Введение к работе
Актуальности темы. Одним из самых распространенных хронических инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, наносящих значительный экономический ущерб животноводству, является лейкоз крупного рогатого скота (ВЛ КРС). Проблема лейкоза имеет общебиологическое и медицинское значение ввиду близкого морфологического и эволюционного родства вируса лейкоза крупного рогатого скота с вирусами Т-клеточного лейкоза человека и до настоящего времени не потеряла своей актуальности. Наоборот, лейкоз вышел на первое место в ряду хронических инфекций крупного рогатого скота. Болезнь поражает в первую очередь высокопродуктивных коров, что, в свою очередь, является угрозой национальному генофонду крупного рогатого скота страны (Н.И. Петров, 2001; Н.А. Мальцева с соавт., 2003; Г.А. Симонян, 2005; П.Н. Смирнов с соавт., 2007; М.И. Гулюкин, 2008, 2009; И.М. Донник с соавт., 2000, 2008, 2010; Л.К. Эрнст, Н.А. Зиновьева, 2008).
На сегодняшний день, единственными наиболее эффективными методами борьбы с лейкозом крупного рогатого скота, являются его ранняя диагностика, изоляция и методичная выбраковка больных животных с последующим формированием свободного от вируса лейкоза стада. Поэтому, совершенствование методов его ранней диагностики является актуальной задачей. Одними из основных требований, предъявляемым к диагностическим тестам, являются чувствительность и специфичность (В.П. Федотов, О.В. Иванов, О.Ю. Иванова, 2006; М.И. Гулюкин 2007; И.М. Донник, А.Т. Татарчук, 2008, 2009; A.M. Смирнов 2008; В.В. Субботин, Д.В. Колбасов, 2008).
Установление принадлежности ВЛ КРС к определенному генотипу может служить основанием для расширения исследований в данном направлении, в проведении исследований в выявлении патогенетических особенностей развития лейкозного процесса, как в экспериментальном, так и в спонтанном вариантах (D. Beier, P. Blankenstein, О. Marquardt, J. Kuzmak, 2001; СВ. Чичинина, 2005; Е.В. Дробот, 2007, 2008; Ф.Ф Зинатов, 2008; И.М. Гулюкин, А.И. Клименко, Н.Ф. Ломакина, 2009, 2010; И.М. Донник, 2010, П.Н. Смирнов, Н.В. Грачева, 2009, 2010).
Изучение особенностей строения и функционирования генома вируса/провируса, возможно, позволит в будущем не только понять, но и управлять течением инфекционного процесса (М.И. Гулюкин с соавт., 2009).
Генотипическое разнообразие ВЛ КРС и результаты сравнительного исследования, в контексте их эпизоотической значимости, открывают новые методические подходы в разработке научно-обоснованных схем оздоровления неблагополучных по лейкозу стад.
Цель исследований: определить чувствительность и специфичность используемых современных диагностических тестов в выявлении вирусоносителей лейкоза крупного рогатого скота в оздоравливаемых стадах
Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
-
Выявить распространение лейкоза в Уральском регионе.
-
Изучить эффективность современных методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
-
Изучить эффективность комплекса диагностических тестов (РИД, ИФА, ПЦР) у коров и молодняка в оздоровленных и оздоравливаемых от лейкоза популяциях животных.
-
Изучить генотипическое разнообразие, молекулярно - генетическую структуру и провести филогенетический анализ возбудителя лейкоза крупного рогатого скота, циркулирующего в популяции животных из разных регионов России.
5. Разработать рекомендации для ранней лабораторной диагностики лейкоза.
Научная новизна. Впервые изучена молекулярно-генетическая структура ВЛ КРС, циркулирующего в популяции животных разных регионов России. Из крови инфицированных ВЛ КРС животных получены изоляты возбудителя лейкоза, определены их молекулярно - генетические свойства, подтвержденные лабораторными тестами («nested» - ПЦР, ПДРФ анализ (RFLP), ДНК -секвенирование). Нуклеотидные последовательности участка гена env 444bp выделенного возбудителя занесены в международный банк генотипов (GenBank NCBI, 2009, 2010 гг.). На основании филогенетического анализа полученных результатов согласно Международной классификации, определена дендрограмма регионального распределения циркулирующих штаммов ВЛ КРС.
Проведены исследования сравнительной эффективности лабораторных (РИД, ИФА, ПЦР) методов диагностики лейкоза у коров и молодняка в оздоровленных и оздоравливаемых стадах.
Практическая значимость и реализация результатов исследований.
Результаты исследований учтены при проведении оздоровительных мероприятий в животноводческих предприятиях Свердловской и Тюменской областей, в которых отмечена положительная динамика сокращения количества неблагополучных по ВЛ КРС молочно - товарных ферм, и снижения уровня инфицирования животных.
На основании полученных данных подобраны праймеры для ПЦР диагностики, способствующие раннему выделению носителей ВЛ КРС в оздоравливаемых стадах как среди коров, так и среди молодняка.
На основании данных выполненных исследований по определению чувствительности и специфичности диагностических тестов в оздоравливаемых хозяйствах подготовлены рекомендации - «Способ ранней прижизненной диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота», утвержденный НТС МСХиП Свердловской области (2010 г.).
Результаты исследований нашли отражение в научно-практических рекомендациях:
Методические рекомендации Система мероприятий оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза в Уральском федеральном округе, г. Екатеринбург: Уральское издательство, 2008.- 66 с.
Научные рекомендации Методология снижения инфицированное животных вирусом лейкоза в оздоравливаемых стадах к.р.с, г. Екатеринбург: Уральское издательство, 2009. - 124 с.
Методические рекомендации Способ ранней диагностики лейкоза у молодняка крупного рогатого скота, г. Екатеринбург: Уральское издательство, 2010. - 32с.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-
В животноводческих предприятиях Уральского региона лейкоз крупного рогатого скота имеет широкое распространение.
-
Диагностика лейкоза лабораторными методами, в оздоравливаемых и оздоровленных стадах имеет различную эффективность, зависящую от чувствительности и специфичности тест систем.
-
В популяциях крупного рогатого скота в регионах РФ циркулирует возбудитель лейкоза, имеющий различное генотипическое разнообразие и генотипическую структуру, характерную для Австралийского, Бельгийского и смешанных типов.
-
Филогенетический анализ вируса лейкоза, полученный на основе ДІЖ -секвенирования позволил классифицировать опытные штаммы и сравнить их с мировыми изолятами.
-
Ранняя диагностика ВЛ КРС с использованием комплекса лабораторных методов позволяет выявить инфицированных животных с 15 - ти дневного возраста.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций и патологии животных» (г. Омск, 2009), международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней животных и птиц» (г. Екатеринбург, 2008), международной научно-практической конференции «Основные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц» (г. Екатеринбург, 2010), молодежных научно -практических конференциях УрНИВИ РАСХН (2008-2009гг.), осенней научно-практической конференции по отбору инновационных проектов молодых ученых «У.М.Н.И.К.» (г. Екатеринбург, 2010), ученом совете ГНУ Уральского научно-исследовательского ветеринарного института Российской академии сельскохозяйственных наук (2008 - 2010 гг.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 2 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ (1 - журнал «Ветеринария Кубани», 1 -журнал «Аграрный вестник Урала»), 3 - методические рекомендации.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, анализа полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы. Материал изложен на 140 страницах машинописного текста, содержит 21 таблицу и 23 рисунка. Список литературы включает 257 источник, в том числе 87 зарубежных.
