Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Дизентерия свиней и ее краткая характеристика 10
1.1.1. Возбудитель болезни 11
1.1.2 Клинико-эпизоотологическая манифестация ДС 12
1.1.3. Патологоморфологические изменения и патогенез ДС 17
1.1.4. Диагностика ДС 21
1.1.4. Химиотерапия и химиопрофилактика ДС 22
1.2. Неспецифическая резистентность и её роль в патологии животных 26
1.2.1. Общая характеристика неспецифической резистентности 26
1.2.2. Роль барьерных приспособлений в неспецифической защите организма 27
1.2.3. Гуморальные факторы неспецифической резистентности 29
1.2.3.1. Лизоцим и его защитная роль 29
1.2.3.2. Система комплемента и её функции в защитных реакциях животного организма 30
1.2.3.3. Бактерицидная активность сыворотки крови — интегральный элемент в механизмах неспецифической резистентности 33
1.2.3.4. Фагоцитоз — основной фактор в клеточных механизмах неспецифической защиты 34
1.3. Заключение по обзору литературы 38
2. Материал и методы исследований 41
3. Результаты исследований и их обсуждение 46
3.1. Показатели микробиоценоза в толстом отделе кишечника у здоровых и больных ДС поросят 46
3.2. Уровень эндогенной интоксикации у подопытных поросят 51
3.3. Клинико-гематологические показатели у подопытных поросят в норме, до и после лечения ДС 56
3.4. Изменения фагоцитарной реакции ПЯН при комплексной химиотерапии ДС 60
3.5. Гуморальные факторы неспецифической резистентности при комплексной химиотерапии поросят, больных ДС 68
3.6. Суммарный показатель неспецифической резистентности при комплексной химиотерапии поросят, больных ДС, её лечебная и экономическая эффективность 70
Заключение- 75
Выводы 81
Практические рекомендации 83
Список работ, опубликованных по теме диссертации 84
Список цитируемой литературы 85
- Возбудитель болезни
- Гуморальные факторы неспецифической резистентности
- Уровень эндогенной интоксикации у подопытных поросят
- Суммарный показатель неспецифической резистентности при комплексной химиотерапии поросят, больных ДС, её лечебная и экономическая эффективность
Введение к работе
Актуальность темы. В большинстве регионов России, как и вне её пределов, свиноводство остается одной из основных отраслей животноводства. При этом в условиях различных форм собственности и создавшейся экономической ситуации возникла острая необходимость срочного возрождения и наращивания темпов производства свинины, предусмотренных «Программой развития АПК на 2008 – 2012 гг.» (А.Т. Мысик, 2006; Г.А. Шичкин, 2008; В.И. Фисинин и др., 2008; В. Шарнин, Н. Михайлов, 2009).
Одним из важных факторов, отрицательно влияющих на этот процесс, являются заболевания свиней различной этиологии. Среди них основное место занимают болезни органов пищеварения, в частности инфекционные гастроэнтероколиты, в т.ч. и дизентерия свиней (ДС), наносящая весьма существенный экономический ущерб свиноводческим хозяйствам (А.В. Голиков и др., 1978 – 1991; В.Н. Скворцов, 2002, 2006; Х.З. Гаффаров, Е.А. Романов, 2004; А.И. Иванов, 1994, 2004, 2005; А.В. Иванов, Р.Х. Юсупов, 2006; А.Г. Шахов и др., 2007; Н.А. Солдатенко, 1994, 1997, 2007; А.А. Швецов, 2007, 2008; E.N. Wood, R.J. Lysons, 1988 и др.).
Основным возбудителем ДС считается анаэробная грамотрицательная спирохета Brachyspira (Treponema, Serpulina) hyodysenteriae, синергично взаимодействующая с условно-патогенной микрофлорой кишечника на фоне расстройств его микроэкологического равновесия, обусловленного активизацией анаэробов при снижении численности бифидо- и лактобактерий (А.В. Голиков, В.В. Бондик, 1980; А.И. Завирюха, 1983; М.Д. Дриаева, 1994; А.И. Иванов, 1997; T.J. Terpestra, I. Akkermans, 1968; D.Y. Taylor, 1970, 1997; D.L. Harries e.a., 1972, 1974; I. Akkermans, W. Pomper, 1973; T. Alexander e.a., 1976; J.M. Kinyon e.a., 1976, 1977; R.J. Lysons, 1979, 1991; M. Karlsson e.a., 1999, 2000).
Однако до настоящего времени отсутствуют специфические средства борьбы с ДС (вакцины, сыворотки), а нередко продолжительное, порой бессистемное применение многочисленных лекарственных средств обуславливает ослабление их лечебно-профилактической эффективности, т.к. у патогенных бактерий, судя по последним данным, сравнительно быстро вырабатываются механизмы повышения резистентности в составе биопленок к химиотерапевтическим препаратам и факторам иммунной защиты (Т.С. Ильина и др., 2006; А.С. Белик и др., 2008). Эти и другие обстоятельства (А.В. Голиков и др., 1991; В.Н. Скворцов, 2002; Н.А. Лагуткин, 2006; А.Н. Гречихин, А.В. Семенихин, 2006; А.Г. Шахов и др., 2007; П.С. Лобова, В.Н. Скворцов, 2008) обусловливают при лечении и профилактике ДС не только изыскание новых химиотерапевтических средств, но и использование относительно «старых» лекарственных веществ в комплексе с различными препаратами, активизирующими (модулирующими) функции нервной, эндокринной, иммунной и других систем организма животных, обеспечивающих, в конечном итоге, нормализацию их метаболизма и оптимальный уровень продуктивности (В.Т. Самохин, 2003; Ю.Н. Федоров, 2005; О.Т. Муллакаев и др., 2006; Б.Д. Кальницкий, 2008).
Перечисленное выше предопределило цель наших исследований: изучить изменения клеточных и гуморальных показателей неспецифической резистентности в норме и при комплексной химиотерапии ДС у поросят послеотъемного периода.
Для ее достижения решались следующие задачи экспериментально-клинического характера:
определить в динамике (0, 7, 15 суток) нормативные клеточные и гуморальные показатели неспецифической резистентности у клинически здоровых поросят (группа доращивания, возраст 65 – 70 дней);
изучить в эти же сроки исследований аналогичные показатели неспецифической резистентности у больных ДС поросят-аналогов на фоне монотерапии препаратом Метронид-50 (ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов);
установить динамику (0, 7, 15 суток) изменения тех же показателей неспецифической резистентности у больных ДС поросят-аналогов при комплексной химиотерапии;
дать сравнительную оценку лечебной и экономической эффективности моно- и комплексной химиотерапии ДС у подопытных животных.
Научная новизна. Подтверждены и научно обоснованы ведущая роль и значение нарушений механизмов неспецифической резистентности в патогенезе ДС на фоне расстройств микроэкологического равновесия в толстом отделе кишечника свиней, обусловленного активизацией анаэробных микроорганизмов при снижении численности лакто- и бифидобактерий.
Установлено, что комплексная химиотерапия ДС поросят послеотъёмного периода оказалось эффективней по сравнению с монотерапией, т.к. в большей степени повышала уровень клеточных и гуморальных факторов неспецифической резистентности (врожденного иммунитета), обеспечивая тем самым более раннее восстановление и нормализацию так называемой «оральной толерантности» у больных ДС поросят (К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, 2008).
Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные экспериментально-клинические данные убедительно продемонстрировали необходимость комплексной химиотерапии ДС, способствующей более раннему клиническому выздоровлению больных животных по сравнению с использованием только одних средств так называемой «специфической монотерапии». Расширение и углубление наших знаний о состоянии механизмов неспецифической резистентности у поросят отъемного и послеотъемного периодов в норме и при ДС позволяет разрабатывать новые, научно-обоснованные и эффективные схемы-модели профилактики и лечения этой инфекции в свиноводческих хозяйствах различных форм собственности в условиях современной России.
Материалы собственных исследований не только вносят определенный вклад в изучение патогенеза ДС, но используется в учебном процессе, в работе научно-исследовательских учреждений ветеринарного профиля, при написании и составлении учебников, учебных пособий и руководств по инфекционной патологии свиней.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены, обсуждены и одобрены: на Международном научно-практическом конгрессе «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (г. Санкт-Петербург, 2006); на XV Международном ветеринарном конгрессе (г. Москва, 2007); на Международной конференции «Актуальные проблемы здоровья скота, завозимого в Россию в рамках нацпроекта «Развитие агропромышленного комплекса» (г. Казань, 2007); на Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ВНИИВ и М (13 – 14 ноября 2008 г. Покров, Владимирская обл.); на расширенном заседании кафедры анатомии и физиологии животных Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (г. Саранск, 2009).
Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на профильных кафедрах Санкт-Петербургской и Казанской ГАВМ, Нижегородской, Ивановской, Костромской, Кировской и Брянской ГСХА, Оренбургского ГАУ, Мордовского и Хакасского госуниверситетов.
Публикация результатов исследований. Основные материалы по диссертации опубликованы в 5 научных трудах, в т.ч. одна из них – в рецензируемых изданиях списка ВАК Минобрнауки РФ.
Положения, выносимые на защиту:
клеточные гуморальные факторы неспецифической резистентности у клинически здоровых и больных ДС поросят-аналогов послеотъемного периода;
изменения показателей неспецифической резистентности у больных ДС поросят через 7 и 15 суток после начала моно- и комплексной химиотерапии;
лечебная и экономическая эффективность испытанных схем лечения ДС подопытных поросят-аналогов.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на ….. страницах компьютерного текста и традиционно состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и практических предложений. Список цитируемой литературы содержит ….. источника, в т.ч. ….. зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована ….. таблицами и ….. рисунками.
Возбудитель болезни
В нашей стране возбудитель ДС впервые изолирован и изучен в Белгородском отделе ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко в 1978 году (А.В. Голиков и др., 1980). Brachyspira hyodysenteriae - подвижная анаэробная грамотрицательная спирохета, извитой змеевидноподобной формы с 2 - 3 и более изгибами длиной 6 — 8,5 и толщиной 0,32 - 0,38 мкм. При электронной микроскопии у этого микроорганизма обнаружены внешняя оболочка, протоплазма, 7-8 осевых фибрилл, которые входят в цилиндр протоплазмы и перехлестываются вблизи центра клетки (IJ. Terpestra, I.P.W. Akkerman, 1968; J. Schleicher, 1970).
Для выделения Br.hyodysenteriae используют метод изоляции на среде ТСА-400 (триптиказосоевый агар + спектомицин 400мкг/мл), предложенный J.G. Songer et al. (1976). Он позволяет выделить возбудителя в чистой культуре уже на вторые сутки даже в незначительном количестве исследуемого материала. Изоляция и культивирование Br. hyodysenteriae на кровяном ТСА сопровождается резко выраженным бета-гемолизом, заметным уже на вторые-третьи сутки в виде серовато-белого налета со слабо очерченными просвечивающими колониями диаметром 0,5-3,0 мм на поверхности среды. Микроб не способен к споро- и капсулообразованию, является весьма строгим анаэробом и требует особой газовой атмосферы для культивирования (80-90% водорода и 20—10% углекислого газа). При этом необходимо удаление остаточного количества кислорода из вакуумного термостата с помощью алюмопалладиевого катализатора или раствора двухвалентного хрома. В полужидком триптиказослизистом сывороточном агаре брахиспиры растут в виде диффузного с сероватым оттенком облачка в верхнем слое среды, что наиболее заметно при ростстимулирующем влиянии температуры выращивания, равной +42С (А.В.Голиков и др., 1980, 2001; М.Д. Дриаева, А.И. Иванов, 1994; А.А. Конопаткин и др., 1994; А.Г. Биндер, 1984; А.И. Белых, 1985, 1993 а, б; и др.). В жидкой питательной среде (D.L. Harris, J.M. Kinyon, 1974) рост брахиспир характеризуется своеобразным «мерцанием» при встряхивании пробирки. Микроб ассоциирован с хозяином, энтеропатогенный для свиней. Для своего роста использует растворимые сахара, способность к брожению слабо выражена, а из глюкозы образует бутират, ацетат, Н2 и С02, не восстанавливает нитраты, липаза и лецитиназа отсутствуют, не растет в средах с добавлением глицина, на средах с индолом изоляты могут быть грамположительными и грамотрицательными. Рост брахиспир наблюдается только в анаэробных условиях на селективных жидких питательных средах. Лучшим патматериалом для их выделения является соскоб со слизистой оболочки ободочной или слепой кишки павшего или вынужденно убитого животного при остром (подостром) течении ДС (А.И. Завирюха, 1983; А.И. Иванов, 1996, 2005; В.Н. Скворцов, 2002, 2006; С. Fellstrom е.а., 1999; М. Novotna, О. Skardova, 2002; M.R. Вассаго е.а., 2003).
По общепризнанному мнению, ДС является энзоотически протекающей инфекционной болезнью с высокой контагиозностью (А.В.Голиков и др., 1980, 2001; С.И.Прудников, 1983; А.А. Конопаткин, 1982, 1993; В.Н.Павлов, 1990; А.И.Иванов, М.Д. Дриаева, 1995; А.И. Иванов и др., 2002; А.В. Иванов, Р.Х. Юсупов, 2006; В.Л. Крупальник и др., 1980, 2006; М. Tesouro, 1969; D.J.Taylor, 1979, 1997; J.M.Greer, MJ. Wannmuchler, 1989 и др.). Однако ряд ученых в России и за ее пределами высказывает мнение, что ДС является факторно-инфекционным заболеванием, ибо для ее возникновения, кроме взаимодействия макро- и микроорганизма, обязательно требуется наличие определенных соактантов как в самом организме, так и во внешней среде. При этом их негативное влияние сопровождается ослаблением механизмов неспецифической резистентности (врожденного иммунитета) и активизацией условно-патогенной микрофлоры. Нейроиммуноэндокринные расстройства, имеющие характер дисрегуляторной патологии, а также воздействие различных стресс-факторов, включая оксидативный стресс, являются неотъемлемым компонентом патогенеза подобных заболеваний у животных (Ю.С. Кабанков, Е.Д. Квасников, 1979; А.А. Конопаткин, 1982; В.И. Шнур, 1983; В.А. Барабой, 1991; Г.И. Блехман, Н.А. Шаламова, 1992; Е.А.Дубинина, И.В. Шугал ей, 1993; А.И. Иванов, 1997; В.А. Сидоркин, 2001; А.И.Иванов, А.А. Конопаткин, 2002; А.Г.Шахов и др., 2007; D.L.Harris е.а., 1972; L.S.Mansfeldte.a.,1996).
Наиболее значимые клинические симптомы ДС в зависимости от тяжести течения проявляются катарально-геморрагической диареей, угнетением общего состояния, приступами рвоты, нарастающей жаждой, пониженным аппетитом, потерей упитанности. Кашицеобразные каловые массы вначале водянистые со слизью от серовато-зеленого или грязно серого цвета в дальнейшем приобретают бурый или кофейный оттенок, издают неприятный запах. Позже в них появляются прожилки свежей крови. Температурная реакция примерно у четверти больных ДС поросят при остром течении может повышаться до 40,5 - 41 С в течение 2-3 суток, а в дальнейшем нормализоваться. При отсутствии своевременного лечения на фоне резко выраженного угнетения общего состояния (нарушения координации движений, матовая щетина, запавшие глаза, сгорбленность, испачканный фекалиями отвисший хвост, холодная посиневшая кожа в области живота, подгрудки и ушей, коматозное состояние у отдельных больных животных) гибель больных ДС животных наступает на 3 - 5 - 7 сутки после начала заболевания.
Бессистемная или недостаточно полная терапия ДС сопровождается подострым течением (2-3 недели), выбраковкой и вынужденным убоем. При хронизации болезненного процесса у больных свиней (подсвинков) отмечается нормальная температура тела, перемежающиеся поносы, отставание в росте, низкий прирост живой массы, плохая оплата корма (В.П.Урбан, В.И. Шнур, 1975; А.С. Михальченков, 1975, 1978; П.И. Притулин, 1975, 1977; СИ. Прудников, 1978; А.В. Голиков и др., 1980; А.А. Конопаткин, 1983; В.Н. Ласкавый, 1989; А.И. Белых, 1993; А.И. Иванов, 1995, 2003; DJ. Taylor, 1979; G.N. Wood, R.J. Lysons, 1988).
К ДС- восприимчивы все породы и половозрастные группы свиней. Однако наиболее чувствительны и тяжело переболевают поросята послеотъемного периода и подсвинки до 6 месячного возраста, особенно в тех хозяйствах, где болезнь проявляется впервые. При этом переболевает все поголовье, включая взрослых свиней и поросят подсосного периода выращивания. У последних заболевание часто заканчивается фатальным исходом.
Источником возбудителя инфекции являются больные, переболевшие и выздоровевшие свиньи, которые считаются спирохетоносителями, выделяющими с калом большие количества высоковирулентных штаммов Br. hyodysenteriae, что способствует быстрому перезаражению оставшихся здоровыми животных. Асимптоматическими носителями брахиспир являются , мыши, крысы, собаки, мухи (К. Тарасюк, С. Пейсак,1992). Длительность спирохетоносительства при ДС варьирует от 60 - 70 дней (А.И. Белых, 1989,1993; А.И. Иванов, 2005; J.G. Songer, D.L. Harris, 1976).
Основной путь заражения ДС алиментарный, но своеобразие инфекции заключается в том, что необходим прямой контакт или совместное содержание переболевших и больных животных со здоровыми. При несоблюдении ветеринарно-санитарных правил возбудитель ДС может передаваться обслуживающим персоналом, через оборудование, спецодежду, инвентарь, подстилку и т.п. По данным многих авторов, длительность микробоносительства при ДС переболевшими или клинически здоровыми свиньями составляет пять-шесть месяцев, что способствует формированию эпизоотических очагов и стационарности болезни с периодическим появлением массовых вспышек в случаях ослабления механизмов неспецифической резистентности (врожденного иммунитета), чаще всего на почве нарушений технологии кормления и содержания животных (В.Л. Крупальник и др., 1980, 2006; В.Н. Павлов, 1990; А.И. Иванов, 1995, 2002, 2005; Н.А. Солдатенко, 1997, 2008; Т.В. Barragry, 1990; D.L.Harris, 1992; D.S.Hampson, 1992, 2000; L.D.Olson, 1978, 1995; P. Martelli,1996; B. Lawhorn, 1999; W.L. Hollis, 2006).
Гуморальные факторы неспецифической резистентности
Фактически это многочисленные белки и пептиды крови и других жидкостей тела, обладающие антимикробными свойствами чаще в кооперации друг с другом и активизирующие клетки, способные к фагоцитозу. Наиболее известными представителями этой группы защитных факторов являются лизоцим, белки системы комплемента, пропердиновой системы, интерферон, бактериолизины, нормальные (естественные) антитела, трансферрины, лактоферрин, С- реактивный протеин, интерлейкины и т.п. (О.В. Бухарин и др., 1974, 1977; К.П. Кашкин, О.З.Караев, 1984; Э. Рис, М. Стернберг, 1988; Б.И. Кузник и др., 1989; P. Kokoshis е.а., 1979).
По данным этих и других авторов, лизоцим (мурамидаза) - фермент, чрезвычайно широко распространенный в живой природе. Считают, что он имеет лизосомальное происхождение в клетках животных и человека, расщепляет гликозидные связи между 1 и 4 углеродными атомами N-ацетилмурановой кислоты и N-ацетилглюкозамина. Субстратом для лизоцима могут быть и полимеры, состоящие только из N-ацетилглюкозамина. Антимикробное действие лизоцима, благодаря вышеописанным свойствам, охватывает как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии. Однако у последних однослойный муреиновый комплекс (полимер N-ацетилмурановой кислоты и N-ацетилглюкозамина) покрыт липидным слоем и недоступен для энзиматической деструкции лизоцима. У грампозитивных микроорганизмов муреин многослойный и является субстратом для данного фермента. В биологических жидкостях лизоцим способен оказывать бактериостатическое и бактерицидное действие в отношении многих микробов, по мнению ряда исследователей, за счет активации системы комплемента и присутствия специфических антител (О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, 1974; А. Хорст, 1982; Е. Osserman, 1975).
Основным источником лизоцима являются макрофаги и нейтрофилы. Его постоянный синтез и секреция установлены в моноцитах и макрофагах, а из нейтрофилов, имеющих более высокое содержание энзима, он выделяется при их дегрануляции или после разрушения (Д.Н. Маянский, А.Н. Маянский, 1983; И.С. Фрейдлин, 1984; P. Kokoshis е.а., 1979). В очагах воспаления при распаде лизоцима появляются биологически активные продукты типа тетрапептида тафцина, способные стимулировать кислородзависимый метаболизм нейтрофильных лейкоцитов (О.Ю. Янковский и др., 1987).
В конце 19 века В.И. Исаевым и Р. Пфейфером было установлено бактериостатическое действие свежей сыворотки крови. В дальнейшем этот антимикробный фактор был назван алексином, или комплементом, а его углубленное изучение показало, что это сложная каскадная система из более чем 20 сывороточных белков и подобна в этом плане системе свертывания крови (Н.И.Бахов, 1982; А. Хорст, 1982; Е.В. Езепчук, 1985; Б.И. Кузник и др., 1989)
Система комплемента участвует в разнообразных защитных реакциях против чужеродных тел, клеток и бактерий. Она взаимодействует со многими факторами адаптивного и врожденного иммунитета, с кининовой системой, с процессами свертывания и фибринолиза, с клетками системы мононуклеарных фагоцитов и нейтрафилами, активно участвует в процессах воспаления и т.д. (А.Н. Галиулин, А.Н. Маянский, 1984; И.С. Фрейдлин, 1984; J. Spitznagel, 1984)
Биосинтез компонентов системы комплемента осуществляется преимущественно в макрофагах, а также в печени, селезенке, в эпителии тонкого и толстого отделов кишечника. Её важнейшей ролью считается активация и последующий лизис клеточных мембран (оболочек). Существует 3 пути активации (рис. 2, 3): классическим, альтернативным или пропердиновым и прямой конверсией СЗ - компонента рядом протеолитических ферментов, в частности трипсином, тканевыми и бактериальными протеазами (К.П. Кашкин, О.З.Караев, 1984; Е.В. Езепчук, 1985; М Loos, 1982 и др.)
Классический путь чаще всего активируется комплексом антиген — антитело, а также ДНК, трипсиноподобными ферментами, С-реактивным протеином " и др. при этом условно (рис.1) выделяются 3 блока: а) распознающим (Clq +Clr +Cls), образующий в процессе конформационных перестроек фермент С1 — эстеразу; б) под её воздействием образуется активирующий блок (С2, СЗ, С4 и фермент СЗ - конвертаза (С42а) которая, в свою очередь, способствует формированию литического комплекса (С5... .С9). Нейтрализация вируса Иммунная конглютинация Иммунное прилипание
Биологические функции системы комплемента (по Jager) По современным представлениям, начало альтернативного пути требует инициирующего фактора (IF) активирующего пропердин. Последний затем ферментативно воздействует на В- фактор, который, в свою очередь, энзиматически расщепляет СЗ - фрагмент как и в классическом пути. В дальнейшем ферментативный каскад действует по принципу обратной связи: СЗ активизирует Д-фактор, тот - В-фактор и т.д.. Детали обоих путей активации системы комплемента описаны во многих руководствах, монографиях, учебных пособиях (А.Н. Галиулин, А.Н. Маянский, 1984; Е.В. Езепчук, 1985; А.Я. Кульберг, 1986; Б.И. Кузник и др., 1989; К. Whaley, 1980).
Активность системы комплемента регулируется не только лабильностью образующихся комплексов, но и с помощью набора естественных ингибиторов, блокирующих её каждый активированный компонент или фрагмент (А. Хорст, 1982)
В целом активированная система комплемента и некоторые продукты её активации обеспечивают не только прямое цитолитическое действие на чужеродные клетки и вирусы, но и мобилизуют на защиту и усиливают активность клеток крови и тканей. При этом повышается биосинтез антител, изменяется проницаемость сосудов, усиливается хемотаксис нейтрофилов и макрофагов, функционирование механизмов свёртывания крови, калликреин - кининовой системы, стимулируется местное проявление воспалительной реакции и т.д.
Повышенный уровень комплемента в крови является благоприятным признаком при многих заболеваниях, снижение, наоборот, характеризует ослабление защитных сил организма (А.С. Резникова, 1967; СИ. Плященко, В.Т. Сидоров, 1979; А. Хорст, 1982; П.А. Емельяненко, 1987)
Как видно из представленных сведений, система комплемента занимает одно из ключевых мест среди гуморальных факторов неспецифической резистентности в животном организме. Она обеспечивает не только литический эффект по отношению к микроорганизмам, но и выполняет обширные регуляторно-кооперативные функции по отношению к клеткам соединительной и других ткани, особенно воспаления и аллергии.
Уровень эндогенной интоксикации у подопытных поросят
В настоящее время, на основании проведённых исследований за последние 50 - 70 лет, в гуманной и ветеринарной медицине сформировалось научное направление, определённое как эндогенная интоксикация. Однако до сих пор попытка сформулировать само понятие субстрат эндогенной интоксикации ещё не завершена, т.к. именно от того, какой смысл вкладывается в это понятие, зависит подбор методов, лежащих в основе её идентификации. Появление среднемолекулярных соединений, способных вызвать токсическое воздействие, накапливающихся в организме практически при всех болезненных состояниях, носит универсальный характер и по сути является его метаболическим ответом на любой агрессивный фактор (М.Я. Малахова, 1993, 1955). Продукты обмена, вовремя удалённые при сохраненных метаболических процессах, могут стать причиной интоксикации, вероятно, в 2-х случаях: либо при избыточной продукции, либо при ослаблении или дефекте их элиминации из кровотока. При этом не исключается одновременное присутствие и того и другого.
Молекулы средней массы (МСМ) принято разделять на вещества низкой и средней молекулярной массы (ВН и СММ), включающие в основном вещества небелковой природы и олигопептиды (ОП) с ММ не более 10-кДа. ОП фактически объединяют 2 разных пула: регуляторные пептиды (РП) и нерегуляторные пептиды (НП). Первые по своей природе являются гормональными продуктами, поддерживающими гомеостаз и участвующими в патогенезе различных заболеваний. Это нейротензины, нейрокинины, ВИП, вещество Р, соматостатит и соматомедин, эндорфины и другие биологически активные вещества. Их уровень в животном организме в норме находится в границах нижних пределов физиологических величин и строго контролируется организмом. Место их образования — клетки APUD-системы, конечный эффект их влияния - регуляция многих важных процессов жизнедеятельности в качестве нейротрансмиттеров, нейромодуляторов и т.п., а также в формировании адаптационных реакций организма животных и человека (Н.Т. Рейхлин и др., 1989).
НП - являются продуктами протеолитической деградации белков плазменного и тканевого происхождения, поступившими в кровь в результате аутолиза, некроза, апоптоза, гипоксии органов и тканей, процессов протеолиза, т.е. пептиды с нерегулируемым уровнем в плазме крови, с непредсказуемыми свойствами и токсичностью.
ВН и СММ - это небелковые вещества любой природы и преимущественно являются конечными продуктами обмена: креатинин, мочевина, билирубин, молочная и другие органические кислоты, холестерин и дериваты фосфолипидов, в т.ч. и продукты СРО - свободнорадикального окисления, такие как спирты, альдегиды, гидроперекиси, микробные токсины, карбоновые кислоты, ядовитые продукты обмена (индол, скатол, фенол, путресцин, кадаворин и др.). Условно их можно подразделить на 2 пула: катаболический и анаболический, и распределяются они в крови между белками-носителями плазмы, мицеллами липопротеидов различных классов плотности и гликокаликсом эритроцитов, способными транспортировать эти вещества. Концентрация и распределение ВН и СММ между плазмой и эритроцитами поддерживается у каждого животного и человека на постоянном уровне, зависящем от наследственных и различных факторов окружающей среды.
Ниже (табл. 4) представлены материалы по изучению уровня эндогенной интоксикации у подопытных поросят (больных ДС и интактных) по показателям МСМ, малонового диальдегида (МДА) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) по общепринятым методикам и их модификациям (А.И. Карпищенко, 1999).
Анализ показателей эндогенной интоксикации наглядно продемонстрировал, что у больных ДС поросят дифтеритически-геморрагическое и некротическое воспаление слизистой оболочки толстого отдела кишечника сопровождалось существенным (почти в 1,5 раза) нарастанием концентрации в плазме крови молекул средней массы (МСМ), отражающем в значительной мере совместимость характера патологического процесса с резистентностью организма больного животного или человека.
Как видно из данных табл. 4, комбинированная терапия поросят, больных ДС, уже через 7 суток фактически нормализовала количество МСМ254 и МСМ282 У животных опытной группы , тогда как в контрольной -они не достигали нормативных значений у клинически здоровых животных (р 0,05). Через 15 суток данные показатели в обеих группах нивелировались и не превышали нормативных величин у здоровых поросят.
Весомым подтверждением изложенному выше послужило определение МДА в реакции с 2-тиобарбиткровой кислотой. Как видно из табличных данных, у больных ДС поросят преобладал прооксидантный эффект процессов СРО и ослабления механизмов антиоксидантной защиты (АОЗ). Подтверждением этому служило резкое (почти в 2,5 раза) возрастание уровня МДА по сравнению со здоровыми животными, указывая тем самым на. избыточное накопление продуктов ПОЛ, т.е. на наличие окислительного стресса (Е.Б. Меньшикова и др., 1993, 2001). Включение в комбинированную схему лечения больных ДС поросят опытной группы способствовало более раннему восстановлению антиоксидантного статуса у этих животных на 7 сутки экспериментов. В контрольной группе МДА оставался на более высоком уровне по сравнению с нормой (р 0,05). Через 15 суток в обеих группах наблюдалась нормализация ПОЛ по цифровым показателям МДА (табл. 4).
Изменение количественных показателей ЦИК у больных ДС поросят показало, что их уровень превысил относительную норму в 2,3 раза (р 0,01) и оставался повшенным в опытной и контрольной группах даже чекрез 7 суток (р 0,05), что косвенно согласуется с данными других авторов (Си. Логинов, 2000; Р.Е. Киселёва и др, 2005), указывающих, что ЦИК максимально накапливаются в крови и межтканевой жидкости на высоте воспалительного процесса, отражая, по-видимому, неспособность системы мононуклеарных фагоцитов (И.С. Фрейдлин, 1984) полностью выполнять свою роль в организме больных животных.
Определённый вклад в длительность нахождения ЦИК в кровотоке и в системе микрогемолимфоциркуляции вносят и размеры самих ЦИК, их концентрация, а также функциональная активность системы комплемента и её отдельных компонентов по деструкции и элиминации отложившихся крупных ЦИК на «фильтрующих» структурах стенки сосудов в различных органах и тканях.
В значительной мере эти положения отразились и на ЛИИКК: у больных ДС поросят до лечения он в 6,5 раз превысил таковой у клинически здоровых животных и оказался достоверно выше (р 0,05) у поросят контрольной группы, указывая тем самым на более выраженный и длительный характер эндотоксикоза по сравнению с опытной группой, имеющей и более высокие показатели НСТ-теста, отражающего, как известно, готовность клеток лейкоцитарного ряда к завершённому фагоцитозу (А.Н. Маянский, А.Н. Гизатуллин, 1984; В.А. Чистяков и др., 2008).
Таким образом, выполненные нами исследования показали, что в процессе развития дизентерийного синдрома у подопытных поросят послеотъемного периода наблюдается сдвиг про- и антиоксидантного равновесия в направлении окислительного стресса и эндогенной интоксикации, что является важнейшим звеном в патогенезе этой кишечной инфекции. Включение в схему комбинированной химиотерапии лекарственных препаратов с антиоксидантными и другими свойствами (комплекс витаминов A, D3, Е, С, селенопиран) оказало позитивное стимулирующее влияние на систему антиоксидантной и антитоксической защиты.
Суммарный показатель неспецифической резистентности при комплексной химиотерапии поросят, больных ДС, её лечебная и экономическая эффективность
Значение рассчитанного по 21 лабораторному тесту суммарного показателя неспецифической резистентности (СПНР), в опытной и контрольной группах через 7 и 15 суток после начала опытов, своеобразно отразилась на его параметрах (табл. 10). Так, если у спонтанно заболевших ДС поросят СПНР составил 71,0±2,6 %, то через 7 суток в опыте и контроле он был равен соответственно 86,0±1,8 и 80,0±1,6 % (р 0,01). Через 15 суток СПНР в опытной и контрольной группах возрос до 90,0±1,4 и 86,0±1,2% (р 0,05), указывая тем самым на позитивное влияние комплексной химиотерапии больных ДС животных.
В частности, в контрольной группе клинически выздоровело в течение первой недели 25 животных из 28 (2 пало, 1 вынужденно убито), т.е. лечебная эффективность составила 89,3 %. Кроме того, на второй неделе экспериментов (11 — 12 день) реинфекции в контроле подверглось 3 животных (наличие в пробах фекалий из прямой кишки до 20 - 30 спирохет Br. hyodysenteriae). После соответствующего лечения (Метронид-50, 2 мл/10 кг массы тела) через 2 дня клинические признаки ДС практически исчезли, а возбудитель ДС через 3 суток при бактериоскопии проб фекалий вплоть до окончания срока наблюдений не выявлялся. Из 31 больного ДС животного опытной группы один поросёнок пал, второй - вынужденно убит, т.е. лечебная эффективность в данной группе составила 93,5 %. Дача с комбикормом тилозина тартрата в микрогранулированном виде в комбикорме вплоть до окончания срока наблюдений (30 дней с начала опытов) позволила не только исключить реинфекцию поросят в этот период времени за счёт существенного повышения резистентности, но и добиться более высокой продуктивности, отражающей интенсивность их роста и развития.
В частности при практически одинаковой массе тела в начале экспериментов (16,2 - 16,0 - 15,8 кг) при их завершении (через 30 дней) валовой прирост живой массы в опытной группе составил 7,74±0,21, в контрольной группе 7,05±0,18, а у клинически здоровых поросят-аналогов -12,54±0,27 кг (р 0,02 - 0,001) (табл. 11).
Расчет экономической эффективности разработанной схемы комплексной химиотерапии в опытной группе по сравнению с лечением больных ДС поросят одним Метронидом-50 (контроль) показал, что, несмотря на использование большого количества лечебных препаратов, она оказалась практически одинаковой в том и другом случае (13,6 и 13,8 рубля на 1 рубль затрат) (табл. 12).
Однако более высокая лечебная эффективность, валовой прирост живой массы, отсутствие реинфекции, падежа в опытной группе на фоне повышенного (90,0±1,4 против 86,0±1,2%; р 0,05) СПНР - суммарного показателя неспецифической резистентности, явились объективным подтверждением преимущества комплексной химиотерапии ДС поросят в условиях выполненного клинико-экспериментального исследования.
Таким образом, как следует из представленных фактических материалов в данном разделе, разработанная и апробированная комплексная схема химиотерапии поросят, больных спонтанной ДС, оказалась более эффективной как с лечебной, так и с экономической точки зрения.
Анализ специальной литературы показал, что ДС широко распространена во многих свиноводческих хозяйствах как в России, так и за её пределами. Среди инфекционных гастроэнтероколитов она занимает первое мест (34,2 - 39,9 %) и наносит значительный экономический ущерб за счёт падежа больных животных (10 - 45 %), вынужденного убоя, недополучения продукции, высоких затрат корма на единицу прироста живой массы, на ветеринарные препараты и услуги ветеринарных специалистов, на проведение организационно-хозяйственных мероприятий. Сезонность заболеваемости ДС зависит от наличия в стаде наиболее восприимчивого поголовья поросят в возрасте 2 — 4 месяца (группы доращивания и откорма), но, чаще всего, в осенне-зимний период.
В процессе бактериологического изучения анаэробной микрофлоры в пробах фекалий, содержимом соскобов и мазков-отпечатков слизистой оболочки слепой и ободочной кишки здоровых и больных дизентерией свиней обнаружены анаэробные микроорганизмы. По своим морфологическим, культуральным и др. свойствам их можно было отнести к нормофлоре (бифидо- и лактобациллы), к условно-патогенным (клостридии, фузобактерии, бактериода и др.) и патогенным (Brachyspira hyodysenteriae). Т.е. ещё раз подтвердилась точка зрения ранее выполненных исследований в этой области, что основным возбудителем ДС является Br. hyodysenteriae, вирулентность которой во многом определяется состоянием нормальной кишечной микрофлоры, и, естественно, механизмами врождённого и адаптивного иммунитета организма свиней (П.И. Притулин, 1975; А.И. Иванов, 1997, 2005; T.G.L. Alexander, D.J. Taybor, 1969; D.L. Harris e.a., 1974, 1978; L.D. Olson e.a., 1986; S.K. Nibbelink e.a., 1993; M.R. Baccarro e.a., 2003). По всей вероятности, в настоящее время выдвинутые предположения многих учёных об этиологической роли нормальной анаэробной микрофлоры толстого отдела кишечника в заболевании свиней дизентерией (D.L. Harris, J.M. Kinyon, 1974; и др.) следует связывать как с ослаблением механизмов неспецифической защиты (врождённого иммунитета) организма хозяина под влиянием стрессорных факторов через системы Толл-подобных рецепторов, так и последующую утрату «оральной толерантности» к нормальной микрофлоре желудочно-кишечного тракта и возникновение очагов деструктивного воспаления (К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, 2008).
Выполненные нами клинико-гематологические исследования показали, что у больных ДС поросят обнаруживаются признаки эндогенной интоксикации и её отрицательное воздействие на функционирование системы органов кроветворения, печени, почек и т.п. В частности, при морфологическом анализе образцов периферической крови поросят, больных ДС, установлено наличие микроцитарной анемии и повышение индекса интоксикации Каль-Калифа (1941), резкое повышение уровня МСМ при длине волны 254 и 282 нм с ММ 500 - 5000 кДа, свидетельствующих об избыточном нарастании уровня промежуточных и конечных продуктов обмена белков, углеводов, липидов и нуклеиновых кислот. В свою очередь, они оказывают токсическое и деструктивное воздействие на большинство органов и систем, избегая при этом нейтрализующего, влияния иммунной системы. Косвенным подтверждением этому послужило повышенное в 2,3 раза содержание в крови ЦИК, связанное, по-видимому, с расстройством функции макрофагов и системы комплемента по их элиминации из кровеносного русла.
