Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 8
1.1 Печень и её роль в организме. 8
1.2 Основные патологии печени . 18
1.3 Современные гепатопротекторы, применяемые в ветеринарии. 40
2 Материалы и методы исследований 57
3 Собственные исследования 64
3.1 Производство Диронакса. 64
3.1.1 Физико-химические свойства Диронакса. 64
3.1.2 Качественное и количественное определение Диронакса 68
3.1.3 Изучение стабильности Диронакса 70
3.1.4 Определение кристаллической структуры Диронакса 74
3.2 Токсикологическая оценка Диронакса. 78
3.2.1 Острая токсичность Диронакса. 79
3.2.2 Субхроническая токсичность Диронакса 81
3.2.3 Влияние Диронакса на функцию почек . 84
3.2.4 Влияние Диронакса на центральную нервную систему. 85
3.2.5 Влияние Диронакса на детоксицирующую активность печени 86
3.3 Оценка гепатопротекторного действия Диронакса 88
3.3.1 Эффективность Диронакса при экспериментальном поражении печени четырёххлористым углеродом. 88
3.3.2 Эффективность Диронакса при экспериментальном поражении печени парацетамолом 98
3.3.3 Эффективность Диронакса при экспериментальномпоражении печени этанолом 102
3.4 Эффективность применения Диронакса при гепатите домашних животных 106
3.4.1 Влияние Диронакса на морфологические и биохимические показатели крови собак 107
3.4.2 Влияние Диронакса на морфологические и биохимические.показатели крови кошек 117
3.5 Экономическая эффективность применения Диронакса 123
4 Заключение 125
Выводы 133
Практические предложения 134
Список сокращенных терминов 135
Библиографический список 136
- Основные патологии печени
- Качественное и количественное определение Диронакса
- Влияние Диронакса на функцию почек
- Влияние Диронакса на морфологические и биохимические.показатели крови кошек
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время заболевания печени являются общемировой проблемой. Cпособность печени, как центрального органа процессов метаболизма, обмена ферментов, гормонов, микроэлементов и витаминов, нейтрализации токсинов к выполнению своих функций нередко снижается из-за многочисленных веществ, к которым относятся, в том числе, и некоторые лекарственные средства, при приеме в высоких, а иногда и в терапевтических дозах, повреждающие орган (В.Н. Денисенко, 2006; Е.Б. Бажибина, 2007; T.D. Gould, 2009).
Острые и хронические заболевания печени и желчевыводящих путей были и остаются важной проблемой ветеринарной медицины. Поскольку болезни печени широко распространены, их профилактика, лечение, изыскание способов ранней диагностики, коррекции нарушений метаболизма у животных являются одной из острых проблем в теоретической и практической работе (В.Н. Байматов, 1998; Г. Мюллер, 2006; С.В. Оковитый, 2010).
Несмотря на успехи в медицине и ветеринарии, обычные средства для лечения гепатопатий имеют нежелательные побочные эффекты, малоэффективны и являются дорогостоящими. Следовательно, существует большая потребность в безопасных альтернативных терапевтических средствах для лечения болезней печени (А.С. Логинов, 1997; В.А. Антипов, 2010; В. Бьюрж, 2010).
На отечественном рынке в настоящее время имеется широкий спектр препаратов и кормовых добавок, способствующих восстановлению печени при гепатопатиях различной этиологии, таких как гепатовет, лиарсин, глютаМакс, гепалон, полифепан, гепавет, гепатоджект, дюфалайт, гептрал, эссенциале, гепатосан, хофитол, аллохол, метионин, силимарин, лив 52, билигнин, фосфоглив, липоевая кислота, зиксорин и другие (Б.В. Уша, 2002; В.С. Бузлама, 2003; С. Кайзер, 2010).
Применение препаратов для лечения гепатопатий требует во многих случаях терапии в течение нескольких недель, часто с повторным курсом приёма, в результате чего затраты на лечение животных значительно повышаются. В связи с этим возникает необходимость в разработке гепатопротекторов, имеющих невысокую стоимость и не требующих длительного курса лечения.
В настоящее время разработан отечественный гепатопротектор Диронакс (диизопропиламмония дихлорацетат). Препарат синтезирован в ООО «Базис» (г.Уфа) под руководством доктора технических наук Б.П. Струнина.
В настоящее время разработан отечественный гепатопротектор Диронакс (диизопропиламмония дихлорацетат). Препарат синтезирован в ООО «Базис» (г.Уфа) под руководством доктора технических наук Б.П. Струнина.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является изучение токсико-фармакологических свойств гепатопротектора Диронакс и его применение в ветеринарной практике для профилактики и лечения болезней печени.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
- определить массовую долю основного вещества, изучить стабильность и подтвердить кристаллическую структуру Диронакса;
- дать токсикометрическую оценку Диронакса (острая и субхроническая токсичность, влияние на центральную нервную систему, функцию почек, массу внутренних органов):
- изучить влияние Диронакса на функциональное состояние печени на моделях экспериментальных гепатитов;
- определить терапевтическую эффективность Диронакса при гепатите собак и кошек;
- определить экономическую эффективность применения Диронакса в ветеринарии.
Научная новизна. Впервые по новой технологии синтезирован отечественный гепатопротекторный препарат Диронакс и доказана его химическая структура. Впервые проведены исследования широкого комплекса токсикологических показателей гепатопротектора Диронакс, позволившее выявить степень безопасности его применения. Установлено, что препарат Диронакс относится к четвёртому классу опасности.
Впервые изучены его токсико-фармакологические свойства, влияние на массу внутренних органов, функциональное состояние печени при экспериментальных гепатитах, морфологические и биохимические показатели крови у лабораторных и домашних животных, в частности, у кошек и собак. Препарат имеет положительные показатели на основании доклинических и производственных исследований.
Практическая значимость. Выполненные исследования и полученные результаты позволяют предложить препарат Диронакс как гепатопротектор при заболеваниях печени различной этиологии у собак и кошек. Предложенная доза не вызывает отрицательного действия и обладает лечебным действием.
Результаты исследований использованы в учебном процессе при преподавании дисциплины «Болезни собак» и «Болезни кошек» для студентов факультета биотехнологий и ветеринарной медицины.
Управлением ветеринарии Республики Башкортостан утверждены «Научно-практические рекомендации по применению гепатопротектора Диронакс для лечения домашних животных».
Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющиеся основой диссертации, доложены, обсуждены и одобрены на V Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных « Молодежная наука и АПК: программы и перспективы» (Уфа, 2012), на II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Состояние и перспективы увеличения производства высококачественной продукции сельского хозяйства» (Уфа, 2013), на VI Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных «Наука молодых – инновационному развитию АПК» (Уфа, 2013), на Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию ФГБОУ ВПО Ижевская ГСХА «Научное обеспечение АПК. Итоги и перспективы» (Ижевск, 2013).
Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 8 научных статьях, 4 из которых – в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
- определение массовой доли основного вещества, подтверждение его структуры и стабильности;
- токсикологическая характеристика препарата Диронакс;
- фармакологическая эффективность препарата Диронакс при экспериментальном поражении печени на модели острого гепатита у крыс;
- фармакологическая эффективность препарата Диронакс при гепатите у кошек и собак.
Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Изложена на 154 страницах компьютерного набора. Иллюстрирована 15 рисунками и 26 таблицами. Библиографический список включает 189 источников, в том числе 39 – иностранных авторов.
Основные патологии печени
Соли желчных кислот образуются из продуктов холестерина. Основные соли желчных кислот (холевая и хенодезоксихолевая кислоты) конъюгируют с солями натрия и калия гликохолевой и таурохолевой кислот в желчном пу-зыре и накапливаются здесь до тех пор, пока не происходит их выделение под воздействием вагуса и холецистокинина. Последний, при наличии в ки-шечнике липидов, выделяется из клеток слизистой оболочки двенадцатипер-стной кишки. Желчные соли обеспечивают необходимую среду для эмульги-рования, а следовательно, и абсорбции жиров корма [119, 136].
Также печень регулирует метаболизм гормонов. Здесь синтезируется гепарин. Нарушение этого процесса ведёт к нарушению свёртывания крови. Хотя стероидные гормоны синтезируются не в печени, последняя отвечает за их инактивацию. Так, наряду с глюкокортикоидами, в печени разрушаются тироксин, АДГ, альдостерон, эстрогены, инсулин. При поражении печени может повышаться концентрация этих гормонов. Развивается вторичный ги-перальдостеронизм, уменьшается экскреция 17-кетостероидов и 17-оксикортикостероидов с мочой, увеличиваются содержание и экскреция эст-рогенов. Транскортин – транспортный белок, синтезируется в печени. Он связывает гидрокортизон, а также инактивирует инсулин. При нарушении функции печени возможно развитие гипогликемии. С печенью связана на-дежность синтеза адреналина, норадреналина, дофамина из тирозина. По-следний синтезируется в самой печени [132] .
Большое количество витаминов усваиваются организмом животных с участием печени. Витамины в обмене веществ участвуют в качестве кофер-ментов. В организм они поступают в основном с кормом, а в самом организ-ме синтезируются в крайне незначительных количествах [134]
Желчь эмульгирует жир и таким образом обеспечивает всасывание из кишечника жирорастворимых витаминов – A, D, E и K. В печени животных происходит синтез витамина К и первая фаза активации витамина D [81].
Водорастворимые витамины в печени фосфорилируются и включаются в состав коферментов: В1 – в кокарбоксилазу; В2 – в процессы окислительно-го дезаминирования аминокислот; пантотеновая кислота В3 – в состав коэн-зима А; В6 – в коэнзимы ферментов дезаминирования и декарбоксилирова-ния.
Печень служит депо витаминов A, D, C, B1, B2, B6 и B12 [170]. В печени постоянно находятся в виде запасов железо, медь, цинк, марганец, молибден. Печень является регулятором их обмена. При патологических процессах за-пасы микроэлементов в ней резко истощаются и создается большой избыток их в циркулирующей крови, что, естественно, является предпосылкой для серьёзных расстройств [110].
Ферменты, поступая в организм, проходят метаболизм в первую оче-редь в печени. Они способны ускорить химические превращения определен-ных веществ.
По мнению М. Диксона и Э. Уэбба (1982), вопросы гепатологии зани-мают первое место, так как в печени сосредоточены все обменные и биохи-мические процессы, а число энзимов, входящих в состав печеночных клеток, очень велико.
Каждая из объективных структур гепатоцита обладает определенным характерным набором ферментов. При повреждении гепатоцитов физико-химическая структура их изменяется - от простого изменения клеточной проницаемости до некроза. При этом меняется активность ферментов, свя-занных с субклеточными структурами, и в результате усиленного поступле-ния ферментов в кровь наступает гиперферментемия, механизм которой до сих пор недостаточно ясен [181].
Существует несколько теорий, по-разному объясняющих повышение активности ферментов в сыворотке крови: 1) некротическая; 2) пермеабильная; 3) синтетическая; 4) регенераторная [134]. В сыворотке крови содержится три вида ферментов – внутриклеточные, секреторные и экскреторные.
Внутриклеточные ферменты участвуют в метаболических процессах, происходящих внутри клетки. Наличие их в крови здоровых животных свя-зано с физиологическим лизисом старых клеток. Резкое увеличение активно-сти внутриклеточных ферментов при патологии обусловлено повышением проницаемости мембран, некрозом и лизисом клеток в пораженных органах. Из указанной группы ферментов диагностическое значение имеет определе-ние содержания аспартат-аминотрансферазы (АсАТ), аланин-аминотрансферазы (АлАТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Они содержатся в клетках печени, почек, поджелудочной железы, сердечной и скелетной мышц. Отношение АсАТ/АлАТ называется коэффициентом де Ритиса, он ко-леблется у мелких домашних животных (собаки и кошки) от 0,42 до 0,97 [39].
Аланин-аминотрансфераза (АлАТ) и аспартат-аминотрансфераза (АсАТ) – ферменты, участвующие в обмене аминокислот. Самое большое количество АлАТ содержится в гепатоцитах. Это определяет важное диагно-стическое значение активности данного фермента при заболеваниях печени. Часто повышение активности АлАТ происходит значительно раньше, чем появляются клинические признаки болезни. АлАТ повышается при острых и хронических гепатитах, жировом гепатозе, холестазе [29, 30].
Максимальное количество АсАТ находится в клетках сердца и печени. Это применяется при диагностике заболеваний данных органов. Содержание АсАТ резко увеличивается при миокардитах, миокардозах, инфаркте мио-карда, травмах скелетной мускулатуры, при остром и хроническом гепатитах, холестазе, токсикозах. Коэффициент де Ритиса при болезнях сердца увеличи-вается, а при острой патологии печени снижается [21,116].
Качественное и количественное определение Диронакса
Патология желчных путей у собак проявляется дискинезией, холеци-ститом, желчнокаменной болезнью и опухолями. Первичные заболевания желчных протоков протекают долгое время бессимптомно, но вследствие на-рушения выведения желчи может развиться обтурационная желтуха, сопро-вождающаяся синдромами холемии и ахолии.
Холемия представляет собой комплекс нарушений, обусловленных по-явлением в крови основных компонентов желчи – желчных кислот, билиру-бина, холестерина, что сопровождается желтушным окрашиванием кожи и слизистых оболочек, обесцвечиванием кала и потемнением мочи, кожным зудом и брадикардией.
Ахолия – симптомокомплекс, развивающийся в результате нарушения поступления желчи в кишечник и сопровождающийся стеатореей, обесцве-чиванием кала, метеоризмом, запорами и геморрагическим синдромом [130].
Дискинезия желчных путей – снижение тонуса, сократимости желчного пузыря, протоков, сфинктеров билиарной системы. Дискинезия возникает как первично, так и вторично. У собак чаще встречаются вторичные дискинезии как осложнения при органических поражениях желчных путей, желудка, двенадцатиперстной кишки, поджелудочной железы, почек и других органов брюшной полости. При устранении провоцирующих факторов дискинезия обратима без существенных последствий.
Холецистит – воспаление желчного пузыря, холангит – воспаление желчных протоков. Эти заболевания чаще развиваются одновременно с пре-имущественным поражением в одних случаях желчного пузыря, в других – желчных протоков [145, 169].
Исследования S. Caney, T.J. Gruffyd-Jones (1992) показали, что холан-гит рассматривается как второе наиболее распространенное заболевание пе-чени у кошек в США после идиопатического печёночного липидоза. В стра-нах, в которых печёночный липидоз встречается реже, таких как Великобри-тания, холангит может представлять собой наиболее распространенное рас-стройство печени кошек.
Воспаление может быть острым или хроническим. Первое, по мнению Hendricks et all (1980), предположительно связано с восходящими инфекция-ми из кишечника у собак и могут приводить к холестазу и желтухе [178]. Ис-тинное хроническое заболевание встречается у кошек, однако этиология его не вполне изучена. По всей видимости, кишечный рефлюкс или инфекция не относятся к основным этиологическим факторам.
В желчные ходы и в желчный пузырь микрофлора проникает из ки-шечника, реже из печени, куда микробы попадают с током крови или лимфы. При холецистите и холангите развивается холестаз – застой желчи, изменя-ются её химические свойства. В стенке желчных протоков и желчного пузы-ря может возникнуть катаральный, гнойный или смешанный воспалительный процесс. Нередко холецистит и холангит сочетаются с желчнокаменной бо-лезнью.
У больных животных отмечаются такие клинические признаки, как бо-лезненность в области печени, рвота, диарея, матовость шерстного покрова. У многих больных собак выявляют компоненты дерматологического сим-птомокомплекса: кожный зуд, кожные сыпи (первичные и/или вторичные), алопеции – животных [143,171].
У собак, больных холециститом, активность щелочной фосфатазы, концентрация общего и связанного билирубина повышены, имеется тенден-ция к снижению содержания альбуминов. Характерно увеличение коэффици-ента де Ритиса вследствие повышения активности фермента АсАТ.
По результатам ультразвукового сканирования печени больных холе-циститом регистрируют увеличение размеров желчного пузыря и повышение эхогенности его стенок. Повышение эхогенности и неоднородность паренхи-мы свидетельствуют о том, что холецистит проявляется одновременно с ге-патитом [180].
При хроническом холецистите отмечают увеличение или уменьшение размеров желчного пузыря, изменение его формы. Стенки желчного пузыря утолщены и деформированы [70].
Воспаление желчных путей иногда является фактором, предраспола-гающим к образованию камней. Кроме того, патологический процесс может распространяться на паренхиму печени.
Желчнокаменная болезнь – образование камней в желчном пузыре и протоках печени, которые затрудняют или полностью препятствуют поступ-лению желчи в кишечник [108].
Камни в желчном пузыре у собак бывают очень редко, и обнаруживают их случайно при ревизии органов брюшной полости во время операции.
При неспецифических явлениях: наличие рвоты, слизистого стула, по-вышение активности щелочной фосфатазы и нормальных значениях транса-миназ, – можно предположить образование камней в желчном пузыре [173].
Доказательством диагноза служит холецистография. Течение болезни длительное, бессимптомное [26].
При хроническом холецистите в желчном пузыре образуются камни, что связано с кристаллизацией желчных кислот вследствие нарушения струк-туры коллоидов желчи.
Клинически желчекаменная болезнь проявляется спазмами желчного пузыря. При обтурации желчного протока камнями диагностируют механи-ческую желтуху и печеночную колику.
При ультразвуковом исследовании выявляют деформацию желчного пузыря, утолщение его стенок. В полости желчного пузыря обнаруживают эхопозитивные участки, дающие эхонегативную «дорожку» [39].
Печень играет центральную роль в метаболизме многих лекарствен-ных препаратов, превращая их в полярные водорастворимые соединения, ко-торые могут выводиться с желчью и мочой. Ферменты, участвующие в этих процессах, локализованы в гладком эндоплазматическом ретикулуме гепато-цитов. Метаболизм обычно включает два типа реакций: метаболизм 1й фа-зы, например, окисление и деметилирование ферментами, сцепленными с ци-тохромом Р450; и метаболизм 2й фазы, при котором метаболиты первой фа-зы конъюгируются с полярными молекулами, например, с глутатионом или глюкуроновой кислотой [91, 139].
Влияние Диронакса на функцию почек
Работа выполнена с 2011 по 2014 годы на кафедре морфологии, пато-логии, фармации и незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Башкирский государ-ственный аграрный университет», в институте органической химии Уфим-ского научного центра РАН, государственном бюджетном учреждении «Уфимская городская ветеринарная станция», в обществе с ограниченной от-ветственностью «Базис» (г.Уфа). Основной объект исследований – субстанция / препарат Диронакс – диизопропиламмония дихлорацетат, синтезируемый ООО «Базис» (г.Уфа).
Массовую долю основного вещества определяли с помощью метода, основанного на реакции образования цветного комплекса диизопропиламмо-ния дихлорацетата с бромтимоловым синим. Интенсивность окрашивания при этом пропорциональна концентрации диизопропиламмония дихлораце-тата. Реакция осуществлялась при рН=6,8. Массовую долю основного вещества в процентах вычисляли по форму-ле: % = С 10-6 100 50 100/m = 0,5 C/m, где С- количество диизопропиламмония дихлорацетата, определенное по калибровочному графику пробы, г. m - навеска пробы, г. За результат анализа принимали среднее арифметическое трех парал-лельных определений, абсолютное расхождение между которыми не превы-шает допустимое расхождение, равное 1,0%. Допустимая относительная по-грешность результатов анализа ±6,5%, при доверительной вероятности 0,05.
Качественное определение Диронакса проводили методом инфракрас-ной спектроскопии с преобразованием Фурье. Измерения в среднем диапазо-не порошкообразных образцов выполняли методом прессованием образцов в таблетки и измерения спектров в режиме пропускания. Исследуемые образцы были сначала измельчены в тонкий порошок, а потом перемешаны с непо-глощающим веществом – KBr. Измельченный и смешанный с KBr образец помещали прямо в стаканчик для образца, поверхность образца выравнивали и потом вводили в приставку диффузного отражения для измерений. Изучение стабильности лекарственного препарата Диронакс проведено на 3 последующих сериях: 040, 041, 042 методом ускоренного старения при температуре 45С в полимерных флаконах, укупоренных крышками с кон-тролем первого вскрытия по 100 г., 200 г., 300 г. Определение кристаллической структуры Диронакса было выполнено методом монокристального рентгеноструктурного анализа (РСтА). Бесцвет-ные пластинчатые монокристаллы диизопропиламмония дихлорацетата были получены из раствора в термостатированных условиях при 20С, с точностью до 0,1 С при медленном испарении, для чего 0,5 г исследуемого порошка растворяют в 1 литре дистиллированной воды. Стакан с получившимся рас-твором устанавливают на место, лишенное вибраций и оставляют для испа-рения при указанной температуре. В процессе испарения в течение двух ме-сяцев выпадает кристаллический продукт. Когда размер кристаллического продукта достигает 0,5–1 мм, кристаллы извлекают, промакивают фильтро-вальной бумагой и помещают в бюкс.
Рентгеноструктурный анализ монокристаллов Диронакса проведён в Отделении рентгеноструктурных исследований Центра коллективного поль-зования ЦКП САЦ на базе Лаборатории дифракционных методов исследова-ний ИОФХ им. А.Е.Арбузова КазНЦ РАН.
Кристаллографические характеристики соединения, параметры экспе-риментов и уточнения структур выполнены на автоматическом рентгенов-ском дифрактометре Bruker Smart Apex II CCD (MoК графитовый монохро-матор 0.71073 293 К). Структура была расшифрована с использованием программы SHELXS и уточнена методом наименьших квадратов с использо-ванием программы SHELXL. Все неводородные атомы уточнены в анизо-тропном приближении. Координаты атомов водорода (за исключением, ато-мов водорода аминогруппы) рассчитаны на основе стереохимических крите-риев и уточнены по соответствующим моделям «наездника». Координаты атомов водорода аминогруппы выявлены из разностных карт электронной плотности и уточнены на заключительных стадиях в изотропном приближе-нии. Сбор, редактирование данных и уточнение параметров элементарной ячейки выполнены с использованием пакета программ АРЕХ 2. Bce расчеты произведены с использованием пакета программ WinGX. Анализ межмоле-кулярных взаимодействий проведен с использованием программы PLATON. Программа Mercury использовалась для выполнения рисунков. В лабораторных и экспериментальных опытах было использовано: 36 белых мышей; 316 белых крыс; 8 собак; 8 кошек.
Лабораторные животные содержались в одинаковых зоогигиенических условиях вивария. Кормление животных проводили согласно суточной по-требности лабораторных животных.
Общетоксические свойства Диронакса были изучены и определены в соответствии с «Методическими указанями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвер-ждёнными ГУВ СССР и «Методческими рекомендациями по токсикоэколо-гической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).
Опыты проводили с соблюдением принципов, изложенных в Европей-ской Конвенции по защите животных, используемых для экспериментальных целей.
Перед началом опыта животных взвешивали и рассчитывали количест-во препарата для каждого животного индивидуально в миллиграммах на 1 кг массы животного. На каждую группу брали не менее 6 животных, подобран-ных по принципу аналогов. Исследуемый препарат вводили перорально при помощи ротожелудочного зонда.
Влияние Диронакса на морфологические и биохимические.показатели крови кошек
Влияние препарата на мочевыделительную систему изучали на 60 бе-лых беспородных крысах массой 160 – 190 г. в течение 30 дней. Все живот-ные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. В контрольную и опытные группы входили животные одного возраста. Живот-ным ежедневно вводили с помощью зонда в желудок водный раствор Диро-накса в эффективной дозе 25 мг/кг. На 30-е сутки эксперимента исследовали влияние препарата на диурез. Мочу собирали с помощью индивидуальных мочесборников у животных, получивших водную нагрузку: 5 мл на 100 г. массы животного. За 12 часов до начала опыта животных лишали пищи и во-ды. Количество мочи измеряли каждый час в течение трёх часов. Результаты исследований представлены в таблице Как видно из таблицы 9, в начале эксперимента уровень выделяемой мочи практически не отличался у опытных и контрольной группы и состав-лял 2,7±0,19 мл и 3,03±0,14 мл, соответственно. На 30-е сутки опыта в группе опытных крыс, получавших Диронакс в дозе 25 мг/кг суммарное количество мочи за 3 часа составило 3,18±0,14 мл, тогда как в контроле - 2,91±0,19 мл.
В течение всего эксперимента во всех группах моча была светло-жёлтого цвета, прозрачная, без примесей и резкого специфического запаха. Акты мочеиспускания были произвольными и производились в естественной позе. Таким образом, согласно данным, приведённым в таблице, диурез у опытных животных через 30 дней введения соединения аналогичен таковому у контрольных, что позволяет сделать вывод, что Диронакс не влияет на функцию почек.
Для изучения влияния препарата Диронакс на функции центральной нервной системы крыс был использован тест «Открытое поле» [25], для чего было сформировано 2 группы животных: опытная, животные которой полу-чали диронакс ежедневно в течение 30 дней в дозе 25 мг/кг, и контрольная. Через сутки после последнего введения препарата каждое животное помещали на квадратную площадку, представляющую собой камеру (метр на метр) с высокими бортами. Пол установки расчерчен на равные сектора (25 штук), предназначенных для визуальной регистрации горизонтальной двига-тельной активности экспериментальных животных. В местах пересечений линий секторов в полу имеются отверстия (16 штук), предназначенные для фиксации исследовательской активности. Площадка освещалась лампой.
В течение 3 минут регистрировали: - число вертикальных стоек, как показатель неспецифического уровня возбуждения; - число исследованных отверстий, отражающих исследовательскую активность; - число актов чистки (грумминг), выявляющих эмоциональную актив-ность. Результаты исследования представлены в таблице 10.
Как видно из таблицы 10, после 30-дневного введения Диронакса число вертикальных стоек, исследуемых отверстий и актов чистки в течение 3 ми-нут были аналогичны как в опытной, так и в контрольной группах, однако данные статистически недостоверны. Таким образом, длительное примене-ние диронакса не оказывает влияния на функцию центральной нервной сис-темы.
Влияние Диронакса на детоксицирующую активность печени
В ходе проведения эксперимента по исследованию субхронической токсичности диронакса нами было изучено влияние препарата на функцио-нальную активность печени. Влияние диронакса на продолжительность сна, вызванного снотворными препаратами, изучали на белых крысах обоего пола массой 130-140 г. На 21-е сутки эксперимента за 1 час до введения снотвор-ных веществ животным перорально вводили диронакс в дозе 25 мг/кг. Затем внутрибрюшинно вводили снотворные препараты: раствор гексенала в дозе 80 мг/кг в виде 0,2%-ного раствора, хлоралгидрат в дозе 325 мг/кг и тиопен-тал в дозе 35 мг/кг. Эффект снотворных препаратов оценивали по длительности утраты гравитационного рефлекса. Наступление сна устанавливали по переходу жи-вотных в боковое положение, время нахождения в котором и принимали за продолжительность сна. Полученные результаты изложены в таблице 11
Влияние Диронакса на продолжительность сна крыс при применении снотворных препаратов
Продолжительность гексеналового и хлоралгидратового сна в опытных группах была больше, чем у контрольных животных, но разница статистиче-ски недостоверна, то есть продолжительность медикаментозного сна опыт-ных животных не отличалась от группы контроля. Продожительность тио-пенталового сна в группе опытных животных была достоверно меньше, чем в контрольной группе. Таким образом, Диронакс не влияет на продожительность снотворного действия гексенала и хлоралгидрата и не вызывает угнетения активности пе-чени, но уменьшает продолжительность сна, вызванного тиопенталом. Уменьшение продолжительности сна, вызванного тиопенталом, может быть связано с усилением катаболизма препарата печенью под влиянием диронак-са.
Опыты проводились на 96 белых беспородных крысах линии Wistar обоего пола массой 170-200 г. Животные содержались в условиях вивария с естественным световым режимом на стандартной диете [ГОСТ Р 50258-92], с соблюдением «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» [2007] и пра-вил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ [ГОСТ Р 51000.3-96, ГОСТ Р 51000.4-96]. Убой животных проводился со-гласно требованиям «Международных рекомендаций по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» [2007]. Опреде-ление эффективной дозы исследуемой дозы было проведено на модели ост-рого ССl4 - гепатита, который воспроизводился путем одно-, двух-, трех-дневного внутрибрюшинного введения 50%-го раствора ССl4 в дозе 0,4 мл на 100 г. веса крысы [3].
