Введение к работе
Актуальность проблемы. С каждым годом увеличивается количество факторов, неблагоприятно действующих на разви че эмбриона и плода. Особого внимания заслуживает проблема влияния лекарственных веществ и алкоголя. В настоящее время известно около 900 тератогенных агентов, среди которых много лекарственных вещес.з (Persaud, 1990). Согласно имеющимся данным, свыше 97% беременных женщин принимает прописанные врачом лекарства, кроме того, 65-80$ из них занимается самолечением (Schreiucr Kunz, 1981). Одним из распространенных тератогенов для человечества сегодня является алкоголь. Частота алкогольного синдроыа плода составляет в среднем 0,1-0,4% (Нарзуллаева и др., 193?; цшз, Grau-bard, 1987), а в промышленных странах этот синдром регистрируют у 1-3 всех новорожденных (iSckreiner, Kunz, iyai).
В возникновении врожденных аномалий ведущая роль отводится материнскому организму (Blakley, 1988; Leichter et al., 1989). Патологические состояния, сопутствующие беременности (железоде-фицктная анемия, диабет, эпилепсия, алкоголизм и др.) отражаются на возрастании частоты аномалий развития (Wilson, 1973). В связи с этим 'эльшое значение ^приобретает поиск веществ, повышающих общую .-".тойчивость организма матери, т.е. неспецифических антитератогенов, а также изучение молекулярных основ аномалий развития (Milkow3ki, 1^82).
Одним из способов повышения устойчивости органмзма к действию неблагоприятных факторов является профилактическое использование полезных биологически активных веш~ств, в частности, элеутерококка (Eleutherococcus ssmti.C03us Liaxia.) (ЕреХМаН, Дар-дымов, 1983). Способность элеутерококка оказывать защитный эффект при повреждающих воздействиях самой различной природы экспериментально подтверждена в многочисленных исследованиях отечественных и зарубежных авторов (Брехыан, I96C, 1963, 1987; Цырлина, Яременко, 1964; Монахов, 1967; Бердышев, 1981, 1983, Брехман, Дардымов, 1983; Новожилов, Сильченко, 1985; Элькин и др., 1986; Кропотов, Колдаев, 1986; Дардымов,- 1987; v/aoker, Eilmea, 1978; 1901; Fulder, 1980; Modon, Thompson, 1981; Vogt, 1982; Saito, Nishiyama, 1966; Schechter, 1988). Также имеются одиночные сведения о положительном влиянии элеутерококка в уменьшении частоты пренатальной дистрофии, в регуляции- роста и
2.
развития плода (Болховитинова, 1989).
Однако остается неясный вопрос значимости природных комплексов, обладающіт биологической активности), в частности элеутерококка для процессов эмбриоггльного развития при введении в материнский организм веществ, заведомо вызывающих эмбриотокси-ческий эффект. Познание механизмов действия экстракта элеутерококка на фоне изменения биохимических параметров тератогенаыи могут быть полезными в плане реального подхода к практическому использованию биорегуляторов растительного происхождения в профилактике поражений плода, снижению уровня ск;лтой и явной патологии детского и взрослого населения.
Цель и задачи исследования. Основная цель данного исследования состояла в изучении биологического действия экстракта элеутерококка, как протектора против ксенобиотиков, обладающих эмб-риотоксическиыи, в том числе тератогенными свойствами.
В связи с поставленной целью решались следующие задачи:
-
В экспериментах на здоровых беременных самках крыс изучить защитное действие элеутерококка против заведомо известных тератогенов: хлоридина, салициловокислого натрия, тиогуанина, этанола.
-
Провести сравнение ентитератогенных свойств элеутерококка при введении его в про- и в эмбриональный периоды.
-
На модели беременности, отягощенной железодефицитной анемией, изучить протекторное действие элеутерококка против эмб-риотоксичнзсти этилового спирта.
-
Изучить динамику концентрации этанола в материнском органі".ме на фоне профилактического введения элеутерококка и без него.
-
Изучить состояние липидного, в том числе фосфолипидного обмена, уровня содержания ухлеводосодержащи:: биополимеров в печени беременных с&'ок, как критерия оценки защитно-приспособительных функций клеточных мембран в условиях повреждающего действия этанола.
Пологения, выкосите на защиту:
-
Экстракт из элеутерококка, вводимый до или во время беременности снижает у белых крыс эмбриотоксическое действие таких тератогенов как хлоридин, салициловокислый натрий, этанол и не влияет на эмбриотоксический эффект тиогуанина.
-
На фэне жєлезоцєфиц'/тного состояния беременной самки
3. элеутерококк оказывает протекторное действие против эмбриотокси-ческого эффекта этанола.
3. Нормализующее действие элеутерококка в отношении эмбрио-токсического эффекта этанола заключается в усилении детоксика-ционной функции печени самки и способности протектора к поддержанию окислительно-восстановительных и структурно-функциональных параметров на физиологическом уровне.
Научная новизна. В работе впервые установлена защитная роль растительного экстракта элеутерококка против эмбриотоксического эффекта хлоридича, салициловокислого натрия и этанола. На фоне модели желеэодефицитной анемии, вызванной билиридилом, препарат элеутерококка препятствует проявлению эмбриотоксического действия этанола. Механизм антиэмбриотоксического действия элеутерококка в условиях алкогольной интоксикации обусловлен увеличением мощности окисления этанола в тканях материнского организма и плода, а также нормализующим действиеы на структурно-функциональнее параметры клеточных мембран.
Практическая ценность работы. Проведенные исследования могут иметь прикладное значение в плане разработки новых подходов к профилактике рождения детей с врожденными отклонениями. Изучены некоторые биохимические механизмы действия экстракта элеутерококка, как протектора против повреждающего действия этанола.
Апробация. Основные фрагменты работы докладывались и обсуждались: на Конференции молодых ученых Института биологии і..оря ДВО РАН (Владивосток, 1983), Всесоюзной конференции "Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1983), П Международном симпозиуме по элеутерококку (Москва, 1984), Международном симпозиуме "Алкоголизм и наследственность" (Москва, 1986). Работа прошла апробацию на заседании Проблемной комиссии ТОЙ ДВО РАН.
Публикации. I.J материалам диссертации опубликовано 5 работ.
Объем и структура. Диссертация изложена на /Г/ листах машинописное текста и состоит из введение, главы, посвященной об-
В работе приняты следующие сокращения: АДГ - алкогольдегид-г.огеназа, НАД - никотинамцддинухлеотид, ХЛ - холестерин, СМ -сфингомиелин, ДФГ - дифос^атидилглицерин, ЛФХ - лизофосфатидил-холин, ЛФЭ - лизофосфатидилэтаноламин, УБСП - углеводосодег*ащио биополимеры, БП - бипиридил, ДгФР - дегидрофолатредуктаза.
4.
зору литературы, главы с общей характеристикой материала и методов исследования, трех глав собственных наблюдений и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и библиографического указатегя, включающего Z93 названий, в том числе // зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована /2. таблицами и // рисунками.
Характеристика материалов а методов исследования. Эксперименты выполнены на половозрелых самках крыс линии Вистар из питомника "Стоабовая" (200 шт.)'и беспородных крысах питомника "Рап-пог.ово" (652 шт.) массой 180-250 граммов. Началом беременности считали день обнаружения спермиев во влагалищных мазках после подсадки самок на одну ночь к самцам.
Тератогенез моделировали с помощью известных тератогенов: хлоридина (Акимове., 1968), сал;циловокислого натрия (Чеботарь, 1969), тиогуанина (Вишняков, 1974), этанола (Скосырева, 1982) путем введения их животным в критические сроки беременности. Хлори-дин вводили внутрижелудочно в виде суспенг :и на Твине-20 в дозах 0,4; 1,0; 1,2; 2,5 мг/кг массы на I, 2, 3-й день беременности и 5; 10; 25 мг/кг на 10, И, 12-й дни беременности. Введение сали-циловокислого натрия осуществляли внутримышечной 'нъекцией в дозах 200, 300 и 400 мг/кг на 10, II, 12-й дни беременности. Тио-гуе !ин вводили, внутриорюшинно на 0,3л-ном растпоре едкого натра в дозах 1,0; 1,8; 2,5; 4,0 мг/кг массы животного на 10, II, 12-й дни беременности. Этанол вводили в виде 25^-ного раствора в дозе 4,5 г/кг внутрибрюшинно в критические сроки беременности: с 1-5 день - доимплантационныЯ период и с 10-12 день - основные дни органогенеза однократно в течение суток.
Изучение влияния элеутерококка на эыбриотоксический эффект этанол? на фоне железодефицитной анемии проводили с использованием разработанного "Способа моделирован!..: тератогенного эффекта" (Пучков и др., І9Є5). Железодефицит в организме беременных животных вызывали внутрибршинной инъекцией желеэохелатирующего вещества бипиридила, принц, л биологического действия которого связан с выведением из организма преимущественно двухвалечтного железа. Использовали дозы бипиридила 40 мг/кг и 50 мг/кг, при которых на 12-14 день беременности (фи'мологическсе снижение концентрации железа в сыворотке крови) появляется возможность получения тератогенного эффекта.
С цел'ю коррекции эмбриотоксического действия тератогенов^
5.
использовали спиртовий {не белее 30 содержания спирта) экстракт элеутерококка производства Хабаровского хкмфармзэЕода в различной комбинации с тератогенами в дозе I мл/кг массы. Для предотвращения эмбриотоксического аффекта этанола па фоке железодефици-та экстракт элеутерококка в дозе I мл/кг вводили либо ежедневно с первого дня беременности до момента повреждения, либо 10 ДНРГ^ в проэмбриональком периоде, прекращая введение препарата с наступлением беременности.
Забой животных проводили либо дислокацией шейных позвонков, либо декапитацией на 13-й или /20-й дни беременности. Определяли число желтых тел, количество мест имплантации, живых, погибших и уродливых плодов в матке. Критерием оценки чувствительности эмбриона к повреждающему агенту служил показатель пред- и постим-плантационной гибели. Показателем тератогенной активности служило число плодов с уродствами развития в процентах по отношению к общему числу живых плодов либо в абсолютном выражении на один помет.
С целью выяснения биохшкчесхих механизмов коррекции анти-эмбркотокекческог:. действия элеутерококка в работе было проведено изучение ряда метаболических реакций, характеризующих некоторые стороны липидного и углеводного обмена по VI биохимическим параметрам. Контролем служили интактные беременные животные. Метаболические реакции изучались с помощью следующих биохимических методов :
I. Концентрация этанола в крови и тканях (Кудрявцев, Ушакова, 1980). 2. Концентрация окисленных никотинамидных кофермечтов (НАД) (Klin&enberg, 1963). 3. Экстракция лилидов из ткани печени (Polch et al., 1957). 4. Определении нейтральных липидов (Amenta, 19б4). 5. Фракции фосфолнпидов методом тонкослойной хроматографии В двух направлениях (Svetachev, Vaskovsky, 1972). б. Количественное Определение фракций фосфОЛИПИДОЯ (Vaakovsky et аі.,
1775. 7. Системы растворителей для микротонкослойной хроматографии (Kouaer et аі., 1967). 8. Специфические обнаружители фог*ю-липидов на хроматограммах (Kouaer, 1967; Wn^ner et аі., 1961; Кейтс, 1975; Vaakovaky et al., 1975). 9.. Определение содержания углеводов, связанных с белками: гексоз (Holt, 19154), гексуроновых кислот (Disohe, 1949) (в модификации Р.В.Керкурье-вой (19$3).
Для статистической обработки полученных результатов был использован критерий Т-Стьюдента и непараметрический критерий Еил-коксона-Мснна-Уитни.
б.
![Влияние дипептидов на адаптивное и половое поведение самцов крыс разного возраста [Электронный ресурс]](/i/i/4471/198033.png "Влияние дипептидов на адаптивное и половое поведение самцов крыс разного возраста [Электронный ресурс] Кудрявцева Татьяна Анатольевна")
