезней пчел применяется в летний (активный) и в период зимовки (покоя), нами отработаны различные дозировки и способы их введения в гнездо пчел.
В целях решения вопроса о возможности использования апифлоцида в пчеловодстве нами проведено изучение его антибактериальной терапевтической эффективности в отношении возбудителей бактериозов пчел в лабораторных и производственных условиях.
Одним из основных элементов рационального применения антибиотиков и других антибактериальных препаратов в ветеринарии и в частности в пчеловодстве при инфекционных болезнях является определение чувствительности возбудителя болезни пчел к этим препаратам Это необходимо для того, чтобы избрать наиболее эффективный препарат из числа рекомендованных при данном заболевании и изучении новых бактерицидов, прогнозировать результативность антибиотикотерапии, а также для своевременной замены длительно применяемого в пчеловодстве антибиотика другим, если установлена резистентность к нему патогенных микроорганизмов - возбудителей бактериальных болезней пчел.
Разработка новых препаратов, несмотря на наличие разнообразных антибактериальных средств, остается весьма актуальной задачей, ввиду постоянно возрастающей устойчивости возбудителей инфекционных заболеваний пчел к существующим лекарственным средствам.
Чувствительность микроорганизмов к антибактериальным средствам в лабораторных условиях, дает основание использовать их для лечения инфекционных болезней в условиях пасеки. Чувствительность микроорганизмов пчел Вас. alvei, Str. pluton, Str. apis, Вас. orpheus, Вас. paraalvei, Ent. haf. var. alvei к препарату апифлоцид определяли минимальной концентрацией бактерицида (МІЖ), которая задерживает их рост. Для этой цели использовали два наиболее распространенных и рекомендованных метода: метод последовательных серийных разведений на жидкой среде и метод диффузии в агар с применением дисков («Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных», утв. ГУВ, 1971).
С целью изучения минимальной бактерицидной концентрации приготовили в стерильных пробирках жидкие питательные среды (МПБ) рабочих растворов бактерицидов методом последовательных серийных разведений. Так как чувствительность культур, взятых для определения, находится в пределах 0,001-0,01 мкг/мл, для получения необходимой концентрации бактерицида в начале в пробирках готовили стерильный рабочий раствор с активностью 10 мкг/мл. В пробирки, содержащие по 9 мл, питательные среды переносили из первой пробирки во вторую, из второй в третью и так до последней, по 1 мл среды с бактерицидом. Таким образом, была получена питательная среда с концентрацией 1,0; 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001; 0,00001 мкг/мл. После этого наносили суспензию микробных клеток, учитывая примерное количество по стандарту мутности. Учет результатов бактерицидного действия препаратов (фторхинолонов) вели ежедневно. Для дальнейших исследований брали концентрации, которые задерживали рост возбудителей бактериальных болезней in vitro, в течение 48-72 часов.
Результаты наших исследований показывают, что отсутствие роста наблюдается в пробирках содержащих до 0,0 1 мкг/мл апифлоцида. Так, в пробирке с содержанием бактерицида 0,01 мкг/мл нет роста, а в следующей, где концентрация препарата 0,001 мкг/мл установлен рост культур. Следовательно, значение минимальной подавляющей концентрации для микроорганизмов возбудителей болезней пчел Вас. alvei, Str. pluton, Str. apis, Вас. orpheus, Вас. paraalvei, Ent. haf. var. alvei препарата апифлоцид будет соответствовать 0,0055 мкг/мл. В дальнейших исследованиях будем использовать концентрацию препарата, округляя в большую сторону, равную 0,01 мкг/мл.
Для возбудителя европейского гнильца - Str. pluton, минимальная бактерицидная концентрация соответствует 0,05 мкг/мл. Это указывает, что испытуемый микроорганизм более устойчив, к взятым концентрациям препарата.
При изучении бактерицидных свойств препаратов методом диффузии в агар, используя метод последовательных серийных разведений в пробирках, готовили маточный раствор препаратов и вносили их в расплавленную питательную среду перед застыванием при температуре не выше 40-45С, тщательно перемешивали вращательным движением и оставили остывать. После этого наносили суспензию микробных клеток на поверхность застывшего МПА.
Наблюдения за результатами опытов проводили в течение 10 дней, учитывая при этом концентрацию препарата (мкг/мл), ингибирующую рост возбудителей гнильцовых болезней пчел на питательной среде.
