Введение к работе
Актуальность темы. В структуре инфекционной патологии лейкоз крупного рогатого скота занимает лидирующее место в РФ и составляет более 40% .
Широкое распространение лейкоза в сельхозпредприятиях всех форм собственности, большой экономический ущерб, наносимый животноводству, в том числе племенному, социальная значимость данной нозологии, отсутствие средств профилактики и терапии определяют актуальность фундаментальных и прикладных исследований по данной проблеме (Г.Ф. Коромыслов, 1975; В.П. Шишков, 1976; В.А. Бусол, 1983; А.Ф. Валихов, 1985; М.И. Гулюкин, 1985; В.М. Нахмансон, 1986; Г.А. Симонян, 1987; П.Н. Смирнов, 1992; И.М. Донник, 1999; Ю.П. Смирнов, 2003; В.В. Храмцов, 2005; и др.).
В отдельных субъектах РФ, таких как Вологодская, Ленинградская, Свердловская области, Республика Саха (Якутия) и Ханты-Мансийский автономный округ, при эффективном научном обеспечении достигнуты высокие результаты по организации и проведению противоэпизоотических мероприятий, позволившие практически оздоровить территории перечисленных субъектов РФ.
Если изучение краевой эпизоотологии, иммунологических и патогенетических аспектов лейкоза велось достаточно интенсивно, то проблемы эпизоотологической роли молодняка, полученного от инфицированных коров-матерей, влияние некоторых факторов на особенности реагирования при проведении диагностических исследований, сочетанного течения с другими вирусными инфекциями, поиск и применение средств иммунологической коррекции у инфицированных животных изучены недостаточно.
Этим обстоятельством определяется постоянная потребность ветеринарной практики в новых научно обоснованных рекомендациях, в том числе по вопросам диагностики, факторам передачи, особенностям распространения, мерам борьбы и профилактики такой нозологии, как лейкоз крупного рогатого скота.
Недостаточно высокий предел чувствительности реакции иммунодиффузии (РИД) для выявления животных, носителей вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) (С.А. Мурватуллоев, 1984; В.Г. Арутюнян, 1992; В.М. Чекишев, 1995; П.Н. Смирнов,1996; Р.З. Файзулин, 1996; В.В. Храмцов, 1999; В.В. Разумовская, 2002; И.М. Донник, 2009; С.И. Логинов, 2007; и др.), заставляет изыскивать новые или усовершенствовать имеющиеся методы диагностики инфекции ВЛКРС, изыскивать возможности повышения собственных защитных сил организма.
Все обозначенные выше проблемы весьма актуальны и требуют эффективного, научно обоснованного и практического решения во многих субъектах Российской Федерации, в том числе в Новосибирской области.
Цель исследований. Провести комплексную оценку факторов, влияющих на особенности проявления и распространения лейкоза крупного рогатого скота и, с учетом полученных результатов, усовершенствовать систему, обеспечивающую благополучие по данной нозологии.
Задачи исследований:
1. Изучить эпизоотическую ситуацию по инфекции ВЛКРС и лейкозу крупного рогатого скота в Новосибирской области в зависимости от географического расположения территорий, возраста животных и данных ветеринарно-санитарной экспертизы мясокомбинатов и убойных пунктов.
2. Теоретически обосновать и апробировать в условиях производства основы многофакторного анализа и информационно-аналитического мониторинга при инфекции и лейкозе крупного рогатого скота.
3. Изучить иммунологические и биохимические характеристики молодняка крупного рогатого скота, полученного от инфицированных вирусом лейкоза коров-матерей, и роль таких животных в особенностях проявления инфекционного и эпизоотического процессов.
4. Оценить в сопоставлении результаты визуальной и инструментальной оценки диагностических исследований в ИФА, а также чувствительности таких тест систем, как РИД и ИФА, и возможное влияние некоторых физиологических и биотических факторов на особенности реагирования животных в тест-системе ИФА, и отработать регламент применения РИД и ИФА в системе противоэпизоотических мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота.
5. Определить иммунобиохимические показатели при сочетанном течении инфекции вируса лейкоза с вирусной диареей и парагриппом крупного рогатого скота, и влияние данной ассоциации возбудителей на результаты диагностических исследований при инфекции ВЛКРС.
6. В условиях производственного эксперимента изучить возможность применения иммуномодулирующих препаратов при инфекции ВЛКРС с целью выявления животных, латентных носителей вируса лейкоза и низкими титрами антител к ВЛКРС.
7. Рассчитать абсолютный и опосредованный экономический ущерб, наносимый лейкозом крупного рогатого скота животноводству сельхозпредприятий, и разработать комплексную, научно обоснованную программу противоэпизоотических мероприятий профилактики и борьбы с лейкозом с использованием тест-системы ИФА.
Научная новизна. Продолжено ретроспективное изучение эпизоотической ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в трех административно-территориальных зонах Новосибирской области. Установлены стабилизация и снижение показателя заболеваемости в динамике за последние 5 лет.
Проведен направленный многофакторный математический анализ и выявлена степень корреляции признаков, имеющих приоритетное значение при распространении лейкоза крупного рогатого скота. Установлено, что из 68 сопоставляемых качественных показателей корреляция (значения не достоверны) установлена по 37 признакам. Из них максимальное значение корреляции установлено только по одному признаку – сопоставлении уровня инфицированности и заболеваемости коров в хозяйстве (r = 0,558);
При проведении иммунобиохимических исследований инфицированного и больного лейкозом крупного рогатого скота, в том числе и при ассоциативном течении инфекции ВЛКРС и ИРТ, установлено, что в целом содержание определяемых компонентов сыворотки крови подопытных животных не выходило за рамки нормативных показателей.
Из числа больных лейкозом, инфицированных ВЛКРС и интактных животных, гематологические и биохимические изменения выявлены только у больных. Из 32 определяемых показателей достоверная разница установлена по 26 при исследовании крови и по 5 из 13 при исследовании сыворотки крови. Часть из них отражает нарушения общего гемопоэза.
Выявлены количественные изменения практически по всем определяемым аминокислотам, а также макро- и микроэлементам, за исключением железа. В процессе развития лейкозной патологии отмечается липидемия. В крови больных лейкозом животных зарегистрировано понижение (до 37%) витамина Е.
Достоверная разница установлена по уровню гематокрита при сопоставлении животных, инфицированных вирусом инфекционного ринотрахеита, и животных, инфицированных ВЛКРС; лизину (инфекция ВД и ВЛКРС), метионину (ВЛКРС+ИРТ) при сопоставлении с животными других опытных групп, а также в группе животных, спонтанно инфицированных вирусом инфекционного ринотрахеита.
По другим сопоставляемым показателям разница недостоверна.
При исследовании в РИД телят в возрасте 2,5 и 6 мес, полученных от больных лейкозом коров-матерей, реакция была отрицательной. В ИФА средние показатели оптической плотности находились на уровне 10–12 EU и одновременно проявили положительную реакцию в ПЦР. Эти животные представляют научный интерес, как иммунотолерантные. Пробы сыворотки крови 10% телят разных возрастных групп также имели индивидуальные показатели оптической плотности на границе, не регистрируемой в РИД.
Исследования сыворотки крови животных в РИД и ИФА до и после введения туберкулина выявили определенную вариабельность (как повышение, так и понижение) уровня антител у некоторых животных после введения ППД туберкулина, что не позволяет утверждать о направленном иммуностимулирующем или ингибирующем эффекте препарата и влиянии его на результаты диагностических исследований на инфекцию ВЛКРС.
Установлено, что максимальное количество инфицированных ВЛКРС животных выявляется при проведении первых трех диагностических исследований с интервалом не менее 1–2 мес при исследовании в ИФА и 6 мес при исследовании в РИД.
Изучение иммуностимулирующих и иммуномодулирующих свойств випраксина показало, что индекс спонтанной пролиферации в дозе 60 и 600 мкг/л увеличивался от 0,9 до 1,0 EU.
При определении противовирусной и интерферониндуцирующей активности препарата in vitro установлено, что випраксин в дозах 0,0075, 0,075 и 0,75 мкг/мл не проявляет цитотоксического эффекта относительно клеточной культуры МDВК. Внесение препарата в дозе 7,5 мкг/мл вызывает токсичность культур клеток.
Препарат не подавляет репродукцию вируса в чувствительной культуре клеток и не обладает вирулицидным эффектом. Применение его обусловливает определенную индукцию интерферонообразования (от 3,33 до 9,33 ед/мл). С увеличением контакта по времени до 24 ч интерфероногенный эффект возрастает (от 9,33 до 53,33 ед/мл).
Теоретическая и практическая значимость работы. Получены и проанализированы данные ветеринарно-санитарной экспертизы, позволяющие наиболее объективно определить напряженность ситуации по лейкозу и с учетом ограничений на использование и утилизацию туш по причине лейкоза определить в последующем экономическую составляющую этой проблемы в масштабах области. По данным мясокомбинатов и убойных пунктов, в области сократилось количество случаев регистрации лейкоза и утилизации туш.
Результаты производственных наблюдений позволяют рекомендовать для первичного исследования телят в возрасте 6 мес. тест-систему ИФА.
Показано, что через 30 дней после обработки инфицированных ВЛКРС животных випраксином, повышались титры специфических противовирусных антител у слабо реагирующих (1:2; 1:4 и 1:16) в РИД. Следовательно, использование данного препарата позволяет дополнительно выявить 4,5% инфицированных животных, сократить интервал исследований от 3 мес до 30 дней и, соответственно, сроки оздоровления неблагополучных ферм от лейкоза.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях, семинарах, совещаниях, в том числе: «Проблемы адаптации сельскохозяйственных животных в Сибири» (Новосибирск, 1995–1996); на первой научной конференции «Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири» (Новосибирск, 16 января 1996 г.); второй научной конференции «Паразиты и вызываемые ими болезни в Сибири» (Новосибирск, 1997); на трех научно-производственных конференциях по проблеме инфекционной патологии животных (Новосибирск, 1997–1999 гг.); межрегиональной научно-практической конференции «Проблемы экологии в программах профессионального образования» (Новосибирск, 2000); научно-практической конференции в рамках Сибирского федерального округа Российской Федерации «Проблема экологии агропромышленного комплекса» (Новосибирск, 2002); на ученом совете ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (Новосибирск, 2004).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликована 54 научные работа, в том числе одна монография, одно учебное пособие, утвержденное МСХ РФ, и 14 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Вестник НГАУ», «Ветеринария», научно-производственный журнал «Ветеринарный врач», «Ветеринария и кормление», «Вестник БГСХА им. В.Р. Филиппова» и др.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографию и приложения. Работа иллюстрирована 39 таблицами и 18 рисунками. Библиографический указатель включает 255 источников отечественной и иностранной литературы.
