Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 9
1.1 Краткая характеристика бруцелл и их изменчивость 9
1.2 Иммунитет и иммуномодулирующие препараты при бруцеллезе 16
1.3 Специфическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных 27
2 Собственные исследования 36
2.1 Материалы и методы исследований 36
2.2 Результаты собственных исследований 46
2.2.1 Иммуногенная активность культур различных штаммов
В.abortus на СПФ и конвенциональных морских свинках 46
2.2.2 Морфологические и культурально-биохимические свойства культур различных штаммов В.abortus до и после пассажирования через организм морских свинок 56
2.2.3 Сравнительные показатели иммунологической эффективности культур штаммов В.abortus 82, 19, 82-ПЧ, 82-RTr и R-1096 после пассажирования через организм морских свинок и при сочетанном введении с различными иммуномодуляторами 71
2.2.4 Изыскание наиболее эффективной схемы применения иммуномодуляторов при иммунизации морских свинок вакциной из штамма В.abortus 82-RTr 78
Выводы 90
Практические предложения 92
Список литературы 93
Приложение 121
- Иммунитет и иммуномодулирующие препараты при бруцеллезе
- Специфическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных
- Результаты собственных исследований
- Изыскание наиболее эффективной схемы применения иммуномодуляторов при иммунизации морских свинок вакциной из штамма В.abortus 82-RTr
Введение к работе
1.1 Актуальность темы. Благодаря научно-обоснованной системе специальных мероприятий, бруцеллёз животных в настоящее время ликвидирован в большинстве регионов Российской Федерации. Однако отдельные регионы, районы, хозяйства остаются неблагополучными по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота по настоящее время, а также появляются новые неблагополучные пункты.
Опыт борьбы с бруцеллезом крупного и мелкого рогатого скота в СССР и РФ доказывает большую роль в оздоровлении хозяйств от этой инфекции специфической профилактики с помощью вакцин из штаммов В.abortus 19 и B.melitensis Rev 1 (И.А.Косилов и др., 1999). Однако привитые ими животные длительное время сохраняют поствакцинальные показатели серологических реакций, что создает большие трудности при диагностике бруцеллеза и оздоровлении стад от этой инфекции. Поэтому исследователи пошли по пути изыскания таких вакцинных штаммов бруцелл, которые бы обладали слабо- или инагглютиногенными свойствами. Так, в РФ по настоящее время в качестве официального препарата против бруцеллеза крупного рогатого скота в основном применяется живая вакцина из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82 (К.М. Салмаков и др., 2008).
В США, наряду с вакциной из штамма 19, для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и диких животных (бизоны, олени и др.) используют живую вакцину из штамма В.abortus RB51 (S. Olsen and Ph. Mamer, 2006).
Совершенствование противобруцеллезных вакцин продолжается и в настоящее время. Так, в ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) был отобран вариант штамма 82, чувствительный к пенициллину, - штамм В.abortus 82-ПЧ (К.М. Салмаков, Г.А. Белозерова, 1994 г.); путём воздействия специфического бактериофага на культуру исходного вирулентного штамма получен штамм B.abortus R-1096 (Г.М. Сафина и др., 2004). Живые вакцины из штаммов 82-ПЧ и R-1096 испытываются в производственных условиях на крупном рогатом скоте (А.В.Иванов и др., 2006).
За последние годы получен ряд штаммов В.abortus, устойчивых к различным антибиотикам - стрептомицину, рифампицину, тетрациклину и др. Эти штаммы находятся в RS-форме, слабоагглютиногенны и обладают иммуногенными свойствами (А.М.Фомин и др., 2006).
Анализ исследований показывает, что культуры, находящиеся в S- и SR-формах, обладают более выраженными иммуногенными свойствами, чем культуры в RS- и R-формах. Однако штаммы бруцелл в RS- и R-формах и резистентные к различным антибиотикам, обладая слабо- и инагглютиногенными свойствами, также имеют большое практическое значение.
Одним из способов повышения эффективности вакцин является использование иммуномодуляторов - веществ, повышающих специфические иммунные ответы на вводимые антигены. В последние годы многие исследователи уделяют большое внимание разработке новых иммуномодуляторов, способных усиливать как гуморальный, так и клеточный иммунитет с минимальными побочными эффектами или их отсутствием. Также оценивается возможность использования цитокинов в качестве адъювантов вакцин (А.А. Денисов и др., 2008).
1.2 Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучить в сравнительном аспекте иммунобиологические свойства вакцин из различных штаммов В.abortus и влияние на эти свойства иммуномодуляторов, отобрать из них наиболее эффективные для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
-
Определить иммуногенную активность культур различных штаммов В.abortus на СПФ- и конвенциональных морских свинках;
-
Изучить морфологические и культурально-биохимические свойства ряда штаммов В.abortus до и после их пассажирования через организм морских свинок;
-
Установить влияние пассажей и иммуномодуляторов на повышение иммунологической эффективности штаммов В. abortus, особенно находящихся в RS- и R- формах.
-
Изыскать более эффективную схему применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации морских свинок живыми вакцинами из диссоциированных штаммов B.abortus.
1.3 Научная новизна работы. Впервые в сравнительном аспекте изучены
иммунобиологические свойства российских и американских вакцинных штаммов
В.abortus. При этом установлена наиболее высокая иммунологическая активность
штаммов В.abortus 19 (США) и 82 (Россия), находящихся соответственно в S- и
SR- форме. Более низкая иммуногенность отмечена у штаммов в RS-форме (82-
RTr и 82-ПЧ) и R- форме (75/79-АВ, RB51 и R-1096).
Показано преимущество живой вакцины из штамма В.abortus 82 перед вакциной из штамма 19.
Установлено, что иммуномодуляторы полиоксидоний, фактор некроза опухолей - Р, ларифан и тиосульфат натрия повышают иммуногенную активность культур вакцинных штаммов бруцелл, особенно при применении культур, находящихся в RS-форме.
Установлена более выраженная иммунологическая эффективность живой вакцины из штамма B.abortus 82-RTr при двукратном применении иммуномодулятора полиоксидония (при одновременном введении с вакциной и затем повторно через 1 месяц) и отдаленном однократном (только через месяц после вакцинации) применении тиосульфата натрия.
1.4 Практическая значимость работы. Живые вакцины из штаммов
B.abortus 82-RTr (рифампицин-тетрациклин-резистентный) и 82-ПЧ (пенициллин-
чувствительный) в сочетании с иммуномодуляторами - полиоксидонием,
фактором некроза опухолей-Р (ФНО-Р), ларифаном и тиосульфатом натрия -
рекомендуются для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого
скота и других видов животных разного возраста.
Вакцина из штамма 82-ПЧ не обладает абортогенными свойствами, что позволяет иммунизировать ею также маточное поголовье животных в любой стадии беременности. Вакцина из штамма 82-RTr может быть применена отдельно и сочетано с антибиотиками рифампицином и тетрациклином при экстренной защите животных при угрозе заражения в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах.
1.5 Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на
научных сессиях Ученого совета ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» в виде ежегодных
отчетов о НИР (2006-2009 гг.); на 6-ой региональной научно-практической
конференции, посвященной 85-летию СИБНИВИ-ВНИИБТЖ, «Естественная и специфическая резистентность населения и животных в условиях Сибири» (Омск, 2007); научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (Казань, 2007, 2008); на Международном Рабочем Совещании «Бруцеллез - пограничная инфекция животных и человека, требующая общих усилий разных стран»» (Серпухов, Московская область, 2008).
1.6 Публикации результатов исследований. По теме диссертационной
работы опубликовано 11 научных работ, в том числе 4 - в изданиях,
рекомендованных ВАК РФ.
1.7 Основные положения, выносимые на защиту:
-Результаты сравнительного изучения иммунологической активности культур различных штаммов В.abortus на СПФ и конвенциональных морских свинках;
-Морфологические и культурально-биохимические свойства вакцинных штаммов B.abortus до и после их пассажирования через организм морских свинок;
Влияние пассажей и иммуномодуляторов на повышение иммунологической эффективности культур различных штаммов B.abortus, особенно находящихся в RS- и R- формах;
Изыскание более эффективной схемы применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации морских свинок живыми вакцинами из диссоциированных штаммов B.abortus.
1.8 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121
странице компьютерного текста и включает введение, обзор литературы,
собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические пред
ложения, список использованной литературы и приложения.
Работа иллюстрирована 26 таблицами. Список литературы включает 210 источников, в том числе 45 иностранных. В приложении представлены документы, подтверждающие результаты основных этапов работы.
Иммунитет и иммуномодулирующие препараты при бруцеллезе
Продолжительное время среди ученых господствовало мнение о наличии при бруцеллезе лишь инфекционного, нестерильного иммунитета (Sergent and Parrot, 1935). Эта научная гипотеза была опровергнута работами многих исследователей, сделавшими вывод о самопроизвольном затухании бруцеллеза, несмотря на тенденцию к длительному его течению. Такое заключение подтверждалось результатами исследований на бруцеллез коз, овец (Е.С. Орлов, 1942; И.Р. Замурий,1949), крупного рогатого скота (А.А. Аливердиев, 1946), свиней (Д.К. Бессонов, 1941) и мелких лабораторных животных (Ю.А. Базилевич, 1955). Самоизлечение от бруцеллеза наблюдали и у людей (Е.М. Пилецкая и М.Л. Федер, 1954).
Установление возможности самовыздоровления при бруцеллезе имело решающее значение для создания новых представлений о характере иммунитета при этой инфекции. В работах П.Ф. Здродовского (1969), П.А. Вершил овой и др.(1974), М.И. Чернышевой (1958) и др. указывается, что в начальной стадии заселения организма бруцеллами вакцинного штамма формируется инфекционный, нестерильный иммунитет. Усиливаясь, этот иммунитет освобождает организм от бруцелл, с этого момента наступает постинфекционный или стерильный иммунитет.
При анализе материалов по изучению иммуногенеза у морских свинок, привитых живыми вакцинами, было сделано заключение о формировании прививочного иммунитета в два этапа (П.А. Вершилова и др., 1974). На первом этапе вследствие недостаточной фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов происходит интенсивное размножение бруцелл вакцинного штамма. Через 1-5 суток после вакцинации эти клетки начинают проявлять фагоцитарную активность. Фаза размножения тем продолжительнее, чем больше и выше остаточная вирулентность вакцинной культуры. Первая фаза формирования иммунитета завершается к 10 - 15-му дню. На втором этапе в организме происходят морфологические изменения в органах и тканях: выраженная гиперплазия ретикулярных клеток и появление очаговых эпителиоидных пролифератов. Степень выраженности и напряженности иммунитета прямо пропорциональна продолжительности фазы размножения бруцелл в клетках и морфологическим изменениям в организме. Но большие дозы вакцинных штаммов могут вызывать глубокие деструктивные некротические изменения в лимфатических узлах и органах и оказывать тем самым отрицательное влияние на проявление защитной функции ретикулоэндотелия. Напряженность иммунитета зависит от дозы вакцины и остаточной вирулентности вакцинного штамма (A. Olitzki and D. Sulitzeanu, 1954; S.S.Elberg, 1973).
Стимуляция клеток организма, осуществляющих фагоцитоз, происходит не только под влиянием живых бруцелл, но и в присутствии «растворенного» антигена, который может сохраниться в клетках организма (Н.И. Татишвили,1969; П.А. Вершилова и др., 1970; Janney and D.T. Berman, 1962).
При попадании в иммунный организм бруцелл вирулентных штаммов происходит ранняя резко выраженная защитная реакция, выражающаяся в их фагоцитозе нейтрофилами, гистиоцитами, макрофагами, фибробластами внутренних органов и лимфатических узлов. Фагоцитарный процесс завершается внутриклеточном лизисом бруцелл на протяжении 2-3 суток после заражения. Этот механизм защиты осуществляется в инфекционной и постинфекционной фазах иммунитета. Очищение иммунного организма от бруцелл происходит при любом введении их в организм — подкожном, внутрикожном, интраназальном, внутритрахеальном (М.И. Чернышева, 1958; В.П. Тульчинская и др., 1960; S.S. Elberg, 1973). Нейтрофилы в процессе фагоцитарной деятельности погибают, а макрофаги остаются неповрежденными. В организме неиммунного животного также наблюдается фагоцитоз, но он развивается позднее и не завершается лизисом всех бруцелл (М.И.Чернышева, 1957).
По вопросу механизма иммунитета при применении живых вакцин высказываются различные суждения. Одни считают, что при бруцеллезе иммунитет складывается из 2-х компонентов: специфической и неспецифической резистентности (D. Sulitzeanu, 1965), другие объясняют это отбором в организме классов моноцитов с повышенной резистентностью (Holland and Pickett, 1958) или накоплением большого количества антигена путем медленного постепенного освобождения клеточных оболочек бруцелл (Foster and Ribi, 1962). Вершилова П.А. и др. (1972) отмечают, что первая фаза фагоцитоза определяется опсонизирующим действием гуморальных факторов организма, вторая — активностью переваривающих систем (лизосом), при отсутствии иммунных макрофагов и иммунной сыворотки отмечается слабый фагоцитоз. Наличие иммунных компонентов способствует более активному протеканию фагоцитоза.
Имеются данные, свидетельствующие о том, что иммунитет при бруцеллезе в значительной степени определяется защитными факторами ферментативного характера (Hellman, 1962). Например, в процессе взаимодействия макрофага и бруцелл в экстрактах моноцитов, полученных от здоровых и иммунных кроликов, выделяется лизоцимоподобное вещество, которое оказывает лизирующее действие на бруцеллы (D.I. Ralston and S.S. Elberg, 1971).
У иммунизированных живой вакциной животных повышаются опсонизирующие и превентивные свойства крови, особенно к 30-му дню после вакцинации. Эти свойства сыворотки не коррелируют с колебанием плазматической реакции (М.И. Чернышева, 1957; B.C. Степин и Ю.Ф. Граме, 1972).
Специфическая профилактика бруцеллеза крупного рогатого скота и других видов животных
Установлением факта самоизлечения при бруцеллезе была обоснована принципиальная возможность создания не только иммунитета к этой инфекции, но и различных вакцин. При изыскании убитых (химических) вакцин встретились с большой трудностью, поскольку эти вакцины вызывали иммунитет слабой напряженности и небольшой продолжительности (Ф.П. Локтева, 1946; П.А. Вершилова, 1947; П.Н. Жованик, 1950 и др.). В нашей стране и за рубежом продолжаются работы по изысканию убитых (химических) вакцин (А.А. Сумароков и др., 1984; Т.Г. Попова и др., 2005). При этом большое внимание уделяется изучению клеточных стенок и других антигенных фракций бруцелл (П.А. Вершилова и др., 1971; Е.А. Драновская и др., 1972; Smith et al, 1962; Marcenson et al, 1962; Chen and S.S.Elberg, 1969).
Однако многочисленные исследования свидетельствуют, что наиболее эффективными для предупреждения заболевания бруцеллезом являются живые вакцины. Первые опыты по активной профилактике этой инфекции поставил Bang (1911). В его время господствовало мнение о существовании при бруцеллезе лишь нестерильного иммунитета, поэтому прививку вакцины крупному рогатому скоту ученый проводил лишь с целью предотвращения и сокращения абортов у животных. После работ Банга прививку вирулентными культурами бруцелл нестельных коров стали осуществлять во многих странах — в Англии, Дании, Америке и особенно Германии (В.И.Стольников , 1927). Однако предохранительные прививки живой культуры бруцелл животным давали незначительный результат. Кроме этого, у них была установлена способность выделения микробов во внешнюю среду с молоком, что создавало прямую угрозу заражения не только здорового скота, но и людей (Hart and Fraum, 1927). По этим причинам прививки животным вирулентных штаммов бруцелл в дальнейшем были прекращены.
Исследователи применяли не только штаммы бруцелл с наследственно ослабленными вирулентными свойствами, но и штаммы, у которых эти свойства снизились под влиянием различных факторов. Ослабление вирулентности культур бруцелл достигалось также путем воздействия на них антибиотиков (М.М.Иванов и Л.В.Кириллов, 1964; В.С.Уралева, 1964; Jacotot and Vallee, 1959; Е.М. Simon and D.T. Berman, 1962). Например, M. Herzberg and S.S. Elberg (1953) вначале получили стрептомицин-зависимый штамм B.melitensis, а затем из него отобрали колонии, не растущие в присутствии этого антибиотика (Л.А. Стручкова, 1989). Такой вариант штамма они обозначили Рев 1. Вакцина из этого штамма иммуногенна (Е.С.Орлов и др., 1962; П.С.Уласевич, 1975; Alton, 1969), но обладает высокой остаточной вирулентностью (М.М. Иванов и Р.В. Складчиков, 1970).
Наиболее высокие результаты, были достигнуты при испытании вакцины из штамма B.abortus 19. Культура этого штамма была выделена в 1923 году из молока коровы (Buck, 1930). В условиях хранения при комнатной температуре штамм значительно снизил вирулентные свойства. Из него был отобран иммуногенный клон (Cotton, Buck and Smith, 1936).
Объединенный комитет экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (1972) указывает, что штамм 19 стабилен, малопатогенен и иммуногенен. Однако защита, вызываемая иммунизацией вакциной из этого штамма относительна, и ревакцинация не повышает иммунитета. Вакцинация взрослого рогатого скота не рекомендуется, привитые животные обычно длительно и устойчиво сохраняют серопозитивность, а вакцинация беременных животных иногда приводит к выкидышу.
Проводя отбор из штамма 19 вариантов бруцелл с пониженной остаточной вирулентностью и обладающих иммуногенными свойствами, П.А. Вершилова (1960) получила штамм 19-ВА, из которого изготавливают вакцину против бруцеллеза для людей. Х.С. Котлярова (1950) предложила вакцинный штамм В. abortus 104-М, обладающий хорошими иммуногенными свойствами. В отличие от штамма 19, он имеет большую остаточную вирулентность (Е.С.Орлов и др., 1971).
Обладая определенными положительными качествами, многие из апробированных и исследуемых вакцинных штаммов бруцелл не были лишены отрицательных свойств. В частности, после иммунизации вакциной из штамма 19 у животных в крови появлялись и продолжительное время удерживались (особенно у коров) агглютинины и комплементсвязывающие антитела. Это обстоятельство затрудняло проведение быстрых оздоровительных мероприятий, а также создавало дополнительную проблему дифференциации больных бруцеллезом животных от здоровых в вакцинированных стадах.
Результаты собственных исследований
Результаты серологического исследования СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) морских свинок через 15 суток после иммунизации их вакцинами из штаммов В. abortus отражены в таблице 1.
Из таблицы 1 видно, что морские свинки, привитые вакциной из штамма 19, через 15 суток после иммунизации реагировали положительно в РБП, РА и РСК с R-антигеном ВНИВИ. В РСК с R-антигеном титр антител был невысоким. Морские свинки, привитые вакцинами из штаммов 82, 82-ПЧ, 75/79-АВ и RB51 показывали положительный результат только в РСК с R-антигеном. Самый высокий титр антител был у животных, привитых вакциной из штамма 82 (66,7±13,3).
Показатели серологического исследования СПФ морских свинок через 1 месяц после иммунизации их вакцинами из штаммов B.abortus отражены в таблице 2.
Данные таблицы 2 показывают, что спустя один месяц морские свинки, привитые вакциной из штамма 19, стали реагировать положительно во всех серологических реакциях, а животные, привитые другими вакцинами, реагировали положительно лишь в РСК с R-антигеном. У одних животных титры антител снизились, у других повысились, у третьих остались на прежнем уровне. Так, у морских свинок, привитых вакциной из штамма 82, титр РСК с R-антигеном снизился с 66,7±13,3 до 40,0±0,0, штаммом RB51 - снизилось с 41,7±21,7 до 33,3±6,7, у привитых штаммом 82-ГТЧ - наоборот, количество антител возросло с 10,0±5,8 до 46,7±17,7, и в группе привитых вакциной из штамма 75/79-АВ осталось неизменным (20,0±10,0). В этот срок положительно среагировала в РСК в титре 10 ME одна морская свинка, привитая вакциной из штамма 82-ГТЧ.
Из данных таблицы 3 видно, что через 2 месяца после вакцинации закономерность проявления серологических реакций осталась прежней: морские свинки, привитые вакциной из штамма 19, давали положительный результат во всех реакциях, при этом в РСК с единым бруцеллезным антигеном титр антител возрос с 26,7±6,7 до 40,0±23,0. В РСК с R-антигеном титр антител снизился во второй группе до 23,3±7,1, до сомнительных и отрицательных показателей в 3-й и 4-й группах и до 30,0±10,0 в последней группе, где количество антител было самым высоким. РБП, РА и РСК у животных, привитых вакцинами из штаммов 82, 82-ПЧ, 75/79-АВ и RB51, были отрицательными.
Данные, представленные в таблице 4, показывают, что через 3 месяца у морских свинок, привитых вакцинами из различных штаммов бруцелл, проявление серологических реакций осталось в неизменных пределах. Но титры антител стали еще ниже. Так, морские свинки, привитые вакциной из штамма 19, перестали реагировать положительно в РБП и РСК с R-антигеном, сохраняя положительные результаты в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном в невысоких титрах антител. Животные, привитые вакцинами из штаммов 82, 82-ПЧ, 75/79-АВ и RB51, реагировали отрицательно в серологических реакциях с диагностикумами из S-форм бруцелл, а в РСК с R-антигеном у некоторых животных сохранились положительные показатели. Причем в группе привитых вакциной из штамма 82 они сохранились у всех животных (средние титры 10,0±5,0), а в других группах - только у отдельных животных в титрах 1:10 и 1:5.
Из данных таблицы 5 видно, что через 4 месяца после иммунизации и перед их заражением почти во всех группах морских свинок произошло повышение титров антител. У морских свинок, привитых вакциной из штамма 19, титр антител в РА повысился с 16,7±3,3 до 53,3±13,3, в РСК с 11,7±4,4 до 66,7±13,3, стала положительной и РСК с R-антигеном. Значительно увеличилось количество антител в РСК с R-антигеном у животных, привитых вакциной из штамма 82, с 10,0±5,0 до 26,7±6,7. Неизменными остались показатели в группе животных, привитых вакциной из штамма 82-ПЧ. Стали реагировать положительно морские свинки в 2-х последних группах.
Результаты бактериологических исследований морских свинок, подвергнутых эвтаназии через 4 месяца после вакцинации, были отрицательными.
Через одни сутки после эвтаназии 3-х морских свинок от каждой группы оставшиеся животные были заражены культурой вирулентной штамма В. abortus 54-МВГНКИ.
Результаты исследований на СПФ морских свинках (таблица 6) показали, что все контрольные животные заразились генерализованной формой инфекции. От 14 морских свинок было выделено ПО культур бруцелл. Индекс инфицированности (ИИ) органов и лимфатических узлов составлял 78,6±5,9 %, а индекс веса селезенки (ИВС) - 3,03±0,36. Все животные реагировали положительно в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.
Наибольшую иммуногенность показали вакцины из штаммов B.abortus 19 и B.abortus 82. Все животные оказались резистентными к инфицированию вирулентной культурой. Сравнительно высокими иммуногенными свойствами обладали штаммы B.abortus RB51 и B.abortus 82-ПЧ. Количество иммунных животных в этих группах животных составляло 87,5% и 86,7%, соответственно. Наименее иммуногенным оказался штамм B.abortus 75/79-АВ, после вакцинации которым заражению противостояли 78,6% животных.
Изыскание наиболее эффективной схемы применения иммуномодуляторов при иммунизации морских свинок вакциной из штамма В.abortus 82-RTr
Результаты серологического и бактериологического исследований морских свинок в эксперименте по установлению более эффективной схемы применения иммуномодуляторов при сочетанной иммунизации их живой вакциной из штамма B.abortus 82-RTr отражены в таблицах 25 и 26.
Так, из таблицы 25 видно, что все морские свинки, привитые вакциной из штамма 82, в ходе всего эксперимента реагировали положительно в РСК с R-антигеном в относительно высоких титрах антител при отрицательных и слабо положительных результатах РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном.
Во все сроки исследования морские свинки, привитые вакциной из штамма 82-RTr, реагировали отрицательно в РА и PCK-S. В РСК с R-антигеном ВНИВИ отмечалось постепенное снижение тиров антител, и через 2 месяца они были практически отрицательными.
У животных, привитых вакциной из штамма 82-RTr с иммуномодуляторами (группы 3-8), по сравнению с животными, привитыми без таковых, не отмечалось значительного увеличения или снижения титров антител в РА и РСК. Однако через 2 месяца после иммунизации титры РСК с R-антигеном в группах 3-8 оставались положительными, в то время как в группе животных, привитых только вакциной, РСК была уже отрицательной. В 5-ой группе с двукратным введением полиоксидония титр антител в РСК с R-антигеном возрос до 52,9 ± 19,8.
Данные таблицы 26 показывают, что все интактные животные заразились генерализованной формой инфекции: при бактериологическом исследовании от 6 морских свинок было выделено 49 культур вирулентного штамма B.abortus 54-М. Все животные реагировали положительно в РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном в высоких титрах антител. ИИ составил 81,7 %.
Введение только иммуномодуляторов не обеспечивало защиту от последующего заражения. Все животные этих групп заразились генерализованно.
У морских свинок, привитых вакциной из штамма 82-RTr без иммуномодуляторов, иммунитет составил 37,5 %. В группе привитых культурой штамма 82 процент иммунных животных составил 80,0 %.
В группах животных с сочетанным применением вакцины из штамма 82-RTr с имуномодуляторами отмечался нестерильный иммунитет, к тому же культур вакцинного штамма в этих группах было выделено больше, по сравнению с животными, привитыми только вакциной. В то же самое время от отдельных животных были выделены культуры бруцелл как вакцинного штамма 82-RTr, так и вирулентного - 54-М.
При одновременном введении с вакциной из штамма 82-RTr иммуномодуляторы полиоксидоний и тиосульфат натрия снижали иммуногенность вакцины на 7,5 и 23,2 %, соответственно. При двукратном же введении данных иммуномодуляторов (одновременно с вакциной, затем повторно через 1 месяц) -повышали на 48,2 и 5,4 %.
При отдаленном применении (только через 1 месяц) полиоксидоний снижал иммуногенность вакцины из штамма 82-RTr на 23,2 %, в то время как тиосульфат натрия - повышал на 12,5 %.
Таким образом, для практического применения с целью повышения иммуногенности вакцины из штамма 82-RTr можно рекомендовать двукратное введение полиоксидония, а также двукратное и отдаленное введение тиосульфата натрия.
Данные последнего опыта подтверждают результаты, полученные в опыте по изучению влияния пассажей и иммуномодуляторов на иммуногенность вакцин из штаммов, где полиоксидоний и тиосульфат натрия при одновременном введении с вакциной повышали иммуногенность пассажированной культуры штамма 82-RTr на 16,7 %.
На современном этапе специфической профилактике бруцеллеза с помощью вакцин отводится значительная роль. Нужна вакцина высокоиммуногенная, эффективная, удобная для практического применения. Одни исследователи являются сторонниками живых вакцин, обладающих агглютиногенными свойствами, вторые отстаивают неагглютиногенные штаммы, третьи ведут работу в направлении изыскания инактивированных коспускулярных и химических вакцин (B.C. Бронников, А.А. Новицкий, 1995; и др.).
Во многих странах мира для специфической профилактики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в основном используют живые вакцины из штаммов B.abortus 19 и B.melitensis Rev 1.
Опыт борьбы с бруцеллезом крупного и мелкого рогатого скота в РФ доказывает большую роль специфической профилактики в оздоровлении хозяйств от этой инфекции с помощью этих вакцин. Однако в процессе широкого их применения было установлено, что привитые ими животные длительное время сохраняют поствакцинальные показатели серологических реакций, что создает большие трудности при диагностике бруцеллеза и решении более быстрого оздоровления стад от этой инфекции. Поэтому исследователи пошли по пути изыскания таких вакцинных штаммов бруцелл, которые бы обладали слабыми или инагглютиногенными свойствами. Так, в Российской Федерации по настоящее время в качестве официального препарата против бруцеллеза крупного рогатого скота в основном применяется живая вакцина из слабоагглютиногенного штамма B.abortus 82 (SR-форма).
