Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ. В последние годы сформировано представление о новом классе пептидных регуляторов - цитомединах ( Морозов В.Г.,Хазинсон В.Х. 1979-! 996). Авторы данноі'і концепции предполагают, что цитомедины осуществляют перенос биологической информации между клетками различных популяций, входящих в состав любого органа. Главная их функция заключается в регуляции генетического гомеостази и- защитных механизмов, таких как иммунитет, неспецифпческая резистентность, гемостаз, репаративные, адаптационные процессы и другие (Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1979-1994; Кузник Б.И. и соавг.,1981-1996).
В отличии от известных регуляторных систем, пептидные регуляторы обладают тканевой специфичностью и нормализуют функцию тех органов, из которых они были получены. В связи с широкой распространенностью патологии кровообращения, особый интерес вызывают цитомедины, выделенные из органов сердечно-сосудистой системы.
В литературе существуют данные о коррегирующем влиянии кордиалина на отдельные функции сердечнососудистой системы (Слепушкин В.Д. 1988-1991; Андреева Л.И.,1988-1994). Однако до сих пор не изучено его действие на иммунитет, гемостаз и неспецифнческую резистентность. Подобные исследования являются актуальными, так как при атеро-" склеротическом поражении сердца и миокардитах различной этиологии угнетается иммунная система, падает неспецифическая резистентность, наступают глубокие изменения в системе гемостаза с развитием ДВС-синдрома (Климов А.Н., Нагорнев В.А., 1986-1996; Балуда В.П., 1983-1992). В связи с этим изучение действия кордиалина на иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность огранизма является необходимым и представляет интерес как в теоретическом, так и в практическом отношении.
Более ранними исследованиями, посвященными действию ткаиеспецифических пептидов на систему комплемента, выявлено ингибируюшие влияние кордиалина на классический путь активации комплемента. (Кузник Б.И.,Ложкина А.Н., 1988). Из многих исследованных цитомединов пептидный препарат из сердца
обладает наиболее выраженным антикомплементгым действием. Эти данные открывают перспективу выделения чистого ингибитора системы комплемента из кордиалина.
Целью нашего исследования явилось изучение действия кордиалина на иммунитет, гемостаз и неспецифическуто резистентность организма с приоритетным исследованием молекулярных механизмов его влияния на систему комплемента. Поставленная цель определила следующие задачи:
-
Исследовать влияние кордиалина на иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность организма у больных ише-мическсй болезнью сердца и здоровых людей in vitro.
-
Изучить молекулярные механизмы действия пептидного препарата сердца на систему комплемента.
-
Провести фракционирование кордиалина с целью выделения фрагментов, ингибирующих активность комплемента.
-
Исследовать влияние полученных очищенных.препаратов нагемостаз, ".ммунитет и неспецифическую резистентность.
Установлено, что пептидный препарат из сердца практически не влияет на гемостаз здоровых доноров. В крови больных ИБС он снижает повышенную агрегационную активность тромбоцитов, уменьшает количесто адгезирующих кровяных пластинок, тормозит образование протромбиназы по внешнему и внутреннему путям и стимулирует фибринолитическую активность крови.
Пептидный препарат из сердца обладает иммуномодули-рующим действием. В опытах in vitro он не оказывает влияния на иммуннокомпетентные клетки здоровых доноров, но при иммунизации животных стимулирует антителообразование. У больных ИБС кордиалин уменьшает экспрессию рецепторов Т-хелперов и В-лимфоцитов и.повышает её на Т-супрессорах.
Кордиалин стимулирует кислородзависимые и кислород-независимые процессы в нейтрофилах периферической крови, повышает их фагоцитарную активность.
Кордиалин оказывает дозозависимое действие на систему комплемента, в дозе до 20 мкг/мл стимулирует активацию классического пути комплемента, более высокие концентрации препарата оказывают выраженный ингибирующий эффект. В сыворотке сольных ИБС кордиалин однонаправленно ингибн-рует активацию комплемента. Ингибирующий эффект проявляется в системе агрегированных IgG и связан с блокированием Си: доменаIgG.
Выделенная комплементрегулирующая фракция обладает иммунномодулирующей и коагуологической активностью кор-диалнна. В её состав входят стимулирующие и ингибирующие комплементарный гемолиз соединения.
Получен ингибитор системы комплемента, препятствующий связыванию Clq субкомпонента первого компонента комплемента с иммунным комплексом, предотвращая активацию комплемента по классическому пути. Подобный тип ингибнро-вання системы компемента полнпептидом, выделенным из эндогенного регулятора, описан впервые.
Установлено, что в крови больных ИБС кордиалин удлиняет время свертывания крови, усиливает фибринолиз, оказывает антиагрегашюнный и антиадгезивный эффект, уменьшает количество В-лимфоцитов и Т-хелперов, активирует Т-супрессоры , стимулирует фагоцитарную активность in vitro. Сочетание имму-нокоррегирующего и антикомштементного действия препарата с улучшением микроциркуляции и нормализации гемостаза может найти широкое применение в кардиологической практике.
Разработан оригинальный метод выделения эффекторов Clq аффинной хроматографией на IgG-стекле.
Выделена фракция кордпалина, обладающая комплемент-ной, иммуномодулирующей и коагулогической активностью. Этот компонент препарата может служить основой для синтеза соединений целенаправленного действия на иммунитет, гемостаз и систему комплемента.
Получен регулятор системы комплемента, ингибирующий связывание Clq субкомпонента с IgG в составе иммунного комплекс.
Данные диссертации внедрены в учгбный процесс кафедры нормальной физиологии Читинской медицинской академій!.
-
Пептидный препарат сердца в опытах in vitro не влияет на иммунитет и гемостаз здоровых людей. В крови больных ИБС кордиалин снижает агрегационную активность тромбоцитов, их адгезию, обладает гипокоагуляцнонным эффектом, усиливает фибрнкслиз, уменьшает .экспрессию рецепторов Т-хелперов и В-лим-фоцнтов, активирует Т-супрессоры, стимулирует фагоцитарную активность, кислородзависимые и кпелороднезависимые процессы нейтрофилов, ингибирует классический путь активации комплемента. Введение препарата здоровым мышам на фоне сенсибилизации к чужеродному, агенту стимулирует антителооб-разование.
-
На классический путь активации комплемента кордиалин оказывает дозозависимый эффект: р. дозе до 20 мкг/мл усиливает активность комплемента, увеличение концентрации приводит к ингибирующему эффекту. Пептидный препарат из сердца ингибирует,связывание Clq субкомпонента с Сш-доменом IgG в составе иммунного комплекса.(Ю= 2,84+0,3 мгк/мл). Подобный тип ингибирования системы комплемента препаратом эндогенной природы описан впервые.
,3. Методом аффинной хроматографии на IgG-стекле из
кордиалина получена фракция, оказывающая противоположные
эффекты на связывание и активацию Clq с иммунным комплек
сом. Полученный фрагмент обладает иммуномодулирующцмн
свойствами кордиалина. \ ,
4.Выделен регулятор системы комплемента, препятствующий связыванию Clq субкомпонента с агрегированным IgG. Данный полипептид ингибирует активацию системы комплемента в условиях образования иммунных комплексов.
і .
Материалы исследований доложены на научной конференции молодых ученых и студентов ЧГМА (1995), Всероссийской научной конференции "Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники" (Чита, 1995, 1996), 2
въезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск. 1995), 1 региональной конференции "Сохранение биологического разнообразия в байкальском регионе: проблемы, подходы, практика" (Улан-Удэ, 1996), Международной конференции по иммун-нореабилитации (Турция, 1996), 1 Всероссийском конгрессе пато физиологов (Москва, 1996), Международном симпозиуме "Геронтологи ческие аспекты пептидной регуляции функций организма" (Санкт-Петербург, 1996). По материалам диссертации опубликовано 13 научных работ.
ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.
Работа изложена на 164 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы.трёх глав собственных результатов, обсуждения полученных данных, выводов и указателя литературы, включающего 125 отечественных и 129 зарубежных источников. Текст иллюстрирован 19 таблицами и 15 рисунками.
