Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Антигены семени и его отдельных компонентов 9
1.2. Синтез спермоантител в организме 14
1.3. Спермоиммунизация в организме самки в зависимости от состояния полового тракта 19
1.4. Снижение активности спермоантител в организме 24
1.5. Влияние кратности осеменения на оплодотворяемость самок 28
1.6. Влияние количества спермиев в дозе на оплодотворяемость и спермоантителообразование 32
1.7. Методы выявления спермоантител в сыворотке крови животных 37
2. Материал и методика исследований 40
3. Результаты собственных исследований
3.1. Сравнительные данные о чувствительности иммунных реакций, выполненных разными методами, при определении спермоантител с целью диагностики бесплодия иммунной этиологии 52
3.2. Анализ результатов осеменения коров при одно- и двукратном их осеменении 57
3.3. Изучение активности спермоантител в сыворотке крови коров, осемененных одно- и двукратно в половой цикл, в краниальную часть
цервикального канала 61
3.4. Оплодотворяемость и титр антител при интракорнуальном осеменении 71
3.5. Изменчивость титра спермоантител и оплодотворяемость коров при интравагинальном осеменении 83
3.6. Оплодотворяемость при одно- и двукратном осеменении в разные участки полового тракта 92
3.7. Оплодотворяемость телок, осемененных разными дозами глубокоохлавденного семени быков в краниальную часть шейки матки, и динамика титра спермоантител при этом 102
3.8. Титр спермоантител сыворотки крови телок при одно- и двукратном осеменении интракорнуально 5 млн. спермиев в I мл 116
4. Обсщение результатов 122
5. Выводы 131
6. Предложения 133
7. Список использованной литературы
- Антигены семени и его отдельных компонентов
- Спермоиммунизация в организме самки в зависимости от состояния полового тракта
- Сравнительные данные о чувствительности иммунных реакций, выполненных разными методами, при определении спермоантител с целью диагностики бесплодия иммунной этиологии
- Оплодотворяемость и титр антител при интракорнуальном осеменении
Введение к работе
В основных направлениях экономического и социального развития СССР на 1981 - 1985 годы и на период до 1990 года и в решениях майского (1982 г.) Пленума ЦК КПСС предусмотрено довести среднегодовое производство молока в одиннадцатой пятилетке до 97 - 99 млн.т, а в двенадцатой - до 104 - 106 млн.т, производство мяса -соответственно до 17 - 17,5 млн.тонн и 20 - 20,5 млн. (в убойном весе), яиц не менее 72 млрд. и 78 - 79 млрд.штук, шерсти 470-480 тыс. тонн. Для выполнения поставленных задач, наряду с другими мероприятиями необходимо решительно улучшить воспроизводство стада.
Среди многочисленных причин, вызывающих нарушение воспроиз-водительности крупного рогатого скота, ведущее место занимает изменение иммунного равновесия. На данном этапе развития науки бесплодие иммунной этиологии остается слабо изученным разделом размножения сельскохозяйственных животных. Слабая изученность касается, главным образом, вопросов о причинности возникновения в организме животных высокоактивных антител, которые препятствуют оплодотворению.
Впервые на связь антигенных факторов спермиев с патологией размножения обратил внимание И.И.Мечников (1899) и S.Hdtck.lrvLkov (1900).
Дальнейшие исследования показали, что иммунные и иммуноподоб-ные явления участвуют во всех процессах нормального воспроизведения у самцов и самок и существенно влияют на гаметогенез, миграцию спермиев в половых путях, оплодотворение, эмбриофетогенез, лактацию, развитие в ранний постнатальный онтогенез (К. ijcmA^txi/YWr, 1899; Н.И.Алексеев, 1913; Н.И.Розанов, 1927; I. /?osenioX , 1931;
М. Асі&кл.'П, 1932; А.Б.Бернштейн и др., 1933; И.И.Соколовская, 1936, 1968, 1971, 1972, 1975, 1978, 1981; К.Братанов, 1951, 1959, I960, 1963, 1965, 1968, 1971, 1975, 1978; А.Д.Адо, 1961; R. ^oWarols, 1964; к.Шмуь и \К. ProU^mouyi , 1967; P.dumkt l. a. , 1968; М.Аалгрен, 1971; В.П.Павличенко с соавт., 1971, 1975,1977, 1979, 1982; Р.С.Сираждинов, 1973; Е.В.Эйдригевич, 1974, 1975; А.Я.Шевченко, 1975, 1980; В.И.Максимов, 1978, 1980; А.Е.Дорожи-лов, 1979; Ca,obw
Almkd Tor&Lmi, 1981; IW.H&wltmdt ^.а., I98I;TJ
1982; В.И.Говалло с соавт., 1982; Е.В.Ильинский, 1982; М.К.Копы-лова с соавт., 1982; С.Паркхаус с соавт., 1983 и др.
Несмотря на наличие целого ряда исследований, направленных на изучение нарушений иммунного равновесия в организме крупного рогатого скота как причины возникновения бесплодия, некоторые стороны патогенеза этих нарушений остаются не решенными, что затрудняет проведение научно-обоснованных мероприятий по снижению бесплодия. В частности, недостаточно изучена роль антител, выявленных разными иммунологическими тестами, в патогенезе бесплодия; не изучен вопрос об Шнтигенном действии консервированных холодом половых клеток самцов, введенных в разные анатомические участки половых путей самок, слабо изучена антигенная активность половых клеток самца, введенных в половые пути коровы в разные периоды после отёла и т.д. Отсутствие перечисленных сведений ограничивает разработку профилактических мероприятий нарушений воспроизведения.
Актуальность темы. Одним из необходимых и непременных условий интенсификации животноводства является получение высокой оп-лодотворяемости коров и полноценного приплода, а, следовательно,
- б -
и улучшение племенной работы, которая неразрывно связана с повышением воспроизводительных качеств коров. Как известно, бесплодие коров приносит громадные экономические убытки. Поэтому борьба с нарушением воспроизводства и до настоящего времени остается одной из актуальных проблем зоотехнической, ветеринарной и биологической наук.
Из разновидностей бесплодия коров и телок наименее изучено бесплодие иммунной этиологии, которое выражается нарастанием активности спермоантител в сыворотке крови и приводит к нарушению оплодотворения или эмбриофетального развития. При этом актуальным является выяснение роли сроков осеменения после родов, количество половых клеток, консервированных холодом, использующихся для искусственного осеменения и др. в формировании патологического иммунного процесса в организме коров. На актуальность данной проблемы указывает и то, что за последнее десятилетие во всем мире уделяется большое внимание исследованиям по иммунологии воспроизведения. Состоялось 4 Международных симпозиума, ряд конгрессов и конференций. Причина такой заинтересованности заключается в необходимости глубокого познания структур и функций иммунной системы, как факторов, регулирующих генетическое единство внутренней среды организма.
Цель и задачи исследования. Целью исследований явилось изучение состояния иммунной реактивности по отношению половых клеток быка, у коров и телок при их искусственном осеменении путем введения определенного количества половых клеток в конкретные анатомические участки полового тракта. Выяснить роль и активность определенных спермоантител в возникновении бесплодия, а также изучить процесс спермоантителообразования при одно- и двукратном осеменении в период эструса в разные сроки после отела.
В связи с этим в задачу исследований мы поставили следующие
7 вопросы:
провести сравнительную оценку в оплодотворении роли определенных антител, выявленных разными иммунологическими тестами;
изучить влияние числа половых клеток в дозе глубокоохлаж-денного семени на образование спермоагглютининов в сыворотке крови телок и их оплодотворяемость;
определить роль кратности осеменения в половую охоту, изменчивость титра спермоагглютинации и связанную с ней оплодотворяемость коров при введении семени в разные участки гениталий;
установить наиболее эффективные сроки оплодотворения коров в послеродовой период и изучить динамику образования спермо-антител в сыворотке крови в эти периоды;
- изучить влияние сроков осеменения коров после отела на оплодотворяемость, эмбриофетальную выживаемость и жизнестойкость в ранний постнатальный период.
Научная новизна и практическая значимость работы заключается в том, что на большом подопытном поголовье проведено определение титра спермоантител в сыворотке крови коров и телок разными иммунологическими тестами. При этом установлено, что у самок, у которых выявлены спермоиммобилизины и спермопреципитины, независимо от титра спермоагглютининов, процесс оплодотворения полностью нарушается. Тесты "Ф-Д" к' и "К" х' оказались менее чувствительны при исследовании сыворотки крови у интактных телок, нежели у коров; тест "РА" к^ одинаково чувствителен и у коров и у телок.
*> І. В целях удобств изложения реакций в дальнейшем тесты
будут обозначаться: спермоагглютинации по гайта - РА; микро-спермоагглютинации по Франклину и Дюку - "Ф-Д"; макроспермоагглю-тинации по Кибрику - "К*; спермоиммобилизации по Изожима и Асри-така - "И"; иммунодиффузии в агаровом геле по Оухтерлони -"РВД".
2. Животные, осемененные однократно в период эструса будем называть опытные, осемененные двукратно- контрольные.
Наибольшая оплодотворяемость отмечена у коров и телок при титре спермоантител, установленных по "РА" 1:64, по "Ф-Д" и "К"-1:32 при отсутствии в сыворотке крови иммобилизинов ("И") или преципитинов (РВД).
Выявлено, что у коров, осемененных в первый месяц после отела, титр спермоантител в 2,2 раза выше, чем у коров, осемененных через 2 и 3 месяца после отела. Титр спермоантител при двукратном осеменении в период эструса, независимо от места введения спермы в половые пути и количества половых клеток в ней, выше нежели при однократном, а оплодотворяемость ниже, что подтверждает преимущество однократного осеменения коров и телок случного возраста.
В наших исследованиях животные находились под опытом до получения делового приплода. А полученный приплод был под контролем в течение первого месяца постфетального развития. При этом мы учитывали живую массу при рождении телят, потери (вынужденный убой, падеж) и др.
Исследования проводились в соответствии с Государственной комплексной программой НИР на 1981 - 1985 гг. по решению научно-технического задания 23 "Усовершенствовать системы селекционной работы и повышение продуктивности сельскохозяйственных животных с использованием молекулярно-генетических, иммуногенетических, физиолого-биологических методов исследований на ЭВМ. Разработать новые методы размножения и усовершенствовать технику искусственного осеменения сельскохозяйственных животных", утвержденного НТС МСХ СССР в 1980 гоцу по заданию МСХ СССР.
Антигены семени и его отдельных компонентов
Работы И.И.Мечникова (1899) положили начало изучению роли антигенных свойств спермиев в размножении. Этому предшествовали открытия Э.Дженера (1796), Л.Иастера (1881), показавшие, что при внедрении в организм млекопитающих микроорганизмов-возбудителей инфекционных заболеваний, у животных вырабатываются иммунные тела, нейтрализующие возбудителя (по Грунтенко, 1976).
Ж.Борде и Н.Н.Чистович (1898-1899) обнаружили, что не только микроорганизмы, но и другие чужеродные белки стимулируют выработку антител (по И.И.Мечникову, 1951).
И.И.Мечников (1899) и К.Ландштейнер (1899), иммунизируя морских свинок спермой кролика, установили накопление в сыворотке крови специфических антител. Образование спермоантител в крови морских свинок при парентеральном введении спермы затем было подтверждено С.Метальниковым (1900), К.Ландштейнером (1926,1936).
Е.С.Лондон (1902) из сыворотки крови неиммунизированных лабораторных животных, кроме изо- и гетероспермолизинов, выделил аутоспермолизины и аутоагглютенины.
Исследуя кровь иммунизированных лабораторных животных С.Метальников (1900) и И.Д.Стрельников (1923) установили наличие положительной реакции между сывороткой крови и сперматозоидами не только донора, но и других животных, не использовавшихся в иммунизации, что подтвердило наличие однотипных внутривидовых антигенов.
У других видов животных образование спермоагглютининов наблюдали К. Lcv\id,$twwr (1899), М.П.Тушнов (I9II), И.Руфимский (1926), А.Д.Бернштейн и др. (1933), И.И.Соколовская (1939) и др. А. ІЧе.і.їх.ге п. (1964) установил, что при иммунизации животных гетерогенной спермой титр образовавшихся антител всегда был выше, чем гомогенной.
К.К.Скробанский (1904) впервые получил иммунную сыворотку против ткани яичника животных и установил, что "оотоксические" сыворотки обладают сильным гемолитическим действием. Спермии в этих сыворотках сохраняли более активную подвижность, чем в сыворотке крови не иммунизированных животных.
Ряд авторов (К.Братанов с соавт., 1949, 1950; И.И.Соколовская и др., 1971, А.Т.Иванов и И.Ф.Малиновский, 1975; В.И.Максимов, 1978; В.П.Павличенко с соавт., 1979 и др.) отмечали наличие в низких титрах спермоантител у интактных самок и самцов.
Антигенные свойства семени и наличие антител к ним могут быть определены по реакции агглютинации сперматозоидов при контакте с сывороткой крови животных того же или другого видов (И.И.Соколовская, 1936, 1938; R.Я.&eLwourds, I960).
Иммунизируя кроликов семенем животных разных видов и плазмой спермы в отдельности f{.il.$oLw(kraLs (I960) получил антитела как против спермиев, так и против плазмы. При этом иммуногенные свойства гомологичных спермиев и плазмы проявлялись слабее, чем гетерологичных.
В исследованиях (A.J Wul , I960, 1962, 1969; MAolwU » 1965) установлено, что спермии, будучи в семенниках или в придатках семенника антигенными свойствами не обладают, и лишь после контакта с секретами добавочных половых желез они преобрета-ют эти свойства. На основе этих исследований ими был введен термин "обвивающие" или "обволакивающие" антигены (1969).
Н.Н.Жуков-Вережников (1949) связывает образование антител с антигенными свойствами белков самих спермиев. Исследования Н.И.Розанова (1927) подтвердили данные И.И.Мечникова и Е.С.Лондона об антигенной специфичности семени, показав при этом, что сперматозоиды человека не чувствительны к антителам против спермий животных.
Позднее W. ІЇІЯмА, JL. Си. (1938), К. Братанов и др. (1978) установили, что одни антигены находятся в головке, а другие в хвосте спермиев. Наряду с этими локальными антигенами авторы обнаружили особый, так называемый, поверхностный термостабильный видоспецифический антиген на головке и хвосте спермия; и антиген, расположенный в глубине головки спермия, проявляющий действие только после иммунизации предварительно разрушенными головками. Из опытов (M.JjGtskU/n., 1932; A/ j/dkaicou-oiyshi JL. Ои. , 1961; і. FramkluYL a. fl. Jkijtg » I960) видно, что в женском организме спермальные изоантитела склеивают спермий не только головками или хвостиками, но и головками с хвостиками.
Несомненно, что агглютинация спермиев разными анатомическими образованиями связана с разнообразием их антигенного состава в разных анатомических участках.
Путем абсорбции эякулированного семени антисыворотками против секретов добавочных половых желез (k.y.&lMJrWLr и $1.&иЦ$ , 1965) в сперме кролика выявили десять антигенов, из них семь в спермальной плазме и два в спермиях. Ими же обнаружено семь антигенов в сперме быка, два из которых в спермиях, пять в спермальной плазме.
Методом иммунофлуоресценции И.И.Соколовская (1971, 1976) показала локализацию антигенов спермиев в акросоме.
В.П.Кононов с соавт.,(1977, 1980), изучая природу антигенов спермы установили, что в акросоме спермиев быка содержатся антигены гликопротеидной природы; в теле полисахариднои и на поверх ности локализированы простые белки или липопротеиды.
Из плазмы спермы человека К,&атхИъош&г с сотр. (1961) выделил девять антигенных фракций, сходных с антигенами сперматозоидов. В секретах пузырьковидных желез Лоті (1968) обнаружил вещество с особо выраженными антигенными свойствами, которые назвал "спермопокрывающий антиген", а P.Ru/w/fcx и У.ШМл/гьовь (1968) в секретах пузырьковидной и предстательной желез выявили по два антигена.
На видовую и органную специфичность антигенов спермы впервые указали И.И.Мечников (1900) и Е.С.Лондон (1901).
Последующие исследования СУ. општ.(1901), X. tftietojun а. І.ЯатІу (1923), Н.И.Розанова (1927), Я.їУиуи с соавт.ШЗЗ), 4.И humls, (1934) подтвердили наличие видовых антигенов в семени и экспериментально показали, что сыворотка крови животных, иммунизированных гомологичными спермиями агглютинировала половые клетки данного вида и не вступала в реакцию с таковыми другого вида (человека).
Спермоиммунизация в организме самки в зависимости от состояния полового тракта
Известно, что антитела продуцируются клетками РЭС (СМФ).
При введении в организм антигена вначале появляются плазматические клетки, которые синтезируют специфическую М-РНК, кодирующую строго определенную последовательность аминокислот в данном антителе. Первая иньекция антигена превращает плазматические клетки РЭС в трансформированные клетки-предшественницы, повторная иньекция превращает их в плазматические (Уотстон, 1967).
Интенсивность спермоиммунизации зависит от реактивности организма, силы антигена, генетической предрасположенности к выработке антител, места введения антигена, а также от возраста и вида животного (Павличенко с соавт,, 1977), дозы и повторяемости введения антигена в организм (Соколовская с соавт., 1981).
В преодолении иммунобиологической несовместимости родительских особей, интерес представляет процесс образования спермоан-тител у самок в зависимости от состояния генитального аппарата.
К.Братанов с соавт. (1962) установил, что ферментативная способность слизистой оболочки половых путей служит защитным барьером против спермоиммунизации организма. При здоровом состоянии слизистой оболочки гениталий самок введенная сперма быстро подвергается ферментации, теряет свои антигенные свойства и выводится со слизью.
Свойство покровного эпителия слизистой оболочки матки самок защищает организм от поступления антигена, если при этом здоровое состояние репродуктивного аппарата (Жаркий, 1975, 1982; Соколовская, 1976).
Обобщая результаты своих исследований В.П.Павличенко с соавт. (1977) пришли к выводу, что интенсивность иммунизации самок связана с нарушением иммунного равновесия в организме коров в результате ряда причин, главные из которых: длительное использование семени одних и тех же быков при искусственном осеменении коров; осеменение коров в послеродовой период с незаконченной инволюцией полового тракта.
Однако барьерная функция эндометрия может быть нарушена предшествующей беременностью, незавершенной инволюцией генитального аппарата, повреждением маточных капилляров при искусственном осеменении. Через поврежденные слизистые покровы антиген поступает в кровь, стимулируя при этом РЭС к спермоантителообразова-нию, обуславливая бесплодие (Бесхлебнов,1934; Соколовская,1975, 1981; Слепцова и др., 1977; Волкова и др., 1978; Макаричева, 1979; Роберте, 1979; Могиленко с соавт., 1982).
Высокая концентрация спермоагглютининов в сыворотке коров может способствовать проникновению их через слизистую оболочку шейки матки и влагалища в матку, которые наиболее проницаемы для спермоантител, особенно при нарушении их целостности ( &dwwrds , 1970).
К.Братанов (1961), А.А.Сысоев (1977) считают, что спермо-агглютинирующий фактор является естественным и постоянным компонентом крови как молодых, так и взрослых особей обоего пола. В частности, у телок уровень спермоантител колеблется в пределах 1:2 - 1:32.
В исследованиях В.П.Павличенко и др. (1971) на коровах и В.П.Гончарова (1979) на кобылах установлено, что титр сывороточных антител без ущерба для зачатия может достичь до уровня 1:128.
Антигены в циркулирующую кровь могут проникнуть через микротравмы подслизистого слоя шейки матки при искусственном осеменении коров и телок (Братанов с соавт., 1962; И-УльоЪ- » 1964; Сеглинь, 1968).
Гистологическими ииммунологическими исследованиями эпителия матки коров выяснили, что готовность маточных структур к новому плодоношению наступает на втором месяце после отела, раннее осеменение редко дает приемлемый результат и является одной из причин пренатальной смертности и др. (Соколовская и др.,1968, 1969; Решетникова, 1970; Мюйрсепп и др., 1971; Зальцман, 1973; Карна-чев и др., 1973; Шевченко, 1975; Жаркий, 1979 и др.).
В опытах Е.В.Эйдригевича с соавт. (1974), проведенных в ус ловиях юга Украины выявлено, что раннее оплодотворение в период первого месяца после отела оказывает отрицательное влияние на жизнеспособность ожидаемого приплода.
На образование спермоагглютининов в организме животных значительное влияние оказывает физиологическое состояние самок, особенно в послеродовой период, морфологическая целость цитоплазма-тических мембран. В естественной спермоиммунизации отрицательную роль играют скрытые формы эндометритов, диагностировать которые клинически1 невозможно. При скрытых эндометритах усиливается спер-мофагоцитоз, проницаемость кровеносных сосудов для антигенов повышается титр спермоагглютининов при осеменении до 1:1024. В результате возрастает сила и напряженность естественного спермо-иммунитета, который обуславливает иммунное бесплодие женских особей (Братанов, Диков, I960, 1963; Осетров, Марчук, 1969; Пав-личенко с соавт., 1977; Гончаров, 1978; Лукьяненко, 1978; Осташ-ко и др., 1980; Дахно с соавт., 1981; Могиленко с соавт., 1982).
Введение беременным животным антигенов спермы, экстрактов из зародышей или провизорных органов в большинстве случаев вызьгоает аборт (Вязов, 1962, 1973) или способствует многочисленным повторениям течки ( MMWQI » 1969).
Сравнительные данные о чувствительности иммунных реакций, выполненных разными методами, при определении спермоантител с целью диагностики бесплодия иммунной этиологии
Исследования ряда ученых показывают, что среди причин, вызывающих нарушение оплодотворения и пренатального развития, могут быть иммунологические факторы, которые оказывают влияние на иммунные реакции; они могут быть как положительные, так и отрицательные. Это зависит от состояния организма и от внешних условий. Следовательно, иммунные явления у сельскохозяйственных животных необходимо изучать в соответствии с условиями их жизни, а также со структурой и функциональным состоянием органов воспроизведения. Иммунные реакции отличаются, главным образом, специфичностью по отношению к определенным антигенам, а также тем, что организм как бы запоминает однажды встреченное инородное тело (антиген) и в случае вторичного проникновения -вырабатывает против него антитела, причем эта "память" строго индивидуальна.
Антитела могут быть выявлены разными методами в зависимости от типа ответной реакции иммунной системы на разные антигены - гуморальной, клеточной, аллергической.
Мы, в своих исследованиях, для определения титра специфических спермоантител применяли иммунологические методы (тесты): РА, Ф-Д, К, И и РВД. Проведено около 5-й тысяч лабораторных исследования (4775) из 954 проб крови коров и телок. Пробы крови от подопытных животных брали по общепринятой методике.
Нами сделан анализ полученных данных при исследовании проб крови коров и телок разными иммунологическими тестами. Эти данные обобщены в табл.3 и 4.
Взятие проб крови для определения специфических спермоанти-тел проводили в день осеменения, на 8-й и 18-й дни после осеменения (табл.3). Из таблицы видно, что по тестам РА, Ф-Д и К спермоантитела выявлены во всех пробах крови в разном разведении. Спермоиммобилизины выявлены в пробах крови 31 животного из 185, спермопреципитины в 12 пробах. Из 31 самки, у которых были выявлены спермоиммобилизины в сочетании с спермоагглю-тининами, оплодотворение наступило у 5-й, но беременность не сохранилась, у остальных зачатие не произошло даже при титре спермоагглютининов 1:8.
Из 12-и самок, у которых были выявлены спермопреципитины, реакцией иммунной диффузии (РВД), оплодотворение наступило у одной при титре спермоагглютининов в день осеменения 1:16, на 18-й - 1:64 и спермопреципитинов 1:2, но беременность прервалась. У остальных самок оплодотворение не наступило при низком титре спермоагглютинации (1:4...1:16) в сочетании с спер-мопреципитинами.
Мы провели сравнительный анализ иммунологических тестов микроспермоагглютинации Франклин и Дюку (Ф-Д) и макроспермо-агглютинации Кибрик (К) по отношению к реакции агглютинации (РА). В день осеменения по этим тестам было исследовано 185 проб крови самок. Из 185 проб крови исследованных тестом Ф-Д на уровне РА титра спермоантител было 158 проб (85,0%), по тесту К - 114 (62,0%). На 8 день после осеменения соответственно 159 проб (85,9%) и по тесту К - 117 (63,2%). На 18 день после осеменения по Ф-Д было 176 проб (95,6%) и по К - 141 проба (76,6%). В наших исследованиях титр спермоагглютинации имел более четкую выраженность по отношению к сравниваемые (Ф-Д и К). Тест Ф-Д на 18 день после осеменения по титру спермоагглютинации приближался к РА и его уровень составлял 96,1%. По тесту Кибрик и др. также шло увеличение и к 18 дню составил 77,0% по отношению к РА.
Нами одновременно проведен сравнительный анализ 5 иммуно логических тестов при исследовании проб крови телок, при этом дополнительно исследовали коовь на 30 день после осеменения (табл.4). В день осеменения по РА, Ф-Д и К выявлены спермоаг-глютинины во всех пробах в разном разведении.
Оплодотворяемость и титр антител при интракорнуальном осеменении
В предыдущем разделе изложены результаты исследований оп-лодотворяемости и динамики изменчивости титра спермоантител при одно- или двукратном осеменении коров в шейку матки. В этом разделе излагаются материалы опыта по выяснению оплодот воряемости и динамики изменчивости титра спермоантител при осеменении коров непосредственно в рог матки (интракорнуально).
Для изучения влияния кратности осеменения на образования спермоантител в сыворотке крови коров при интракорнуальном осеменении были сформированы в учхозе "Пушкинское" ЛСХИ две группы коров (табл.13). Опытную группу коров (24) искусственно осеменяли в период эструса однократно, контрольную (26) - двукратно.
Реакции спермоагглютинации, иммобилизации, иммунодиффузии в агаровом геле, как и в предыдущих опытах, ставили в день осеменения, на 8 и 18 дня после осеменения.
В табл.14 приведены результаты первого осеменения коров опытной и контрольной групп при непосредственном введении семени в рог матки. Как видно из данных этой таблицы, при внутри-маточном осеменении получен довольно высокий процент оплодотво-ряемости - 83 в опытной и 77 в контрольной. Что касается различий оплодотворяемости в зависимости от одно- или двукратного осеменения в одну охоту, то эти различия были не существенны и недостоверны.
В табл.15 приведены результаты определения титра спермоаг-глютининов у животных перед осеменением. Из таблицы видно, что средняя величина титра спермоагглютининов, выявленных в сыворотке крови по трем иммунологическим тестам (РА, Ф-Д и К), не имела существенных различий между опытной и контрольной группами животных. По опытной группе средний титр спермальных агглютининов был 1:39, 1:32 и 1:27 по РА, Ф-Д и К, и в контрольной -1:32, 1:30 и 1:27 соответственно.
Как видно из данных табл.І5, в опытной группе при титре спермоагглютининов от 1:16 до 1:64 из 19 осемененных коров у всех наступило оплодотворение (100%). В контрольной группе животных из 21 - оплодотворилось 19 (90%) соответственно. У двух коров зачатие не наступило (Сена 340 и Безвинная 1322). Анализ данных этих животных показал: корова Сена 340, возраст 8 лет, удой за 305 дней предыдущей лактации составил 5705 кг молока, была осеменена на 20 день после отела при исходном титре спермоагглютининов по РА, Ф-Д и К 1:64. На 8 день после осеменения титр спермоантител увеличился по РА 1:128, Ф-Д и К 1:64, на 18 день - по РА и Ф-Д 1:128 и К 1:64. Корова по кличке была осеменена на 19 день после отела при исходном титре спермоантител по РА 1:64, по Ф-Д и К 1:32. На 8 день после осеменения титр спермоагглютининов возрос по РА 1:128, Ф-Д и К без изменений и на 18 - по всем трем тестам увеличился до 1:128, т.е. до предела иммунологической толерантности.
Предполагаем, что для этих двух неоплодотворившихся животных, при достаточно высоком уровне надоя молока за предыдущую лактацию (5705 и 4235 кг) продолжительность от отела до осеменения 20 и 19 дней соответственно недостаточно для восстановления иммунной реактивности, возникшей при плодоношении и родах. Недостаточно полное восстановление гениталей в послеродовой период, повторное введение семени и связанные с этим манипуляции, по-видимому, стали причиной эмбриональной смертности, так как последующий половой цикл у коровы Сена повторился через 34 дня, а у коровы Безвинная - через 41 после первого осеменения.
Анализ изменчивости титра спермоантител у коров, осемененных одно- или двукратно непосредственно в рог матки (табл.16) показал, что как в опытной, так и контрольной группах титр спермоагглютининов на 8 и 18 дни после осеменения увеличился. Но при двукратном осеменении был несколько выше, хотя не превышал пределов физиологических границ (1:128).
Некоторое увеличение титра спермоантител у животных контрольной группы на 8 и 18 дни после осеменения по сравнению с опытной, по-видимому, связано с повторным введением семени в тот же половой цикл и проводимыми при этом манипуляциями.
Похожие диссертации на Влияние нарушения иммунного равновесия на воспроизводительную функцию коров
