Введение к работе
Актуальность темы. За последние два десятилетия в промышленном птицеводстве приобрели актуальность проблемы, связанные со снижением колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника и факторов естественной резистентности, ответственных за поддержание физиологического статуса организма птицы. Широкое применение антибиотиков, несбалансированное кормление и технологический стресс обуславливают нарушение сложившегося микробного равновесия и провоцируют развитие дисбактериоза кишечника (Выдрин А.Н., 1998; Бовкун Г.Ф., 2003; Берсенева А.Б., Чупахина Е.В., 2004; Деблик А.Г., 2005; Field M., 1979; Roberfroid M.B., 2000).
Степень разработанности. Одним из перспективных направлений в решении проблемы лечения и профилактики желудочно-кишечных инфекций, коррекции микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и повышения сохранности молодняка сельскохозяйственных животных и птицы является применение энтеросорбентов и кормовых добавок, использование которых повышает уровень колонизационной резистентности слизистой оболочки кишечника за счет стимуляции размножения молочнокислых бактерий и бифидобактерий (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000; Субботин В.В., Сидоров М.А., 2000; Митрохин С.Д., 2004; Субботин В.В., 2009; Панин А.Н., Малик Н.И., 2009, 2011; Плешакова В.И., Шмидт Г.О., 2012; Panda A.K., Morkunas M., 2001).
Во всем мире, в том числе и России, проводится активная разработка и внедрение безопасных эффективных энтеросорбентов и пробиотических препаратов, как альтернативы антибиотикам (А.М. Степанова, 2011). Роль энтеросорбентов сводится к детоксикации организма и способности сорбировать в кишечнике токсические вещества, продукты жизнедеятельности микробов и выведению их из организма, при этом сами сорбенты не содержат компоненты, которые бы всасывались в кишечнике и метаболизировались. Природные растительные сорбенты, обладающие уникальными ионообменными и сорбционными свойствами, являются объектами современных исследований и актуальны для внедрения в ветеринарную практику (Мащенко И.С., 1983; Давыдов В.И., Белякова Н.А., 1991; Коптев В.Ю. и др. 1998; Раицкая В.И., 2002; Гунько В.М. и др., Донкова Н.В., 2004; Веприкова Е.В., Щипко М.Л., Кузнецова С.А, Кузнецов Б.Н., 2005; Тараканов Б.В., 2005, 2007)
Основой пробиотиков служат либо микроорганизмы, представляющие нормальную микрофлору, либо нехарактерные для нормофлоры сапрофиты, способные вытеснять патогенные микроорганизмы из просвета кишечника (Сидоров М.А. с соавт., 2000; Шевелева С.А. с соавт., 2002; Павлова Н.В., Лебедева И.А., 2007; Ноздрин Г.А., Соколов В.Д., Андреева Н.Л. и др., 2009; Малик Н.И. и др. 2011, Клетикова Л.В., 2012; Kushal et al., 2000; О'Sullivan D.J., 2001; Oggioni M.R., 2003; Ouwehand A.C., 2003; Bernardeau M., 2009).
Цель исследований установить этапы формирования микробиоценоза кишечника цыплят и определить естественную резистентность птицы на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 в комплексе с пробиотиком Наринэ.
Для достижения цели были поставлены задачи:
1. изучить этиологическую структуру острых кишечных инфекций у цыплят в условиях птицеводческих хозяйств;
2. изучить биологические свойства выделенных возбудителей микроорганизмов;
3. установить структуру микробиоценоза кишечника цыплят с диарейным симптомокомплексом и лечебно-профилактическую эффективность применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ;
4. оценить морфологический состав крови, установить динамику биологических показателей естественной резистентности организма цыплят (общий белок, БАСК, ЛАСК) и определить сохранность цыплят на фоне комплексного применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и Наринэ.
Научная новизна. Изучены этиологически значимые ассоциации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, определена роль острых желудочно-кишечных инфекций в общей бактериальной патологии птиц.
Изучено формирование и становление микробиоценоза кишечника цыплят при воздействии растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.
Определен видовой состав и серологический профиль этиологически значимых условно-патогенных бактерий у птиц.
Установлена коррекция показателей естественной резистентности организма птиц на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные дополняют сведения по научному обоснованию применения растительных энтеросорбентов для профилактики и лечения острых желудочно-кишечных инфекций.
Доказана эффективность использования растительного энтеросорбента ЭБК-2 в комплексе с пробиотиком Наринэ при коррекции микробиоценоза кишечника цыплят, повышения уровня естественной резистентности организма и увеличения сохранности птицепоголовья.
Апробирована и предложена схема коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта цыплят с диарейным симптомокомплексом при использовани растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ и обосновано повышение сохранности птиц при ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях.
Разработаны научно-практические рекомендации «Пути повышения сохранности птиц при ассоциированных желудочно-кишечных инфекциях» (утв. на научно-техническом совете КрасГАУ, протокол № 1 от 11.12.2012).
Методология и методы исследований. Работа выполнена в период с 2007 по 2012 гг. на кафедре эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ИПБиВМ, лаборатории НИИЦ ФГБОУ ВПО КрасГАУ. Экспериментальные исследования по определению профилактической эффективности растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ проведены на базе птицефабрики СПХ ЗАО «Владимировское» Назаровского района Красноярского края.
При изучении эпизоотической ситуации по острым кишечным инфекциям птицепоголовья в птицеводческих хозяйствах Красноярского края проанализированы отчетные документы КГКУ «Красноярская ветеринарная лаборатория» за период с 2000 по 2011 гг., а так же результаты собственных исследований.
Объектом исследований являлись цыплята кросса «Родонит-2» различных возрастных групп с момента вывода до 30-ти сут. возраста. В экспериментах использовали цыплят, подобранных по принципу аналогов, содержащихся в равных условиях.
Для коррекции микробиоценоза кишечника цыплят, повышения продуктивных качеств и сохранности птицепоголовья в раннем постнатальном онтогенезе использовали растительный энтеросорбент ЭБК-2 (Патент RU 2389498, 2009) и пробиотик Наринэ (бактерий Lactobacillus acidophillus штамм ЕР 317/402).
При проведении экспериментальной части работы по изучению растительного энтеросорбента ЭБК-2 были сформированы три группы по 100 голов. Схема исследований представлена в таблице 1.
Таблица 1 – Схема исследований
Материалом исследований служили пробы фекалий цыплят опытных и контрольной групп, качественный состав микроорганизмов кишечника птицы определяли лабораторными методами. Количество микроорганизмов в 1 г рассчитывали путем высева 0,1 мл различных разведений исследуемого материала на чашки Петри с плотными дифференциально-диагностическими питательными средами. Материал для исследований получали в утренние часы до кормления.
Возрастную динамику становления микробиоценоза желудочно-кишечного тракта цыплят изучали на 1-, 5-, 10-, 15-, 20-, 25-, 30-е сут., используя методические указания «Выделение и идентификация условно-патогенных энтеробактерий и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных» (Блохина И. Н., Воронин Е. С. и др. - 1991); «Диагностика колибактериоза животных и птицы» (1991), «Диагностика смешанной кишечной инфекции», (1991) с использованием коммерческих сред и тест-систем СИБ производства ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, по методическим указаниям, разработанным Л.С.Коврук с соавторами «Ускоренная индикация морганелл, сальмонелл и энтеропатогенных эшерихий с адгезивными антигенами в патологическом материале, кормах, объектах внешней среды в реакции коагглютинации» (2001).
Для изучения действия растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ на физиологические показатели роста и развития цыплят в динамике, проводили взвешивание, определяли среднесуточный прирост и скорость роста (Броди, 1945).
Для исследования морфологических и биохимических показателей кровь получали при диагностическом убое цыплят опытных и контрольной групп. Все манипуляции с птицей производили согласно Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или иных научных целей (2003)
Морфологические исследования крови включали определение количества эритроцитов (1х1012/л) и лейкоцитов (1х109/л) с использованием камеры Горяева гемоглобин определяли по методу Сали, общий белок крови рефрактометрическим методом по Филипповичу Ю.В. (1975).
Иммунологические исследования включали определение лизоцимной активности сыворотки крови (Дорофейчук А.Г., 1968). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по Смирновой О. В. и Кузьминой А. Т. (1966) в модификации Максимюк Н. Н., Телешевской Л. Я. (1995).
Статистическую обработку результатов, полученных в ходе экспериментов и наблюдений, проводили при помощи компьютерной программы Microsoft Excel 2003 и пакета программ Statistica.
Выражаем большую благодарность сотрудникам КГКУ «Красноярская ветеринарная лаборатория» за любезно предоставленные архивные документы, за консультативную помощь в проведении исследований сотрудникам кафедры эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы и НИИЦ КрасГАУ.
Основные положения, выносимые на защиту:
этиологическая структура острых кишечных инфекций у цыплят в условиях птицеводческих хозяйств Красноярского края;
коррекция микробиоценоза кишечника цыплят с диарейным симптомкомплексом при использовани растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ
показатели морфологического состава крови, динамика иммунологических показателей естественной резистентности организма и сохранность цыплят на фоне применения растительного энтеросорбента ЭБК-2 и пробиотика Наринэ.
Степень достоверности и апробация полученных результатов. Данные проведенных исследований являются частью комплексных исследований в рамках программы фундаментальных и приоритетных направлений НИР кафедры эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертиза ИПБиВМ ФГБОУ ВПО КрасГАУ: «Оценка лечебно-профилактической эффективности препаратов при массовых болезнях продуктивных животных и птиц», что предусматривает изыскание и испытание эффективных экологически безопасных препаратов для лечения и профилактики массовых инфекционных болезней животных и птиц.
Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедр: эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы; физиологии и зоогигиены животных; разведения, генетики и биотехнологии с.-х. животных ИПБиВМ ФГБОУ ВПО КрасГАУ; морфологии и физиологии животных ФГБОУ ВПО ХГУ им. Н.Ф. Катанова; ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО им. П.А. Столыпина.
Результаты исследований внедрены в практическую работу ветеринарной службы СПХ ЗАО птицефабрики «Владимировская» Назаровского района Красноярского края.
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научных конференциях: Всероссийской очно-заочной научно-практической и методической конференции с Международным участием «Инновации в научно практической деятельности» (Красноярск, 2010); VIII Международной научно-практической конференции «Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки, посвященной 75-летию со дня рождения ученого-микробиолога и агроэколога А.Т. Фарниева. (Владикавказ, 2012), III Всероссийской научно-практической конференции с Международным участием «Современные тенденции развития агропромышленного комплекса Сибири» (Абакан, 2012); 10-ой Международной телеконференции: Актуальные проблемы современной науки (Томск, 2013); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы научной и практической ветеринарной медицины: посвященные памяти заслуженного деятеля науки РФ, доктора ветеринарых наук, профессора Сивкова Геннадия Сергеевича» (Тюмень, 2013).
Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе три в изданиях, регламентированных ВАК Министерства образования и науки РФ, научно-практические рекомендации - 1.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 26 рисунками и 12 таблицами. Список использованной литературы включает 226 наименований, в том числе 53 иностранных авторов.
