Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Атопический дерматит - современное понимание этиопатоге нетического процесса 10
1.2. Клинико-эпизоотологическая манифестация атопического дерматита у собак 21
1.3. Современные методы диагностики атопического дерматита у собак 22
1.4. Современные представления о лечении собак, больных осложненным атопическим дерматитом 27
1.5. Новые направления лечебно-реабилитационных мероприятий при атопическом дерматите у собак 30
2. Собственные исследования 35
2. 1. Материалы, методы и объемы исследований 35
2. 2. Результаты исследований 41
2.2.1. Нозологический профиль заразной патологии собак в изучаемом регионе 41
2.2.1.1. Роль и место атопического дерматита в суммарной патологии собак 51
2.2.2. Экспертная оценка результатов клинических и лабораторных исследований собак при проявлении атопического дерматита и на фоне их лечения 53
2.2.3. Экспертная оценка показателей гомеостаза собак, больных атопическим дерматитом на фоне терапевтического воздействия 63
2.2.3.1. Результаты исследований гематологических показателей у собак при осложненном атопическом дерматите 63
2.2.4. Состояние иммунной системы собак при осложненных формах атопического дерматита на фоне терапевтического воздействия 71
2.2.4.1. Экспертная оценка показателей фагоцитоза у собак при осложненном атопическом дерматите на фоне медикаментозного воздействия 71
2.2.4.2. НСТ-тест как метод контроля тяжести патологического процесса при атопическом дерматите собак 76
2.2.4.3. Экспертная количественная оценка популяций и субпопуляций лимфоцитов у собак с осложнённой формой атопического дерматита 82
2.2.4.4. Сравнительная оценка уровня иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM) у собак при осложненном атопическом дерматите 88
2.2.4.5. Экспертная оценка уровня цитокинов у собак при осложненном атопическом дерматите 94
2.2.4.6. Динамика циркулирующих иммунных комплексов в крови с собак, больных осложненным атопическим дерматитом 99
3. Обсуждение результатов исследований 101
Выводы 107
Практические предложения 108
Список использованной литературы 109
- Атопический дерматит - современное понимание этиопатоге нетического процесса
- Новые направления лечебно-реабилитационных мероприятий при атопическом дерматите у собак
- Результаты исследований гематологических показателей у собак при осложненном атопическом дерматите
- Динамика циркулирующих иммунных комплексов в крови с собак, больных осложненным атопическим дерматитом
Введение к работе
Актуальность темы. Из-за отсутствия в России статистической базы данных о количестве собак и кошек, их социально-биологических категориях не представляется возможным иметь объективную оценку распространения конкретных болезней животных этих видов. Единичные публикации о поголовье собак носят лишь обобщающий характер, характеризуя только численность зарегистрированных животных (Снегирев С.И., Гуславский Н.И., 2001 г.). Ряд болезней вообще не подлежит государственной регистрации.
Вместе с тем, в последние годы зооветбизнес в отношении мелких домашних животных в России развивается быстро и достаточно успешно – разрабатываются специализированные корма, новые препараты для лечения заболеваний мелких домашних животных, аксессуары для собак, появляются новые породы кошек и собак, отдельные животные от российских производителей получают статусы чемпионов мира и другие значимые титулы, что повышает интерес к разведению более ценных и, как правило, легко уязвимых относительно здоровья, пород собак.
По мнению ряда авторов (Бурова В.И., 1999; Веденеев С.А., 2005 и др.), к наиболее распространенным болезням, наносящим ущерб здоровью домашних животных, относятся заболевания кожного покрова различной этиологии, в том числе и наследственного характера.
По статистическим данным журнала Waltham за 2006 год причину практически половины данных обращений владельцев собак составляет дерматит вследствие аллергии на блох, а 37,6% - атопический дерматит, который диагностируется чаще в экономически развитых странах. Кроме того, возможно, что этим сложным с точки зрения патогенеза и тяжелым для всего организма заболеванием страдает около 10% собак.
В связи с тем, что возможно сочетанное проявление атопического дерматита с грибковыми и бактериальными инфекциями, своевременно и качественно поставить диагноз не всегда удается, сложной является и дифференциация атопии от пищевой и контактной аллергий, а также эпителиотропной лимфомы.
Атопия (греч. аtopia – странность, необычность) - группа аллергических заболеваний людей, основная роль в развитии которых принадлежит наследственной предрасположенности (Смирнова, Н.С., 1998, 1999, 2001, 2002). Данный термин впервые ввел в 1922 ученый Кока. Позднее было установлено, что многие характерные для атопии явления встречаются также у собак, крупного рогатого скота, моржей и других животных. Особенности клинического проявления атопического дерматита у собак впервые описаны более 60 лет тому назад (Nagata, M., 1999).
Атопический дерматит (АтД) – хроническое заболевание, характеризующееся интенсивным кожным зудом и часто осложняющееся бактериальными и грибковыми инфекциями, что ведет к вторичной иммунной недостаточности. Однако в последнее время был достигнут значительный прогресс в понимании природы, выработке способов профилактики и контроля атопии у собак. Длительный контроль данного заболевания предусматривает ограничительные меры, хотя появление на фармацевтическом рынке новых препаратов дает возможность облегчить состояние заболевших животных. В настоящее время медикаментозное устранение кожного зуда и профилактика грибковых и бактериальных осложнений признаны большинством ветеринарных специалистов основными способами облегчения атопического дерматита у собак.
Относительно широкое распространение осложненных форм атопического дерматита (АтД) среди собак в условиях г. Нижнего Новгорода, недостаточная изученность его проявления в зависимости от пород собак и тяжести патологического процесса, потребность в разработке новых более эффективных средств и способов лечения больных животных определили выбор темы и направления наших исследований.
Целью работы явилось изучение клинического и эпизоотического проявления атопического дерматита собак, в том числе осложненного бактериальной и грибковой инфекциями, особенностей развития патогенеза, изменения иммунологических показателей для подбора наиболее оптимальной схемы лечения больных животных.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
– изучить особенности эпизоотического и клинического проявления атопического дерматита собак;
– определить характер иммунологических изменений в организме собак больных атопическим дерматитом;
– в сравнительном аспекте изучить эффективность стандартной и экспериментальной (с применением средств энзимотерапии) схем лечения больных собак;
– разработать наиболее оптимальную схему лечения животных, отвечающую принципам комплексности и эффективности лечебно - реабилитационных мероприятий.
Научная новизна: впервые в России проведены исследования по изучению на популяционном и субпопуляционном уровнях особенностей эпизоотического и клинического проявления атопического дерматита у собак, установлены формы ассоциативного его проявления, определен характер манифестации патологического процесса. Разработана схема лечения больных атопическим дерматитом собак с применением препаратов системной энзимотерапии, характеризующаяся сокращением сроков их реабилитации.
Теоретическая и практическая значимость работы. Научно обосновано и практически доказано, что осложненный атопический дематит – болезнь управляемая.
Разработанные схемы-модели эпизоотологической и лабораторной диагностики, предлагаемый комплекс лечебно-реабилитационных мероприятий – доступны, эффективны и востребованы.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-
Атопический дерматит собак – хроническое заболевание кожи, характеризующееся зудом, значительными иммунологическими нарушениями и генетической направленностью.
-
Атопический дерматит собак практически всегда осложняется бактериальной и грибковой флорой, усугубляющей воспаление кожи.
-
Препараты системной энзимотерапии устраняют побочные действия гормональных и антибактериальных препаратов, способствуя лучшему усвоению последних и быстрому устранению воспаления, оказывают избирательное иммуномодулирующее действие.
-
Использование препаратов системной энзимотерапии в комплексе лечебно-реабилитационных мероприятий при атопическом дерматите собак сглаживает симптоматическое проявление болезни, значительно сокращая сроки нормализации иммунологических показателей в сравнении со стандартными схемами лечения.
Пути реализации. Результаты исследований по применению средств энзимотерапии могут использоваться для совершенствования лечебно-реабилитационных мероприятий при других патологиях домашних животных, а также в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.
Апробация и публикации результатов исследований
Тема диссертационной работы, методическая основа, направления и результаты исследований, изложенные в материалах диссертации, доложены и обсуждены на заседаниях совета ветеринарного факультета ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (2007–2010 гг.), на конгрессах по проблемам ветеринарной медицины (секция мелких домашних животных), на научно-практической конференции в пос. Персиановский (2008), на научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия» (2008), на межкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава кафедр микробиологии, вирусологии и биотехнологии, эпизоотологии и инфекционных болезней, паразитологии, общей биологии и ветсанэкспертизы ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (Н. Новгород, 2010 г.).
Материалы диссертации опубликованы в 5 научных работах, в т.ч. в 3 статьях – в центральных изданиях, рекомендованных ВАК РФ для опубликования материалов докторских и кандидатских диссертаций («Ветеринария» и «Ветеринарная практика»).
Внедрение. Результаты исследований в 2006–2010 годах под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в условиях учебно-клинического центра ФГОУ ВПО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» и зооветеринарного Центра «Фауна» (ЗВЦ «Фауна», г. Н.Новгород).
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений, списка использованной литературы.
Диссертация изложена на 135 стр. компьютерного текста, иллюстрирована 15 рисунками и 18 таблицами.
Список использованной литературы включает 283 наименования, в том числе 159 иностранных авторов.
Атопический дерматит - современное понимание этиопатоге нетического процесса
Атопический дерматит - генетически обусловленное аллергическое и воспалительное хроническое заболевание кожи, проявляющееся интенсивным кожным зудом. Эта болезнь обычно ассоциирована с увеличением количества антител (IgE) к аллергенам окружающей среды, которые могут попасть в организм через кожу и пищеварительный тракт. Современная концепция атопического дерматита объясняет гиперпродукцию IgE с позиции врожденной иммунной недостаточности и нарушением функции Т-супрессоров, проявляющейся в ослаблении подавляющего воздействия на тот клон В-лимфоцитов, с которым связан синтез IgE [78, 177]. В настоящее время стала понятна иммунная функция кожи, хотя раскрыть природу АД до конца пока не удалось.
Аллергены, вызывающие АтД, проникают в организм через кожу [225, 226] и пищеварительный канал [232]. Аллергенами чаще всего выступают клещи домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus, кладовые клещи, плесневые грибки, пыльца сорняков, трав и деревьев, клещи домашней пыли, аспергиллы, чешуйки человеческой кожи [226].
Известно, что атопическая аллергия зависит от множества факторов окружающей среды и неблагоприятной экологической обстановки [115, 155]. АтД диагностируют в экономически развитых странах, как у людей, так и у животных. Это хроническое рецидивирующее заболевание поражает приблизительно 10% популяции собак [180].
Изучая наследственную предрасположенность собак к АтД, исследователи установли, что можно создавать линии собак, предрасположенных к АтД, посредством их сенсибилизации с раннего возраста небольшими дозами аллергенов. Не у всех подвергнутых такой обработке собак развились клинические признаки болезни, но всегда отмечали повышенный уровень IgE [255]. Данные проведенных исследований подтвердили обоснованность рекомендаций по ограничению использования в племенной работе больных атопией собак. Существует мнение, что наследуется не только атопия, но и патологический характер функционирования различных систем организма -нервной, иммунной, пищеварительной и др., что является предрасполагающими факторами проявления и развития АтД [51, 52, 53, 203, 241]. Некоторые породы собак проявляют предрасположенность к АтД: боксер, английский бульдог, вест-хайленд-уайт терьер, шар-пей, американский стафорд-ширский терьер, немецкая овчарка, бостон-терьер, французский бульдог, бультерьер, мопс, далматин, Джек-Рассел-терьер, лабрадор ретривер [218, 232].
Хотя в развитии АтД, без сомнения, важную роль играет генетическая предрасположенность, нельзя недооценивать и экологические факторы окружающей среды. К провоцирующим факторам проявления и развития АтД относятся искусственное вскармливание щенков, раннее введение прикорма, инфекционные заболевания, нарушения деятельности пищеварительного тракта, дисбактериоз, психоэмоциональные воздействия, зависимость заболевания от изменений гормонального фона организма, обменные, нейрогу-моральные, нейрососудистые нарушения, нерациональное питание, аллергическое состояние, различные интоксикации и др. [1, 59].
Различные факторы окружающей среды, несомненно, являются триггер-ными в отношении развития АтД у предрасположенных к нему собак. Так, контактные раздражители и аллергены (мыло, растворители, одежда из шерсти, механические раздражители, детергенты, консерванты, ароматизаторы) повреждают наружный покров, вызывают воспаление, раздражение и открывают входные ворота для дальнейшего воздействия факторов окружающей среды. Микробные агенты типа Staphylococcus aureus, Pityrosporum ovale, грибов рода Candida так же могут усиливать повреждение кожного барьера, вырабатывая так называемые суперантигены, подробнее про которые будет описано ниже [30, 31, 32, 132, 144, 145]. Пищевая сенсибилизация в патогенезе АтД занимает не последнее ме сто. Облегчение тяжести течения АтД после исключения из пищевого рацио на аллергогенных продуктов отмечается более чем у 90% собак с тяжелым - АтД [74]. Известно, что пищевая аллергия протекает в основном с реакциями I и IV типов, при этом к 1-ому году жизни значимость этих типов гиперчувствительности обычно уменьшается. Считается, что наличие пищевой аллергии - прогностический показатель тяжелого течения АтД [113]. Не менее важная роль в патогенезе АтД отводится врожденной, генетически опосре-дованной ферментопатии пищеварительной системы, что ведет к формированию выраженной эндогенной интоксикации и утяжеляет течение заболевания [92, 203].
Эмоциональный стресс так же индуцирует и поддерживает патологиче ч», ский процесс при АтД. Более 70% ветеринарных врачей и почти все владель цы больных собак убеждены в усугубляющем действии стресса при АтД. Спонтанные или периодические стрессы могут не только осложнить течение заболевания, но и стать пусковыми факторами при обострениях [74].
В последнее время важное значение в патогенезе АтД придается нару-шению метаболизма жирных кислот в форменных элементах, плазме крови, жировой ткани. Недостаток определенных жирных кислот приводит к дефициту компонентов простогландинового каскада, обладающих регуляторными функциями прежде всего в отношении клеточного синтеза IgE и способст w». вующих уменьшению воспалительных явлений [74, 75].
Многие исследователи считают, что развитие атопического дематита у собак происходит при участии генетических факторов, в нем участвуют эф-фекторные клетки воспаления, большое число медиаторов воспаления, поврежденный кожный барьер и бактерии [87, 147, 158, 170, 173, 176-178].
В науке сформировался иммунологический аспект понимания этой патологии у животных, в т. ч. и у домашних плотоядных.
В течение многих лет считалось, что кожа считается органом-мишенью для различных типов иммунологических и воспалительных реакций [93, 140, 141, 268]. Позднее было доказано, что кожа не только мишень поражения, но и активный участник развития многих типов иммунологических и воспали тельных заболеваний [117].
В развитии АтД принимает участие большое количество эффекторных клеток воспаления: тучные клетки, эозинофилы, нейтрофилы, лимфоциты, кератиноциты, дендроциты, клетки Лангерганса (антиген-презентирующие клетки) и другие представители мононуклеарных фагоцитов. Они секрети-руют цитокины, которые модулируют различные типы иммунологических и воспалительных реакций [81,126, 212, 239, 240, 248, 250].
Известно, что в коже тучные клетки обычно обнаруживают вблизи кро ч. веносных сосудов, причем в поверхностных слоях кожи их количество зна чительно больше, чем в глубоких. Количественное представительство этих клеток имеет топические особенности, что может объяснять характерную ло кализацию поражений при АтД у собак, особенно в ушной раковине и в об ласти пальцев [130]. Тучные клетки, как известно, несут на своей поверхно сти рецепторы к IgE. Установлено, что когда антиген, к которому собака чув ствительна, оказывается связанным со специфическим иммуноглобулином (IgE), происходит дегрануляция тучных клеток, и из них освобождаются ме диаторы воспаления (гистамин, серотонин, лейкотриены, цитокины, фермен V. ты и опухолево-некротические факторы), инициируя развитие сосудистых реакций, в том числе покраснения, зуд и др. - т. е. происходят явления, похожие на реакцию гиперчувствительности замедленного типа. У больных атопией собак тучные клетки особенно реактивны - их называют «раздраженными» тучными клетками [159].
Механизм развития атопического дерматита очень сложен [142, 168, 175, 198, 253]. АтД у людей, как астма и аллергический ринит (которые у со бак встречаются значительно реже, чем дерматиты), в 80% случаев представ ляют собой семейный синдром, связанный с генетическими дефектами [3, 4, -Ч 7, 25, 40, 41, 94, 104, 105, 109, 125, 157].
В основе этого заболевания лежит повышенная активация Т-клеток. Иными словами, инициация иммунного ответа протекает на фоне измененной дифференцировки Т-хелперов [5, 105]. Лабораторные исследования показали, что атопические иммунные реакции осуществляются прежде всего Т2 [269]. Так, при воздействии аллергена домашних клещей in vitro лимфоциты больных атопическим дерматитом продуцируют ИЛ-4, тогда как лимфоциты здоровых доноров - у-интерферон [186, 236]. Последний продуцируется только ТІ-клетками, но ингибирует Т2-клетки и, следовательно, стимуляцию В-клеток ИЛ-4 [152, 153]. Состояние повышенной экспрессии ИЛ-4 приводит к инфильтрации дермы Т-2 клетками, повышенной продукции IgE к определенному аллергену [208, 230, 235, 263], пролиферации тучных клеток, аккумуляции эозинофилов, экспрессии FcErll на КЛ и эозинофилах [137, 139, 206, 215, 216]. Взаимодействие IgE с КЛ посредством рецепторов Fcr II или Fcr I при АтД вызывает значительное раздражение [127, 217, 274]. Взаимодействие IgE с рецепторами тучных клеток приводит к дальнейшему образованию ИЛ-4 и высвобождению медиаторов воспаления [27, 275]. Таким образом, при контакте аллергенов со специфическими IgE , расположенными на по - верхности тучных клеткок и связанными с ними посредством Fc-рецепторов, происходит ряд биохимических реакций, ведущих к выбросу медиаторов воспаления (гистамин, простогландины, тромбоксаны, лейкотриены), и проявлению клинической картины заболевания [47, 87]. В нормальных условиях медиаторы способствуют развитию защитной острой воспалительной реак-ции.
Новые направления лечебно-реабилитационных мероприятий при атопическом дерматите у собак
Энзимы, являются катализаторами биохимических реакций и присутст вуют везде, где протекают такие реакции - в растениях и живых формах - от микробов до человека [8-17, 63, 64]. Это означает их участие в иммунном, от вете на любые воздействия на организм, в функции системы гомеостаза или обеспечении динамического равновесия между коагуляционным и антикоа гуляционным потенциалом; их участие в ограничении реакций местного вос палительного ответа (отек, гиперемия, усиленный синтез простогландинов с развитием болевого синдрома и пр.) и многих других процессах [8, 23, 124].
Огромные возможности открывает использование системной энзимоте рапии при лечении воспалительных заболеваний [21]. Иммуномодулирую-щее действие протеолитических энзимов, включая препараты СЭТ, проявляется в достижении необходимой активности различных клеток, участвующих в иммунологических реакциях, включая сосудистый эндотелий, моноциты -V. макрофаги, тромбоциты, иммунокомпетентные клетки. В результате регулируется иммунный ответ, ограничивается возможность нежелательных имму 31 нологических эффектов, например степени экспрессии адгезивных молекул и силы адгезии клеток [22, 63, 64].
Иммуномодулирующие свойства энзимов проявляются и в их влиянии на продукцию и удаление цитокинов. Цитокины — молекулы из мелких полипептидов, продуцирующиеся, в основном макрофагами, лимфоцитами, клетками РЭС. Цитокины фактически контролируют все процессы иммунитета. Выше было отмечено огромное значение цитокинов в развитии аллергических и воспалительных процессов, сопровождающих АтД [63, 185, 196, 197, 199, 200]. Энзимы индуцируют генерацию ИЛ-1, ИЛ-2, других интерлейки-нов и цитокинов, но также блокируют их чрезмерную генерацию, обеспечивают инактивацию и удаление «опасных» цитокинов из поврежденных областей, вызывающих хронизацию патологического процесса [77, 60, 61, 86, 138, 190, 223, 228, 259].
Часто причиной усиленной генерации цитокинов является наличие в тканях отложений фибрина и ЦИК (антиген-антитело). Они удаляются клетками ретикуло-эндотелиальной системы. В ряде случаев процесс естественного удаления комплексов нарушается или элиминация затруднена в связи с их избыточным количеством. Так как высокие концентрации ЦИК блокируют фагоцитарную реакцию макрофагов, то их разрушение и удаление еще более затрудняется [195, 196, 221, 246]. При участии системы комплемента ЦИК способствуют дальнейшему повреждению тканей и развитию реакции хронического воспаления с постоянным выделением продуктов распада и токсинов. Процесс принимает прогрессирующее хроническое течение с клиникой аутоиммунного заболевания (гломерулонефрит, различные варианты диффузных заболеваний соединительной ткани и др.). Таким образом, роль ЦИК в развитии хронических процессов, к которым относится и АтД, существенна. Энзимы даже в небольших концентрациях способствуют расщеплению и элиминации ЦИК, благодаря чему возобновляется способность моноцитов-макрофагов и других фагоцитов освобождать организм от антител и, следовательно, - от образования новых ЦИК. Расщепление и элиминация ЦИК является основой эффекта СЭТ при хронических (к которым относится АД) и аутоиммунных заболеваниях [86, 199, 120, 181, 237].
Энзимы оказывают модулирующее действие на фагоцитоз: так как гиперактивация фагоцитарной системы приводит к нежелательным эффектам, например потере способности макрофагов к расщеплению иммунных комплексов, то разрушение и удаление ЦИК с помощью СЭТ способствует восстановлению нормального состояния фагоцитарной системы [56, 73]. Кроме того препараты СЭТ способны непосредственно активировать макрофаги [85, 106, 160,201,202,279].
Протеазы способны регулировать адгезивные молекулы - селективным отщеплением молекул CD4 на поверхности Т-лимфоцитов можно снизить порог активации этих клеток и ограничить гиперактивацию воспалительного процесса [172, 256].
Важным свойством протеолитических энзимов является их воздействие на систему гемокоагуляции и в первую очередь - способность растворять отложения фибрина в сосудах, тем самым восстанавливая периферический кровоток, облегчая разрушение тромбов [14, 15, 16, 63, 121, 149, 191, 247].
Доказательством эффективности применения оральных энзимов является нормализация реологических свойств крови. При этом нормализация кровотока достигается не только за счет влияния на сосудистый эндотелий, вязкость крови, гемостаз и фибринолиз, но и за счет восстановления эластичности эритроцитов, улучшения их способности приспосабливаться к условиям капиллярного кровотока. В результате восстанавливается оксигенация тканей [20,41,86, 191].
Одновременное воздействие энзимов на иммунную систему и систему гомеостаза обеспечивает высокий противовоспалительный эффект. Ускорение регресса воспалительного процесса, очевидно связано с противоотечным, анальгетическим действием энзимов, улучшением микроциркуляции. Восстановление микрокровотока облегчает обратное поступление интерстици-альной жидкости в сосудистую систему [164, 204, 210]. Имеет значение лизис белков в очаге воспаления, что препятствует задержке жидкости в полостях и тканях, обеспечивает профилактику спаечного процесса. Протеазы разрушают медиаторы воспаления - серотонин, гистамин, простогландины, брадики-нин и др. Все это совместно с восстановлением кровообращения в очаге воспаления и устранением отека оказывает анальгетическое действие [60, 95, 97]. Энзимы ингибируют дегрануляцию тучных клеток, снижая выделение гистамина, что способствует снижению зуда [6, 55, 90, 112, 98-202, 279]. Регулируя течение воспалительного процесса, оптимизируя его, усиливая собственную защиту организма, энзимы хорошо сочетаются с антибактериальными препаратами [83]. Комбинация СЭТ с антибиотиками способствует повышению концентрации последних в очаге воспаления, что позволяет снижать их суточные и курсовые дозы, а также улучшает процессы репарации [38,48,49,54,55,57,86].
Важным преимуществом СЭТ является ее безопасность и хорошая переносимость. Изучение токсичности «Вобэнзима» (основного представителя СЭТ в таблетированной форме) показало, что средней летальной дозы можно достичь при введении животным только 15 мг/кг препарата в сутки, что сравнимо с ежедневным приемом 600 таблеток на собаку весом 10- кг. Симптомов интоксикации не получено ни при длительном, ни тем более при однократном или повторном приеме препарата. К числу редко встречаемых, но возможных побочных эффектов относят сонливость, диспептические расстройства, аллергические реакции [89]. Не выявлено мутагенного, тератогенного и канцерогенного действия оральных энзимов [60, 62].
Основным препаратом СЭТ в Росии является «Вобэнзим», в состав которого входят панкреатин, папаин, бромелайн, липаза, амилаза, трипсин, хи-мотрипсин и рутозид.
Так как энзимы являются макромолекулами, резорбции в кишечнике подвергается лишь небольшая их часть. Показано, что из кишечника резор-бируется только 26% трипсина, 14% химотрипсина, 18% панкреатина, 6% папаина. Поэтому для достижения необходимой дозы энзимов на разовый прием назначают 1 таблетка на 5-10 кг массы животного [85]. Возможность абсорбции макромолекул энзимов через кишечник была доказана после выполнения цикла серьезных исследований, посвященных гистологической структуре и функции кишечного эпителия [36, 165]. Установлено, что макромолекулы ферментов связываются в кишечнике с антипротеазой а2-макроглобулином и в таком виде проходят через кишечный барьер к месту их воздействия [16, 35, 118, 199, 200, 213, 214].
Энзимы, содержащиеся в препаратах СЭТ, как и другие высокомолекулярные комплексы, дольше задерживаются и накапливаются в опухолях, областях ран, воспаления и тромбоза, что связано с гиперваскуляризацией этих участков за счет активного ангиогенеза, замедления кровотока, повышения сосудистой проницаемости и менее выраженного, чем в здоровых тканях, развития лимфатической системы [16, 107, 209, 221].
Таким образом, несмотря на достаточное внимание исследователей к теме атопического дерматита у собак, многое остается неизученным: недостаточно исследованы иммунологичесике аспекты заболевания, не изучена активность фагоцитов при данной проблеме, количественные изменения некоторых цитокинов и субпопуляций лейкоцитов. Кроме того, выявление иммунодефицита при атопическом дерматите послужило основанием для его дифференцированной коррекции с помощью различных химиотерапевтиче-ских препаратов. Между тем лечение традиционными методами может привести к снижению иммунорегуляторных субпопуляций и стойкому угнетению функциональной активности лимфоцитов. Необходим рациональный иммунологический контроль за лечением по принципу восстановления иммунного гомеостаза. Для нормализации иммунного ответа применялись различные препараты: у-интерферон, циклоспорин, миелопид и другие [74]. Для лечения больных атопическим дерматитом людей препататы СЭТ используются относительно давно, особенно у детей [28, 29, 30, 33, 39, 51, 52, 95]. Препараты СЭТ для лечения собак с различными патологиями стали применять относительно недавно [80].
Результаты исследований гематологических показателей у собак при осложненном атопическом дерматите
Клинико-гематологические показатели гомеостаза больных собак за период опыта отражены в таблицах 2.10. и 2.11.
В ходе исследований установили, что практически у 100% больных ато-пическим дерматитом собак на момент исследования наблюдалось повышение температуры тела до 39,1 и 39,2 С. Возникновение такой субфебрильной температуры напрямую связано с воспалительными процессами в коже, хотя при ректальном измерении температуры некоторые животные ведут себя беспокойно, что также ведет к небольшому временному ее повышению.
Пульс и частота дыхательных движений в минуту были также повышены (пульс до 118-120 ударов в минуту (на 7-8% по сравнению со здоровыми собаками), частота дыхательных движений до 45,1 в минуту (увеличение на 20 — 27% по сравнению с контролем)), что, на наш взгляд, связано как с субфебрилитетом, так и со стрессовым состоянием животного при осмотре.
По результатам общего анализа крови обнаружены следующие нарушения: лейкоцитоз до 17,5хЮ9/л при норме 7-12 109/л (увеличение на 103 -108% по сравнению с контролем), снижение количества гемоглобина до 101,1 и 99,7 г/л при норме 130-190 г/л (снижение на 28-29% по отношеню к контролю), незначительная эритропения, повышение СОЭ до 10,1 мм/ч при норме 1-5 мм/ч (в 1,8-2,1 раза). При исследовании лейкограммы выявлены: ярко выраженная лимфоцитопения (снижение количества лимфоцитов с 55,5 (в контроле) до 21,1%, т. е. уменьшение на 58 - 62% по сравнению со здоровыми собаками), сдвиг лейкоцитарной формулы влево (увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов до 26,1% при норме 1-6% (в 6,8-7,1 раза в сравнении с интактными животными), снижение количества сегментоядер-ных нейтрофилов до 33,9 при норме 50-72% (в 1,5 раза в сравнении с интактными животными), эозинофилия (количество эозинофилов повышено до 12.5 при норме 2-6%, т. е в 2-6 раз), моноцитоз (увеличение количества моноцитов до 8,3 при норме 0-6, т. е. в 1,3-8 раз).
Все это свидетельствуют о наличии в организме больных собак хронических воспалительных процессов, в том числе возникших на фоне контаминации бактериальной микрофлорой, аллергической настроенности организма, анемии, а также явлений интоксикации и развитии иммунодефицита.
Известно, что широкое распространение атопических заболеваний, первичных и вторичных иммунодефицитных состояний во многом обусловлено нарушением регуляторных механизмов иммунной системы организма. Можно выделить по крайней мере несколько основных причин, которые лежат в основе иммунологических нарушений: воздействие антропогенных неблагоприятных экологических факторов, широкое и порой неоправданное применение антибиотиков, глюкокортикостероидных препаратов (ГКС), которое приводит к снижению иммунного ответа.
Анализ современного течения атопии за последние несколько лет показал, что у больных АтД редко встречаются «чистые» их формы, отмечается раннее присоединение бактериального и грибкового дерматита, дисбактериоза, пиодермии, что указывает на снижение устойчивости к инфекции. Эта группа, по моим данным, составляет более 50% от общей популяции больных АтД собак. Частые обострения хронической бактериальной, вирусной, грибковой инфекции приводят к более тяжелому течению АтД, формированию вторичной иммунной недостаточности (ВИН), а многократные курсы анти-биотикотерапии и ГКС препаратов не только не препятствуют прогрессиро-ванию АтД, но и усиливают агрессивность ВИН. Так как препараты СЭТ обладают иммуномодулирующим действием, снижают сроки применения антибиотиков, уменьшают побочное действие антибиотико- и гормонотерапии и сокращают сроки лечения, они идеально подходят для комплексного лечения АтД.
Из данных, представленных в таблице 2.10 видно, как нормализуются показатели температуры, пульса, дыхания по мере лечения. Уже через 2-е недели лечения температура нормализовалась в обеих группах животных, частота пульса и дыхания приблизилась к норме. Скорость нормализации показателей общего анализа крови (табл. 2.11) в 1-ой и 2-ой группе собак была разной. Как видно из таблицы, количество лейкоцитов через 2-е недели после начала лечения составляло около 13,6x10/л в 1 группе и 12Дх109/л во второй (т.е. уменьшение количества лейкоцитов на 20% в 1-ой группе и на 30% во второй по сравнению с исходными данными). Через месяц показатель составил 11.4хЮ9/л и 9,3х109/л соответственно в 1-ой и 2-ой группах (уменьшение количества лейкоцитов на 35%) и 46% по сравнению с исходными данными). Приблизительно такая же ситуация наблюдалась и с другими показателями общего анализа крови: увеличение гемоглобина через 2-е недели после начала лечения составило 20% в 1-ой группе и 35% во второй по сравнению с изначальными данными (соответственно стал 120,7 и 135 г/л), через 1,5 месяца после начала лечения гемоглобин повысился на 25% в 1-ой группе и на 40%) во второй (соответственно стал 125,2 и 140,1 г/л). Количество лимфоцитов увеличилось через 2-е недели после начала лечения на 33% и 75% соответственно в 1-ой и 2-ой группе собак, через 1,5 месяца после начала лече 68 ния увеличение наблюдалось на 80% и 150% соответственно в 1-ой и 2-ой группах. Тоже самое наблюдается и с другими исследованными показателями: палочкоядерные нейтрофилы уменьшились на 22% и 45% через 2 недели, на 40% и 84%) через 1,5 месяца, эозинофилы уменьшились на 40%) и 58% через 2 недели, на 75% и 85% через 1,5 месяца. Приблизительно такие же процентные соотношения наблюдаются при уменьшении моноцитов (на 4% и 0%; 32% и 33%) и СОЭ (на 12% и 27%; 15% и 68%).
Установили, что нормализация показателей общего анализа крови после проведенного курса лечения происходит существенно быстрее у собак 2-ой группы, получающей «Вобэнзим», чем у собак 1-ой группы (на 10-50% через 2-е недели (в среднем на 22%), и на 10-70% через. 1,5 месяца (в среднем на 33%)), что подтверждает высокую эффективность препаратов системной эн-зимотерапии при атопическом дерматите.
Изменения биохимических показателей крови больных собак отражены в таблице 2.12.
Биохимический статус у собак, больных АтД, определялся по основным показателям белкового, углеводного обмена, по активности ряда сывороточных ферментов (АсТ, АлТ, амилаза).
Как видно из материалов таблицы 2.12 , у собак, больных осложненными формами АтД, обнаруживался ряд существенных ферментативно-обменных нарушений, вносящих определенный вклад в патогенез АтД. В частности, у них определялся достаточно низкий уровень белка (приблизительно на 11% по сравнению со здоровыми животными), снижение глюкозы (в среднем на 25%) по сравнению с контролем), повышение ЩФ (примерно на 52% по отношению к контролю), ферментов АсТ (приблизительно на 45%), АлТ (на 36%)) и амилазы (на 10% также по отношению к здоровым). Показатели работы почек (мочевина и креатинин) находились в норме.
Динамика циркулирующих иммунных комплексов в крови с собак, больных осложненным атопическим дерматитом
Установлено, что у больных АтД длительная и стойкая персистенция циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), образованных низкоавидны-ми антителами, ведет к сенсибилизации организма и дисфункции Т-хелперов. Небольшие количества ЦИК стимулируют процесс фагоцитоза, но при излишнем их количестве возникает обратная реакция, т.е. снижение как коли -чества фагоцитирующих клеток, так и их функциональных способностей. На этом фоне провоцируется развитие вторичной иммунной недостаточности, снижение резистентности организма к микроорганизмам (бактериям, грибкам, вирусам), что ведет к усилению тяжести и хронизации патологического процесса при атопии.
Определяли количество ЦИК методом В. Гашковой в модификации Г.И. Молотилова с использованием коммерческого гамма-глобулина.
В контролируемом эксперименте установили (табл. 2.18 см. выше), что у собак при осложненном атопическом дерматите происходит увеличение количества ЦИК почти на 90% (300 мкг/мл) в сравнении со здоровыми собаками ( 160 мкг/мл). На фоне проведенного лечения у собак 1-ой подопытной группы количество ЦИК уменьшилось на 10% по сравнению с исходным, а у собак 2-ой группы - на 95%.
Подтвердили, что препараты СЭТ связывают циркулирующие иммунные комплексы в крови больных собак и способствуют выведению их из организма за счет своей ферментной природы. Лечение атопического дерматита с использованием препаратов СЭТ на 85% эффективнее по сравнению с традиционной схемой лечения.
Благодаря этому стимулируется работа фагоцитов, уменьшается хрони-зация патологического процесса, снижается сенсибилизация организма, нормализуется работа Т-хелперов, и, как следствие, снижается проявление вторичной иммунной недостаточности больных атопическим дерматитом собак.
Атопический дерматит — генетически обусловленное аллергическое воспалительное заболевание кожи, характеризующееся тяжестью клинического течения, частой хронизацией и чрезвычайной сложностью лечения.
Изучили клинические особенности атопического дерматита у собак. Они характеризуются навязчивым зудом и преимущественным поражением кожи в области межпальцевых промежутков, внутренней поверхности ушей, подмышечной и паховой зоне, подбородка, шеи и др. Для атопического дерматита собак характерны лихенификация, гиперпигментация, частичная алопеция и изменение цвета шерсти в результате постоянного вылизывания собакой зудящей кожи: изменение цвета белой шерсти на рыжую, а черной - на красноватую (чаще в межпальцевых промежутках).
Описанная клиническая картина совпадает с ранее полученными данными зарубежных ученых [74, 113, 179]. Установлено, что часто у больных собак наблюдается отит (в 78%), хейлит (в 50% случаев), конъюнктивит (60%) и дисбактериоз (в 70% случаев), о чем также сообщалось в работе Т. Olivry в 2003 году и Ф. Детиу в 2006 году. Кроме того, выяснено, что в большинстве случаев к первоначальному дерматиту присоединяется вторичная микрофлора (бактерии, грибки), что характеризуется клиническими проявлениями (пустулами, воспаленными царапинами, перхотью, струпьями) и бактериологическими исследованиями. Чаще всего при исследованиях пораженных участков кожи обнаруживали из бактерий Staphilococcus aureus (в 90% случаев), из грибков - Malassezia spp (также в 90% случаев). Присоединение вторичной микрофлоры ведет к усугублению патологического процесса, хронизации его и возникновению вторичной иммунной недостаточности, что подтвердилось иммунологическими исследованиями. Эти данные согласуются с мнением многих ученых [24, 74, 180, 203].
Подтверждено, что АтД возникает чаще всего у молодых собак и существует породная предрасположенность к данному заболеванию (согласуется с [113, 215, 232]). Чаще болеют атопическим дерматитом следующие породы собак: вест-хайленд уайт терьер, шар-пей, мопс, французский бульдог, лабрадор ретривер, английский бульдог, американский стафордширский терьер.
Установлено, что иммунопатогенез данного заболевания сложен, он сочетает в себе угнетение клеточного иммунитета и активацию клеточно-опосредованной аллергической реактивности. Важнейшим звеном иммунной дисфункции при АтД является Т-клеточный иммунитет. Дефект клеточного иммунитета проявляется на всех уровнях: количественном (снижением числа зрелых Т-клеток в среднем на 30%) и функциональном (нарушение продукции интерлейкинов - ИЛ и клеточно-опосредованных реакций). Наблюдается увеличение числа Т-хелперов и их дисфункция, проявляющаяся в увеличении вырабатываемых ими цитокинов (ИЛ-4 на 50%, ИЛ-6 на 6%) и в снижении интерферонов в среднем на 50%, что ведет к усилению аллергических процессов в коже и снижению иммунитета. Со стороны Т-супрессоров наблюдается их уменьшение и снижение активности, что в свою очередь связано с нарушением регуляции антителообразования. Также при АтД повышается функциональная активность и количество В-лимфоцитов, что выражается гиперпродукцией IgE, ответственного за проявление аллергических реакций: зуда, гиперемии и воспаления. Кроме того, при АтД увеличено количество IgG и IgM. При присоединении к дерматозу вторичной флоры существенно снижается функциональная активность фагоцитов приблизительно на 40%, что также способствует снижению иммунитета, усугубляющему патологический процесс. Другой важный показатель нарушения иммунитета - увеличение количества иммунных комплексов в сыворотке крови при АтД приблизительно на 85%, что также вызывает снижение активности фагоцитов, дополнительно провоцирующее развитие вторичной иммунной недостаточности. Перечисленные изученные данные согласуются с работами многих ученых [130, 131, 189].
