Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Физические методы лечения и естественная резистентность организма (обзор литературы) 9-25
Глава 2. Клиническая характеристика больных, материалы и методы исследований 26-27
2.1. Методы определения иммунокомпетентных клеток . 27-29
2.2. Оценка лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии 29-29
2.3. Определение уровня иммуноглобулинов 29-29
2.4. Определение концентрации цитокинов 29-30
2.5. Определение экспрессии тканевого фактора 30- 31
2.6. Исследование агрегационной функции тромбоцитов . 31-31
2.7. Определение содержания оксида азота 32-33
2.8. Статистическая обработка материала 33-33
Глава 3. Влияние пелоидотерапии на состояние защитных систем организма 34-37
3.1. Влияние пелоидотерапии на состав популяций и субпопуляций лимфоцитов 37-38
3.2. Влияние пелоидотерапии на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию 38-46
3.3. Влияние пелоидотерапии на экспрессию тканевого фактора моноцитами периферической крови 46-50
3.4. Влияние пелоидотерапии на агрегацию тромбоцитов 50-64
3.5. Влияние пелоидотерапии на продукцию оксида азота 64-65
3.6. Влияние пелоидотерапии на продукцию цитокинов 66 - 69
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 70 - 85
Выводы 86 - 86
Практические рекомендации 87 - 87
Список использованной литературы 88 - 106
- Методы определения иммунокомпетентных клеток
- Влияние пелоидотерапии на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию
- Влияние пелоидотерапии на экспрессию тканевого фактора моноцитами периферической крови
- Влияние пелоидотерапии на продукцию цитокинов
Введение к работе
Проблема заболеваний позвоночника, в том числе остеохондроза,
постоянно находится в центре внимания специалистов, занимающихся
невропатологией, нейрохирургией, ортопедией, внутренними болезнями,
физиотерапией, мануальной терапией, реабилитологией, что обусловлено
ее высокой медико-биологической и социальной значимостью (Кузнецов
В.Ф., 2000). По данным Н.В. Торопцева и соавт. (1995) на долю
вертеброгенных заболеваний нервной системы приходится свыше
половины всей неврологической заболеваемости с временной утратой
нетрудоспособности. Физиотерапевтические методы для лечения и
реабилитации больных остеохондрозом являются наиболее
востребованными. Их положительный эффект обусловлен сложным
влиянием на организм человека, сопровождающимся значительными
изменениями метаболизма, нейрогуморальной регуляции,
функционального состояния различных органов и систем (Улащик В. С, 1994; Ходарев СВ. и соавт., 2001; Hoshi A. et al., 2001).
Среди естественных физических лечебных факторов,
применяемых при остеохондрозе, широко применяются пелоиды. Однако до сих пор в большинстве случаев отсутствуют глубокие знания в понимании тонких механизмов влияния пелоидотерапии на организм человека, в связи с чем, нет достаточно четких критериев для их назначения и контроля эффективности лечения. Поскольку в настоящее время большое внимание уделяется физиотерапевтической реабилитации больных при различных заболеваниях, в патогенезе которых ведущую роль играют защитные механизмы, то исследование реакций иммунитета, гемостаза, неспецифической резистентности организма под влиянием пелоидотерапии у больных остеохондрозом является важной проблемой. Одновременно решение этого вопроса позволило бы определить
эффективные дозы действия не только лечебной грязи, но и других физиотерапевтических факторов, влияющих на защитные функции организма при многих патологических состояниях (Беличенко Т.А., Паненко А.В., 2000; Khoor A. et al., 2001; Gambichler Т. et al., 2000; de Rie M.A. et al., 1998; Fang J.Q. et al., 1999). Однако до сих пор не предложены надежные лабораторные тесты естественной резистентности организма, отличающиеся высокой информативностью и позволяющие своевременно оценить эффективность и достаточность проводимой физиотерапии. В связи с этим поиск методов контроля за проводимой пелоидотерапией у больных остеохондрозом является актуальным в теоретическом и практическом отношениях.
Цель и задачи исследования
Основной целью исследования являлось изучение влияния лечебной грязи озера Угдан на реакции иммунитета и гемостаза в процессе лечения больных остеохондрозом.
В связи со сказанным нами решались следующие задачи:
1. Изучить влияние пелоидотерапии на состояние защитных функций
организма (иммунитет и гемостаз) в процессе реабилитации больных
остеохондрозом.
2. Проследить реакции иммунитета и гемостаза в зависимости от возраста
пациента и количества физиотерапевтических процедур при
остеохондрозе.
3. Подобрать тесты, отличающиеся высокой информативностью и
позволяющие своевременно оценить эффективность и достаточность
проводимой физиотерапии у больных остеохондрозом.
Научная новизна 1. Впервые для контроля эффективности и оценки достаточности объема и кратности пелоидотерапии у больных остеохондрозом использованы функциональные тесты лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии,
экспрессии тканевого фактора, продукции провоспалительных цитокинов ИЛ-ір и ФНОос и комплексно исследованы системы иммунитета и гемостаза. 2. Впервые показано, что использование лечебной грязи озера Угдан (Читинская область) у больных остеохондрозом снижает число цитотоксических клеток с поверхностными маркерами CD8+, стимулирует способность Т-лимфоцитов адгезировать на своей поверхности тромбоциты, повышает уровень IgA и снижает агрегационную функцию тромбоцитов. У людей старшего возраста при продолжительном лечении (более 5 сеансов) пелоидотерапия повышает продукцию провоспалительных цитокинов - ИЛ-1р и ФНОа, оксида азота, экспрессию тканевого фактора и усиливает агрегацию тромбоцитов.
Теоретическая и практическая значимость работы Установлено, что пелоидотерапия вызывает различные изменения иммунитета и гемостаза у больных остеохондрозом в зависимости от возраста. Для контроля эффективности и оценки достаточности объема и кратности назначения пелоидотерапии предложены функциональные тесты лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, экспрессии тканевого фактора, продукции провоспалительных цитокинов ИЛ-1(3 и ФНОа. Проведенные исследования позволили обосновать эффективность и дозирование физиопроцедур у лиц разного возраста.
Внедрение в практику Результаты работы включены в отчет за 2003 год по Федеральной программе "Мониторирование здоровья и методы реабилитации старшего поколения населения России" внедрены в лечебную практику Областной больницы восстановительного лечения № 5 Читинской области и использованы в учебном процессе на кафедрах нормальной физиологии с
курсом клинической физиологии, патологической физиологии Читинской государственной медицинской академии.
Апробация диссертации Материалы работы представлены на Международной конференции "Проблемы прогнозирования в современном мире" (Чита, 1999), на XIX научно-практической конференции врачей СибВО (Чита, 1999), на научно-практической конференции, посвященной Дню медицинского работника (Чита, 2001), международной научно-практической конференции "Технические науки, технология и экономика" (Чита, 2001); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 50-летию образования ЧГМА (Чита, 2003), Международном конгрессе "Здравница -2003", (Кисловодск, 2003), на XIX Конгрессе международного общества по тромбозу и гемостазу (ISTH) (Birmingham, 2003), на международном конгрессе по клинической иммунологии (Paris, 2003), межрегиональной научно-практической конференции "Народы Забайкалья: межкультурный диалог (Чита, 2003).
Положения, выносимые на защиту
1. Лечение сульфидной грязью озера Угдан у больных остеохондрозом
уменьшает агрегационную функцию тромбоцитов, оказывает влияние на
клеточное звено иммунитета, снижая число цитотоксических клеток с
поверхностными маркерами CD8+, повышая способность Т-лимфоцитов
адгезировать на своей поверхности тромбоциты, увеличивает уровень
IgA..
2. У людей старшего возраста при продолжительном лечении
остеохондроза (более 5 сеансов) пелоидотерапия повышает продукцию
провоспалительных цитокинов - ИЛ-ір и ФНОа, оксида азота,
экспрессию тканевого фактора моноцитами крови и усиливает агрегацию
тромбоцитов.
Методы определения иммунокомпетентных клеток
Подсчет общего числа лейкоцитов проводили стандартным методом в камере Горяева. Мазки крови фиксировали метанолом в течение 10 мин и окрашивали по Романовскому-Гимза. Подсчет клеток крови осуществляли под иммерсионным объективом х90, окуляр ХІ5.
Для получения общего пула лимфоцитов свежую гепаринизированную кровь человека, разбавленную в 2 раза средой 199 наслаивали на урографин-фикол (плотность 1,077) и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 40 минут. После центрифугирования интерфазное кольцо, содержащее лимфоциты, забирали пастеровской пипеткой. Полученную клеточную взвесь трижды отмывали средой 199 и готовили взвесь лимфоцитов. Для получения общего пула лимфоцитов свежую гепаринизированную кровь человека, разбавленную в 2 раза средой 199 наслаивали на урографин-фикол (плотность 1,077) и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 40 минут. После центрифугирования интерфазное кольцо, содержащее лимфоциты, забирали пастеровской пипеткой. Полученную клеточную взвесь трижды отмывали средой 199 и готовили взвесь лимфоцитов нужной концентрации, в зависимости от поставленной цели.
Субпопуляции лимфоцитов определяли методом непрямой поверхностной иммунофлуоресценции (Барышников А.Ю., 1990). Для постановки этой реакции в центрифужную стеклянную пробирку вносили 500000 лимфоцитов, выделенных в градиенте фиколл-верографин, в объеме 30 мкл раствора Хенкса, к ним добавляли 20 мкл готового коммерческого раствора моноклонального антитела (ТОО "МедБиоСпектр", Москва) осторожно перемешивали и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. После инкубации к лимфоцитам добавляли 1 мл раствора Хенкса, перемешивали легким покачиванием пробирки и центрифугировали 2-3 минуты при 1200 об./мин. Надосадочную жидкость осторожно сливали, а оставшиеся капли среды убирали фильтровальными полосками. В пробирку к отмытым клеткам вносили 20 мкл вторых (антимышиных) антител, меченных ФИТЦ (FITC anti Mi), осторожно перемешивали и помещали в рефрижератор при t = 4С на 30 мин. После реакции лимфоциты дважды отмывали раствором Хенкса и к осадку клеток добавляли 50 мкл того же раствора, их ресуспендировали легким покачиванием пробирки. Суспензию клеток переносили в лунки парафилма на сухое предметное стекло, предварительно обработанное в 0,005% растворе poly-L-lysine (Sigma), и инкубировали там в течение 20 мин при комнатной температуре. После адгезии клеток к стеклу, осторожно полосками фильтровальной бумаги убирали среду и вносили по 20 мкл 50% -го раствора глицерина. При люминесцентной микроскопии использовали объектив микроскопа х90, окуляр х10. Оценку реакции осуществляли по проценту светящихся клеток.
Определение показателя лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, относящегося к функциональным тестам оценки иммунокомпетенных клеток, проводили по методу, предложенному Ю.А.Витковским и соавт. (1999). Свежую гепаринизированную кровь обследуемых больных наслаивали на градиент урографин-фикол (плотность 1,077) и выделяли лимфоциты как описано выше. Собирали интерфазное кольцо, содержащие клетки и кровяные пластинки, однократно промывали фосфатно-солевым буфером (рН 7,4) и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 3-4 мин. Надосадочную жидкость сливали, осадок микроскопировали в камере Горяева. Подсчитывали число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов на 100 клеток.
Иммуноглобулины классов А, М, G у больных людей определяли методом радиальной иммунодиффузии (Манчини G.,1965). В качестве образца для сравнения использовали стандартные сыворотки с известным содержанием иммуноглобулинов.
Для определения концентрации цитокинов (ИЛ-1(3, ФНОа) использовали наборы реагентов ТОО "Цитокин" (г.Санкт-Петербург).змерение уровня цитокинов проводили методом твердофазного ИФА с помощью двойных антител и применением пероксидазы хрена (КФ 1.11.1.7). Один тип моноклональных антител против цитокинов иммобилизировали на внутренних поверхностях ячеек планшетов для микротитрования. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитопу молекул цитокинов применялся в виде конъюгата с биотином. Индикаторным компонентом реакции являлся конъюгат пероксидазы хрена со стрептавидином, имеющим высокое сродство к биотину. После стандартного режима инкубации образцов сыворотки или плазмы с МонАТ, и последующих промывок в лунки микропланшета вносили конъюгат пероксидазы со стрептавидином, вновь инкубировали, и добавляли субстрат с реагентом цветной реакции (3-диметиламинобензоат). После развития окраски измеряли активность связанной пероксидазы с использованием фотометра для микропланшета с длиной волны 450 нм (Friemel Н, 1987; Ngo Т.Т., Lenhoff Н.М., 1988).
В качестве стандарта для сравнения в каждой реакции служили рекомбинантные ИЛ-1(3, ФНОос входящие в состав набора. По данным титрования стандартных образцов строили калибровочные графики для каждого из цитокинов, по которым определяли концентрацию ИЛ-ір, ФНОос в опытных образцах сыворотки или плазмы.
Влияние пелоидотерапии на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию
Установлено, что существенных различий лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у пациентов различных возрастных групп после 5 процедур пелоидотерапии не наблюдается (табл. 3.1). Однако после 10 процедур у пациентов в возрасте 16 - 19 лет число лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов возросло от 15,2 ± 1,2% до 21,3 ± 1,8% (р 0,05), а у лиц в возрасте 20 - 49 лет - с 13,8 ± 1,3% до 23,4 ± 2,1 % (р 0,05). В этот же период у пациентов старшей возрастной группы достоверных сдвигов этого показателя не обнаружено.
Таким образом, аппликации грязи у пациентов в молодом и среднем возрасте повышают функциональную активность Т-лимфоцитов. У пожилых людей пелоидотерапия не оказывает заметного влияния на способность лимфоцитов адгезировать на своей поверхности тромбоциты.Изветсно, что тканевой фактор является главным физиологическим инициатором гемокоагуляции. Он представляет собой трансмембранный гликопротеин, который одновременно является поверхностным клеточным рецептором и кофактором плазменного фактора свертывания VII. Активация проферментно-ферментного каскада свертывания крови с участием тканевого фактора приводит к образованию тромбина, активации тромбоцитов, отложению фибрина (Seghatchian M.J., Samama М.М., 1996). Чрезмерная экспрессия тканевого фактора в циркулирующей крови, в основном на поверхности моноцитов, связана с большим риском развития тромбоза при различных заболеваниях (Osterad В., 1996; Seghatchian M.J., Samama М.М., 1996). Кожа человека представляет собой обширную область скопления макрофагов, густую сеть сосудов, где возможна экспрессия тканевого фактора.
В настоящей серии исследований мы изучили экспрессию тканевого фактора лейкоцитами цельной крови у пациентов, получающих пелоидотерапию через 5 и 10 процедур.
Тест осуществляли по методу, предложенному R.A.Santucci et al. (2000), в нашей модификации. С это целью нами проводилась оценка времени коагуляции рекальцифицированной цельной крови после 4-х часовой инкубации в присутствии продигиозана. В качестве контроля служила нестимулированная культура крови. По разности времени коагуляции стимулированной и нестимулированной крови мы судили о степени экспрессии тканевого фактора.
При исследовании экспрессии тканевого фактора моноцитами периферической крови выявлялась следующая картина (табл. 3.3.1). После 5 аппликаций грязи у пожилых людей отмечалось несущественное сокращение разницы времени коагуляции продигиозан-стимулированнои и интактной крови. Однако после 10 процедур пелоидотерапии у пациентов этой группы разница времени свертывания продигиозан-стимулированнои и нестимулированной крови достоверно уменьшилась и составила 16,8 ± 3,1% против 36,1 ± 2,1% в период до лечения (р 0,001). Полученные данные свидетельствуют о высокой экспрессии тканевого фактора моноцитами периферической крови пожилых людей.
Влияние пелоидотерапии на экспрессию тканевого фактора моноцитами периферической крови
Современная физиотерапия обладает большими возможностями применения естественных и искусственно получаемых физических факторов для профилактики и лечения различных болезней. Методы физиотерапии оказывают активное влияние на многие системы организма, стимулируют защитные силы, способствуют ликвидации воспалительных, дистрофических нарушений, совершенствуют адаптационные способности организма (Боенко И.Д., Козлов В.А., Кузник Б.И., 1990). Методы физиотерапии являются неотъемлемой частью лечения и медицинской реабилитации при многих болезнях внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы, кожи и др.
Физиотерапия благодаря ее многообразному действию рассматривается как патогенетическая, стимулирующая, функциональная терапия. Главная ее особенность состоит в том, что энергия физического фактора поглощается тканями, трансформируется в энергию биологических процессов и подкрепляет собственные энергетические ресурсы организма, повышая тем самым его функциональные возможности.
Механизм действия лечебных грязей на организм очень сложен. Имеет место комплексное воздействие температурного, механического и химического факторов. Высокая теплоемкость, низкая теплопроводность, незначительная конвекционная способность, обеспечивают длительное сохранение тепла в грязевой аппликации, постепенную подачу его организму, глубокое проникновение в ткани. Как теплолечебное средство грязь вызывает активную гиперемию не только сосудов кожи, но и глубоко расположенных органов, улучшает крово- и лимфообращение, трофику тканей, повышает обменные процессы. Большую роль в действии грязелечебной процедуры играет химический фактор, некоторые авторы считают его основным (специфическим). Содержащиеся в лечебной грязи химические компоненты (сероводород, соли, гуминовые, гормоноподобные и антибактериальные вещества, ионы растворимых кислот и др.) действуют на многочисленные хеморецепторы кожи. Некоторые из этих биологически активных элементов, проникая через кожу в кровь и лимфу, оказывают гуморальное воздействие (Карачевцева Т.В., Лапина К.В., 1987).
Таким образом, воздействие лечебных грязей на организм основывается на общефизиологических механизмах, включающих рефлекторное влияние с вовлечением нейрогуморальных регуляторных систем, разнообразных метаболических реакций (Боенко И.Д., Козлов В.А., Кузник Б.И., 1990). Химическому и тепловому факторам принадлежит ведущая роль в формировании ответных реакций организма (местных и общих), выраженность которых зависит от от свойств применяемой лечебной грязи, ее температуры, методики лечения, исходного состояния организма.
Грязелечение оказывает благоприятное влияние на функциональное состояние нервной системы, нейрогуморальные процессы, стимулирует иммунологические и адаптационные реакции, уменьшает степень сенсибилизации организма. Лечебной грязи присуще выраженное противовоспалительное действие, в основе которого лежит активирование биоэнергетических и ферментативных процессов, улучшение в системе микроциркуляции. Грязи обладают сорбционными свойствами, инактивируют патогенные организмы на поверхности кожи (Улащик B.C., 1994; Карачевцева Т.В., Лапина К.В., 1987).
Таким образом, грязелечение весьма сильный вид физиотерапии, активно действующий на ряд патогенетических звеньев при многих заболеваниях, вызывающий реакцию различных органов и систем организма. Практически очень важно, чтобы эти реакции не выходили за пределы физиологических норм приспособления организма и колебаниям внешней среды и грязелечение не вызывало бы патологических сдвигов. Здесь все зависит от правильной дозировки процедур.
Результаты исследований позволяют утверждать, что пелоидотерапия обладает мощным биологическим действием. Однако ее эффект зависит от индивидуальных особенностей организма, в частности, от возраста. Нами обнаружено, что иммунная система у пациентов старших возрастных групп менее выражено реагирует на применение лечебной грязи. В то же время у них повышается продукция провоспалительных цитокинов и более сильно экспрессируется тканевой фактор моноцитами крови, который является основным триггером гиперкоагуляции. Это может ухудшить результаты лечения и даже вызвать острые состояния. Эти обстоятельства диктуют необходимость индивидуального подхода к дозированию и сочетанию процедур у людей различных возрастных групп.
Пелоидотерапия оказывает стимулирующее влияние на дыхание и кровообращение, улучшает окислительно-восстановительные процессы и электролитический обмен, обладает противовоспалительным, спазмолитическим и гипосенсибилизирующим действием (Боенко И.Д., Козлов В.А., Кузник Б.И., 1990).
Механизм действия лечебных грязей до конца не изучен, но с уверенностью можно говорить, что во многом он определяется реакцией иммунной системы. При грязелечении у пациентов реагируют лимфоциты и макрофаги кожи на многофакторное раздражение.
В рассматриваемом нами методе лечения ведущая роль принадлежит коже. Кожа, как известно, представляет собой гомеостатическую систему, функционирующую в интересах целого и отвечающую местными изменениями ради поддержания гомеостаза всего организма. Этот механизм отчетливо прослеживается и при действии на организм многих физических факторов. К таким биологически целесообразным защитно-приспособительным реакциям относятся следующие: воспаление, гиперемия, выброс физиологически активных веществ, пигментацию и др. Некоторые из них имеют и самостоятельное значение для действия лечебных физических факторов на организм. Это подтверждает, что в механизме действия физиотерапевтических методов оценку роли кожи, отличающейся тонким реагированием на воздействия внешней среды, надо осуществлять с позиций системного подхода (Улащик B.C., 1994).
Влияние пелоидотерапии на продукцию цитокинов
Однако у пациентов старшего возраста (49 - 70 лет) количество процедур лечебной грязи (более 5) способствовало экспрессии тканевого фактора лейкоцитами периферической крови, что может расцениваться как неблагоприятная реакция, поскольку он является главным физиологическим инициатором гемокоагуляции. Одними из важных индукторов экспрессии тканевого фактора являются провоспалительные цитокины, концентрация которых существенно повышается при развитии многих патологических состояний. Чрезмерная экспрессия тканевого фактора в циркулирующей крови, в основном на поверхности моноцитов, гранулоцитов, а также эндотелием связана с большим риском развития тромбоза при различных заболеваниях (Витковский Ю.А. и соавт., 1997-2001; Oosting J.D. et al., 1991; Osterud В., 1996; Paleolog E.M., 1994; Seghatchian M.J., Samama M.M., 1996; Wharram B.L. et al., 1991). В последние годы в Международном обществе по тромбозу и гемостазу разгорелась дискуссия о способности нейтрофилов экспрессировать тканевой фактор. Ряд исследователей считают, что нейтрофилы способны отвечать экспрессией тканевого фактора под влиянием различных индукторов, в том числе и провоспалительных цитокинов (Nakamura S., Imamura Т., Okamoto К., 2004). Наши исследования показывают, что у лиц пожилого возраста усиливается продукция провоспалительных цитокинов после процедур грязелечения, что способствует нейтрофилам повышать гиперкоагуляцию. Однако другой специалист по исследованию тканевого фактора - В. Osterud (2004) - полностью отрицает возможность гранулоцитов самостоятельно экспрессировать тканевой фактор и утверждает, что такое свойство нейтрофилам сообщают прилипающие к ним тромбоциты. Вполне возможно, что при изучении экспрессии тканевого фактора в цельной крови наблюдаемых пациентов, тканевой фактор экспрессировали только моноциты, как это утверждают в своей методике R.A.Santucci и соавторы (2000). Установлено, что грязелечение повышает уровень оксида азота у пациентов. Сейчас достоверно известно, что NO участвует в регуляции сосудистого тонуса как антагонист адренергической системы. Он ингибирует агрегацию тромбоцитов и их адгезию к сосудистой стенке, тормозит экспрессию тканевого фактора (Клименко О.В., 2002). Эта молекула задействована в таких сложных процессах, как иммунитет, выступая в роли одного из факторов антибактериальной защиты, а также в процессах запрограммированной клеточной смерти (апоптоза). В процессах апоптоза оксид азота может выступать как компонент, ускоряющий данный процесс, так и замедляющий его. Окись азота вызывает расслабление гладкой мускулатуры сосудистой стенки и желудочно-кишечного тракта. Он действует как в центральной, так и в периферической нервной системе, выступая в роли нейротрансмиттера, регулирует активную работу не только дыхательной, но и мочевыделительной системы посредством органных нервов. Он также влияет на функционирование секреторных клеток и тканей. Описанные эффекты оксида азота являются благоприятными в восстановительный период заболеваний. Однако, у пациентов старшей возрастной группы с признаками атеросклеротического поражения повышение продукции оксида азота может вызвать отрицательные последствия (Napoli С. и соавт., 2001): 1) уменьшается количества мембранных рецепторов артериальной стенки, которые реагируют на физиологические стимулы и индуцируют синтез оксид азота; 2) понижается концентрация или ухудшается утилизация аргинина; 3) падает концентрация либо тормозится активность индуцибельной и эндотелиальной синтазы окиси азота; 4) ухудшается выделение N0 из атеросклеротически измененного эндотелия; 5) затрудняется диффузия оксида азота через эндотелий в гладко-мышечные клетки сосудов, что приводит к снижению их чувствительности к вазодилататорному действию; 6) локально увеличивается деградация оксида азота, в результате чего повышается генерация свободных радикалов с последующим запуском перекисного окисления липидов со всеми вытекающими последствиями; 7) уменьшается взаимодействие N0 с гуанилатциклазой и ограничением синтеза ц-ГМФ. Учитывая, что пелоидотерапия у людей старшей возрастной группы увеличивает продукцию провоспалительных цитокинов, то становится понятным патологическое значение усиления продукции оксида азота (Хи L. et al., 1999: Young V.R. et al„ 1983; Nathan C, 1992). Длительная продукция NO действует как проапоптозный модулятор, приводящий к активации каспаз посредством выделения митохондриального цитохрома С в цитозоль, увеличенной экспрессии р53, активации JNK/SAPK и нарушенной экспрессии апоптоз-ассоциированных белков, в частности Вс1-2, стресс-белка, ферритина, трансферриновых рецепторов и активацию апоптоз-связанных белков. Цитотоксичность, в результате длительного накопления NO, как установлено, инициирует запрограммированную смерть клетки. Эффекты оксида азота по действию на апоптоз определяются клеточным типом и количеством оксида азота. (Hatano Е., et al., 2001; Chung Н.Т. et al., 2001). Апоптоз в молодом и пожилом возрасте влечет за собой разные последствия. В первом случае - это рост и развитие органов и систем, а во втором - снижение пролиферативного резерва и угнетение адаптационно-приспособительных и защитных механизмов. О значении молекул оксида азота в механизмах реализации физиопроцедур указывают многие исследователи. Иг.И. Гусаров и соавт. (2002) утверждают, что подобно новым сведениям о биологической роли NO, достижения молекулярной биологии указывают существенное влияние на понимание механизмов развития патологии и раскрывают возможности для создания новых целенаправленных и эффективных средств их коррекции при заболеваниях. По мнению авторов, благодаря изучению продукции NO, становятся понятным механизмы лечебного действия многих эмпирически созданных лекарственных препаратов, а также бальнеотерапевтических факторов.
